医学免疫学检验-细胞因子测定及应用PPT优选课件
合集下载
《细胞因子的检测》课件
干细胞治疗
干细胞分泌的细胞因子具有促进组织再生和修复的作用，可用于治 疗多种疾病。
基因治疗
通过将具有治疗作用的基因导入细胞，调控细胞因子的表达，达到治 疗遗传性疾病和罕见病的目的。
04
细胞因子检测的挑战与展望
检测灵敏度与特异性
检测灵敏度
提高检测方法的灵敏度，降低检测限，以便更早地发现细胞 因子的存在。
挑战
面临的挑战包括如何提高检测方法的 实用性和可靠性，以及如何降低检测 成本，使其更易于在临床推广应用。
05
案例分析
案例一：肿瘤细胞因子检测
总结词
肿瘤细胞因子检测是利用细胞因子作为生物标志物，对肿瘤进行早期诊断、病情监测和疗效评估的方 法。
详细描述
肿瘤细胞因子检测通过检测肿瘤细胞分泌的细胞因子，如肿瘤坏死因子、白介素等，来判断肿瘤的存 在、发展阶段和预后情况。该方法具有无创、灵敏度高、特异性强等优点，有助于提高肿瘤的诊断准 确性和治疗效果。
案例三：感染性疾病细胞因子检测
总结词
感染性疾病细胞因子检测是利用细胞因子作 为生物标志物，对感染性疾病进行诊断和病 情监测的方法。
详细描述
感染性疾病细胞因子检测通过检测患者体内 异常升高的细胞因子，如白介素-1、白介素 -6等，来判断感染性疾病的类型和严重程度 。该方法有助于早期发现感染源，为患者提 供及时有效的治疗，同时有助于评估治疗效 果和预后情况。
药物研发
药物筛选
通过检测细胞因子水平的变化，可以筛选出具有潜在治疗作用的 候选药物。
药物疗效评估
在药物研发过程中，检测细胞因子水平的变化可以评估药物的疗 效和作用机制。
个体化治疗
根据患者细胞因子表达水平的差异，可以制定个体化的治疗方案 ，提高治疗效果。
干细胞分泌的细胞因子具有促进组织再生和修复的作用，可用于治 疗多种疾病。
基因治疗
通过将具有治疗作用的基因导入细胞，调控细胞因子的表达，达到治 疗遗传性疾病和罕见病的目的。
04
细胞因子检测的挑战与展望
检测灵敏度与特异性
检测灵敏度
提高检测方法的灵敏度，降低检测限，以便更早地发现细胞 因子的存在。
挑战
面临的挑战包括如何提高检测方法的 实用性和可靠性，以及如何降低检测 成本，使其更易于在临床推广应用。
05
案例分析
案例一：肿瘤细胞因子检测
总结词
肿瘤细胞因子检测是利用细胞因子作为生物标志物，对肿瘤进行早期诊断、病情监测和疗效评估的方 法。
详细描述
肿瘤细胞因子检测通过检测肿瘤细胞分泌的细胞因子，如肿瘤坏死因子、白介素等，来判断肿瘤的存 在、发展阶段和预后情况。该方法具有无创、灵敏度高、特异性强等优点，有助于提高肿瘤的诊断准 确性和治疗效果。
案例三：感染性疾病细胞因子检测
总结词
感染性疾病细胞因子检测是利用细胞因子作 为生物标志物，对感染性疾病进行诊断和病 情监测的方法。
详细描述
感染性疾病细胞因子检测通过检测患者体内 异常升高的细胞因子，如白介素-1、白介素 -6等，来判断感染性疾病的类型和严重程度 。该方法有助于早期发现感染源，为患者提 供及时有效的治疗，同时有助于评估治疗效 果和预后情况。
药物研发
药物筛选
通过检测细胞因子水平的变化，可以筛选出具有潜在治疗作用的 候选药物。
药物疗效评估
在药物研发过程中，检测细胞因子水平的变化可以评估药物的疗 效和作用机制。
个体化治疗
根据患者细胞因子表达水平的差异，可以制定个体化的治疗方案 ，提高治疗效果。
细胞因子检测技术ppt课件
本法常用于IFN等的测定，IFN可诱导细胞产生抑制 病毒RNA和DNA合成的酶，保护细胞不受病毒感染，产 生细胞病变效应（CPE）。
4、趋化活性测定法
趋化因子诱导细胞移动的方式
趋化性(c趋化因子高浓度处作 定向移动的特性,可采用琼脂糖和微孔小室趋化试验。
2、细胞毒活性测定
• 对指示细胞具有破坏作用的细胞因子，若与细 胞共育将会导致细胞死亡。因此，待测细胞因 子作一系列稀释后加至指示细胞培养体系，以 检测培养细胞的死细胞数作为判断指标，死细 胞数量与细胞因子的活性呈正比。应用系列稀 释的细胞因子标准品，制作其活性与剂量关系 的标准曲线，以此作为待测品活性的定量测定 的基础。
结果客观易于自动化； 适用于大标本量的测定
方法的特异性受依赖细 胞株影响；放射性污染
(2) MTT 比色法
特点：不使用放射性核素， 以细胞代谢变化为增殖指征 指示细胞的增殖情况与线粒体代谢活性相关
与同位素掺入法相比
测定步骤类似
掺入物：MTT而非3H-TdR； 反应条件：选用的细胞及其浓度、 培养时间不同
一个斑点代表一个细胞因子分泌细胞，斑 点的颜色深浅程度与细胞分泌的细胞因子 量相关
（二）免疫学检测
细胞因子(或受体)与相应的特异性抗体( 单 克隆抗体或多克隆抗体)结合，通过同位素、 荧光或酶等标记技术加以放大和显示， 从 而定性或定量显示细胞因子(或受体)的水平。 1、ELISA法 2、酶联免疫斑点实验 3、流式细胞分析法
1、ELISA方法
ELISA法是应用最为广泛的非均相酶标免疫分析技术，一 步或多步的抗原抗体反应和一步酶促反应构成ELISA的基 本步骤，可作定性或定量分析。ELISA法不仅可以用于细 胞因子检测，也可用于可溶性细胞因子受体或可溶性粘 附因子的测定
细胞因子医学免疫学课件课件
02
细胞因子在免疫治疗 中的应用
通过调节细胞因子的分泌，可以治疗 自身免疫性疾病、肿瘤等免疫相关疾 病。
03
细胞因子在疫苗研制 中的应用
疫苗中的某些细胞因子可以刺激机体 免疫应答，增强疫苗效果。
细胞因子在疫苗研制中的应用
细胞因子作为疫苗佐 剂
某些细胞因子可以作为疫苗的佐 剂，增强机体的免疫应答。
细胞因子在疫苗保存 中的作用
细胞因子的产生和作用
细胞因子的产生
细胞因子可由多种免疫细胞如T细胞、B细胞、单核/巨噬细胞等产生，在机 体受到感染或免疫应答等刺激时，这些细胞会产生并释放细胞因子。
细胞因子的作用
细胞因子通过与靶细胞表面的特异性受体结合，发挥调节细胞生长、分化、 增殖和免疫应答等生物学作用，在机体抗感染、抗肿瘤和免疫调节中发挥重 要作用。
其他疾病
细胞因子在衰老过程中的作用
细胞因子网络的变化与衰老相关，调节细胞因子平衡可能有助于延缓衰老进程。
细胞因子在神经退行性疾病中的作用
研究证实细胞因子在帕金森病、阿尔茨海默病等疾病中发挥重要作用，针对这些 细胞因子的治疗可能对神经退行性疾病的防治有益。
05
细胞因子的应用
细胞因子作为药物
细胞因子药物的种类
2023
细胞因子医学免疫学课件
contents
目录
• 引言 • 细胞因子概述 • 主要细胞因子及其功能 • 细胞因子与疾病 • 细胞因子的应用 • 景
细胞因子是免疫系 统中重要调节分子
细胞因子在肿瘤、 感染和自身免疫性 疾病等多种疾病中 具有重要地位
细胞因子在免疫应 答和炎症反应中发 挥关键作用
研究细胞因子在疫苗中的作用 ，设计和开发新型的疫苗，以 提高疫苗的免疫效果和预防范 围。
细胞因子医学免疫学课件课件
应的平衡。
诱导或抑制炎症反应
02
细胞因子可以诱导或抑制炎症反应，参与感染和组织损伤的防
御。
调节代谢
03
细胞因子可以调节代谢，包括糖、脂肪和蛋白质的合成和分解
。
细胞因子的产生与调控
01
02
03
产生部位
细胞因子主要由免疫细胞 、上皮细胞、内皮细胞等 产生。
产生条件
细胞因子的产生通常在抗 原刺激、炎症反应、细胞 因子自身诱导等条件下诱 导产生。
细胞因子在肿瘤免疫中的作用
总结词
细胞因子在肿瘤免疫中具有双重作用，一方面可以促进肿瘤细胞的生长和扩散，另一方面也可以激活免疫细胞 以清除肿瘤。
详细描述
某些细胞因子，如IL-6和TGF-β，可以促进肿瘤细胞的生长和扩散，而另一些细胞因子，如IFN-γ和TNF-α， 则可以激活免疫细胞以清除肿瘤。因此，针对细胞因子的治疗策略需要仔细平衡其促肿瘤和抗肿瘤的作用。
3
白细胞介素-3（IL-3）
主要由活化的T细胞和肥大细胞产生，主要功能 是刺激多能造血干细胞的定向分化与增殖，产 生各种类型的血细胞。
肿瘤坏死因子（Tumor Necrosis Factors）
肿瘤坏死因子-α（TNFα）
主要由活化的单核/巨噬细胞产生，功能是 杀伤靶细胞和促进细胞凋亡，还具有介导炎 症的作用。
细胞因子在炎症反应中的作用
总结词
细胞因子在炎症反应中发挥关键作用，可以促进炎症细胞的聚集和活化，以及炎症介质的释放和修复 。
详细描述
在炎症反应中，细胞因子可以促进炎症细胞的聚集和活化，以及炎症介质的释放和修复。例如，IL-1 、IL-6和TNF-α等细胞因子可以促进炎症反应的加剧，而IL-4、IL-10和TGF-β等细胞因子则可以抑制 炎症反应，促进修复。
医学免疫学细胞因子优秀课件
集落刺激因子 （CSF）
• 定义：指能刺激多能造血干细胞和不同发育分 化阶段的造血祖细胞增殖分化，并在半固体培 养基中形成相应细胞集落的细胞因子。
• 分类：IL-3、GM-CSF、G-CSF、M-CSF、 EPO和SCF等
CSF与临床
• 肿瘤患者放疗和化疗后-------白细胞
GM-CSF、G-CSF、M-CSF 细胞
IL-1 IFN
TNF
IL-1
IFNI
TGF
L2
IL-4
TNF IFN
TNF
IL-1 TGF
IL-1 IL-6
内皮细胞
T细
胞
IFN
因
IL2 IL-4
子
IL-5 IL-6
的
网
络
B性
细胞因子以网络形式发挥作用
树突状细胞，巨噬细胞
IL-12 Th1
IL-10 IL-4 IFN-g
Th2, 肥大细胞
IL-4
IL-4
更有效地诱导
+
B细胞 IgE 类别转换
IL-5
拮抗性
一种细胞因子抑制另一种细胞因子的功能
IL-4 IFN-γ
IL-4 促进
Th2细胞
IFN-γ抑制
网络性
众多细胞因子可相互诱生、生物学作用相 互促进或相互抑制，形成十分复杂的、开放式 的细胞因子调节网络，维持免疫系统的动态平 衡。
成纤维细胞
医学免疫学细胞因 子
概述
• 概念：
由免疫原、丝裂原或其 他因子等刺激机体免疫细 胞及组织细胞分泌的在细 胞间发挥相互调控作用的 一类小分子可溶性多肽蛋 白，通过结合细胞表面的 相应受体调节细胞生长分 化和效应，调控免疫应答。
《细胞因子检测概述》课件
化学发光法
化学发光法是一种利用化学发光反应来检测细胞因子的方 法。这种方法具有高灵敏度、高特异性和可定量等优点， 适用于痕量细胞因子的检测。
化学发光法主要包括酶促化学发光和直接化学发光等方法 。这些方法在临床诊断、药物研发和环境监测等领域有广 泛应用。
荧光定量PCR法
荧光定量PCR法是一种基于PCR技术 的细胞因子检测方法。通过荧光染料 或探针标记的特异性引物，实现对细 胞因子基因的定量检测。这种方法具 有高灵敏度、高特异性和可定量等优 点。
THANKS
感谢观看
细胞因子在免疫应答、炎症反应、造 血等生理和病理过程中发挥重要作用 。
细胞因子种类
白细胞介素（IL）
如IL-1、IL-2、IL-6等，具有调节免疫和炎 症反应的功能。
干扰素（IFN）
如IFN-α、IFN-β、IFN-γ等，具有抗病毒、 抗肿瘤和免疫调节作用。
肿瘤坏死因子（TNF）
如TNF-α、TNF-β等，具有抗肿瘤和免疫调 节作用。
案例二：自身免疫性疾病细胞因子检测
总结词
自身免疫性疾病细胞因子检测是利用细胞因子作为生物标志物，对自身免疫性疾病进行诊断和病情监测的方法。
详细描述
自身免疫性疾病细胞因子检测通过检测患者体内异常升高的细胞因子，如IL-17、IL-23等，来判断自身免疫性疾 病的存在、发展阶段和治疗效果。这种检测方法有助于提高自身免疫性疾病的诊断准确性和治疗效果，为患者提 供更好的治疗选择。
05
细胞因子检测案例分析
案例一：肿瘤细胞因子检测
总结词
肿瘤细胞因子检测是利用细胞因子作为生物标志物，对肿瘤进行早期诊断、病情监测和疗效评估的方 法。
详细描述
肿瘤细胞因子检测通过检测肿瘤细胞分泌的细胞因子，如IL-6、TNF-α等，来判断肿瘤的存在、发展 阶段和治疗效果。这种检测方法具有无创、灵敏度高、特异性强的优点，有助于提高肿瘤的诊断准确 性和治疗效果。
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2020/10/18
23
各类细胞因子检测的常用靶细胞
细胞因子 IL-1
IL-2 IL-3
实验系统 D10（M）增殖法 EL-4（M）增殖法 A352（H）增殖抑制法 CTLL（M）增殖法 KG-1（H）增殖法 TF-1（H）增殖法
IL-4 IL2-0520/10/18
CTLL（M）增殖法 BCL-1（M）增殖法
不能判断细胞因子的生物学活性。
2020/10/18
33
ห้องสมุดไป่ตู้
ELISPOT
2020/10/18
34
酶联免疫斑点试验(ELISPOT或ElisaSpot)
在包被有待测细胞因子抗体的微孔板上，加 基 入可分泌相应细胞因子的待测细胞，经在有或无 本 刺激物存在的条件下培养，待测细胞分泌细胞因
原 子于其周围，并被板上的特异性抗体捕获。后续 理 的反应如同ELISA，即在洗去细胞后视用于试验
干扰因素 IL-2、IL-4 IL-4
IL-4
GN-CSF、IL-5
IL-6、EPO
IL-2
IL-4
24
第一课件网网站
各类细胞因子检测的常用靶细胞
细胞因子 IL-6
IL-7 IL-8 GM-CSF
TNF/ IFN
2020/10/18
实验系统
干扰因素
B9（M）增殖法
IL-4、IL-11
BM60（H）增殖法
的酶标抗体为一抗或二抗，分别作直接或间接法。
2020/10/18
7
细胞因子检测的特点与方法
1、检测的特点 2、检测的方法
2020/10/18
15
细胞因子检测的特点
免疫原性较弱 样品含量低 样品具有时效性 生物效应特异性差
2020/10/18
16
细胞因子检测的方法
免疫学检测方法——抗原性检测
细胞生物学检测方法——生物活性检测
分子生物学检测方法——基因表达检测
2020/10/18
17
第二节 细胞因子检测的方法与原理
一、细胞因子的细胞生物学检测
二、细胞因子的免疫学检测
三、细胞因子的分子生物学检测
2020/10/18
18
细胞因子的细胞生物学检测
1、检测方法与原理 2、检测中的操作注意要点
2020/10/18
19
检测方法与原理
细胞增殖或增殖抑制试验 细胞病变抑制试验 细胞毒试验 细胞趋化试验
2020/10/18
26
显示检测结果
1、细胞增殖状态的显示： 放射性核素掺入法、 胞内酶活性显示法 活细胞染色法 细胞荧光测定法
2、细胞毒或细胞病变状态的显示
活细胞染色法
胞内酶活性显示法
DNA断片测定法
2020/10/18
27
细胞增殖检测方法分类
➢直接计数法 简便、直观,但费时、主观因素影响大、
第一课件网网站
2020/10/18
1
第一节 细胞因子检测概述
一、细胞因子的类型与作用特点 二、细胞因子检测的特点与方法
2020/10/18
2
细胞因子
由非神经—内分泌细胞产 生的一大类与免疫应答活动 密切相关的低分子蛋白与多 肽。
2020/10/18
3
细胞因子的类型与作用特点
1、细胞因子的分类 2、细胞因子的作用特点
Clone-IXN/2b（M）增殖法
中性粒细胞（M、H）趋化法
TF-1（H）增殖法
IL-3、IL-5
IL-6、IL-5
L929 （M、H）细胞毒法
wish（H）病变保护法
IFN- 、 IFN-
L929（M）病变保护法
IFN- 、 IFN2-5
检测标本的准备
1、分离特定的产生细胞 2、对产生细胞进行诱导、激活 3、选择适当的收集时间
2020/10/18
5
各
类
细
胞
因
子
间
关
CSFs
系
Chemokines
ILs IFNs TNFs TGFs
2020/10/18
6
1、旁分泌（paracrine）、自分泌（autocrine）性 2、多源与同源性 3、高效性 4、多效性（pleiotropy） 5、丰余性（redundancy） 6、协同性 7、拮抗性 8、网络性
30
生物学活性测定方法学评价
敏感性较高 特异性不高 操作繁琐 易受干扰
2020/10/18
31
细胞因子的免疫学检测
分泌型细胞因子的检测 细胞内细胞因子的检测
2020/10/18
32
ELISA
特异、简便 易于推广和标准化等优点 可同时检测大量标本且试验废弃物便于处 理 细胞因子测定的首选方法
敏感性偏低
难以标准化和自动化 ➢细胞代谢活性测定方法
3H-TdR、125I-UdR掺入法或MTT等比 色法 ➢细胞代谢产物测定法
代谢产物荧光强度测定法和指示细胞表 面标记或可溶性分子测定法
2020/10/18
28
(1) 放射性核素掺入法
通过检测细胞DNA合成的增加或减少来判断细胞增殖的方 法。在细胞的增殖过程中，DNA合成的增加使得指示细胞对 核苷或碱基的需求增多，若将核苷标记上可以示踪的同位素（ 3H/125I ），通过检测细胞内的同位素含量，则可反映细胞增 殖的程度。
结果客观易于自动化； 适用于大标本量的测定
2020/10/18
方法的特异性受依赖细 胞株影响；放射性污染
29
(2) MTT 比色法
特点：不使用放射性核素， 以细胞代谢变化为增殖指征 指示细胞的增殖情况与线粒体代谢活性相关
与同位素掺入法相比
测定步骤类似
2020/10/18
掺入物：MTT而非3H-TdR； 反应条件：选用的细胞及其浓度、 培养时间不同
2020/10/18
4
以生物学作用进行划分的分类
白细胞介素（Interleukin）—— IL-1、IL-2、…… IL-18 干扰素（Interferon）—— IFN-、IFN-、IFN- 肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor）—— TNF- 、 TNF- 集落刺激因子（Colony-stimulating factor）—— M-CSF、G-CSF 转化生长因子（Transforming growth factor）—— TGF- 趋化因子（Chemokine）—— IL-8、GROs、MCP-1 生长因子（Growth factor）—— EGF、FGF、IGF、PDGF
2020/10/18
20
细胞
趋化因子
2020/10/18
滤膜：计数受趋化细胞
趋化试验原理示意
21
检测中的操作注意要点
靶细胞的选择与培养
检测标本的制备
显示检测结果
2020/10/18
22
靶细胞的选择与培养
1、对所测的细胞因子有特异的敏感性
2、易培养、保存、生物学特性稳定
3、有良好的生长状态
4、种属适配