AKTA操作流程
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在某种高浓度的盐的存在下，它们可能由于增强的疏水相互作用而 沉淀下来
离子强度的改变，有机溶剂的存在，温度和pH（尤其在等电点， 没有表面净电荷时）都能影响蛋白质结构和溶解度
盐浓度逐步的降低，样品组分根据疏水性的依次洗脱
层析柱料平衡及上样
分步洗脱及清洗
反相层析
反相色谱(reverse phase chromatography ，RPC)
所提供的标准混合器大小为 1.4 ml 也可选择 0.6 ml 和 5 ml 混合器 对于更高流速或难以混合的缓冲液需要更大的混合器
A B管混合 混合池
混合池滤膜的换置
样品环或 Superloop ™的各种上样技术 也可以使用选配的样品泵或系统泵直接把 样品上样到层析柱上
进样管（4）
柱位阀（柱阀口上A下B）
调整积分处理窗口
可对峰命名
实验前后注意事项
实验前准备：系统管道水清洗
实验前准备：缓冲液清洗
实验前准备：pH校准
实验前准备：收集器准备
放置对应盘架，齿轮条码对外
实验前准备：水清洗、缓冲液润洗上样管道
实验前准备：接层析柱并设定相应参数
实验后维护：管道去离子水泵洗
试验后准备：20%乙醇泵洗并保存
电导检测器，pH计
电导检测器用于监测缓冲液和样品的电导率，在线检测真 实的梯度 电导检测器整合温度传感器，可以校正由温度 引起的电导率的变化
在安装有pH电极的阀上直接注射校正液，可以轻松地进行 pH 计校正 限流器连接在 pH 阀上，在管路中产生反压，防止在紫外 流动池中形成气泡
单出口控制阀 V9-Os 可以连接收集器并具有一个额外出口， 可用于流穿组分的收集 多出口收集阀V9-O 能够连接多个收集器，而且有 10 个出 口可以进行大体积组分的收集
AKTA操作流程
汇报人 部门 时间
杨畅
抗体部
2019年5月30 日
目 Contents 录
01 硬件介绍 02 软件介绍
03 实验前后注意事项 04 常用柱层析原理
硬件介绍
简易管路流向
各模块标识
实物图
A1 A2 B1 B2管（最上的4瓶） B1、B2管 B1、B2汇合(In B） 一般装20%乙醇，保养用
均有空气传感器，有气泡 会自动关闭
In A: A1 A2汇合 1A 管 (从In B进泵后出来）
1B管（从In B进泵后出来）
In B：B1 B2汇合
可提供的最 大流速为 150 ml/min 的最大装柱流速。系统压力检测器连 接到系统泵上，连续测量系统压力，并能够自动调整流速 以避免达到设定的压力上限。
New 创建新用户
给定权限
数据注销及激活
手动备份 系统备份
备份还原
System control
Run Data 模块
Chromatogram 模块
Flow scheme 模块
Run Log 模块
Method editor
Evaluation
积分区域 限定峰参数
柱层析原理简介
亲和层析
亲和层析示意图
凝胶过滤
凝胶过滤示意图
离子交换层析
蛋白质电离示意图
常见阳离子交换剂
常见阴离子交换剂
离子交换示意图
离子交换层析流程图
离子交换层析柱平衡及上样
离子交换层析分步洗脱及清洗
疏水层析（HIC）
疏水层析（Hydrophobic Interaction Chromat溶菌酶示意图 亲水部分：深蓝及浅蓝色部分 疏水部分：深红及浅红色部分
疏水氨基酸大部分包含在蛋白质内 部
有些则暴露在外，形成疏水区域， 这部分暴露在外的疏水性基团成为 疏水补丁
蛋白质表面既有疏水区域也有亲水区域，在纯水中，任何疏水效应 都太弱而不能导致配基和蛋白之间或蛋白自身的相互作用
检测吸收峰 190-700nm 紫外/可见光
紫外检测器
苯环共轭双键系统,在紫外光区（220-300nm）显示特征的吸收谱 带,最大光吸收分别为279、278、和259nm
肽键的强吸收峰在214nm处,214nm可测定多肽. 280nm可测定含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨 基酸的蛋白质分子. 铁蛋白是一种多聚体储铁蛋白，由于在分子中心存在大量 的铁离子，它在 340 nm显示出比其他蛋白更强的吸光值
利用非极性的反相介质为固定相，极性有机溶剂的水溶液为 流动相，根据溶质极性(疏水性)的差别进行溶质分离与纯化的洗脱 色谱法。
多肽与反相吸附剂之间互动的吸附/解吸附模型
柱料平衡及上样
分步洗脱及柱料清洗
分配层析
分溶曲线与转移次数（n）的依赖关系
利用固定载体上偶联的疏水性配基与流动相中的疏水分子发 生的可逆结合而进行分离的层析技术
疏水作用（hydrophobic interaction) 非极性分子进入水中，有聚集在一起形成
最小疏水面积的趋势，保持这些非极性分子聚 集再一起的作用成为疏水作用
疏水作用示意图
水的溶解性取决于它能够与偶极子作用并能形成氢键
出口阀
收集器
可以根据时间、体积或自动峰识别进行组分收集 峰识别可以最大限度减少交叉污染，把不需要的组分直接排为废液
组分收集器 F9-C 含有一个收集盘 架，可以容纳从 3 到 50 ml 的各 种试管以及 24、48 和 96 孔深孔 板
软件介绍
Unicorn6 4个窗口
Administration
离子强度的改变，有机溶剂的存在，温度和pH（尤其在等电点， 没有表面净电荷时）都能影响蛋白质结构和溶解度
盐浓度逐步的降低，样品组分根据疏水性的依次洗脱
层析柱料平衡及上样
分步洗脱及清洗
反相层析
反相色谱(reverse phase chromatography ，RPC)
所提供的标准混合器大小为 1.4 ml 也可选择 0.6 ml 和 5 ml 混合器 对于更高流速或难以混合的缓冲液需要更大的混合器
A B管混合 混合池
混合池滤膜的换置
样品环或 Superloop ™的各种上样技术 也可以使用选配的样品泵或系统泵直接把 样品上样到层析柱上
进样管（4）
柱位阀（柱阀口上A下B）
调整积分处理窗口
可对峰命名
实验前后注意事项
实验前准备：系统管道水清洗
实验前准备：缓冲液清洗
实验前准备：pH校准
实验前准备：收集器准备
放置对应盘架，齿轮条码对外
实验前准备：水清洗、缓冲液润洗上样管道
实验前准备：接层析柱并设定相应参数
实验后维护：管道去离子水泵洗
试验后准备：20%乙醇泵洗并保存
电导检测器，pH计
电导检测器用于监测缓冲液和样品的电导率，在线检测真 实的梯度 电导检测器整合温度传感器，可以校正由温度 引起的电导率的变化
在安装有pH电极的阀上直接注射校正液，可以轻松地进行 pH 计校正 限流器连接在 pH 阀上，在管路中产生反压，防止在紫外 流动池中形成气泡
单出口控制阀 V9-Os 可以连接收集器并具有一个额外出口， 可用于流穿组分的收集 多出口收集阀V9-O 能够连接多个收集器，而且有 10 个出 口可以进行大体积组分的收集
AKTA操作流程
汇报人 部门 时间
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2019年5月30 日
目 Contents 录
01 硬件介绍 02 软件介绍
03 实验前后注意事项 04 常用柱层析原理
硬件介绍
简易管路流向
各模块标识
实物图
A1 A2 B1 B2管（最上的4瓶） B1、B2管 B1、B2汇合(In B） 一般装20%乙醇，保养用
均有空气传感器，有气泡 会自动关闭
In A: A1 A2汇合 1A 管 (从In B进泵后出来）
1B管（从In B进泵后出来）
In B：B1 B2汇合
可提供的最 大流速为 150 ml/min 的最大装柱流速。系统压力检测器连 接到系统泵上，连续测量系统压力，并能够自动调整流速 以避免达到设定的压力上限。
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手动备份 系统备份
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Run Data 模块
Chromatogram 模块
Flow scheme 模块
Run Log 模块
Method editor
Evaluation
积分区域 限定峰参数
柱层析原理简介
亲和层析
亲和层析示意图
凝胶过滤
凝胶过滤示意图
离子交换层析
蛋白质电离示意图
常见阳离子交换剂
常见阴离子交换剂
离子交换示意图
离子交换层析流程图
离子交换层析柱平衡及上样
离子交换层析分步洗脱及清洗
疏水层析（HIC）
疏水层析（Hydrophobic Interaction Chromat溶菌酶示意图 亲水部分：深蓝及浅蓝色部分 疏水部分：深红及浅红色部分
疏水氨基酸大部分包含在蛋白质内 部
有些则暴露在外，形成疏水区域， 这部分暴露在外的疏水性基团成为 疏水补丁
蛋白质表面既有疏水区域也有亲水区域，在纯水中，任何疏水效应 都太弱而不能导致配基和蛋白之间或蛋白自身的相互作用
检测吸收峰 190-700nm 紫外/可见光
紫外检测器
苯环共轭双键系统,在紫外光区（220-300nm）显示特征的吸收谱 带,最大光吸收分别为279、278、和259nm
肽键的强吸收峰在214nm处,214nm可测定多肽. 280nm可测定含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨 基酸的蛋白质分子. 铁蛋白是一种多聚体储铁蛋白，由于在分子中心存在大量 的铁离子，它在 340 nm显示出比其他蛋白更强的吸光值
利用非极性的反相介质为固定相，极性有机溶剂的水溶液为 流动相，根据溶质极性(疏水性)的差别进行溶质分离与纯化的洗脱 色谱法。
多肽与反相吸附剂之间互动的吸附/解吸附模型
柱料平衡及上样
分步洗脱及柱料清洗
分配层析
分溶曲线与转移次数（n）的依赖关系
利用固定载体上偶联的疏水性配基与流动相中的疏水分子发 生的可逆结合而进行分离的层析技术
疏水作用（hydrophobic interaction) 非极性分子进入水中，有聚集在一起形成
最小疏水面积的趋势，保持这些非极性分子聚 集再一起的作用成为疏水作用
疏水作用示意图
水的溶解性取决于它能够与偶极子作用并能形成氢键
出口阀
收集器
可以根据时间、体积或自动峰识别进行组分收集 峰识别可以最大限度减少交叉污染，把不需要的组分直接排为废液
组分收集器 F9-C 含有一个收集盘 架，可以容纳从 3 到 50 ml 的各 种试管以及 24、48 和 96 孔深孔 板
软件介绍
Unicorn6 4个窗口
Administration