临床生化检验基础知识培训教材

临床生化检验基础知识培训

一、生化基础知识

二、生化仪器基础知识

三、部分生化项目的临床意义

本文档仅供生化应用工程师参考阅览，更多专业知识请查阅后附参考文献。

肖自强

2014-3-19

一、生化基础知识

1.1生化诊断试剂盒为由一定的化学品或者酶类组成的多成分混合试剂（Reagent），最终以水溶液的方式与待测物发生一系列化学或者生化反应，通过生成物或反应物中某物质的吸光度变化，测量待检测物中某种特定物质的含量。

1.2生化诊断试剂用于检测样本，包括：人体血清（主要）、血浆及尿液中的各种酶类和代谢产物，用于预测，诊断以及治疗监测，协助临床医生诊治疾病提供数据参考。

1.3按功能分为：肝功、血脂、肾功、心肌、代谢、免疫&风湿、离子&其他。

1.4试剂性能评价指标：

1 试剂外观

2批间差

3准确度

4精密度

5线性（灵敏度）

6抗干扰能力（特异性）

7稳定性

1.5试剂检测原理（朗伯比尔定律）：A=Kbc

式中，A 为吸光度;K 为吸收系数，是与入射辐射的波长及吸收物质的性质有关的常数;b为液层厚度，单位为cm;c 为吸收物质的浓度。当浓度的单位为mol/L 时，K 的单位为L/mol·cm，称为摩尔吸收系数，通常用ε表示。摩尔吸收系数ε表示物质对某一波长的辐射的吸收特性。ε愈大，表示物质对某波长辐射的吸收力愈强，因而分光光度法测定的灵敏度就愈高.

1.6理论值与实测值偏差的解释：实测值偏离了朗伯比尔定律。

偏离Lambert-Beer定律的因素：

1复合光对Beer 定律的偏离：吸收定律要求入射光为单色光，而分光光度计单色光的纯度主要决定于色散元件及光路设计，即使高精度的仪器，也得不到纯单色光，而是波长宽度的复合光，其结果导致偏离Lambert Beer 定律。

2杂散光的影响：杂散光(stray light) 是进入检测器待测波长以外的光。主要来源于仪器色散元件表面的散射、单色器内壁尘埃等。

3狭缝宽度的影响：单色器设有进、出口狭缝，狭缝愈窄，单色光愈纯，吸光度增加，但辐射能减小，对弱吸收带的测量有一定影响。定性分析时，为提高分辨能力常采用较小的狭缝，而定量分析时，在灵敏度允许的情况下，宜采用较大狭缝。当出、入射狭缝宽度相等时，狭缝宽度引起的误差最小。

4非吸收作用引起的误差：

1.散射效应：光吸收定律只适用于均匀的吸收体系，如待测溶液是混浊的，当

光通过时，将产生散射效应。其结果使光通过吸收物质的光程不固定，散射光的一部分和透射光一起进入检测器，导致偏离Beer 定律。因此，免疫比浊法常用多点校准来做标准曲线。

2. 荧光效应：分子吸收辐射能后产生的激发态分子以重新发射辐射的方式回

到基态而发射荧光。由于多数显色体系荧光效应很小，而且荧光发射是各向同性，只有一部分沿透射光方向进入检测器，使测量吸光度偏低。一般情况下，荧光效应对分光光度法产生的影响较小。目前，多数光度计设有两个样品室，对有荧光试样可置于离检测器较远的样品室，或在光路中插入适当的滤光片以消除荧光效应。

5测定过程中产生的误差：化学反应引起的误差，人为的误差等，在此不作详细解释。

1.7生化测定方法：临床化学自动分析仪所涉及的测定方法包括终点测定法、连续监测法、固定时间法等。

1.8.1生化分析基本术语概述：

1双波长：由主波长和副波长构成的两个波长，测定样品采用双波长可以消除对实验的影响。主波长是指测定某物质时，生成的产物颜色对光吸收的特有波长。副波长是指测定某物质时，为消除其他干扰物质在主波长造成测定干扰所设定的波长。

2反应杯空白：在特定波长下，光通过以蒸馏水或空气为反应体系所测得的吸光度值。

3试剂空白：在各特定波长下，光通过以蒸馏水或生理盐水为样品和相应测定项目

试剂构成的反应体系所测得的吸光度值。

4样品空白：在各特定波长下，光通过以生物样品和相应测定项目不含有引起反应的一种或多种成分的试剂构成的反应体系所测得的吸光度值;或由生物样品和相应测定项目试剂构成的反应体系产生反应最初时间所测得的吸光度值。

5终点法：这是最常用的分析法。因为该法常有标准液，因此又称比例终点法，是经过一定反应时间后，当反应达到平衡(终点)时做到的一点分析法。一般是在一定温度下，试剂与样品经过一定反应时间，被送人比色系统，然后检测吸光度的变化，由微机系统处理计算和打印显示出结果。其中又分一点终点和两点终点法。

6续监测法：也叫速率法，此法通过测定酶所催化的反应速度，间接计算出酶的含量，称酶活性测定法。在酶促反应过程中，不是任何时期的反应速率都和酶浓度成正比。当酶促反应刚一开始，底物处于过量状态，酶与底物开始结合，生成复合物(ES) ，底物浓度开始下降，此时产物尚未生成。当复合物(ES)分解，生成产物(P) ，酶促反应速度急骤上升，经过很短的作用时间后，产物的生成量或底物的减少量与反应时间成线性关系，反应速度保持恒定不变，这一时期称为零级反应期。随酶促反应继续进行，底物不断消耗，酶促反应条件逐渐变化，酶促反应速度逐渐减慢，产物生成或底物减少量的变化曲线遂趋平坦，这一时期称为一级反应期。此时的反应速率常常不能准确反应酶的含量。因此其测光点一般要求取在反应达到平衡前。7两点速率法：两点速率法也叫固定时间法，对测定及标准采用两个时间点测定。采用此方法的如肌酐（苦味酸法），目前多数自动分析仪还是用Jaffe 氏反应测肌酐，即肌酐能同碱性苦味酸盐生成红橙色化合物，这个反应特异性不高，因为维生素C 、丙酣酸、丙酣、葡萄糖、乙酷醋酸、果糖、氨基马尿酸、蛋白质及其他反应产物亦能与碱性苦位酸盐生成红色化合物，血清中的这些假肌酐约含25%。但真性肌酐与苦味酸的反应为快反应，假肌酐为慢反应，因此测试时测试时间一般在样品与碱性苦味酸试剂混合后25 秒和1 分25 秒在500nm 处测吸光度变化。两时间点的吸光度变化之差，则为特异反应肌酐浓度。

8普通免疫比浊与胶乳增强免疫比浊法：

普通免疫比浊法是抗原与相应的抗体直接结合形成的免疫复合物，在反应液中具有一定的浊度，可由一般分光光度法进行透射比浊（transmission turbidimetry）测定，可用于某些蛋白质和药物浓度等的测定。该法须做多点校准，再经非线性回归，求出抗原或抗体的含量。

胶乳增强免疫比浊法是将抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗粒上，制成致敏的胶乳颗粒，当遇到相应抗原时，发生交联反应，形成抗原抗体复合物，胶乳颗粒发生凝集。单个胶乳颗粒在入射光波长之内并不阻碍光线透过，两个及其两个以上胶乳颗粒凝聚时则使透过的光减少，其减少的程度与胶乳颗粒凝聚的程度呈正比，即与待测抗原量呈正比，由此可检测样本中的特定抗原含量。

该法比普通免疫比浊敏感度高，试剂稳定，个体免疫复合物对结果影响也小，因此结果稳定、可靠，特异性好，精确度高。