邻苯三酚比色法测定土壤多酚氧化酶活性

邻苯三酚比色法测定土壤多酚氧化酶活性

试剂配制

(1)1%邻苯三酚溶液 (2)乙醚。(3)0．5N盐酸。(4)重铬酸钾标准溶液——o．75g重铬酸钾溶于1升0.5N

HCl(相当于50mI醚中含5mg紫色没食子素)。

(5)pH4．5柠檬酸——磷酸缓冲液。标收曲线绘制：取重铬酸钾标准溶液，用o．5N HCI稀释成各种不同浓度。定容后，在分光光度计上于430nm处比色测定。以光密度位为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线。

2。投作步骤取1g土样(过o．25mm筛)，置于50ml三角瓶中，然后注入10ml 1％邻苯三酚溶液，将瓶内含物摇荡后放在30度恒温掐小培养2h。取出后加4mlpH 4．5柠檬酸——磷酸缓冲液，再加35ml乙醚，用力摇荡数次，萃取30min。最后，将含溶解的紫色没食子素的着色乙醚相进行比色。比色时用波长为430nm的滤光片。为防止因乙醚引起的误差，每比色一次用元水乙醇洗涤比色液槽一次。为了消除土壤中原有的醚溶性有机物质而引起的误差及校正

没食于酚的纯度，需设无基质的土壤和无土壤的基质作对照。在

无基质的土壤的对照中，用水代替基质进行培养。

3．活性表示紫色没食子索的量，根据用重铬酸钾绘制的标准曲线查知。

多酚氧化的活性，以2h后1g土壤中紫色没食子素的毫克

数表示。

我不知道找个“紫色没食子素”是什么意思？是不是要找个试剂啊？我问了几个老师，他们都没有听说过这个试剂。我的有的药品冯老师本来说他那有，可是我做的时候去找了，缺了几个，王老师说想办法买了，已经给李老师说了，买了后做，这几天榆林大风降温，那个移栽没有办法进行，上面红颜色的我不知道怎么做了，萃取不知道是萃取什么，看不太懂，还有测那个中性磷酸酶时的酚溶液是苯酚加水就可以了么？我这几天在图书馆查了很多资料，可是都没有啥结果（

配制方法：在大烧杯中加入80mL去离子水，再加入300g 苯酚，在水浴中加热搅拌、混合至苯酚完全溶解。将该溶液倒入盛有200mL去离子水的1000mL分液漏斗内，轻轻振荡混合，

使其成为乳状液。静止7～10小时，乳状液变成两层透明溶液，下层为被水饱和的酚溶液，放出下层，贮存于棕色瓶中备用。）

回复：

没食子素就是邻苯三酚。紫色没食子素就是多酚氧化酶催化氯化没食子素生成的东西。

乙醚萃取的时候会分层，之前不是加邻苯三酚了嘛，乙醚相中萃取出的多酚物质被邻苯三酚着色了生成紫色没食子素。萃取出来的成分就是你在430nm处测定的物质啊！