宫颈人乳头瘤病毒第二代杂交捕获法和实时荧光聚合酶链反应检测法的临床应用比较

的可检出率为 90.0%~99.7%，特别是那些高危型 HPV 感染。 国际癌症研究组织（IARC）对世界 25 个国家（不包括东亚地 区）的宫颈癌标本的研究发现了 15 种高危型 HPV，而与我国 宫 颈 癌 密 切 相 关 主 要 病 毒 类 型 依 次 为 HPV16、HPV58 和 HPV18，HPV58 是我国、日本、朝鲜等东亚地区高发病毒流行 株[6-9]。 所以对存在 CIN 患者进行高危型 HPV 感染的筛查检 测在临床上对于早期预防及发现宫颈癌具有十分重要的临
宫颈癌作为一种危害妇女健康的严重疾病，目前在妇女 中其发病率则仅次于乳腺癌的发病率，位于妇女恶性肿瘤发 病 的 第 2 位 ，每 年 全 世 界 约 有 50 万 新 发 病 例 ，25 万 死 亡 病 例，其中发展中国家占 2/3。 我国是宫颈癌的高发区，占全球 宫颈癌总数的 10%[1-5]。 研究证实，人乳头状瘤病毒（HPV）是 引起妇女宫颈癌及癌前病变发病的致病病毒；研究证实子宫 颈 上 皮 内 瘤 变 （cervical intraepithelial neoplasia，CIN） 患 者 多 数伴 HPV 感染，调查发现妇女宫颈癌患者标本中 HPV-DNA
标本来源于 2011 年 1~6 月在上海市闵行区中心医院妇 产科行液基细胞薄层涂片技术 （LCT）≥ 未 明 确 诊 断 意 义 的 ASCUS 患 者 100 例 。 检 查 者 按 细 胞 学 分 类 ，ASCUS 48 例 ， LSIL 36 例，高度鳞状上皮内病变（HSIL）16 例。 分别采用 realtime PCR 与 HC Ⅱ检测高危型 HPV。 及时将临床采集的标本 送检，按照操作流程预处理临床采集的标本后置于低温冰箱 保存待检。 所有患者均对研究知情。 1.2 仪器与试药
· 医学检验 ·
2011 年 12 月第 8 卷第 36 期
宫颈人乳头瘤病毒第二代杂交捕获法 和实时荧光聚合酶链反应检测法的临床应用比较
王立锋 1，2 1.苏州大学医学院，江苏苏州 215007；2.上海市瑞金医院分院（上海市闵行中心医院）妇产科，上海 201100
[摘要] 目的：比较第二代杂交捕获法（HC Ⅱ）与实时荧光聚合酶链反应技术（real-time PCR）在检测女性生殖道人乳
高 危 型 HPV 实 时 荧 光 PCR 临 床 检 测 试 剂 盒 均 由 上 海 复星诊断有限公司所提供 ；采用 Line-Gene FQIN33 A 型 realtime-PCR 仪 进 行 DNA 检 测 ；HC Ⅱ 基 因 杂 交 信 号 扩 大 系 （美国 Digene 公 司 ）、HPV-DNA 试 剂 盒 （美 国 Digene 公 司 ）、 微 孔 板 封 面 胶 膜 （Xygen 公 司 ）、 子 宫 颈 采 样 器 （ 含 保 存 液 ） （美国 Digene 公司）、圆底 96 孔酶标板（Xygen 公司）。 1.3 实时荧光聚合酶链反应技术检测方法
不 同 引 物 和 探 针 （5' 端 和 3' 端 分 别 标 有 荧 光 报 告 基 团 和荧光淬灭基团），只在相应型别模板的型特异性碱基区域与 模板发生相互作用，PCR 扩增时，兼有 5'-3' 核酸外切酶活性 的 Taq 酶将探针降解，荧光报告基团脱离荧光淬灭基团的作 用，荧光信号逐渐增强，由定量 PCR 仪的荧光监测系统对标 本 的 荧 光 信 号 进 行 实 时 动 态 检 测 ，确 定 模 板 的 型 别 。 realtime PCR 法 高 危 型 HPV 检测 反 应 试 剂 盒 可 分 辨 13 种 高 危 型 HPV 型别（包 括 16、18、31、33、35、39、32、52、56、58、59、68）。 具体操作流程按试剂盒说明书指示的步骤进行操作。 其操作 流程包括如下步骤：①提取样本 DNA。 ②配制 real-time PCR 反应液：将每 1 份样本标本分别分装到 13 个 PCR 反应管中 以 分 别 检 测 13 种 高 危 型 HPV 型 别 。 ③样 本 实 时 荧 光 PCR 扩 增 与 检 测 ：扩 增 过 程 为 50℃反 应 进 行 2 min，在 94℃条 件 下进行 DNA 变性 2 进入 PCR 反应循环，循环温度及时间程 序为 93℃，20 s，50℃，90 s，共计 40 个反应循环，反应温度降 至 50℃时检测反应荧光值。 ④对反应结果进行判断分析。 1.4 第二代杂交捕获检测方法
63.0％和 71.0％，二者总符合率为 82.3%；HC Ⅱ检测手段对高危宫颈病变患者进行高危 HPV 筛查的灵敏性、特异 性 、
准确性、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比和阴性似然比分别为 79.3%、88.2%、91.2%、10.1%、99.7%、8.9 和 0.327；
real-time PCR 以上各指标分别为 100.0%、92.5%、86.7%、8.6%、100.0%、8.7 和 0。结论：Real-time PCR 与 HC Ⅱ检测宫
头瘤病毒（HPV）高危亚型中的临床价值。 方法：随机选取 2011 年 1~6 月我院妇产科行液基细胞薄层涂片技术进行
低度鳞状上皮内病变（LSIL）检查，检查结果为未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞（ASCUS）患者 100 例，分别采
用 real-time PCR 与 HCⅡ检测 HPV 高危亚型， 比较两者的检测结果。 对检测 HPV 阳性的样本或 HPV 阴性但液基
Comparison of clinical value between hybrid capture Ⅱ and multi-fluorescent polymerase chain reaction in the detection of the high-risk human papillomavirus types
细胞薄层涂片技术（LCT）≥LSIL 的妇女采用阴道镜下活组织病理学检查，以病理结果作为验证两种 HPV 检测的参
考标准。 结果：共取病理 68 例。 病理结果证实该人群中子宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅲ级 5 例，CIN Ⅱ级 11 例，CIN Ⅰ级
19 例，慢性宫颈炎和鳞状上皮化生 33 例。 该 100 例患者 HC Ⅱ和 real-time PCR 检测高危型 HPV 的阳性率分别为
床意义。 第 二 代杂 交 捕 获 法 （HC Ⅱ）是 目 前 被 FDA 唯 一 批
92 中国医药导报 CHINA MEDICAL HERALD
2011 年 12 月第 8 卷第 36 期
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准 的 HPV 感 染 检 测 方 法 ，其 具 有 能 同 时 检 测 13 种 高 危 型 HPV 感染的方法。近年来，一种新的 DNA 检测技术实时荧光 聚合酶链反应技术（real-time PCR）检测获得很大的发展，realtime PCR 检测高危型 HPV DNA 具有试验操作简便 ，在扩增 高危型 HPV 时结合了核酸特异型探针以进行杂交， 该方法 提高了实验室检测的敏感性及特异性[10-12]。 本研究采用 realtime PCR 和 HC Ⅱ技 术 来 分 别 检 测 100 例 行 液 基 细 胞 薄 层 涂片技术（TCT）≥低 度 鳞 状 上 皮 内 病 变（LSIL），未 明 确 诊 断 意 义 的 不 典 型 鳞 状 上 皮细 胞 （ASCUS）患 者 宫 颈 标 本 中 的 高 危亚型 HPV，探讨两种检测方法的优缺点及其不同CIN 程度 的高危型 HPV 的检出率，并探讨两种高危 HPV 检测方 法 在 宫颈癌筛查中的作用。 1 材料与方法 1.1 材料
颈上皮内瘤变患者高危型 HPV 有较好的相关性；但 real-time PCR 检测高危型 HPV 具有更好的敏感性和特异性。
[关键词] 人乳头瘤病毒；第二代杂交捕获法；实时荧光聚合酶链反应技术；宫颈上皮内瘤变
[中图分类号] R711.74
[文献标识码] B
[文章编号] 1673-7210（2011）12（c）-092-03
WANG Lifeng1,2 1.School of Medicine, Suzhou University, Jiangsu Province, Suzhou 215007, China; 2.Department of Obstetrics and Gyne cology, Shanghai Ruijin Hospital Branch (Shanghai Minhang Central Hospital), Shanghai 201100, China [Abstract] Objective: To compare real-time polymerase chain reaction (real-time PCR) with hybrid capture Ⅱ (HC Ⅱ) in the detection of high-risk genotypes of human papillomavirus (HPV) in patients with cervical lesion. Methods: 100 patients with cervical atypical squamous cells of undetetemined (TCT≥low grade squamous intraepithelial lesion, LSIL) who received treatment in our hospital department of obstetrics and gynecology were randomly selected from January 2011 to June 2011, cervical samples were detected by real-time PCR and HC Ⅱ to detect high-risk HPV subtypes, and the test results were compared. Results: 68 cases of pathology were selected who were confirmed with cervical intraepithelial neoplasia (CIN), and there were 5 cases were CIN Ⅲ, 11 cease were CIN Ⅱ, 19 cases were CIN I, 33 cases were chronic cervicitis and squamous metaplasia. The positive rate of high -risk HPV types were tested by HC Ⅱ and multi -fluorescent real -time PCR were 63.0% and 71.0% respectively, the total coincidence rate of them was 82.3%. The sensitivity, specificity, accu racy, positive prevalue, negative prevalue, positive likelihood ratio and negative likelihood ratio of patients with cervical le sions detected by HC Ⅱ were 79.3%, 88.2%, 91.2%, 10.1%, 99.7%, 8.9 and 0.327 respectively; Those of real-time PCR were 100.0%, 92.5%, 86.7%, 8.6%, 100.0%, 8.7 and 0 respectively. Conclusion: There are good correlations between HC Ⅱ methods and multi-fluorescent real-time PCR methods in the detection of high-risk HPV type in patients with cervical intraepithelial neoplasia, however, real-time PCR detection of high-risk HPV has better sensitivity and specificity. [Key words] Human papillomavirus; Hybrid capture Ⅱ ; Real -time polymerase chain reaction; Cervical intraepithelial neoplasia