终点显色法试剂盒的临床应用
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脂
4.临床检测内毒素的意义
全国每年临床感染患者2亿人次（表现为：革兰氏阴性菌、真菌、阳性菌、病 毒等感染），其中以革兰氏阴性菌感染占了很大比例。 以往诊断这类疾病主要采用方法为细菌培养法，但细菌培养法所需时间长 （24h以上）且病人服用抗生素有一定程度抑制作用，结果常常呈阴性（细菌内 毒素血症患者血液检测不到细菌），使临床无法确切诊断。
一、细菌内毒素检测试剂盒在 临床的应用
1.细菌內毒素概念： a.革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分脂多糖（LPS）， 也就是细菌内毒素； b.大多数致病原细菌为革兰氏阴性细菌。本法能快 速检测血液中细菌内毒素在临床上具有重大意义； 2.检测的目标：人体血液中的细菌内毒素 3.检测的样品：人体的血清或血浆。其中血清为主要对象。
新北诊断试剂盒
（内毒素、真菌（1-3）-β-D-葡聚糖检测试
剂盒）终点显色法临床运用
目录
1
2
企业简介 鲎试剂介绍及临床上的运用
细菌内毒素试剂盒 真菌检测试剂盒
3
产品优势
与临床现有试剂盒方法比较
检测方法分类及第四代显色基质法意义
一、企业简介
1.基本情况：
1）福州新北生化工业有限公司创立于1995年，由留学归国学者丁友玲创办； 2）公司为生产鲎试剂及其配套产品的高新技术企业。 3）现公司占有3500平方米清洁厂房（1000平方米为局部百级，整体万级），拥 有年产1000万人份的临床检测试剂盒与5000万支鲎试剂的生产流水线 4）公司于2015年取得福建省医疗器械生产许可证及药品生产许可证；
检 测 内 容 及 结 果
C-反应蛋白 降钙素试剂 定量检测试剂盒： 盒存在下列情况 都呈阳性： 当<20mg， 说明存在病毒感 1、严重细菌感染 染可能性大； 2、真菌 3、寄生虫 4、脓毒症 20至50mg之 5、多脏器功能衰 间存在病毒和细 竭 菌的感染； （除病毒外） 当>50mg存 在细菌感染。
二、真菌（1-3）-β-D-葡聚糖检测 试剂盒临床运用
1.（1-3）-β-D葡聚糖概念：
a.存在真菌的细胞壁中，是真菌特有的结构之一
b.真菌类中致病菌主要为：念珠菌、曲霉菌（毛霉菌、隐球菌、接合菌）等真 菌； 2.检测的样品：人体的血清、血浆，其中血清主要对象 3.检测的目标：人体血液中的（1-3）-β-D葡聚糖
市场 部
生产 部
研发 部
品保 部
后勤保 证部
细胞离心设备
冷冻干燥器
工人正在操作封口机
生产区域洁净区走廊
3、公司核心竞争力及历年荣誉
公司取得的5项国家发明专利及15项实用新型专利： 1）抗干扰鲎试剂的制备工艺 （专利号：2003101057615） 2） 隧道式干热灭菌设备测试试用内毒素指示剂的制备方法 （专利号：ZL 2005102000276） 3）一种临床检测试剂的制备方法 （专利号：ZL 2005102000280) 4）(1-3)-β-D-葡聚糖的精制方法（专利号：ZL 2012100760693) 5）一种除液体中热源的凝胶及其制备方法和应用 （专利号：ZL 2014104575879）
特异性： 只与革兰氏 阴性菌内毒素反 应
特异性： 只与真菌 （1-3）β-D葡聚 糖反应
真菌（1-3）β-D葡聚糖检 测试剂盒注册证
细菌内毒素检测试剂盒注 册证
医疗器械生产许可证
四、鲎试剂检测方法分类及第四代显 色基质法的意义
鲎试剂检测方法分类 1、凝胶法鲎试剂（半定量） 2、动态浊度法鲎试剂（定量） 3、显色基质动态浊度法鲎试剂（定量） 第一代 第二代 第三代
2004年以来公司被评为福建省高新技术企业；
2006~2008年主要奖励：福建省科技进步三等奖； 第十六届全国发明展览 会银奖； 海峡两岸职工创新成果金奖 ；福州市科技进步一等奖、二等奖；福 建省巾帼发明专利奖等；
2015年建立省级院士专家工作站；
2015年取得医疗器械生产许可证及体外诊断试剂的注册证； 第四代细菌内毒素检测试剂盒、真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测试剂盒（终 点显色法）为国内首创；
d.灵敏度高：可检测血清中细菌内毒素达 0.005 Eu/ml 以上；
可检测血清中真菌（1-3）β-D葡聚糖达 5 pg/ml以上；
e.临床符合率高，可达98%；
f.碱试剂法处理血清对脂血，溶血，黄疸样本，浑浊样本具有一定的屏蔽作用。
细菌内毒素检测试剂盒 终点显色法原理图
真菌（1-3）β -D葡聚糖检测 试剂盒终点显色法原理图
丁友玲女董事与J· Levin教授 J· Levin教授于1965年发明鲎试 剂用于检测细菌内毒素
丁友玲董事日本留学与导师照 岩永贞昭（左边），日本鲎血 研究世界权威，显色基质 理论的发明者
丁友玲董事与田中重则 田中重则，日本生化工业株式会社 首席研究官，终点显色法 试剂盒产品首创者
2.公司架构
总经 理
我司应用细菌内毒素特异性试剂盒可以简便、快速测定血液中的细菌内毒素 含量是否超过临床限值，其检测结果可以为临床诊断提供重要依据。
5.医院临床检测适用科室及范围 适用范围： 1）各种系统感染疾病 2）细菌性感染疾病 3）原因不明的发热
适用科室： ICU病房
急诊科
感染科
儿科
烧伤科、呼吸内科、血液内科百度文库肾内科、内分泌科、肿瘤科、普外科、胸外科、 移植科、妇产科 6.临床血清内毒素限值：≤0.03Eu/mL 7.血清保存条件：在2~8℃中，可保存72h。
三、细菌内毒素、真菌检测试剂盒与 C-反应蛋白的检测试剂盒及 降钙素试剂盒的比较
试剂盒的比较
试剂盒 名称
C-反应蛋白定 量检测试剂盒
降钙素试剂盒 （PTC）
细菌内毒素检 测试剂盒
血清中细菌 内毒素： ≥0.03Eu/ml 为革兰氏阴性菌 感染。
真菌（1-3）βD葡聚糖检测 试剂盒
血清中真菌 （1-3）β-D葡聚 糖检测试剂盒： ≥20pg/ml为真菌 深部感染。
4、显色基质终点显色法鲎试剂（定量）
第四代
全国首创
细菌内毒素、真菌（1-3）β-D葡聚糖试剂盒（终点显色法）的优势： a.快速，反应时间1h；
b.稳定性好:试剂反应体系加入偶氮化试剂终止反应后检测，稳定性、重现性均好；
c.抗干扰能力强：由于偶氮化反应显玫红色，于波长 545nm 测定，克服血清 中浊度和颜色干扰。
本试剂盒包装规格：2人份/支，20人份/盒； 可以避免血清样品较少时，引起试剂盒的浪费，节约试剂盒成本！
谢谢！
精诚合作，共创未来
4.临床检测真菌的意义 a.目前真菌感染的普遍性 近年来，由于造血干细胞移植、器官移植的广泛开展，高强度免疫抑制 剂，大剂量化疗药物及广谱抗生素的长期应用，使临床患者体内菌群失调，产 生深部真菌感染的发病率呈上升趋势。引起不明发热或长期低烧不退，常常被 误诊为临床耐药性。 b.目前真菌感染诊断的方法 1）细胞培养法（7至10天），临床意义不大 2）活体取菌（患者痛苦难接受、漏检率高）
结论
根据比较证明， 前两种方法均为广泛 性检测不具有特异性， C-反应蛋白定量检测 试剂盒尚可证明有细 菌感染等，但无法说 明感染菌的种类；降 钙素法则对所有感染 都呈阳性。 本公司细菌内毒 素检测试剂盒与真菌 （1-3）β-D葡聚糖检 测试剂盒，当大于限 值时，可判断为革兰 氏阴性细菌感染和深 部真菌感染。 因此我司两种检 测试剂盒可以作为前 两种检测试剂盒的补 充，为临床医生进一 步提供更确切的感染 源依据。
二、鲎试剂简介
中国鲎 (Tachypleus tridentatus ) 海洋节肢动物；俗称: 鸳鸯鱼,夫妻鱼, 马蹄蟹。
鲎血遇氧变蓝
主要原料是鲎 血细胞中的变 形细胞； 鲎试剂是变形 细胞中提取的 蛋白酶冻干制 品；
鲎试验法的确立
1885年美国的W.H.Howell发表了一篇有关鲎血的化学组成和凝集方面 的研究成果，可以说是鲎试剂研究的开端。 1956年美国科学家Bang和Levin发现美洲鲎血液加入革兰氏阴性菌时会 产生凝胶。 1964年Levin和Bang提出了鲎血凝集的初步机理。（Levin是我司的顾 问） 1968年正式建立了鲎试验方法；1980年被美国药典采纳代替兔法检测 药品中细菌内毒素。
血清处理方法
用独创碱试剂 用加热法，沉 加入血清处理球蛋 淀血清中的干扰球 白、白蛋白、凝血 蛋白、白蛋白、凝 因子，可克服干扰 血因子，但处理不 物质对检测的干扰，完全，易出现假阳 降低假阳性与假阴 性结果； 性几率；
用加热法，沉 淀血清中的干扰球 蛋白、白蛋白、凝 血因子，但处理不 完全，易出现假阳 性结果；
终点显色基质法仪器 ——酶标仪 呈现玫红色的即为处理样品
第四代终点显色基质试剂盒与第二、三代对比优势： 试剂盒 比较项目
反应特点
第四代试剂盒 （终点显色法）
第三代试剂盒 （动态显色法）
第二代试剂盒 （动态浊度法）
反应后加入 动态测定 动态测定 偶氮化试剂终止反 （反应终点不明确） 应后，进行测定。 （反应终点不明确） 稳定性、重现性好；
1979 年福建省药品检验所丁友玲（现任我司董事长）、刘端华首先在 国内研制成功鲎试剂。82年中试成功，获卫生部重大成果甲级奖。
80年代日本生化工业株式会社与和光纯药株式会社将鲎试剂制备成试 剂盒，应用于临床检测人血液中的内毒素。
鲎试剂在临床检测上的应用
（终点显色基质法）
一、细菌内毒素试剂盒临床运用 二、真菌检测试剂盒临床运用
细菌内毒素（lps） C因子 B因子 凝固酶原 C因子 B因子 凝固酶
真菌（1-3）β-D葡聚糖 G因子 G因子
凝固酶原
boc-leu-gly-arg——pNA（对硝基苯胺）
pNA boc-leu-gly-arg（游离）
A=405nm测定（淡黄色）
A=545nm测定（玫红色）
：激活成分
最左边的空白样品
本司真菌快速诊断试剂盒： 1）快速检测（1小时） 2）可微量检测至10pg/ml（临床限值为20pg/ml） 3）特异性强，只与（1-3）-β-D葡聚糖反应
5.医院临床检测适用科室及范围 适用范围： 1）各种系统感染疾病 2）深部真菌性感染疾病 3）原因不明的发热 4）长期适用抗生素，但仍为低热体征者 适用科室： ICU病房 急诊科 感染科 烧伤科 儿科 呼吸内科、血液内科、肾内科、内分泌科、肿瘤科、普外科、胸外科、移植科、 风湿免疫科、妇产科 6.临床血清中真菌多糖限值： 1） ≤20pg/mL，基本判为无深部真菌感染（10~20pg/ml之间作为真菌感染观 察期）； 2） ≥20pg/mL，疑似真菌感染，建议结合临床症状进行判断及治疗。 7.血清保存条件：在2~8℃中，可保存72h。
4.临床检测内毒素的意义
全国每年临床感染患者2亿人次（表现为：革兰氏阴性菌、真菌、阳性菌、病 毒等感染），其中以革兰氏阴性菌感染占了很大比例。 以往诊断这类疾病主要采用方法为细菌培养法，但细菌培养法所需时间长 （24h以上）且病人服用抗生素有一定程度抑制作用，结果常常呈阴性（细菌内 毒素血症患者血液检测不到细菌），使临床无法确切诊断。
一、细菌内毒素检测试剂盒在 临床的应用
1.细菌內毒素概念： a.革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分脂多糖（LPS）， 也就是细菌内毒素； b.大多数致病原细菌为革兰氏阴性细菌。本法能快 速检测血液中细菌内毒素在临床上具有重大意义； 2.检测的目标：人体血液中的细菌内毒素 3.检测的样品：人体的血清或血浆。其中血清为主要对象。
新北诊断试剂盒
（内毒素、真菌（1-3）-β-D-葡聚糖检测试
剂盒）终点显色法临床运用
目录
1
2
企业简介 鲎试剂介绍及临床上的运用
细菌内毒素试剂盒 真菌检测试剂盒
3
产品优势
与临床现有试剂盒方法比较
检测方法分类及第四代显色基质法意义
一、企业简介
1.基本情况：
1）福州新北生化工业有限公司创立于1995年，由留学归国学者丁友玲创办； 2）公司为生产鲎试剂及其配套产品的高新技术企业。 3）现公司占有3500平方米清洁厂房（1000平方米为局部百级，整体万级），拥 有年产1000万人份的临床检测试剂盒与5000万支鲎试剂的生产流水线 4）公司于2015年取得福建省医疗器械生产许可证及药品生产许可证；
检 测 内 容 及 结 果
C-反应蛋白 降钙素试剂 定量检测试剂盒： 盒存在下列情况 都呈阳性： 当<20mg， 说明存在病毒感 1、严重细菌感染 染可能性大； 2、真菌 3、寄生虫 4、脓毒症 20至50mg之 5、多脏器功能衰 间存在病毒和细 竭 菌的感染； （除病毒外） 当>50mg存 在细菌感染。
二、真菌（1-3）-β-D-葡聚糖检测 试剂盒临床运用
1.（1-3）-β-D葡聚糖概念：
a.存在真菌的细胞壁中，是真菌特有的结构之一
b.真菌类中致病菌主要为：念珠菌、曲霉菌（毛霉菌、隐球菌、接合菌）等真 菌； 2.检测的样品：人体的血清、血浆，其中血清主要对象 3.检测的目标：人体血液中的（1-3）-β-D葡聚糖
市场 部
生产 部
研发 部
品保 部
后勤保 证部
细胞离心设备
冷冻干燥器
工人正在操作封口机
生产区域洁净区走廊
3、公司核心竞争力及历年荣誉
公司取得的5项国家发明专利及15项实用新型专利： 1）抗干扰鲎试剂的制备工艺 （专利号：2003101057615） 2） 隧道式干热灭菌设备测试试用内毒素指示剂的制备方法 （专利号：ZL 2005102000276） 3）一种临床检测试剂的制备方法 （专利号：ZL 2005102000280) 4）(1-3)-β-D-葡聚糖的精制方法（专利号：ZL 2012100760693) 5）一种除液体中热源的凝胶及其制备方法和应用 （专利号：ZL 2014104575879）
特异性： 只与革兰氏 阴性菌内毒素反 应
特异性： 只与真菌 （1-3）β-D葡聚 糖反应
真菌（1-3）β-D葡聚糖检 测试剂盒注册证
细菌内毒素检测试剂盒注 册证
医疗器械生产许可证
四、鲎试剂检测方法分类及第四代显 色基质法的意义
鲎试剂检测方法分类 1、凝胶法鲎试剂（半定量） 2、动态浊度法鲎试剂（定量） 3、显色基质动态浊度法鲎试剂（定量） 第一代 第二代 第三代
2004年以来公司被评为福建省高新技术企业；
2006~2008年主要奖励：福建省科技进步三等奖； 第十六届全国发明展览 会银奖； 海峡两岸职工创新成果金奖 ；福州市科技进步一等奖、二等奖；福 建省巾帼发明专利奖等；
2015年建立省级院士专家工作站；
2015年取得医疗器械生产许可证及体外诊断试剂的注册证； 第四代细菌内毒素检测试剂盒、真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测试剂盒（终 点显色法）为国内首创；
d.灵敏度高：可检测血清中细菌内毒素达 0.005 Eu/ml 以上；
可检测血清中真菌（1-3）β-D葡聚糖达 5 pg/ml以上；
e.临床符合率高，可达98%；
f.碱试剂法处理血清对脂血，溶血，黄疸样本，浑浊样本具有一定的屏蔽作用。
细菌内毒素检测试剂盒 终点显色法原理图
真菌（1-3）β -D葡聚糖检测 试剂盒终点显色法原理图
丁友玲女董事与J· Levin教授 J· Levin教授于1965年发明鲎试 剂用于检测细菌内毒素
丁友玲董事日本留学与导师照 岩永贞昭（左边），日本鲎血 研究世界权威，显色基质 理论的发明者
丁友玲董事与田中重则 田中重则，日本生化工业株式会社 首席研究官，终点显色法 试剂盒产品首创者
2.公司架构
总经 理
我司应用细菌内毒素特异性试剂盒可以简便、快速测定血液中的细菌内毒素 含量是否超过临床限值，其检测结果可以为临床诊断提供重要依据。
5.医院临床检测适用科室及范围 适用范围： 1）各种系统感染疾病 2）细菌性感染疾病 3）原因不明的发热
适用科室： ICU病房
急诊科
感染科
儿科
烧伤科、呼吸内科、血液内科百度文库肾内科、内分泌科、肿瘤科、普外科、胸外科、 移植科、妇产科 6.临床血清内毒素限值：≤0.03Eu/mL 7.血清保存条件：在2~8℃中，可保存72h。
三、细菌内毒素、真菌检测试剂盒与 C-反应蛋白的检测试剂盒及 降钙素试剂盒的比较
试剂盒的比较
试剂盒 名称
C-反应蛋白定 量检测试剂盒
降钙素试剂盒 （PTC）
细菌内毒素检 测试剂盒
血清中细菌 内毒素： ≥0.03Eu/ml 为革兰氏阴性菌 感染。
真菌（1-3）βD葡聚糖检测 试剂盒
血清中真菌 （1-3）β-D葡聚 糖检测试剂盒： ≥20pg/ml为真菌 深部感染。
4、显色基质终点显色法鲎试剂（定量）
第四代
全国首创
细菌内毒素、真菌（1-3）β-D葡聚糖试剂盒（终点显色法）的优势： a.快速，反应时间1h；
b.稳定性好:试剂反应体系加入偶氮化试剂终止反应后检测，稳定性、重现性均好；
c.抗干扰能力强：由于偶氮化反应显玫红色，于波长 545nm 测定，克服血清 中浊度和颜色干扰。
本试剂盒包装规格：2人份/支，20人份/盒； 可以避免血清样品较少时，引起试剂盒的浪费，节约试剂盒成本！
谢谢！
精诚合作，共创未来
4.临床检测真菌的意义 a.目前真菌感染的普遍性 近年来，由于造血干细胞移植、器官移植的广泛开展，高强度免疫抑制 剂，大剂量化疗药物及广谱抗生素的长期应用，使临床患者体内菌群失调，产 生深部真菌感染的发病率呈上升趋势。引起不明发热或长期低烧不退，常常被 误诊为临床耐药性。 b.目前真菌感染诊断的方法 1）细胞培养法（7至10天），临床意义不大 2）活体取菌（患者痛苦难接受、漏检率高）
结论
根据比较证明， 前两种方法均为广泛 性检测不具有特异性， C-反应蛋白定量检测 试剂盒尚可证明有细 菌感染等，但无法说 明感染菌的种类；降 钙素法则对所有感染 都呈阳性。 本公司细菌内毒 素检测试剂盒与真菌 （1-3）β-D葡聚糖检 测试剂盒，当大于限 值时，可判断为革兰 氏阴性细菌感染和深 部真菌感染。 因此我司两种检 测试剂盒可以作为前 两种检测试剂盒的补 充，为临床医生进一 步提供更确切的感染 源依据。
二、鲎试剂简介
中国鲎 (Tachypleus tridentatus ) 海洋节肢动物；俗称: 鸳鸯鱼,夫妻鱼, 马蹄蟹。
鲎血遇氧变蓝
主要原料是鲎 血细胞中的变 形细胞； 鲎试剂是变形 细胞中提取的 蛋白酶冻干制 品；
鲎试验法的确立
1885年美国的W.H.Howell发表了一篇有关鲎血的化学组成和凝集方面 的研究成果，可以说是鲎试剂研究的开端。 1956年美国科学家Bang和Levin发现美洲鲎血液加入革兰氏阴性菌时会 产生凝胶。 1964年Levin和Bang提出了鲎血凝集的初步机理。（Levin是我司的顾 问） 1968年正式建立了鲎试验方法；1980年被美国药典采纳代替兔法检测 药品中细菌内毒素。
血清处理方法
用独创碱试剂 用加热法，沉 加入血清处理球蛋 淀血清中的干扰球 白、白蛋白、凝血 蛋白、白蛋白、凝 因子，可克服干扰 血因子，但处理不 物质对检测的干扰，完全，易出现假阳 降低假阳性与假阴 性结果； 性几率；
用加热法，沉 淀血清中的干扰球 蛋白、白蛋白、凝 血因子，但处理不 完全，易出现假阳 性结果；
终点显色基质法仪器 ——酶标仪 呈现玫红色的即为处理样品
第四代终点显色基质试剂盒与第二、三代对比优势： 试剂盒 比较项目
反应特点
第四代试剂盒 （终点显色法）
第三代试剂盒 （动态显色法）
第二代试剂盒 （动态浊度法）
反应后加入 动态测定 动态测定 偶氮化试剂终止反 （反应终点不明确） 应后，进行测定。 （反应终点不明确） 稳定性、重现性好；
1979 年福建省药品检验所丁友玲（现任我司董事长）、刘端华首先在 国内研制成功鲎试剂。82年中试成功，获卫生部重大成果甲级奖。
80年代日本生化工业株式会社与和光纯药株式会社将鲎试剂制备成试 剂盒，应用于临床检测人血液中的内毒素。
鲎试剂在临床检测上的应用
（终点显色基质法）
一、细菌内毒素试剂盒临床运用 二、真菌检测试剂盒临床运用
细菌内毒素（lps） C因子 B因子 凝固酶原 C因子 B因子 凝固酶
真菌（1-3）β-D葡聚糖 G因子 G因子
凝固酶原
boc-leu-gly-arg——pNA（对硝基苯胺）
pNA boc-leu-gly-arg（游离）
A=405nm测定（淡黄色）
A=545nm测定（玫红色）
：激活成分
最左边的空白样品
本司真菌快速诊断试剂盒： 1）快速检测（1小时） 2）可微量检测至10pg/ml（临床限值为20pg/ml） 3）特异性强，只与（1-3）-β-D葡聚糖反应
5.医院临床检测适用科室及范围 适用范围： 1）各种系统感染疾病 2）深部真菌性感染疾病 3）原因不明的发热 4）长期适用抗生素，但仍为低热体征者 适用科室： ICU病房 急诊科 感染科 烧伤科 儿科 呼吸内科、血液内科、肾内科、内分泌科、肿瘤科、普外科、胸外科、移植科、 风湿免疫科、妇产科 6.临床血清中真菌多糖限值： 1） ≤20pg/mL，基本判为无深部真菌感染（10~20pg/ml之间作为真菌感染观 察期）； 2） ≥20pg/mL，疑似真菌感染，建议结合临床症状进行判断及治疗。 7.血清保存条件：在2~8℃中，可保存72h。