外泌体研究 PPT
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直径约为30-150nm，具有“杯状”或 “碟状”形态, 外侧含有脂质双分子层。
的 特 征
携带母体细胞特征性生物信息分子，如蛋白质、脂质、脱氧核糖核酸(DNA)、信使 RNA(mRNA)、微小RNA（miRNA）以及非编码RNA（Non-codingRNA）等。
表面标记蛋白主要有 Alix，TSG101，CD63，CD9，CD81和 HSP70。主要含有以下几种 物质：MHC I 类和/或 II 类分子、热休克蛋白（hsp）、四跨膜蛋白、整合素、细胞骨架 蛋白以及一些生物酶类。
通过内吞作用，将“货物”运入胞内。
征
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
9
外 泌 体 的 分 离 与 鉴 定
研究生科研汇报
超速离心法
分
离
沉淀法
方
法
及
特
免疫亲和
点
捕获法
超速离心法获得的外泌体数量多，但常 有蛋白杂质。
改良后的蔗糖密度梯度离心法，操作简 便，成本较 低，得到了广泛应用。
发
2007年，Valadi证实了细胞分泌的
现 外泌体中含有的mRNA以及MicroRNA 均具备良好的生物活性。
与
研 随后，许多研究均发现外泌 体可通过携带蛋白质及核酸等成
究 分在细胞间传递信息并发挥功能。
研究生科研汇报
外 泌 体 的 发 现 与 研 究
研究生科研汇报
外 泌 体
细 胞 内 由 多 囊 泡 胞 内 体 (multivesicular bodies, MVBs)向外出芽形成, 通过MVBs与细 胞膜融合, 由细胞主动分泌释放到细胞外的 腔内囊泡 (intraluminal vesicles, ILVs)。
纳米粒子跟踪分析
(nanoparticle tracking analysis, NTA) 测量外泌体的直径
Western-blot （ WB ） 法 或 磁 珠 分选的免疫学方法等可清楚地 分析外泌体表面存在标志蛋白
流式细胞技术
(flow cytometry, FACS) 分离外泌体并分析其纯度
外 泌 体 与 肿 瘤 的 关 系
研究生科研汇报
外泌体
——精准肿瘤学的明星——
研究生科研汇报
1 外泌体的发现与研究 2 外泌体的特征 3 外泌体的分离与鉴定 4 外泌体与肿瘤的关系 5 总结与展望
研究生科研汇报
外
1983年, Pan等人在绵羊网织红细胞体
泌
外成熟的过程中, 用异硫氰酸荧光素或者 125I标记的转铁蛋白受体的抗体, 对转铁蛋
研究生科研汇报
免疫激活
肿瘤分泌的外泌体膜上携带肿瘤细胞的抗原, 被树突状细胞识别并呈递给T细胞, 从而诱发免疫反应, 促进免疫激活
免疫逃逸
黑色素瘤所分泌的外泌体膜上含有Fas配体分子，可与T细胞的Fas受体相互作用， 介导T细胞凋亡以逃脱免疫监视
恶化 转移 发展 发生
乳腺癌分泌的外泌体可以促进肿瘤血管生成、肿瘤生长和扩散，促进周围正常 乳腺细胞的增殖并抑制它们的凋亡
被认为是细胞间分子交换和信息传递的生物纳米颗粒。
研究生科研汇报
外
人体中大约有1014个外泌体，近乎于平均每个细胞产生 1000-10000个。
泌
体
正常细胞及肿瘤细胞均分泌外泌体，恶性肿瘤细胞较非 恶性细胞能分泌更多外泌体。通过分析外泌体可以直接获得
癌细胞的基本信息。
的
特
被分泌出的外泌体会进入血液、唾液、尿液及乳汁等体
影像学 生化 病理学
循环肿瘤细胞
（CTC）
微创
液体
循环肿瘤DNA/RNA
活检
（ctDNA/RNA）
肿
肿瘤细胞分泌的外 泌体
早期 诊断
瘤
诊
随机性
断
半衰期短
监测病人 即时情况
不确定性
不能反映肿瘤的 病理状态
对肿瘤远端转移不
循环肿
瘤细胞 （CTC）
循环肿瘤DNA/RNA （ctDNA/RNA）
检测与肿 瘤细胞类 型、疾病 进程、治
外泌体递送EGFR调节肝脏微环境促进胃癌肝转移
间充质干细胞分泌的外泌体可以促进胃癌细胞的生长
胶质瘤细胞分泌的外泌体可以促进其自身的增殖
研究生科研汇报
外
泌
体
与
肿瘤诊断的生物标志物
肿
瘤
的
关
系
肿瘤潜在的治疗靶点
肿瘤治疗的生物标志物 抗肿瘤药物的有效载体
外 泌 体 与 肿 瘤 的 关 系
研究生科研汇报
早期检测难 早期确诊难 容易引发扩散
研 或血小板等其他组分的独特性. 他们将其命名为外泌体(exosome)。
究
研究生科研汇报
外 泌
外泌体却并没有因为初次被发现而被引起重视，反而被误
认为是细胞处理胞内垃圾的一种囊泡外泌形式，用于装载和运 送细胞在成熟过程中所产生的诸如质膜受体一类的废弃物。
体
1996年, Raposo等人发现
的
外泌体具有呈递抗原, 并刺激T 细胞增殖的作用。
使用聚乙二醇沉淀法获得的外泌体，蛋 白污染少，分离效率高，但颗粒大小不一。
利用外泌体表达的特异性抗体标记的免 疫磁珠进行富集，可获得纯度较高的外泌体， 但操作复杂且影响因素较多。
试剂盒
近年来各种商业化的外泌体提取试剂 盒逐渐得以推广。
研究生科研汇报
外 泌 体 的 分 离 与 鉴 定
透射电子显微镜
(transmission electron microscopy, TEM) 观察外泌体的大小、 形态，测量直径
体
白受体进行追踪, 发现细胞膜的转铁蛋白受 体在与一种包含多肽的囊泡结合后, 囊泡与
的
细胞膜分离, 分泌到上清, 这是人类首次观测 到游离于细胞外存在的囊泡。
发
现 与
1987年, 他们发现这些囊泡中含有在网织红细胞成熟过程中丢失的一些成分（乙酰 胆碱酯酶、葡萄糖转运蛋白、核苷转运蛋白和转铁蛋白受体等），同时, 他们发现这些 囊泡膜具有网织红细胞细胞膜的特征, 比如也有极高的鞘磷脂含量, 显示了其区别于细胞
含量波动 准确度较低
是一个可靠的标准
疗手段等
有关
敏感性差
研究生科研汇报
外
几乎存在于人体所有的体液里
泌
体
与 肿
肿 瘤 诊
瘤
具有脂质双分子层结构
断
的
保护内部的核酸分子免
关
于被降解
是液体活检的重要组成部分 在体液中含量多于CTC 每毫升血液超过10个 比CTC更加灵敏
液中，通过循环系统到达其他细胞与组织，产生远程调控作
征
用。
研究生科研汇报
外
外泌体通过内吞进入受体细胞后，将 “货物”释放进入胞质内，并重新形成多
泌
不同来
wenku.baidu.com
泡体。
源的外
体
泌体进 入受体
外泌体直接与受体细胞膜融合，将携 带的“货物”释放进入受体细胞胞质。
的 特
细胞的 方式
外泌体上的配体与受体细胞膜上特殊 受体结合，既能起到信号传导作用，也能
的 特 征
携带母体细胞特征性生物信息分子，如蛋白质、脂质、脱氧核糖核酸(DNA)、信使 RNA(mRNA)、微小RNA（miRNA）以及非编码RNA（Non-codingRNA）等。
表面标记蛋白主要有 Alix，TSG101，CD63，CD9，CD81和 HSP70。主要含有以下几种 物质：MHC I 类和/或 II 类分子、热休克蛋白（hsp）、四跨膜蛋白、整合素、细胞骨架 蛋白以及一些生物酶类。
通过内吞作用，将“货物”运入胞内。
征
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
9
外 泌 体 的 分 离 与 鉴 定
研究生科研汇报
超速离心法
分
离
沉淀法
方
法
及
特
免疫亲和
点
捕获法
超速离心法获得的外泌体数量多，但常 有蛋白杂质。
改良后的蔗糖密度梯度离心法，操作简 便，成本较 低，得到了广泛应用。
发
2007年，Valadi证实了细胞分泌的
现 外泌体中含有的mRNA以及MicroRNA 均具备良好的生物活性。
与
研 随后，许多研究均发现外泌 体可通过携带蛋白质及核酸等成
究 分在细胞间传递信息并发挥功能。
研究生科研汇报
外 泌 体 的 发 现 与 研 究
研究生科研汇报
外 泌 体
细 胞 内 由 多 囊 泡 胞 内 体 (multivesicular bodies, MVBs)向外出芽形成, 通过MVBs与细 胞膜融合, 由细胞主动分泌释放到细胞外的 腔内囊泡 (intraluminal vesicles, ILVs)。
纳米粒子跟踪分析
(nanoparticle tracking analysis, NTA) 测量外泌体的直径
Western-blot （ WB ） 法 或 磁 珠 分选的免疫学方法等可清楚地 分析外泌体表面存在标志蛋白
流式细胞技术
(flow cytometry, FACS) 分离外泌体并分析其纯度
外 泌 体 与 肿 瘤 的 关 系
研究生科研汇报
外泌体
——精准肿瘤学的明星——
研究生科研汇报
1 外泌体的发现与研究 2 外泌体的特征 3 外泌体的分离与鉴定 4 外泌体与肿瘤的关系 5 总结与展望
研究生科研汇报
外
1983年, Pan等人在绵羊网织红细胞体
泌
外成熟的过程中, 用异硫氰酸荧光素或者 125I标记的转铁蛋白受体的抗体, 对转铁蛋
研究生科研汇报
免疫激活
肿瘤分泌的外泌体膜上携带肿瘤细胞的抗原, 被树突状细胞识别并呈递给T细胞, 从而诱发免疫反应, 促进免疫激活
免疫逃逸
黑色素瘤所分泌的外泌体膜上含有Fas配体分子，可与T细胞的Fas受体相互作用， 介导T细胞凋亡以逃脱免疫监视
恶化 转移 发展 发生
乳腺癌分泌的外泌体可以促进肿瘤血管生成、肿瘤生长和扩散，促进周围正常 乳腺细胞的增殖并抑制它们的凋亡
被认为是细胞间分子交换和信息传递的生物纳米颗粒。
研究生科研汇报
外
人体中大约有1014个外泌体，近乎于平均每个细胞产生 1000-10000个。
泌
体
正常细胞及肿瘤细胞均分泌外泌体，恶性肿瘤细胞较非 恶性细胞能分泌更多外泌体。通过分析外泌体可以直接获得
癌细胞的基本信息。
的
特
被分泌出的外泌体会进入血液、唾液、尿液及乳汁等体
影像学 生化 病理学
循环肿瘤细胞
（CTC）
微创
液体
循环肿瘤DNA/RNA
活检
（ctDNA/RNA）
肿
肿瘤细胞分泌的外 泌体
早期 诊断
瘤
诊
随机性
断
半衰期短
监测病人 即时情况
不确定性
不能反映肿瘤的 病理状态
对肿瘤远端转移不
循环肿
瘤细胞 （CTC）
循环肿瘤DNA/RNA （ctDNA/RNA）
检测与肿 瘤细胞类 型、疾病 进程、治
外泌体递送EGFR调节肝脏微环境促进胃癌肝转移
间充质干细胞分泌的外泌体可以促进胃癌细胞的生长
胶质瘤细胞分泌的外泌体可以促进其自身的增殖
研究生科研汇报
外
泌
体
与
肿瘤诊断的生物标志物
肿
瘤
的
关
系
肿瘤潜在的治疗靶点
肿瘤治疗的生物标志物 抗肿瘤药物的有效载体
外 泌 体 与 肿 瘤 的 关 系
研究生科研汇报
早期检测难 早期确诊难 容易引发扩散
研 或血小板等其他组分的独特性. 他们将其命名为外泌体(exosome)。
究
研究生科研汇报
外 泌
外泌体却并没有因为初次被发现而被引起重视，反而被误
认为是细胞处理胞内垃圾的一种囊泡外泌形式，用于装载和运 送细胞在成熟过程中所产生的诸如质膜受体一类的废弃物。
体
1996年, Raposo等人发现
的
外泌体具有呈递抗原, 并刺激T 细胞增殖的作用。
使用聚乙二醇沉淀法获得的外泌体，蛋 白污染少，分离效率高，但颗粒大小不一。
利用外泌体表达的特异性抗体标记的免 疫磁珠进行富集，可获得纯度较高的外泌体， 但操作复杂且影响因素较多。
试剂盒
近年来各种商业化的外泌体提取试剂 盒逐渐得以推广。
研究生科研汇报
外 泌 体 的 分 离 与 鉴 定
透射电子显微镜
(transmission electron microscopy, TEM) 观察外泌体的大小、 形态，测量直径
体
白受体进行追踪, 发现细胞膜的转铁蛋白受 体在与一种包含多肽的囊泡结合后, 囊泡与
的
细胞膜分离, 分泌到上清, 这是人类首次观测 到游离于细胞外存在的囊泡。
发
现 与
1987年, 他们发现这些囊泡中含有在网织红细胞成熟过程中丢失的一些成分（乙酰 胆碱酯酶、葡萄糖转运蛋白、核苷转运蛋白和转铁蛋白受体等），同时, 他们发现这些 囊泡膜具有网织红细胞细胞膜的特征, 比如也有极高的鞘磷脂含量, 显示了其区别于细胞
含量波动 准确度较低
是一个可靠的标准
疗手段等
有关
敏感性差
研究生科研汇报
外
几乎存在于人体所有的体液里
泌
体
与 肿
肿 瘤 诊
瘤
具有脂质双分子层结构
断
的
保护内部的核酸分子免
关
于被降解
是液体活检的重要组成部分 在体液中含量多于CTC 每毫升血液超过10个 比CTC更加灵敏
液中，通过循环系统到达其他细胞与组织，产生远程调控作
征
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研究生科研汇报
外
外泌体通过内吞进入受体细胞后，将 “货物”释放进入胞质内，并重新形成多
泌
不同来
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泡体。
源的外
体
泌体进 入受体
外泌体直接与受体细胞膜融合，将携 带的“货物”释放进入受体细胞胞质。
的 特
细胞的 方式
外泌体上的配体与受体细胞膜上特殊 受体结合，既能起到信号传导作用，也能