AKTA操作流程
AKTA操作流程
AKTA 操作流程1 洗泵2 pause 或end 换Buffer 34 降速(节约缓冲液) 上样5 end6 Run789降速卸柱子水洗洗泵 降速0.5 装柱子升速洗柱子缓冲液洗 A Buffer100%AKTA预备与注意事项* AKTA与液相的区别，AKTA不能进气泡Hitrap Q 1ml阴离子柱*柱子的再生方法2M NaCl→水→1M NaOH→水1 检查足够量的A 2L，B Buffer 1L, 2M NaCl 1L（平衡洗脱，要多来几次）、水和20%的乙醇、1M NaOH 50ml2 准备Fraction 的试管、2ml离心管3 透析后离心2000g 10min, 然后过滤好自己的样品(如过夜需继续过滤并准备新的离心管装过滤液)4 白纸、笔（记录收集管号）和记号笔（写离心管），纸巾（换柱子用）5 冰盒2个（1个放样品1个放收集好的离心管含酶液）6 一次性滤器和针若干7 1ml 枪和枪盒（如有时需稀释样品8准备一个废液瓶一个小烧杯（取水洗针等）* 设警报压力卸（装）（别人或自己）的柱子，手动操作一定要* 设警报压力有时设错流速* 设警报压力即便没设错流速，由残存的Buffer可能很稠(如75%的酒精或2M NaOH)，造成超过界限压力* 2ml/min的流速一般的离子柱可以承受，可以实时观察柱子压力* 不运行方法，不会吸样口到LOOP环* 方法成熟以后，可用直接用45%的B buffer当A缓冲液* 电导唯一性，第二次调整时可以用B buffer测一下电导* 从样品环上样，一是不经过泵，二是可以用很小的量如用NaOH洗脱时* 换Buffer洗泵，一般先冲泵可以替换缓冲液，这样一跑柱子就是有效的换过的缓冲液，如不洗泵，可以看电导等参数* NaOH最好不要过检测器。
过LOOP环等要用inject模式冲洗包括注射器，或手动冲洗AKTA方法设定[阴离子柱]储液KPB纯化缓冲液A 1L(一般需配2L) (0.01M=10uM)KPB 由0.1M KPB母液稀释纯化缓冲液B 1L由纯化缓冲液A(10uM) + 0.5M KCl称取1*0.5*74.55=37.28g KCl 定容到1L纯化缓冲液A 抽滤2M NaCl 1L称取2*1*58.44=116.88g NaCl 定容到1L 抽滤1M NaOH 50ml称取0.05*1*40=2g NaCl 定容到50ml 抽滤由纯化缓冲液A(10mM) + 0.2M KCl 500ml1M NH4SO4 50mlSuperdex 200 凝胶柱预备与注意事项**0.22um** 准备0.5M NaOH、water、Ethoh20%、缓冲液、样品90个15ml 离心管*设警报压力delta-column pressure*设柱位置* 流速0.5，用水或缓冲液洗LOOP环* 手动End后，要重设报警压* 增加平衡体积，在第二次进样后，就不用平衡了* 目标分子量越小，出现越晚* 降低流速或是增加洗脱体积，可以提高分辨率* 结束时A1→NaOH,B1→water,Aw→ 20%EthohA1 水洗→A1,B1 20%乙醇A V ANT 参数Pump 泵> Flow: 设定系统泵流速> Gradient: 梯度设定> BufferPrep_pH: 使用缓冲液配制功能时，设定pH值> SampleFlow: 设定样品泵流速> PumpWashExplorer: 系统泵清洗，25ml/min，30ml/管> SystemWash: 使用缓冲液配置功能时，清洗系统泵，30ml/min，共洗75mlFlowpath 流路> BufferValveA1: 缓冲选择阀切换> PumpAInlet: A 泵入口三通阀切换> PumpBInlet: B 泵入口三通阀切换> SampleValve: 样品选择阀切换> InjectionValve: 上样阀切换> ColumnPosition: 层析柱位阀切换> FlowDirection: 层析柱流向切换> OutletValve: 收集出口阀切换> InjectionMark: 插入记号Alarm & Mon 报警、检测> WaveLength: 选择监测波长（1-3个）> AutoZeroUV: 紫外吸收校零> Alarm: 设置压力、紫外、电导、pH等报警限> Watch: 监测参数设置，配合方法编辑中的watch功能Frac 收集：> Peak_Frac_Parameters: 计峰收集参数设定> FracCollect_900: 分布收集每管体积> Frac_Stop_900: 停止分别收集> FeedTube: 换管收集> Peak_Fraction: 按峰收集每管体积> Peak_FracStop: 停止计峰收集> OutletFraction: 出口阀每峰分段收集每段体积等设置Others 其它> Block: 调用程序块（只在方法运行时可用）> Next_breakpoint: 跳到下一程序块（只在方法运行时可用）> BufferPrepRecipe: 选择缓冲液配方> Set_Mark: 插入提示语> End_Timer: 设定结束运行时间> Record on/off: 手动运行时开始或结束数据记录疏水柱缓冲液配制**0.22um** 准备0.01 KPB、0.01KPB+ 1M NH4SO4 、样品90个15ml 离心管**0.01KPB+ 1M NH4SO4 溶液中，NH4SO4太多，容易蛋白质溶液在跑的过程中析出赌柱子，NH4SO4太低则疏水吸附力减弱**与离子柱相反先用0.01KPB+ 1M NH4SO4高盐洗 0.01 KPB高效液相色谱色谱柱的清洗程序反相: 乙腈-水(5:95) 10倍体积(非盐流动相可省略) *不低于20min* 梯度到乙腈-水( 95:5) , 冲10倍体积柱无梯度功能系统中间增加5倍柱体积乙腈-水(50:50)冲洗步骤正相: 乙腈-正己烷(1:99) 10倍柱体积流动相10mM KH2PO4.H3PO4 buffer(pH2.9) + acetonitrile ( 2:1 v/v)烟腈反应终浓度20mM反应总体积500ul10ul 上清+ (440超纯水+ 50ul 200mM的母液)490ul烟腈,反应20min 取100ul与100ul乙腈（分析纯）混合上样尼克酰胺标样。
AKTAprime操作规程 范本
昆山市工业技术研究院小核酸生物技术研究所有限责任公司ÄKTAprime 全自动层析仪操作规程操作步骤：1.开机：先启动电脑，等电脑启动完成后打开AKTAprime主机电源。
2.点击桌面上的Primeview图标进入层析监视界面。
3.将A/B管道分别放入0.45um/0.22um过滤去离子水中。
4.在AKTAprime主机操作界面按上下键选择Manual Run进入操作菜单界面。
5.选择“Set Pressure Linit”设置系统压力上限，选择“Set Flow Rate”设置流速，选择“Start Run运行。
6.按下操作面板上的“Pause/Cont.”暂停运行。
7.将A/B管道分别放入0.45um/0.22um过滤buffer中。
8.重复操作步骤4—5。
9.按下操作面板上“end”按钮，结束运行。
10.安装层析柱，将层析柱上下管道分别接入AKTA相对应的接口。
11.选择“Set Flow Rate”设置流速，选择“Set Pressure Linit”设置层析柱压力上限，选择“Start Run”运行，开始平衡层析柱。
12.将样品用注射器推入样品环中，选择“Manual Run—Set Inject valvePos--Injection”命令开始进样，等样品全部层析柱后切换“Injection”到“Load”状态。
13.选择“Manual Run—Set Gradient/concentration”命令设置洗脱梯度。
14.洗脱完成后按下控制面板“end”按钮结束层析方法。
15.双击桌面“PrimeView Evaluation”图标，进入Evaluation界面，在Manual run中找到刚才运行的色谱图，选择菜单栏“File—Save As..”命令保存。
16.方法运行完毕后，用0.45um/0.22um过滤后的去离子水冲洗管道。
17.当电导和PH降至中性时换上20%乙醇冲洗管道，直到将所有管道充满乙醇为止。
AKTA操作说明
AKTA操作说明第一章：引言1.1目的本操作说明的目的是提供一个详细的指南，以帮助用户正确操作并有效利用AKTA系统。
1.2适用范围本操作说明适用于所有使用AKTA系统的操作人员。
1.3定义1.3.1 AKTA系统：指一套高效的色谱仪系统，由AKTA Pure、AKTA avant等设备组成，用于生物大分子的分离纯化。
第二章：系统组成2.1 AKTA Pure2.1.1 AKTA Pure系统由主机、泵、阀组、控制软件等组成。
2.2 AKTA avant2.2.1 AKTA avant系统由主机、泵、阀组、控制软件等组成。
第三章：系统操作3.1准备工作3.1.1确保所有液体介质已接入正确位置。
3.1.2检查设备状态，确保设备正常运转。
3.2打开系统3.2.1 AKTA Pure3.2.1.1按下主机上的电源按钮，然后按下软件界面上的“连接”按钮，确保主机和软件连接成功。
3.2.2 AKTA avant3.2.2.1按下主机上的电源按钮，然后按下软件界面上的“连接”按钮，确保主机和软件连接成功。
3.3设置方法3.3.1根据实验需求，使用软件界面上的设置按钮进行参数设置，包括流速、梯度洗脱的梯度段数和比例，柱子的温度等。
3.4样品操作3.4.1准备样品：根据实验需求，准备待分离的生物大分子样品。
3.4.2样品进样3.4.2.1 AKTA Pure：选择进样器位置，将样品稀释至合适的溶液浓度后，使用软件界面上的“加载样品”功能进行样品进样。
3.4.2.2 AKTA avant：选择进样器位置，将样品稀释至合适的溶液浓度后，使用软件界面上的“加载样品”功能进行样品进样。
3.5运行实验3.5.1设置柱子：选择合适的柱子，并进行柱子的准备工作，如柱子平衡、填充柱子缓冲液等。
3.5.2开始实验：根据实验要求，点击软件界面上的“开始”按钮，系统将自动进行色谱分离纯化实验。
实验过程中，可以实时观察色谱曲线，控制运行参数。
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程一、目的：为了确保蛋白纯化层析系统操作的准确性、稳定性和安全性，保证实验结果的可靠性，制定本操作规程。
二、适用范围：本操作规程适用于实验室内的AKTA蛋白纯化层析系统操作。
三、操作流程：1.准备工作：(1)预热：打开系统电源，预热至设定温度（一般为室温）。
(2)洗涤缓冲液：根据实验要求，制备所需的洗涤缓冲液，确保其浓度和pH值符合要求。
(3)净化缓冲液：根据实验要求，制备所需的净化缓冲液，确保其浓度和pH值符合要求。
(4)样品：根据实验要求，制备所需的样品。
2.系统配置：(1)连接仪器：将系统中的各个模块连接好，包括色谱柱、注射器、检测器等。
(2)配置方法参数：根据实验要求，在系统内设置合适的流速、梯度洗脱条件等相关参数。
3.样品处理：(1)样品加载：将样品注入到加载注射器中，通过样品加载阀注入到色谱柱中。
(2)洗脱：根据实验要求，设置梯度洗脱条件，将混合物中的目标蛋白纯化。
4.系统清洗：(1)注射器清洗：每次实验结束后，将注射器从系统中取出，用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。
(2)色谱柱清洗：每次实验结束后，将色谱柱从系统中取出，用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。
5.系统关闭：(1)关闭电源：关闭系统电源，断开电源线连接。
(2)清洗系统：将系统中的各个模块用水冲洗干净，保持干燥。
(3)整理工作台：将使用过的耗材整理归位，清理工作台。
四、操作注意事项：1.操作前应仔细阅读操作手册，了解仪器的基本原理和操作要点。
2.操作时要穿戴实验室个人防护用品，避免吸入或接触有害物质。
3.在操作过程中，要严格按照实验要求进行，避免操作失误。
4.定期检查系统的运行状态，保证系统正常工作。
5.操作完成后，要及时清洗和整理仪器，保持仪器的干净和完好。
五、风险控制与安全措施：1.使用过程中，注意避免溶液飞溅引起的伤害，避免溶剂和化学品的吸入或接触。
2.避免电源短路或其他电气故障引起的意外事故。
蛋白纯化AKTA操作说明(一)2024
蛋白纯化AKTA操作说明（一）引言概述：蛋白纯化是生物技术研究中常用的一种重要技术手段，通过纯化目标蛋白，可以实现对其结构、功能和相互作用的进一步研究。
AKTA是一种常用的蛋白纯化设备，本文将介绍如何进行AKTA操作以获得高纯度的蛋白样品。
本文分为五个大点：设备准备、准备实验材料、样品制备、纯化操作步骤、数据处理和总结。
正文：一、设备准备：1. 查看设备状况：检查AKTA设备的各个组件是否齐全，并确保设备正常工作。
2. 设备消毒：使用适当的消毒剂对AKTA设备进行消毒，确保实验过程的无菌。
二、准备实验材料：1. 缓冲液：根据实验需要选择不同的缓冲液，并准备足够的量。
2. 标记抗体：根据实验需要选择适当的标记抗体，并准备足够的量。
3. 标记亲和树脂：根据实验需要选择适当的标记亲和树脂，并准备足够的量。
4. 标准品：准备适当浓度的标准品作为纯化过程中的参考。
三、样品制备：1. 细胞裂解：采用适当的方法对细胞进行裂解，获得含有目标蛋白的裂解液。
2. 预处理：根据裂解液的性质，进行适当的预处理，如去除杂质、调整pH值等。
3. 样品加载：将预处理后的样品加载到纯化系统中，确保样品的均匀分布。
四、纯化操作步骤：1. 初始化设备：打开AKTA软件，选择纯化方法，并设置相关参数。
2. 样品加载：将样品加载到设备中，并根据实验要求选择适当的柱子和纯化方案。
3. 洗脱：使用缓冲液进行洗脱，去除非目标蛋白和杂质。
4. 目标蛋白回收：使用适当的缓冲液洗脱目标蛋白，并将其收集到已经标记好的收集管中。
5. 清洗设备：使用适当的缓冲液对设备进行清洗，防止交叉污染。
五、数据处理和总结：1. 数据记录：记录纯化过程中的各项数据，如流速、吸光度和洗脱峰。
2. 数据分析：对纯化结果进行分析和比较，评估纯化效果。
3. 总结经验：根据纯化结果总结操作经验，以优化蛋白纯化的流程和效率。
总结：本文介绍了蛋白纯化AKTA操作的基本步骤。
通过设备准备、准备实验材料、样品制备、纯化操作步骤和数据处理，可以获得高纯度的蛋白样品，为后续的蛋白研究提供了可靠的基础。
AKTA使用方法
AKTA使用方法：阴/阳离子交换柱（1）buffer都要进行超声除气10min（母液需要用0.45μm过滤膜过滤）。
（2）洗泵。
点击Pumps→Start pumpA wash 和Start pump B wash。
用Q A buffer 冲洗pump A，用Q B buffer冲洗pump B。
（3）洗系统（管道）。
将Conc%B改为100%，点击Start system wash。
（4）改流速，平衡柱子。
将System flow的流速改为合适的流速（4mL/min, 2mL/min,0.4mL/min），点击Set flow rate。
然后选择柱位。
用Q B buffer平衡Q柱4-5个柱体积，再用Q A buffer平衡Q柱4-5个柱体积。
（5）准备收集盘，设置运行程序。
准备烧杯收集outlet。
（6）上样，选择A pump上样，当电导上升时waste改为outlet。
上样不要进气泡，上样结束后将A pump放入Buffer A。
电导下降到约1时，outlet改为waste，停止程序。
（7）Elution, 运行洗脱程序。
（设置程序时，一定要勾选using fraction collector）（8）及时将outlet取出并保存好。
（9）收集收集管，并将buffer放回。
Superdex(分子筛、凝胶过滤层析)（1）浓缩。
将蛋白样品溶液用30K的浓缩管在4℃浓缩。
（2）洗泵。
用Superdex buffer冲洗pump A。
（3）用Superdex buffer冲洗整个系统（整个系统体系6-8mL）两个柱体积（约10mL左右）。
（4）平衡。
用Superdex buffer平衡两个柱体积（柱体积23.65mL）。
（5）准备收集盘，用Superdex buffer冲洗Loop环，设置运行程序。
（6）上样，运行程序。
（设置程序时，一定要勾选using fraction collector）（7）根据分子筛图谱对收集的样品取样进行SDS-PAGE电泳。
AKTA层析仪使用操作规程(AKTA蛋白纯化系统经典培训资料)
ÄKTApurifier层析仪使用操作规程1、开机打开仪器的主电源，打开电脑电源。
待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。
双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
2、准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。
3、清洗及管道准备首先将A1管道放入缓冲液或平衡液，binding buffer中，将B1管道放入高盐溶液中或elution buffer，在system control窗口点击工具栏内的manual，选择 pump→pump wash basic，选中A1,B1管道为ON， execute。
泵清洗将自动结束。
4、安装层析柱在manual里选择pump→flow rate，输入流速1ml/ml，insert；选择Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。
待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。
5、开始纯化：1）等待柱子平衡好了（观察电导COND，pH的数值和变化趋势）就准备上样了。
此时将紫外调零，选择Alarm&mon→autozero，exectue。
2）用样品环上：将样品吸进注射器，推掉气泡，从injectionValve的3号位推入（进样量不得低于样品环的体积的2倍）推好后不要取下注射器。
在manual里选择flowpath→injectionValve→inject，execute。
3）用泵上样：点击pause，将A1放入样品中，点击countine，待样品上完后，再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。
2),3)选择一种方式4）洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。
(完整word版)蛋白纯化AKTA操作说明
AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤：1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。
2. 打开系统：打开电脑：双击Unicorn 7.0打开系统，进入log on 界面，用户名默认为Default，输入密码：default，点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。
注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control界面，Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual---Execute Manual instructions---......；Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵：把A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗，放入分子筛缓冲液中，在SystemControl界面下，点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数：设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute；设流速：Pumps---System flow ---设置system flow（1mL/min）---Execute。
注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下)：接柱子的上面：拧下连接进样阀和检测器之间的线，等进样阀出口有液体流出时，拧开柱上面线头的螺帽，将它连到进样阀出口；接柱子的下面：去掉柱下端连接的注射器，连上接头，连上一段线，待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里，滴满，将接头连到检测器的连接口里。
akta 操作规程
akta 操作规程操作规程是指为了规范化、标准化工作流程，确保工作的安全和高效进行而制定的一系列规范和步骤。
以下是关于akta操作规程的一份示例，总字数为1200字。
一、引言akta操作规程旨在确保在akta工作流程中的每个步骤都按照标准程序和最佳实践进行操作，以保证最佳的实验结果和避免任何潜在的风险和错误。
二、适用范围本操作规程适用于所有参与akta工作流程的工作人员，包括实验室技术人员、研究人员等。
三、定义1. akta：一种用于蛋白质纯化的仪器。
2. 标本：指待处理的蛋白质溶液。
四、工作准备1. 检查akta设备是否正常运作，并进行必要的维护和保养。
2. 准备所需的试剂和耗材。
3. 检查仪器和试剂的质量和有效期。
五、样品处理1. 按照相关的实验方案和标准操作程序将标本添加到akta设备中。
2. 设置合适的参数，如流速、压力等，以确保蛋白质纯化的效果最佳。
3. 监测纯化过程中的各项参数，如pH值、溶液浓度等，及时进行调整。
4. 在工作过程中严格遵守个人防护要求，如戴手套、穿实验服，并避免直接暴露于有害化学物质中。
5. 严格按照规定的时间和步骤进行样品处理，避免任何错误。
六、数据记录与分析1. 在整个纯化过程中，准确记录关键步骤和操作参数。
2. 在操作过程中及时记录实验结果，包括纯化效果、产率等。
3. 对结果进行合理的分析和解释，并进行必要的调整和改进。
七、安全措施1. 在操作过程中，严格遵守实验室的安全规定，使用个人防护设备。
2. 防止刺激性、致敏性和有毒性物质的接触，并妥善处理废弃物。
3. 在有害气体、溶液或物质存在的情况下，确保有良好的通风条件。
八、仪器维护与清洁1. 在每次使用后及时进行仪器的维护和保养，检查仪器的功能是否正常。
2. 仪器清洁要求按照实验室的相关规定进行，保持工作区域的干净整洁。
九、问题解决1. 在操作过程中遇到任何问题，应立即与相关人员进行沟通和协调，确保问题及时解决。
蛋白纯化AKTA操作说明
AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤：1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。
2. 打开系统：打开电脑：双击Unicorn 7.0打开系统，进入log on 界面，用户名默认为Default，输入密码：default，点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。
注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control界面，Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual---Execute Manual instructions---......；Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵：把A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗，放入分子筛缓冲液中，在SystemControl界面下，点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数：设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute；设流速：Pumps---System flow ---设置system flow（1mL/min）---Execute。
注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下)：接柱子的上面：拧下连接进样阀和检测器之间的线，等进样阀出口有液体流出时，拧开柱上面线头的螺帽，将它连到进样阀出口；接柱子的下面：去掉柱下端连接的注射器，连上接头，连上一段线，待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里，滴满，将接头连到检测器的连接口里。
AKTA使用操作
AKTA1 先打开AKTA 开关后再开电脑2 打开软件UNICORN，进入到System Control3 冲洗系统：泵(Pump)—Pump wash bsic—Pump A-选择 On单击执行(Execute)，立即执行指令，冲洗充满系统，之后会自动结束4 设置报警： AlarmsQmon—Alarm pressure---highalarm---在参数(Parameters)下面输入新的数值Mpa（根据柱子的信息设置5），单击执行(Execute)，立即执行指令5 设置流速：泵(Pump)--流量(Flow)—在参数(Parameters)下面输入数值（流速FlowRate），设置一个较小的流速，一般0.5mL/min。
单击执行(Execute)，立即执行指令，单击关闭(Close)关闭对话框6 接注：在冲洗状态运行中接柱子，先打开柱子上端，注满液体，先松松接入接头，去掉柱子下端堵头并接上接头，稍紧，待下接头有液体流出，充满接柱孔后旋紧，然后拧紧柱子上面接头。
7 平衡：冲洗平衡柱子一个柱体积到基线稳定，期间可在接口2和6之间接上样品环，注射冲水洗干净，再用buffer冲洗并充满，注射器不拔，等待上样8 上样：窗口进入到Flowpath—Injection valve—选择load，单击执行(Execute)。
取下注射器，用新的注射器吸取适量的样品（根据样品环的容量，注射器中不要带入气泡）从注射口缓慢的注入样品，注射器不可拔掉。
注射完成后，把load改为inject—insert，Alarms&Mon---AutozeroUV--insert，单击执行(Execute)开始上样，走4mL左右时，样品应已从样品环完全进入系统，把inject改为load，单击执行(Execute)，等待出峰收样，同时摆好收样器的位置，准备接收管。
9 收样：出峰时设置Frac---fractionation900---在参数(Parameters)下面输入数值，一般0.5mL—1mL，单击执行(Execute)，结束收样时end结束，保存结果10：处理：洗脱样品结束后处理系统，先用水冲洗一个柱体积到基线稳定，暂停，换NaOH冲洗至少一个柱体积到基线稳定，再用水冲洗一个柱体积到基线稳定，测PH 为7.0，暂停，换20% 乙醇（Ethanol）冲洗至少一个柱体积到基线稳定，11：拆柱：先拆下面，取下后松接上堵头，旋松上面的接头，旋紧下面堵头，取下上面接头，柱子上端注满液体，接上端堵头。
AKTA层析仪使用操作规程
ÄKTA全自动层析仪操作规程1. 开机打开主机和电脑电源，待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮不闪烁），双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
2. 准备流动相和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。
3. 清洗管道及装柱3.1 首先将A1管道放入平衡液或banding buffering中，将B1管道放入高盐溶液中或elutionbuffering中，在system control窗口点击manual→pump→pump wash basic，选中A1,B1管道为ON， execute。
泵清洗程序会自动运行结束。
3.2 选择manual→pump→flow rate，输入流速1ml/ml，insert；选择manual→Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。
将进样阀的1号位管道接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉，直接拧入紫外流动池或连接管道。
4. 手动运行4.1 平衡柱子平衡好了（观察电导COND，pH的数值正确曲线走稳了）。
此时将紫外调零，选择manual →Alarm&mon→autozero，exectue，就准备上样了。
4.2 上样4.2.1 用样品环上，将样品吸进注射器，推掉气泡，从进样阀的3号位推入（进样量不得低于样品环的体积的2倍），不要取下注射器。
选择manual→flowpath→injectionValve→inject，execute。
4.2.2 用样品泵上样（AKTAexplorer系统），将样品置于Sample Valve 1号位（可以选8个不同的位置），点击manual→pump→Direct Load_960输入进样流速和体积，execute。
AKTA prime 聚合物分析仪标准操作规程
AKTA prime 聚合物分析仪标准操作规程目的规范AKTA prime 聚合物分析仪的操作程序范围适用于质检部AKTA prime聚合物分析仪的标准操作责任质检部组织制订并实施一、装柱1.葡聚糖凝胶的处理1)称取葡聚糖凝胶约50g，用纯化水浸泡24小时，或煮沸1小时，使其充分溶涨，待凝胶下沉以后，用纯化水漂洗，重复此操作，直到除去较细颗粒。
2)当柱效不好时，须将凝胶倒出用0.2mol/L氯化钠与0.2mol/L氢氧化钠混合液浸泡0.5小时以上，再用纯化水漂洗至中性。
2.填柱1)将柱头的滤膜向上，用注射器注入纯化水，慢慢赶出滤头气泡，并将膜润湿。
2)先装好柱下端的柱头，然后将准备好的凝胶轻轻搅匀（将水和凝胶的比例调为3：7），匀速加入柱内，待凝胶不再下沉，将柱子上方加满水，塞住下面的柱头，再迅速装上上端的柱头，压至凝胶上。
注意不要使柱内有气泡．3)柱上端的管路接进样阀“1”号位，柱下端的管路接检测器。
4)用０．４５um过滤的纯化水为流动相，用８ml／min冲柱，直至凝胶体积不变．5)再将上端柱头下移，至凝胶表面．二、操作面扳及工作流程图介绍1．操作面板的按键功能介绍面板中“△”或“”选择某一菜单；“ＯＫ”进入此菜单；“Esc”按1)缓冲转换阀：在手动运行菜单（Manual Run）中的“set buffer valve pos(pos1)按“ＯＫ”，可设置“１”和“２”。
“１”一般用于做实验用的流动相“Ａ”或“Ｂ”；“２”是保护外环管路用的２０％的乙醇。
“（pos1）”代表现在的通道是１。
（注：其它通道为空，在冲柱子时，不能设置２－８，如果设置错误，柱子将被乙醇脱水或冲干。
）2)进样阀：在手动运行菜单（Manual Run）中的“Set Inject Valve Pos(Load)”按“ＯＫ”，会出现三种选择，“Waste Load Inj”。
选择“Ｗaste”，通道转到储液器。
一般是一天实验结束，用乙醇保护时，用到此选择；选择“Ｌoad”，通道转到进凝胶柱，这是进样前的状态。
AKTA蛋白纯化系统操作
AKTA蛋白纯化系统操作1.设定纯化方法：首先，根据目标蛋白质的特性和要求，选择合适的纯化方法。
一般而言，常用的纯化方法包括亲和层析、凝胶层析和离子交换层析等。
在AKTA蛋白纯化系统上，可以预设不同的纯化方法并保存为方案。
2.准备蛋白样品：准备待纯化的蛋白样品。
在纯化前，需要将样品进行预处理，例如，去除杂质、去盐、浓缩等。
此外，一些特殊的样品也需要添加辅助试剂，如DTT、EDTA等。
3.配置层析柱：根据之前设定的纯化方法，选择合适的柱子。
AKTA系统支持多种柱径和材质的柱子，可以根据需要更换。
4.连接管路：将柱子与系统的蛋白吸附和洗脱缓冲液的管路相连接，确保连接处无泄漏。
5.调整流速：设置蛋白吸附和洗脱缓冲液的流速。
一般而言，根据柱子的大小和纯化方法的要求，设置合适的流速可以提高纯化效果。
6.均衡柱子：在进行纯化前，需要将柱子进行均衡操作。
均衡柱子可以提高吸附剂（如亲和树脂）和蛋白样品之间的接触效果，提高纯化效率。
7.加样和洗脱：将经过均衡的柱子连接到AKTA系统，将样品通过自动加样器加入。
在加样后，可以通过设定的方法进行洗脱和冲洗，以去除非目标蛋白质和杂质。
8.收集纯化的目标蛋白：通过设置最终洗脱步骤，将目标蛋白质从纯化方法中洗脱出来。
同时，系统可以将纯化的目标蛋白自动收集到相应的管子或容器中。
9.检测纯化后的蛋白质：对纯化后的蛋白质进行检测，如SDS-、Western blot等方法，以验证纯化效果。
10.清洗设备：在纯化完成后，要对设备进行清洗。
根据实验室的规范和设备说明书，进行相应的操作，以确保设备的使用寿命和实验结果的准确性。
总之，AKTA蛋白纯化系统是一种功能强大、操作灵活的蛋白质纯化设备。
通过合理的设定纯化方法、处理样品和操作设备，可以高效地纯化目标蛋白质，并得到高质量的纯化产物。
AKTA操作流程
蛋白层析纯化系统FPLC：全称为快速蛋白液相色谱（Fast protein liquid chromatography）操作流程：1.打开全自动交流稳压器的电源2.打开FPLC或purifier 100的电源，系统立即进行自检3.打开电脑电源4.双击unicon4.12图标，输入用户名和密码，进入系统窗口。
ÄKTA层析软件有四个窗口：UNICORN Main Menu、Method Editor、System Control、Evaluation。
如使用程序运行，在Method Editor窗口里编方法设置各种参数(详见注意事项)；如使用手工运行，在System Control窗口里设置各种参数。
5.接入层析柱。
如需低温操作，可通冷凝水6.注入样品，运行程序或手工运行7.试验结束，先用水冲洗柱子，再用20%乙醇保存柱子，然后拆除柱子，不得带入气泡。
取下后放回原位。
保存系统及层析柱8.关机：仔细检查完毕，确信用过的所有管道都已经充满20%乙醇后，退出ÄKTA层析软件各窗口，脱出UNICORN软件，关闭电脑9.关闭系统电源注意事项：技术指标注意事项：1. 报警压力参数设置：所有程序运行和手动运行中，必须首先设定报警压力（使用预装柱，编程时由软件自动设定）。
压力值参阅层析柱及填料说明书，取较小的一个最大耐受压力。
我们实验室的层析柱如XK16/70Superdex75、200、DEAE-FF等柱子的警报压力均为0.3MPa。
Sephacryl-200、Sephacryl-300的警报压力为0.2MPa。
2.紫外灯：如果只是平衡层析柱，关闭紫外灯。
FPLC通过FPLC系统主机关闭；Purifier 通过软件lamp off关闭。
一般在上样前或前15min打开紫外灯。
3.层析柱的连接：层析柱是玻璃的，一定要轻拿轻放。
层析柱特别是凝胶过滤柱不能有气泡进入，将柱子接入系统时，可在柱子一端接带有液体的注射器，用手推，将气泡排出，同时，给系统一定流速，保证没有气泡的情况下将柱子连入系统。
AKTA层析仪使用操作规程(GE版)
ÄKTApurifier层析仪使用操作规程1、开机打开仪器的主电源，打开电脑电源。
待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。
双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
2、准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。
3、清洗及管道准备首先将A1管道放入缓冲液或平衡液，binding buffer中，将B1管道放入高盐溶液中或elution buffer，在system control窗口点击工具栏内的manual，选择 pump→pump wash basic，选中A1,B1管道为ON， execute。
泵清洗将自动结束。
4、安装层析柱在manual里选择pump→flow rate，输入流速1ml/ml，insert；选择Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。
待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。
5、开始纯化：1）等待柱子平衡好了（观察电导COND，pH的数值和变化趋势）就准备上样了。
此时将紫外调零，选择Alarm&mon→autozero，exectue。
2）用样品环上：将样品吸进注射器，推掉气泡，从injectionValve的3号位推入（进样量不得低于样品环的体积的2倍）推好后不要取下注射器。
在manual里选择flowpath→injectionValve→inject，execute。
3）用泵上样：点击pause，将A1放入样品中，点击countine，待样品上完后，再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。
2),3)选择一种方式4）洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。
蛋白纯化AKTA操作说明
AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤：1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。
2. 打开系统：打开电脑：双击Unicorn 7.0打开系统，进入log on 界面，用户名默认为Default，输入密码：default，点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。
注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control界面，Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual---Execute Manual instructions---......；Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵：把A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗，放入分子筛缓冲液中，在SystemControl界面下，点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数：设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute；设流速：Pumps---System flow ---设置system flow（1mL/min）---Execute。
注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下)：接柱子的上面：拧下连接进样阀和检测器之间的线，等进样阀出口有液体流出时，拧开柱上面线头的螺帽，将它连到进样阀出口；接柱子的下面：去掉柱下端连接的注射器，连上接头，连上一段线，待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里，滴满，将接头连到检测器的连接口里。
蛋白纯化AKTA操作说明(二)2024
蛋白纯化AKTA操作说明（二）引言概述：本文档旨在提供关于蛋白纯化AKTA操作的详细说明。
蛋白纯化是生物化学和生物技术中常用的实验技术之一，能够用于从复杂的生物样品中纯化目标蛋白质。
AKTA操作是常用的蛋白纯化系统，本文将介绍该系统的操作步骤和注意事项，帮助用户顺利进行蛋白纯化实验。
正文：一、AKTA操作之仪器准备1. 确保AKTA蛋白纯化系统已经连接好电源，并打开主机电源开关。
2. 检查液氮罐中的液氮是否充足，并确保液位高于所需运行温度。
3. 打开冰盒，准备好所需的离心管、移液器和其他实验器材。
二、AKTA操作之列柱装配1. 按照实验要求选择合适的色谱柱和填料，并正确装配到AKTA系统中。
2. 使用力学手套松开色谱柱底部的螺丝，将填料注入色谱柱中，确保填料均匀。
3. 同时，注意将填料与色谱柱的连接口处用黑色硅胶密封，以免液体泄漏。
三、AKTA操作之流程设置1. 打开AKTA系统的软件界面，并选择“新建方法”。
2. 在方法设置界面中，设定蛋白纯化的各个步骤，如进样、洗脱等流程参数。
3. 根据实验需求，选择合适的梯度洗脱方案，并输入相应的洗脱液体浓度。
四、AKTA操作之样品处理1. 将待纯化的生物样品进行预处理，如离心、过滤等，以去除杂质。
2. 根据纯化需求，可进行某些特定试剂的添加，如酶切剂、亲和标记剂等。
3. 根据方法设置，将样品装入进样器中，并调整进样量和进样流速。
五、AKTA操作之运行实验1. 保存并加载所设置的方法，确保参数设定正确。
2. 启动AKTA系统，开始实验运行，并监控过程中的各项参数指标。
3. 及时记录实验数据，并根据需要进行样品采样、保存等操作。
总结：通过本文所述的蛋白纯化AKTA操作说明，用户可以了解到系统准备、列柱装配、流程设置、样品处理和运行实验等关键步骤。
合理而正确的操作，将帮助用户获得高质量的蛋白纯化结果。
同时，用户还需根据实际操作中的具体情况，进一步优化实验参数，以满足各自的研究需求。
AKTA简要操作说明
AKTA简要操作说明
欢迎来到AKTA！
AKTA是一款快速，直观的组合操作系统，用于您使用终端来管理日
常业务。
它可以帮助您更有效率地进行日常操作，提高工作效率，提高工
作质量，并减少您的操作时间。
在本文中，我们将向您介绍AKTA的简单操作步骤。
希望通过本文，
您能够快速熟悉AKTA的操作流程，更好地展现您的能力。
1）设置用户权限
AKTA系统中的用户权限可以很容易被设置。
首先，您需要登录AKTA，然后点击“系统管理”-“设置用户权限”，将可以看到系统已经存在的
用户及其权限，您可以根据自身需要调整用户的权限等级。
您也可以新增
用户，并配置该用户的权限等级。
2）创建交易记录
当您在AKTA系统中创建新的交易记录时，需要先登录AKTA，然后点
击“交易记录”-“新建”，您可以看到一个新的交易记录表，您可以在
表中输入所有交易记录相关信息，例如：交易日期，交易类型，金额，收
款/付款方，备注等。
3）管理商品库存
如果您想要在AKTA中管理商品的库存，只需要登录AKTA，然后点击“商品库存”，您可以查看商品库存的相关信息，例如：商品名称，库存
数量，入库日期，状态等信息。
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离子强度的改变，有机溶剂的存在，温度和pH（尤其在等电点， 没有表面净电荷时）都能影响蛋白质结构和溶解度
盐浓度逐步的降低，样品组分根据疏水性的依次洗脱
层析柱料平衡及上样
分步洗脱及清洗
反相层析
反相色谱(reverse phase chromatography ，RPC)
所提供的标准混合器大小为 1.4 ml 也可选择 0.6 ml 和 5 ml 混合器 对于更高流速或难以混合的缓冲液需要更大的混合器
A B管混合 混合池
混合池滤膜的换置
样品环或 Superloop ™的各种上样技术 也可以使用选配的样品泵或系统泵直接把 样品上样到层析柱上
进样管（4）
柱位阀（柱阀口上A下B）
调整积分处理窗口
可对峰命名
实验前后注意事项
实验前准备：系统管道水清洗
实验前准备：缓冲液清洗
实验前准备：pH校准
实验前准备：收集器准备
放置对应盘架，齿轮条码对外
实验前准备：水清洗、缓冲液润洗上样管道
实验前准备：接层析柱并设定相应参数
实验后维护：管道去离子水泵洗
试验后准备：20%乙醇泵洗并保存
电导检测器，pH计
电导检测器用于监测缓冲液和样品的电导率，在线检测真 实的梯度 电导检测器整合温度传感器，可以校正由温度 引起的电导率的变化
在安装有pH电极的阀上直接注射校正液，可以轻松地进行 pH 计校正 限流器连接在 pH 阀上，在管路中产生反压，防止在紫外 流动池中形成气泡
单出口控制阀 V9-Os 可以连接收集器并具有一个额外出口， 可用于流穿组分的收集 多出口收集阀V9-O 能够连接多个收集器，而且有 10 个出 口可以进行大体积组分的收集
AKTA操作流程
汇报人 部门 时间
杨畅
抗体部
2019年5月30 日
目 Contents 录
01 硬件介绍 02 软件介绍
03 实验前后注意事项 04 常用柱层析原理
硬件介绍
简易管路流向
各模块标识
实物图
A1 A2 B1 B2管（最上的4瓶） B1、B2管 B1、B2汇合(In B） 一般装20%乙醇，保养用
均有空气传感器，有气泡 会自动关闭
In A: A1 A2汇合 1A 管 (从In B进泵后出来）
1B管（从In B进泵后出来）
In B：B1 B2汇合
可提供的最 大流速为 150 ml/min 的最大装柱流速。系统压力检测器连 接到系统泵上，连续测量系统压力，并能够自动调整流速 以避免达到设定的压力上限。
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给定权限
数据注销及激活
手动备份 系统备份
备份还原
System control
Run Data 模块
Chromatogram 模块
Flow scheme 模块
Run Log 模块
Method editor
Evaluation
积分区域 限定峰参数
柱层析原理简介
亲和层析
亲和层析示意图
凝胶过滤
凝胶过滤示意图
离子交换层析
蛋白质电离示意图
常见阳离子交换剂
常见阴离子交换剂
离子交换示意图
离子交换层析流程图
离子交换层析柱平衡及上样
离子交换层析分步洗脱及清洗
疏水层析（HIC）
疏水层析（Hydrophobic Interaction Chromat溶菌酶示意图 亲水部分：深蓝及浅蓝色部分 疏水部分：深红及浅红色部分
疏水氨基酸大部分包含在蛋白质内 部
有些则暴露在外，形成疏水区域， 这部分暴露在外的疏水性基团成为 疏水补丁
蛋白质表面既有疏水区域也有亲水区域，在纯水中，任何疏水效应 都太弱而不能导致配基和蛋白之间或蛋白自身的相互作用
检测吸收峰 190-700nm 紫外/可见光
紫外检测器
苯环共轭双键系统,在紫外光区（220-300nm）显示特征的吸收谱 带,最大光吸收分别为279、278、和259nm
肽键的强吸收峰在214nm处,214nm可测定多肽. 280nm可测定含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨 基酸的蛋白质分子. 铁蛋白是一种多聚体储铁蛋白，由于在分子中心存在大量 的铁离子，它在 340 nm显示出比其他蛋白更强的吸光值
利用非极性的反相介质为固定相，极性有机溶剂的水溶液为 流动相，根据溶质极性(疏水性)的差别进行溶质分离与纯化的洗脱 色谱法。
多肽与反相吸附剂之间互动的吸附/解吸附模型
柱料平衡及上样
分步洗脱及柱料清洗
分配层析
分溶曲线与转移次数（n）的依赖关系
利用固定载体上偶联的疏水性配基与流动相中的疏水分子发 生的可逆结合而进行分离的层析技术
疏水作用（hydrophobic interaction) 非极性分子进入水中，有聚集在一起形成
最小疏水面积的趋势，保持这些非极性分子聚 集再一起的作用成为疏水作用
疏水作用示意图
水的溶解性取决于它能够与偶极子作用并能形成氢键
出口阀
收集器
可以根据时间、体积或自动峰识别进行组分收集 峰识别可以最大限度减少交叉污染，把不需要的组分直接排为废液
组分收集器 F9-C 含有一个收集盘 架，可以容纳从 3 到 50 ml 的各 种试管以及 24、48 和 96 孔深孔 板
软件介绍
Unicorn6 4个窗口
Administration