HTRF技术原理和应用介绍

Cisbio-HTRF®技术原理和应用简介

HTRF®（均相时间分辨荧光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence ）是一种用来检测纯液相体系中待测物的技术。该技术基于荧光共振能量转移（FRET，Fluorescence Resonance Energy Transfer）和时间分辨荧光（TRF, Time-Resolved Fluorescence)）两大技术，开通的一款高通量药物筛选利器。

荧光共振能量转移（FRET）

利用两种荧光基团的能量转移，这两种荧光基团分别称为能量供体（Donor）和能量受体（Acceptor）。Donor被外来光源激发（例如氙灯或激光），如果它与Acceptor比较接近，可以将能量共振转移到在Acceptor上，使其受到激发，发出特定波长的发射光。

将Donor和Acceptor分别与相互作用的两个生物分子结合，生物分子的结合可以将Donor和Acceptor拉到足够近的距离，产生能量转移，由于Acceptor的发射光来自能量转移，所以实验中不需要将未结合与已结合的分子分开，即不需要洗涤步骤。

时间分辨荧光（TRF）

TRF利用稀土元素中镧系元素的独特性质，它们与普通荧光的主要区别是荧光的持续时间不同。普通荧光的半衰期为纳秒级。镧系元素的半衰期为毫秒级，有6个数量级的差别。所以，在检测室，TRF有一个时间延迟---50us，经过这个时间延迟，普通荧光的信号几乎为零，所以，TRF 的背景非常低，反映样品实际情况。

HTRF®的能量受体（技术创新点）

HTRF®的能量供体是铕(Eu)和钛(Tb)的穴状化合物。在这个穴状化合物里，Eu和Tb被永久地嵌

合在一个笼子里，结构非常稳定，这个结构由J.M.Lehn’s教授发明的，并由此在1987年获得了诺贝尔奖。

HTRF®的能量受体

HTRF®的能量受体也有二种，XL665和d2.它们的光学性质相同，分子量不同，前者分子量为10KD，实际上就是别藻蓝蛋白（APC）。我们将APC的亚基偶联在一起，使其不能解离，提高了稳定性，后者分子量为1KD，在某些实验中有独特的优势。

HTRF®的操作步骤

HTRF®操作步骤非常简单，只需要将实验所需试剂加进去，然后孵育，检测即可。

HTRF®实验数据分析

HTRF®采用了比值法来处理数据，可以去除溶液通透率、细胞大小、细胞数量不同引起的误差。

HTRF®应用范围

Cisbio与几乎所有的仪器供应商都建立了合作伙伴关系，下面是经过验证的仪器列表: