终点显色法试剂盒的临床应用
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒显色法-碧云天
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)产品简介：碧云天生产的显色法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。
对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。
细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。
基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞，这就是本试剂盒通过TUNEL(T dT-mediated d U TP N ick-E nd L abeling)法检测细胞凋亡的原理。
本试剂盒有如下优点。
(1) 高灵敏度：可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。
(2) 特异性好：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。
(3) 快速：仅需约2-3个小时即可完成。
(4) 应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。
这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
显色基质鲎试剂盒使用说明书 (终点显色法,含偶氮化试剂)
显色基质鲎试剂盒使用说明书(终点显色法，含偶氮化试剂)【用途】显色基质鲎试剂( Chromogenic End-point Tachypleus Amebocyte Lysate , CE TAL )用于体外细菌内毒素的定量检测，禁止以任何途径进入机体。
【原理】鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品,鲎试剂中含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。
在适宜的条件下（温度，pH值及无干扰物质），细菌内毒素激活C 因子，引起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质，使其分解为多肽和黄色的对硝基苯胺（pNA，λmax = 405nm）。
在一定时间内，pNA的生成量与细菌内毒素浓度成正相关，据此，可以定量供试品的内毒素浓度。
同时，对硝基苯胺（pNA）也可用偶氮化试剂染成玫瑰红色（λmax = 545nm），避免了供试品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰。
【检测限】按反应时间不同可检测0.1EU/ml-1 EU/ml和0.01EU/ml -0.1EU/ml两个区间( 反应时间T 1 和T 2 见出厂检验报告) 。
【试剂盒组成】细菌内毒素工作品，2支鲎试剂， 1.7ml/支，2支显色基质，1.7ml/支，2支偶氮化试剂1，10ml/支，2支偶氮化试剂2，10ml/支，2支偶氮化试剂3，10ml/支，2支HCl (反应终止剂)，50ml/瓶，1瓶细菌内毒素检查用水，50ml/瓶，2瓶【贮存】阴凉处, 最佳2-8℃,避光贮存。
【用法】1 .材料和设备1.1 试剂鲎试剂、细菌内毒素工作品、显色基质、偶氮化试剂1 、偶氮化试剂2 、偶氮化试剂3、HC l ( 反应终止剂) 、细菌内毒素检查用水。
1.2器材旋涡混合仪、移液器、多道移液器、封口膜、试管架。
恒温水浴箱（37±1℃）、分光光度计。
注意：接触试剂及供试品的所有器皿必须是无热原的(我公司提供无热原耗材)。
QIA33 TUNEL显色法凋亡检测试剂盒中文使用说明书_Merck
Calbiochem ®FragEL™ DNA Fragmentation Detection Kit,Colorimetric -TdT Enzyme目录货号QIA33背景介绍背景介绍：：细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象，在生物体进化、内环境的稳定以及系统发育中发挥着重要的作用。
细胞凋亡发生在正常的细胞周期循环中，并发生形态学和生理生化的特征性改变，比如细胞皱缩，细胞间连接消失，线粒体膜电位消失，通透性改变，核质浓缩，核膜核仁破碎，DNA 降解成为约180bp-200bp 的片段；胞膜有小泡状突起，膜内侧磷脂酰丝氨酸外翻到膜表面，胞膜结构仍保持完整，最终凋亡细胞遗骸被分割包裹为几个凋亡小体，并迅速被周围专职或非专职吞噬细胞吞噬。
以上改变发生在不同的细胞凋亡阶段。
检测原理检测原理：：在凋亡晚期细胞中，DNA 会被降解为不同大小的片段，正常的或正在增殖的细胞则几乎没有DNA 的断裂，该方法是将生物素（Biotin ）标记和未标记的dNTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT 酶）的作用下，连接到凋亡细胞中断裂DNA 片段的3’-OH 末端，然后再用亲和素（Streptavidin ）标记的HRP 与标记上的Biotin-dNTP 结合，并通过DAB 显色后用显微镜检测凋亡细胞。
试剂盒对标试剂盒对标记反应进行了优化记反应进行了优化，，采用最佳比例的采用最佳比例的生物生物生物素标记和未标记的素标记和未标记的dNTP 进行3’-OH 末端的核苷酸掺入末端的核苷酸掺入，，使得同一个断裂的DNA 片段片段末端可以形成更长的末端可以形成更长的末端可以形成更长的““标记尾巴标记尾巴””，该“标记尾巴标记尾巴””减少了相邻掺入dNTP 上标记基团的空间位阻上标记基团的空间位阻，，增加每个断裂片段后的增加每个断裂片段后的标记标记标记基团数目基团数目基团数目；；同时生物素和亲和素的高亲和力也可以和力也可以提高检测灵敏度提高检测灵敏度提高检测灵敏度，，减少非特异性反应减少非特异性反应。
体外诊断试剂分类和常见产品技术原理及应用
第三类产品：
1．与致病性病原体抗原、抗体以及核酸等检测相关的试剂； 2．与血型、组织配型相关的试剂； 3．与人类基因检测相关的试剂； 4．与遗传性疾病相关的试剂； 5．与麻醉药品、精神药品、医疗用毒性药品检测相关的试剂； 6．与治疗药物作用靶点检测相关的试剂; 7．与肿瘤标志物检测相关的试剂; 8．与变态反应（过敏原）相关的试剂。
P C R - 电泳： α - 地中海贫血基因诊断试剂盒（ gap-PCR法）
转录介导扩增（TMA）：沙眼衣原体与结核分枝杆 菌检测试剂盒
PCR基本原理示意图
PCR
PCR产物的检测
96孔酶标法
96孔酶标法 加样 分析 观察 数据
过氧化 物酶联 物
（第十类） 基因芯片（微阵列）类试剂
基因芯片（微阵列）：α - 地中海贫血基因芯片诊断试 剂盒
（第十二类） 普通生化类试剂（十万级要求） （包括酶类化学试剂、凝血试剂类 等试剂）
酶类化学试剂:丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒； 碱性磷酸酶（ALP）测定试剂盒 凝血试剂:凝血酶原时间（PT）测定试剂盒；
组织纤溶酶原激活物（t-PT）测定试剂盒
普通生化类试剂(十万级要求)（1）
★原理： 临床普通生化类试剂是一类用于测定人血液、尿液等中各项生 化指标的试剂。含有各种非特异性蛋白成分，要求在十万级洁净 环境中生产。检测方法均为比色法，方法学原理均为显色反应。
免疫组化：癌胚抗原检测试剂盒（多抗） 免疫比浊：β-微球蛋白测定试剂盒（免疫比浊法） 乳胶凝集：沙门氏菌乳胶凝集试剂盒
抗原
抗原：指进入有免疫活性的组织（ 宿主）而引发免疫应答的物质。或 虽不能引发免疫，但可以同抗体结 合的物质。 蛋白质，多糖，核酸，糖脂，青 霉素
关于食品安全快速检测试剂盒的一些见解
关于食品安全快速检测试剂盒的一些见解从四个方面浅谈食品安全检测试剂盒：一、食品安全检测试剂盒产业出现的原因和重要性1、实验室设备数量有限：食品在生产、储存、运输及销售等各个环节，都有可能受到污染，需要多部门、多环节来加以监控。
而实验室的建设成本较大、设备数量有限，满足不了实际需求，由此需要便携式的快速检测设备、试材来实施快速检测行为。
2、实验室的样品检测周期较长：对于许多食物如蔬菜、豆浆、快餐等等，如果送实验室检测，在还没有得到检测报告之前就已过食用期或已销售待尽了。
为保障此类食品的食用安全性，比较好的措施即是快速检测。
3、实验室的样品检测费用较高：许多廉价、普遍食用而又容易出问题的食物如集贸市场出售的食物，要用成百上千倍的检测费用由实验室来全面保障食用者的安全是不现实的，而快速检测则是一种可行的补充行为。
4、实验室的工作量较大：有些物质如色素，己知的就有三千多种，要想区分哪些是食用色素、哪些是非食用色素，要用常规的方法检测其工作量是相当大的，为了减轻工作强度，提高工作效率，需要快速检测加以筛选定性，条件许可时再加以定量。
以上的几种情况导致食品检测测远远满足不了食品安全保障的需求，由此需要快速检测行业来适应食品业发展的需要，食品安全检测试剂盒等快速检测产品就应运而生了。
二、试剂盒按检测方法的分类1、酶联免疫法：酶联免疫法的基本原理是，酶分子与抗体分子共价结合，滴加底物后，底物可在酶作用下出现颜色反应。
根据此方法研制的试剂盒称为酶联免疫试剂盒，既可以定性检测又可以定量检测，检测最快只需几个小时。
此方法多用来检测兽药。
2、化学发光法：化学发光法的基本原理与酶联免疫法基本相同，不同之处在于酶标记物具有产生荧光的特性。
根据此方法研制的试剂盒称为化学发光试剂盒，与荧光光度计或与之配套的化学发光仪可以定量检测。
总体来说化学发光法研制的试剂盒比酶联免疫法试剂盒更灵敏和精确。
3、酶法：酶法的基本原理是利用酶催化一系列生物化学反应，最终产生可用现有检测方法测定的物质。
[精华]鲎试剂试验方法
![[精华]鲎试剂试验方法](https://img.taocdn.com/s3/m/28cbff01caaedd3383c4d3b4.png)
[精华]鲎试剂试验方法鲎试剂实验方法鲎试剂按实验方法可分为:凝胶法、动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂。
凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。
凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。
此法操作比较简单，经济，不需要专用测定设备，可以进行定性或半定量测定。
凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.2ml/支的单个测试或0.5ml/支至5.2ml/瓶的真空封口西林瓶装的多个测试。
使用时一般应加细菌内毒素检查用水复溶后使用。
厦门市鲎试剂实验厂有限公司的真空封口试管凝胶法鲎试剂是把鲎试剂直接灌装在试管中，在真空中压盖封口的新产品。
使用时直接用样品溶解鲎试剂，不会割伤手，更加简单方便安全。
特异性鲎试剂，即弃G因子鲎试剂，是厦门市鲎试剂实验厂有限公司国内首创的产品，它专一对内毒素起反应，避免了G因子旁路的干扰，使检测结果更加可靠，在药检和临床检验方面是不可或缺的理想检测试剂。
目前厦门市鲎试剂实验厂有限公司提供的各种内毒素检测鲎试剂均为特异性鲎试剂，都能对抗葡聚糖的干扰，只对内毒素起反应。
因此不列为独立品种。
动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂，这四种方法都是定量检测内毒素的。
这几种定量法鲎试剂统称光度法鲎试剂。
根据检测原理，终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。
浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。
终点浊度法未见商品化产品。
动态浊度法(又称动态比浊法)是检测反应混合物的浊度上升某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。
动态浊度法的特点为:1. 能准确定量。
2.检测范围宽，可达4个数量级。
3.灵敏度高达0.005EU/ml。
4. 操作简便，系统自动检测分析，一步即成。
5. 经济实用，试剂样品需要量少，可降至50μL。
6. 和微生物检测系统Elx808(配套IU)及专用软件TALgent使用，一次可同时检测多达96个样品。
凝胶限量法和终点显色基质法测定细菌内毒素的比较
凝胶限量法和终点显色基质法测定细菌内毒素的比较摘要：目的用凝胶限量法和终点显色基质法对医疗器械骨水泥杯的细菌内毒素含量进行检测，比较两种方法建立时的优缺点。
方法采用USP 41 <85> Bacterial Endotoxins Test，对供试品进行细菌内毒素检测试验。
关键词：医疗器械；细菌内毒素；方法；比较随着科技发展的不断进步，医疗水平的不断提升，涌现出越来越多的医疗器械及其生产企业，尤其是骨科植入类，作为三类高风险医疗器械，产品相关的生物学检测的技术和方法，需要尽可能的反映器械真实的某物质含量水平。
本文就骨水泥杯，笔者采用凝胶限量法和终点显色基质法对其细菌内毒素检测进行比较。
1材料与试剂1.1显色基质鲎试剂细菌内毒素工作品Control Standard Endotoxin（CSE）（批号：249029，规格：10ng/vial），鲎试剂Pyrochrome? Limulus Amebocyte Lysate（LAL）（批号：2041707，规格：3.2ml/vial），细菌内毒素检查用水LAL Reagent Water（LRW）（批号：AD16729285，规格：100ml/vial），β葡聚糖抑制缓冲液Beta Glucan Inhibiting Buffer（批号：1207057，规格：5.5ml/vial），以上由Associates of CAPE COD Incorporated公司生产。
冰醋酸（批号：20130503，规格：500ml/瓶），由国药集团化学试剂有限公司生产。
1.2凝胶法鲎试剂细菌内毒素工作品Control Standard Endotoxin（CSE）（批号：161，规格：0.5ug/vial），鲎试剂Pyrotell LAL（LAL）（批号：218-02-861，规格：0.125EU/ml；2ml/vial），细菌内毒素检查用水LAL Reagent Water（LRW）（批号：AD16729285，规格：100ml/vial），β葡聚糖抑制缓冲液Beta Glucan Inhibiting Buffer（批号：1207057，规格：5.5ml/vial），以上由Associates of CAPE COD Incorporated公司生产。
《ELISA试剂盒》课件
CHAPTER 04
ELISA试剂盒的操作步骤
实验前的准备
实验环境
确保实验室环境清洁、无尘， 并具备适当的照明和通风设施
。
实验器材
准备所需的实验器材，如移液 器、吸头、酶标板、微孔板夹 等，并进行清洗和消毒。
试剂准备
根据实验需求，准备适量的 ELISA试剂盒、样本、标准品、 洗涤液等，并确保试剂在有效 期内。
酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种基于抗原-抗体反应的检测方法，通过酶标记 的抗体或抗原与相应的抗原或抗体结合，再利用酶催化底物反应显色，达到检测 目的。
酶联免疫吸附试验具有高灵敏度、高特异性和可定量等优点，广泛应用于医学、 生物学、农业等领域。
酶标板的设计与制作
酶标板是ELISA试验中重要的实验器材，常用的酶标板有96孔、48孔和12孔等规格 。
《elisa试剂盒》PPT课 件
CONTENTS 目录
• ELISA试剂盒简介 • ELISA试剂盒的原理 • ELISA试剂盒的种类与选择 • ELISA试剂盒的操作步骤 • ELISA试剂盒的应用与注意事项
CHAPTER 01
ELISA试剂盒简介
ELISA试剂盒的定义
酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA ）是一种常用的免疫学检测方法，而 ELISA试剂盒则是根据该方法设计的一
特异性好
针对特定的目标物质设计，能够准确 区分不同物质。
ELISA试剂盒的优点与局限性
操作简便
实验操作简单，易于标准化和自动化。
VS
适用范围广
可用于不同类型样本的检测，如血清、尿 液、细胞培养液等。
ELISA试剂盒的优点与局限性
内毒素检测方法
内毒素检测方法一、内毒素的检测方法常用的检测内毒素的方法有以下几种：1.凝胶法：通过鲎试剂（鲎试剂中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等）与内毒素发生凝集反应产生凝固蛋白（凝胶）的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。
凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。
此法操作比较简单，经济，不需要专用测定设备，可以进行定性或半定量测定。
2.动态浊度法；浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。
内毒素与鲎试剂中的凝固酶原激活呈凝固酶，凝固酶可使凝固蛋白原变成凝固蛋白（即产生凝胶），使液体的浊度发生变化，通过动态观察浊度变化速率检测。
3.终点显色法:通过由于细菌内毒素激活鲎试剂（鲎试剂中含有C 因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等）C因子，引起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质（含N-α-苯甲酰-DL-精氨酰-4-硝基苯胺盐酸盐），使其分解为多肽和黄色的对硝基苯胺（pNA，λmax = 405nm）。
同时，对硝基苯胺（pNA）也可用偶氮化试剂染成玫瑰红色（λmax = 545nm），避免了供试品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰。
根据产物颜色判断内毒素浓度，又称为比色法。
4.动态显色法:内毒素可激活鲎试剂引起一系列酶促反应，产生黄色的对硝基苯胺（pNA，λmax = 405nm），在一定时间内，动态观察对硝基苯胺（pNA）的生成量，与细菌内毒素浓度成正相关。
但此方法需要带温育系统的动态光度测定仪器及配套软件。
5.其他检测方法：还有一些直接测定内毒素定量的方法如酶联免疫吸附测定法(ELISA)、免疫学方法（如火箭免疫电泳试验法、L-聚赖氨酸法、双抗体夹心法、荧光偏振法等）等，这些方法的特点是特异性、准确性高，但其应用尚待大量临床实践的验证，操作尚待进一步简化；还有一些间接测定的方法，如生物学方法利用LPS刺激免疫细胞产生IL-1、TNF，通过间接测定IL-1、TNF等细胞因子含量，推算出待检样本中的LPS含量；化学发光法：应用CR1和CR3受体诱导中性粒细胞的氧化反应作为一个反应平台，通过测定内毒素对中性粒细胞的生物学作用来检测内毒素的含量；流式细胞术：应用针对内毒素表面抗原决定簇的单克隆抗体对内毒素进行荧光标定而后应用流式细胞仪进行检测。
终点显色法试剂盒的临床应用ppt课件
丁友玲女董事与J·Levin教授
J·Levin教授于1965年发明鲎试 剂用于检测细菌内毒素
丁友玲董事日本留学与导师照
岩永贞昭（左边），日本鲎血 研究世界权威，显色基质 理论的发明者
丁友玲董事与田中重则
田中重则，日本生化工业株式会社 首席研究官，终点显色法 试剂盒产品首创者
3
2.公司架构
总经 理
市场 部
14
二、真菌（1-3）-β-D-葡聚糖检测 试剂盒临床运用
1.（1-3）-β-D葡聚糖概念： a.存在真菌的细胞壁中，是真菌特有的结构之一 b.真菌类中致病菌主要为：念珠菌、曲霉菌（毛霉菌、隐球菌、接合菌）等真
菌； 2.检测的样品：人体的血清、血浆，其中血清主要对象 3.检测的目标：人体血液中的（1-3）-β-D葡聚糖
以往诊断这类疾病主要采用方法为细菌培养法，但细菌培养法所需时间长 （24h以上）且病人服用抗生素有一定程度抑制作用，结果常常呈阴性（细菌内 毒素血症患者血液检测不到细菌），使临床无法确切诊断。
我司应用细菌内毒素特异性试剂盒可以简便、快速测定血液中的细菌内毒素 含量是否超过临床限值，其检测结果可以为临床诊断提供重要依据。
1956年美国科学家Bang和Levin发现美洲鲎血液加入革兰氏阴性菌时会 产生凝胶。
1964年Levin和Bang提出了鲎血凝集的初步机理。（Levin是我司的顾 问）
1968年正式建立了鲎试验方法；1980年被美国药典采纳代替兔法检测 药品中细菌内毒素。
197首先在 国内研制成功鲎试剂。82年中试成功，获卫生部重大成果甲级奖。
（专利号：ZL 2005102000276） 3）一种临床检测试剂的制备方法 （专利号：ZL 2005102000280) 4）(1-3)-β-D-葡聚糖的精制方法（专利号：ZL 2012100760693) 5）一种除液体中热源的凝胶及其制备方法和应用
显色基质鲎试剂盒使用说明书(终点显色法,含偶氮化试剂)
显色基质鲎试剂盒使用说明书(终点显色法，含偶氮化试剂)货号：T7571保存：阴凉处，最佳2-8℃，避光贮存。
产品内容：细菌内毒素工作品，5支鲎试剂， 1.7ml/支，5支显色基质，1.7ml/支，5支偶氮化试剂1，10ml/支，5支偶氮化试剂2，10ml/支，5支偶氮化试剂3，10ml/支，5支HCl(反应终止剂)，50ml/瓶，1瓶细菌内毒素检查用水，50ml/瓶，3瓶用途：显色基质鲎试剂(Chromogenic End-point TachypleusAmebocyte Lysate，CE TAL)用于体外细菌内毒素的定量检测，禁止以任何途径进入机体。
原理：鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品，鲎试剂中含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。
在适宜的条件下（温度，pH值及无干扰物质），细菌内毒素激活C因子，引起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质，使其分解为多肽和黄色的对硝基苯胺（pNA，λmax=405nm）。
在一定时间内，pNA的生成量与细菌内毒素浓度成正相关，据此，可以定量供试品的内毒素浓度。
同时，对硝基苯胺（pNA）也可用偶氮化试剂染成玫瑰红色（λmax=545nm），避免了供试品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰。
检测限：按反应时间不同可检测0.1EU/ml-1EU/ml和0.01EU/ml-0.1EU/ml两个区间(反应时间T1和T2见出厂检验报告)。
用法：1.材料和设备1.1试剂鲎试剂、细菌内毒素工作品、显色基质、偶氮化试剂1、偶氮化试剂2、偶氮化试剂3、HC l(反应终止剂)、细菌内毒素检查用水。
1.2器材无热原试管、无热原吸头、旋涡混合仪、移液器、多道移液器、封口膜、试管架、恒温水浴箱（37±1℃）、分光光度计。
注意：接触试剂及供试品的所有器皿必须是无热原的(我公司提供无热原耗材)。
玻璃器皿可经250℃干烤至少60分钟去除热原。
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市场 部
生产 部
研发 部
品保 部
后勤保 证部
细胞离心设备
冷冻干燥器
工人正在操作封口机
生产区域洁净区走廊
3、公司核心竞争力及历年荣誉
公司取得的5项国家发明专利及15项实用新型专利： 1）抗干扰鲎试剂的制备工艺 （专利号：2003101057615） 2） 隧道式干热灭菌设备测试试用内毒素指示剂的制备方法 （专利号：ZL 2005102000276） 3）一种临床检测试剂的制备方法 （专利号：ZL 2005102000280) 4）(1-3)-β-D-葡聚糖的精制方法（专利号：ZL 2012100760693) 5）一种除液体中热源的凝胶及其制备方法和应用 （专利号：ZL 2014104575879）
一、细菌内毒素检测试剂盒在 临床的应用
1.细菌內毒素概念： a.革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分脂多糖（LPS）， 也就是细菌内毒素； b.大多数致病原细菌为革兰氏阴性细菌。本法能快 速检测血液中细菌内毒素在临床上具有重大意义； 2.检测的目标：人体血液中的细菌内毒素 3.检测的样品：人体的血清或血浆。其中血清为主要对象。
我司应用细菌内毒素特异性试剂盒可以简便、快速测定血液中的细菌内毒素 含量是否超过临床限值，其检测结果可以为临床诊断提供重要依据。
5.医院临床检测适用科室及范围 适用范围： 1）各种系统感染疾病 2）细菌性感染疾病 3）原因不明的发热
适用科室： ICU病房
急诊科
感染科
儿科
烧伤科、呼吸内科、血液内科、肾内科、内分泌科、肿瘤科、普外科、胸外科、 移植科、妇产科 6.临床血清内毒素限值：≤0.03Eu/mL 7.血清保存条件：在2~8℃中，可保存72h。
脂
4.临床检测内毒素的意义
全国每年临床感染患者2亿人次（表现为：革兰氏阴性菌、真菌、阳性菌、病 毒等感染），其中以革兰氏阴性菌感染占了很大比例。 以往诊断这类疾病主要采用方法为细菌培养法，但细菌培养法所需时间长 （24h以上）且病人服用抗生素有一定程度抑制作用，结果常常呈阴性（细菌内 毒素血症患者血液检测不到细菌），使临床无法确切诊断。
细菌内毒素（lps） C因子 B因子 凝固子 G因子
凝固酶原
boc-leu-gly-arg——pNA（对硝基苯胺）
pNA boc-leu-gly-arg（游离）
A=405nm测定（淡黄色）
A=545nm测定（玫红色）
：激活成分
最左边的空白样品
本司真菌快速诊断试剂盒： 1）快速检测（1小时） 2）可微量检测至10pg/ml（临床限值为20pg/ml） 3）特异性强，只与（1-3）-β-D葡聚糖反应
5.医院临床检测适用科室及范围 适用范围： 1）各种系统感染疾病 2）深部真菌性感染疾病 3）原因不明的发热 4）长期适用抗生素，但仍为低热体征者 适用科室： ICU病房 急诊科 感染科 烧伤科 儿科 呼吸内科、血液内科、肾内科、内分泌科、肿瘤科、普外科、胸外科、移植科、 风湿免疫科、妇产科 6.临床血清中真菌多糖限值： 1） ≤20pg/mL，基本判为无深部真菌感染（10~20pg/ml之间作为真菌感染观 察期）； 2） ≥20pg/mL，疑似真菌感染，建议结合临床症状进行判断及治疗。 7.血清保存条件：在2~8℃中，可保存72h。
d.灵敏度高：可检测血清中细菌内毒素达 0.005 Eu/ml 以上；
可检测血清中真菌（1-3）β-D葡聚糖达 5 pg/ml以上；
e.临床符合率高，可达98%；
f.碱试剂法处理血清对脂血，溶血，黄疸样本，浑浊样本具有一定的屏蔽作用。
细菌内毒素检测试剂盒 终点显色法原理图
真菌（1-3）β -D葡聚糖检测 试剂盒终点显色法原理图
二、鲎试剂简介
中国鲎 (Tachypleus tridentatus ) 海洋节肢动物；俗称: 鸳鸯鱼,夫妻鱼, 马蹄蟹。
鲎血遇氧变蓝
主要原料是鲎 血细胞中的变 形细胞； 鲎试剂是变形 细胞中提取的 蛋白酶冻干制 品；
鲎试验法的确立
1885年美国的W.H.Howell发表了一篇有关鲎血的化学组成和凝集方面 的研究成果，可以说是鲎试剂研究的开端。 1956年美国科学家Bang和Levin发现美洲鲎血液加入革兰氏阴性菌时会 产生凝胶。 1964年Levin和Bang提出了鲎血凝集的初步机理。（Levin是我司的顾 问） 1968年正式建立了鲎试验方法；1980年被美国药典采纳代替兔法检测 药品中细菌内毒素。
2004年以来公司被评为福建省高新技术企业；
2006~2008年主要奖励：福建省科技进步三等奖； 第十六届全国发明展览 会银奖； 海峡两岸职工创新成果金奖 ；福州市科技进步一等奖、二等奖；福 建省巾帼发明专利奖等；
2015年建立省级院士专家工作站；
2015年取得医疗器械生产许可证及体外诊断试剂的注册证； 第四代细菌内毒素检测试剂盒、真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测试剂盒（终 点显色法）为国内首创；
结论
根据比较证明， 前两种方法均为广泛 性检测不具有特异性， C-反应蛋白定量检测 试剂盒尚可证明有细 菌感染等，但无法说 明感染菌的种类；降 钙素法则对所有感染 都呈阳性。 本公司细菌内毒 素检测试剂盒与真菌 （1-3）β-D葡聚糖检 测试剂盒，当大于限 值时，可判断为革兰 氏阴性细菌感染和深 部真菌感染。 因此我司两种检 测试剂盒可以作为前 两种检测试剂盒的补 充，为临床医生进一 步提供更确切的感染 源依据。
特异性： 只与革兰氏 阴性菌内毒素反 应
特异性： 只与真菌 （1-3）β-D葡聚 糖反应
真菌（1-3）β-D葡聚糖检 测试剂盒注册证
细菌内毒素检测试剂盒注 册证
医疗器械生产许可证
四、鲎试剂检测方法分类及第四代显 色基质法的意义
鲎试剂检测方法分类 1、凝胶法鲎试剂（半定量） 2、动态浊度法鲎试剂（定量） 3、显色基质动态浊度法鲎试剂（定量） 第一代 第二代 第三代
二、真菌（1-3）-β-D-葡聚糖检测 试剂盒临床运用
1.（1-3）-β-D葡聚糖概念：
a.存在真菌的细胞壁中，是真菌特有的结构之一
b.真菌类中致病菌主要为：念珠菌、曲霉菌（毛霉菌、隐球菌、接合菌）等真 菌； 2.检测的样品：人体的血清、血浆，其中血清主要对象 3.检测的目标：人体血液中的（1-3）-β-D葡聚糖
检 测 内 容 及 结 果
C-反应蛋白 降钙素试剂 定量检测试剂盒： 盒存在下列情况 都呈阳性： 当<20mg， 说明存在病毒感 1、严重细菌感染 染可能性大； 2、真菌 3、寄生虫 4、脓毒症 20至50mg之 5、多脏器功能衰 间存在病毒和细 竭 菌的感染； （除病毒外） 当>50mg存 在细菌感染。
终点显色基质法仪器 ——酶标仪 呈现玫红色的即为处理样品
第四代终点显色基质试剂盒与第二、三代对比优势： 试剂盒 比较项目
反应特点
第四代试剂盒 （终点显色法）
第三代试剂盒 （动态显色法）
第二代试剂盒 （动态浊度法）
反应后加入 动态测定 动态测定 偶氮化试剂终止反 （反应终点不明确） 应后，进行测定。 （反应终点不明确） 稳定性、重现性好；
新北诊断试剂盒
（内毒素、真菌（1-3）-β-D-葡聚糖检测试
剂盒）终点显色法临床运用
目录
1
2
企业简介 鲎试剂介绍及临床上的运用
细菌内毒素试剂盒 真菌检测试剂盒
3
产品优势
与临床现有试剂盒方法比较
检测方法分类及第四代显色基质法意义
一、企业简介
1.基本情况：
1）福州新北生化工业有限公司创立于1995年，由留学归国学者丁友玲创办； 2）公司为生产鲎试剂及其配套产品的高新技术企业。 3）现公司占有3500平方米清洁厂房（1000平方米为局部百级，整体万级），拥 有年产1000万人份的临床检测试剂盒与5000万支鲎试剂的生产流水线 4）公司于2015年取得福建省医疗器械生产许可证及药品生产许可证；
三、细菌内毒素、真菌检测试剂盒与 C-反应蛋白的检测试剂盒及 降钙素试剂盒的比较
试剂盒的比较
试剂盒 名称
C-反应蛋白定 量检测试剂盒
降钙素试剂盒 （PTC）
细菌内毒素检 测试剂盒
血清中细菌 内毒素： ≥0.03Eu/ml 为革兰氏阴性菌 感染。
真菌（1-3）βD葡聚糖检测 试剂盒
血清中真菌 （1-3）β-D葡聚 糖检测试剂盒： ≥20pg/ml为真菌 深部感染。
1979 年福建省药品检验所丁友玲（现任我司董事长）、刘端华首先在 国内研制成功鲎试剂。82年中试成功，获卫生部重大成果甲级奖。
80年代日本生化工业株式会社与和光纯药株式会社将鲎试剂制备成试 剂盒，应用于临床检测人血液中的内毒素。
鲎试剂在临床检测上的应用
（终点显色基质法）
一、细菌内毒素试剂盒临床运用 二、真菌检测试剂盒临床运用
4.临床检测真菌的意义 a.目前真菌感染的普遍性 近年来，由于造血干细胞移植、器官移植的广泛开展，高强度免疫抑制 剂，大剂量化疗药物及广谱抗生素的长期应用，使临床患者体内菌群失调，产 生深部真菌感染的发病率呈上升趋势。引起不明发热或长期低烧不退，常常被 误诊为临床耐药性。 b.目前真菌感染诊断的方法 1）细胞培养法（7至10天），临床意义不大 2）活体取菌（患者痛苦难接受、漏检率高）
4、显色基质终点显色法鲎试剂（定量）
第四代
全国首创
细菌内毒素、真菌（1-3）β-D葡聚糖试剂盒（终点显色法）的优势： a.快速，反应时间1h；
b.稳定性好:试剂反应体系加入偶氮化试剂终止反应后检测，稳定性、重现性均好；
c.抗干扰能力强：由于偶氮化反应显玫红色，于波长 545nm 测定，克服血清 中浊度和颜色干扰。
血清处理方法
用独创碱试剂 用加热法，沉 加入血清处理球蛋 淀血清中的干扰球 白、白蛋白、凝血 蛋白、白蛋白、凝 因子，可克服干扰 血因子，但处理不 物质对检测的干扰，完全，易出现假阳 降低假阳性与假阴 性结果； 性几率；