分子生物学复习题 第八章重组DNA技术说课讲解
第8章DNA重组
• 也称为指纹 fingerprint
33
各种遗传标记的分子关系
RFLP
DNA RAPD AFLP
RNA
基因型
形态性状
Pro
生理生化指标 细胞学标记 其他性状
表现型 受环境条件影响
标记数量有限
34
分子标记的种类
• Based on hybridization: RFLP • Based on PCR:
• PCR反应： 目的基因的（部分）序列已知
• 化学合成法： 要求已知目的基因的核苷酸序列或其产 物的氨基酸序列
42
化学合成法获取目的基因
由已知氨基酸序列推测可能的DNA序列
43
用于基因克隆的载体
• 定义：为携带目的基因，实现其无性繁殖或表达 有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。
• 功能：运送外源基因高效转入受体细胞；为外源 基因提供复制能力或整合能力；为外源基因的扩 增或表达提供必要的条件
人工染色体
• 人工染色体指人工构建的含有天然染色体基本功 能单位的载体系统。
• 原理：天然染色体基本功能单位包括复制起始点 （ARS）、着丝粒(centromere)和端粒 (telomere)。ARS保证染色体复制，CEN保证染 色体分离，TEL保证染色体的稳定存在。人们为 了克隆大片段DNA，利用DNA体外重组技术分离 了天然染色体的基本功能元件并将它们连接起来， 从而构成了人工染色体。
5’ TTTTTTTTTTTTTTOH AAA3A’ AAAAAAAAAAp T4-DNA ligase 5’ TTTTTTTTTTTTTT 3’ AAAAAAAAAAAAAA 5’
重组DNA技术培训课件
重要的工具酶
工具酶 限制性核酸内切酶
T4 DNA连接酶
DNA聚合酶 逆转录酶
碱性磷酸酶 T4多聚核苷酸激酶
末端脱氧核苷酸转移酶
活性 识别特异碱基序列，切割DNA 催化DNA5ˊ-磷酸与3ˊ-羟基 形成磷酸二酯键 以DNA为模板合成DNA 以RNA为模板合成cDNA 切除5－末端磷酸 催化核酸5'-羟基磷酸化 催化3'-端合成同聚尾
基因工程(genetic engineering)
是将不同来源的DNA片段与载体分子连接形成重组DNA分 子，再导入宿主细胞内进行表达，也称重组DNA技术。
本章主要内容
重要的工具酶 基因克隆常用的载体 重组DNA基本原理 重组技术在医学和制药
工业中的应用
第一节 重要的工具酶
工具酶 基因工程中的工具酶主要包括用于DNA和 RNA 分 子 的切割、连接 、 聚合、逆转录等 相 关的各种酶类。
Streptomyces albus Subspecies pathocidicus 白色链球菌
酶名称 BamHⅠ
Bgl Ⅱ EcoRⅠ Hind Ⅲ
PstⅠ SalⅠ
识别顺序 GGATCC
ACATCT
同裂酶 BstⅠ
同尾酶
Bgl Ⅱ MboⅠ
GAATTC
AAGCTT HsuⅠ
CTGCAG SalpⅠ
变性
5'
3'
+
标记探针
3'
5'
㈢ Taq DNA pol（耐热DNA聚合酶）
作用特点 1） Taq DNA pol催化DNA合成的最适温度范围
70 75℃， 2） 95℃以上高温，半小时不失活， 3） 最适合用于聚合酶链反应（PCR）扩增DNA片
高中生物复习课件-DNA重组技术的基本工具
－
只含有抗氨苄青霉素基因源自预期 四＋－
－
－
既不含有抗四环素基因也不 含有抗氨苄青霉素基因
思考与探究 P7
15
27 36 48
思考与探究 P7
2、为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？
通过长期的进化，细菌本身DNA分子 中或者不具备这种限制酶的识别序列，或 者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列 的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样， 尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身 的DNA被切断，并且可以防止外源DNA 的入侵。
对照组：不 实验组1：添 实验组2：添 实验组3：添加一 添加抗生素 加一定浓度 加一定浓度的 定浓度的四环素
的四环素 氨苄青霉素 和氨苄青霉素
对照 实验 实验 实验 组 组1 组2 组3
结论
预期 一
＋
＋
＋
＋
既含有抗四环素基因也含有 抗氨苄青霉素基因
预期 二
＋
＋
－
－
只含有抗四环素基因
预期 三
＋
－
＋
磷酸二酯键
一个核苷酸脱氧核糖上 第3位的羟基与下一个核 苷酸脱氧核糖上第5位的 磷酸羟基脱水缩合成酯 键，该酯键称3,5磷酸二
酯键。
5
A
4
1
3
2
T 5
4
1
3
2
（一）限制性核酸内切酶——“分子手术刀”
④作用特点：
具有特异性。 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，
并且能在特定的切点上切割DNA分子，
生物 选修3 现代生物科技专题
专题1 基因工程
基因工程的产物：
多彩小鱼
转基因小鼠
蓝色玫瑰
辣椒香蕉
《DNA重组》课件
DNA重组技术展望
技术发展：未来DNA重组技术将更加精准、高效、安全
应用领域：DNA重组技术将在生物制药、基因编辑、生物合成等领域发挥重要作用
伦理问题：DNA重组技术可能引发伦理问题，需要加强监管和规范 技术挑战：DNA重组技术面临技术瓶颈和挑战，需要不断探索和创新
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汇报人：PPT
课程名称：《DNA重组》 课程目标：让学生了解DNA重组的基本原理和操作方法 课程内容：包括DNA重组的基本概念、原理、操作方法、应用领域等 课程对象：生物科学、生物技术、医学等相关专业的学生
课件目的
讲解DNA重组在生物技术中 的应用
介绍DNA重组的基本概念和 原理
探讨DNA重组在医学、农业 等领域的应用前景
04 DNA重组技术
重组DNA技术概述
基本原理：通过基因工程技术，将外源DNA片段插入到宿主细胞中，实现基因的转移和表达 应用领域：生物医药、农业、环境科学等领域 主要技术：基因克隆、基因表达、基因沉默等 安全性问题：需要考虑基因重组技术的安全性和伦理问题，确保技术的合理应用和健康发展。
制定伦理规范，明确重组DNA 的伦理边界
加强监管，确保重组DNA的合 规使用
加强公众教育，提高公众对重 组DNA的认知和接受度
07 总结与展望
DNA重组技术总结
技术原理：通过基因工程手段，将外源基因导入宿主细胞，实现基因的定向改造和表达 应用领域：生物医药、农业、环境等领域 技术挑战：基因导入效率、基因表达调控、生物安全性等 发展趋势：基因编辑技术、合成生物学、生物制造等
重组DNA技术应用
基因工程：通过重 组DNA技术，可 以改变生物的遗传 特性，如转基因作 物、基因编辑等。
生物制药：重组 DNA技术可以用 于生产生物药物， 如胰岛素、生长激 素等。
分子生物学复习题 第八章重组DNA技术
第八章重组DNA技术一、选择单选1、下列哪项不属于生物工程？A. PCR技术B.重组DNA技术C.蛋白质工程D.酶工程E.细胞工程2、重组DNA技术中所用的限制酶是哪类？A.Ⅰ型限制酶B.Ⅱ型限制酶C.Ⅲ型限制酶D.Ⅳ型限制酶E.Ⅴ型限制酶3、可以利用蓝白筛选法筛选用pUC转化的重组DNA克隆，是因为pUC包含以下哪种元件？A.复制起点B. amp RC.acZ'D.多克隆位点MCSE.调节基因lacI4、关于λ噬菌体，以下叙述错误的是A.基因组DNA的部分序列并非溶原性生长所必需B.基因组DNA感染大肠杆菌后形成闭环结构C.在溶原性生长时进行滚环复制D.复制时形成多联体结构E.其转化的细菌经过培养形成噬菌斑5、pBR322质粒包含两个抗性基因：氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，据此可以利用哪种方法筛选重组DNA克隆？A.α互补B. PCRC.插入失活D.核酸分子杂交E.蓝白筛选6、制备重组DNA首先要制备目的DNA，要保证目的DNA的量和纯度能满足重组要求。
常用的制备方法不包括A.PCR扩增B.从组织细胞分离基因组DNAC.化学合成D.逆转录合成cDNAE.限制酶截取7、第一种应用于临床的重组蛋白是A.基因工程疫苗B.基因工程抗体C.激素D. 生长因子E.细胞因子8、在重组DNA技术中，目的DNA与载体在体外连接的过程称为DNA的体外重组。
体外重组的方法不包括：A.加人工接头连接B.加同聚物尾连接C.互补黏端连接D.连接E.平移连接9、重组DNA的宿主细胞有原核细胞和真核细胞。
用于制备基因文库的宿主细胞主要是A.哺乳动物细胞B.大肠杆菌C.酵母D.枯草杆菌E.昆虫细胞10、哪种方法要求宿主细胞必须是感受态细胞？A.CaCl2法B.病毒感染法C.脂质体载体法D.显微注射法E.穿刺法11、蓝白筛选属于筛选重组DNA克隆方法的哪种？A.PCR分析B.插入失活分析C.核酸分子杂交分析D.酶切分析E.免疫分析12、重组DNA技术领域常用的质粒DNA是A. T病毒基因组DNA的一部分B. 细菌染色体外的独立遗传单位C. 细菌染色体DNA的一部分D. 真核细胞染色体外的独立遗传单位E. 真核细胞染色体DNA的一部分13、某限制性内切核酸酶切割5’…GGGGGG▼AATTCC…3’序列后产生A. 5’突出末端B. 5’或3’突出末端C. 5’及3’突出末端D. 3’突出末端E. 平末端14、“克隆”某一目的DNA的过程不包括A. 重组DNA分子导人受体细胞B. 外源基因与载体的拼接C. 基因载体的选择与构建D. 筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞E. 表达目的基因编码的蛋白质15、关于基因文库及其构建，以下叙述错误的是A.基因文库包括基因组文库和cDNA文库B.构建基因组文库常用的克隆载体是λ噬菌体、粘粒和酵母人工染色体系统C.目前构建的cDNA文库可以包含一种生物基因组所含的全部编码序列D.真核生物cDNA文库中的目的基因可以在原核细胞内表达活性产物E.构建cDNA文库要用到逆转录酶多选：1、用目的DNA和质粒制备重组DNA，下列哪些工具酶是必需的？A.DNA聚合酶B.核酸酶C.连接酶D.限制酶E.修饰酶2、影响限制酶切割效率的因素有那些？A.底物纯度B.底物甲基化程度C.底物结构D.反应温度E.反应体系组成3、哪些因素会降低限制酶的特异性?A.高浓度限制酶B.高浓度甘油C.低离子强度D.用Mn2+取代Mg2+E.高pH值4、限制酶的应用非常广泛，包括:A.DNA重组B.质粒改造C. DNA杂交D.探针制备E.基因定位5、关于重组DNA技术使用的DNA 连接酶A.用以将目的DNA与载体共价连接成重组DNAB.包括大肠杆菌DNA连接酶和T4 DNA连接酶C.大肠杆菌DNA连接酶需要NAD，而T4 DNA连接酶需要ATPD.大肠杆菌DNA连接酶用于连接切口或互补黏端E.T4 DNA连接酶用于连接互补黏端或平端6、重组DNA技术常用的DNA聚合酶有A.DNA聚合酶ⅠB. Klenow片段C. Taq DNA聚合酶D. 逆转录酶E. T4 DNA聚合酶7、载体分为克隆载体和表达载体两类。
重组DNA技术ppt课件
限制性核酸内切酶
切割DNA分子实 质是断开两个核 苷酸之间的磷酸 二酯键。
磷酸二酯键
DNA分子
限制酶的识别序列：
分类 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ （基因工程技术中常用Ⅱ型）
作用 与甲基化酶共同构成细菌的限制修
饰系统，限制外源DNA， 保护自身DNA。
Ⅱ类酶识别序列特点—— 回文结构(palindrome)
GGATCC CCTAGG
mRNA 反转录酶
cDNA 复制
双链cDNA 载体
重组DNA分子 受体菌cDNAAAAA逆转录酶AAAA TTTT
碱水解
TTTT
DNA聚合酶Ⅰ
SI核酸酶
目录
（二）克隆载体的选择和构建 （三）外源基因与载体的连接
目的基因
限制性内切酶
载体
限制性内切酶
重组体
T4 DNA连接酶 15ºC
载体自连
目的基因 自连
多肽链而特意设计的载体称为表达载体。
作为基因工程运载体的条件
①能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 ②具多种限制酶切点，以便与外源基因连接。 ③具有某些标记基因，便于进行筛选。 ④载体是安全的，不能对受体细胞有害。 ⑤载体DNA分子大小应合适，以便提取和在体外进行 操作。。
常用的载体：质粒
有标记基因的 存在，可用含 氨苄青霉素的 培养基鉴别
4. 聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)
组织或细胞染色体DNA 限制性内切酶
基因片断 克隆载体
重组DNA分子 受体菌
含重组分子的转化菌
* 从基因组DN带的所 有基因组DNA核苷酸序列不久即将完成。 但要揭示人类4万个基因功能的任务将更为艰巨。
人类基因组图谱的初步完成，不仅为全部基因 的定位建立了一个开放框架，而且为分离、鉴定人 类疾病相关基因提供了参照模板。
DNA重组技术ppt课件
用硅化处理的器皿进行酶切可以提高酶活 性；
酶切所用器皿和ddH2O要经过高温灭菌方可 使用；
ＤＮＡ样品应不含重金属离子
ＤＮＡ片段的胶回收
电泳洗脱法 低熔点琼脂糖凝胶电泳挖块法 冻融回收法 玻璃奶回收法 柱回收法（按说明书进行）
２．于４２℃水浴９０秒。
３．冰浴２分钟。
４．加入８００μl LB液体培养基 ３７℃４５分钟。
５．取２００μl涂布于含Amp(５０μg/ml)琼脂糖平皿， ３７℃培养１２～１６小时，观察结果。
注意事项
-80℃冰箱储存的感受态细胞在5-6周后，转 化率很低。可用一已知标准闭环质粒鉴定 感受态细胞的转化能力。
实验方法
ＤＮＡ分子的体外连接
１．在无菌Eppendorf管中加入以下溶液：
a. 0.1μg质粒载体，２倍分子的外源ＤＮＡ。
b. 加无菌水至7.5μl，于４５℃加温５分钟使重新
退火的粘端解链， 将混合物冷却到０℃。
c. 加入：
１０×Ｔ４ＤＮＡ连接酶buffer Ｔ４ＤＮＡ连接酶
1μl 0. 1μl
并确定并确定??此重组子可转入相应的宿主菌中用于对目的11dna分子的体外连接dna分子的体外连接??dna分子的体外连接就是在一定条件下dna分子的体外连接就是在一定条件下由dna连接酶催化两个双链dna片段由dna连接酶催化两个双链dna片段组邻的5组邻的5端磷酸与3端磷酸与3端羟基之间形成组邻的组邻的端磷酸与端磷酸与磷酸酸脂键的生物化学过程dna分子磷酸酸脂键的生物化学过程dna分子的连接是在酶切反应获得同种酶互补序列的连接是在酶切反应获得同种酶互补序列基础上进行的
高连接效率。
第八章基因重组与分子生物技术
基因工程 (genetic engineering）:
采用人工方法将不同来源的DNA进行重组，
并将重组后的DNA引入宿主细胞中进行增殖或
表达的过程。
第八章基因重组与分子生物技术
相关实验：
• 1964年Gurdon等进行的非洲爪蟾实验 • 1970年Steward等用悬浮培养的胡因重组与分子生物技术
3. 从 mRNA 合 成 cDNA
采用一定的方法钓 取特定基因的 mRNA ， 再 通 过 逆 转录酶催化合成其 互 补 DNA （ cDNA ） ， 除 去 RNA 链 后 ， 再 用 DNA 聚 合酶合 成其 互补 DNA 链，从而 得到双 链DNA 。这 一方法通常可得到 可表达的完整基因。
第八章基因重组与分子生物技术
质粒pUC19的分子结构
第八章基因重组与分子生物技术
2．噬菌体
可通过转染方式将其 DNA 送 入 细 菌 体 内 进 行 增殖。常用的为人工构建 的λ噬菌体载体。噬菌体 两端的片段对于其包装是 必需的，因而应予保留； 而其中间部分则可进行改 造或置换，使之具有某种 单一的限制酶切点。目的 基 因 与 噬 菌 体 DNA 进 行 重组时，可采用插入重组 方式，也可采用置换重组 方式。
聚合酶链反应（PCR）
连接两个DNA分子或片段
第八章基因重组与分子生物技术
（二）限制性核酸内切酶作用特点 ① 产生5’突出粘性末端 (cohesive end):
以EcoR I为例：
• 5’…G↓AATT C…3’ → 5’…G -pTTAAC…3’ • 3’…C TTAA↑G…5’ → 3 '…CTTAA p - OH G…5'
重组DNA技术讲解培训课件
15
（一）碱性磷酸酶能去除核酸分子末端的 磷酸基团
来自于大肠杆菌（bacterial alkaline phosphatase，BAP） 或小牛肠（calf intestinal alkaline phosphatase，CIP）。用于 脱去DNA（RNA）5′末端的磷酸基团，使5′ -P成为5′ -OH，该 过程称核酸分子的脱磷酸作用。
表达载体(expression vector) 为使插入的外源DNA序列可转录和翻译
PCR是一种高效快速的体外DNA聚合程序
重组DNA技术讲解
31
五、通过特异杂交系统获取某些转录因子的编码DNA
A. 无转录因子：报告基因不表达
报告基因
酵
“诱饵”DNA序列
母 B. 有转录因子：报告基因表达 .
单
转录因子
杂
交
系
报告基因
统 C. 有转录因子 AD/DNA结合蛋白－融合蛋白：报告基因表达
另外，Taq DNA聚合酶具有末端转移酶作用， 能在所合成DNA链的3′末端加上一个单独的腺苷酸 残基（A）。
重组DNA技术讲解
21
（七）多核苷酸激酶可使寡核苷酸链5´ 羟基末端磷酸化
常 用 的 是 T4 多 核 苷 酸 激 酶 （ T4 polynucleotide kinase），该酶含5′多核苷酸激酶 和3′磷酸酶活性，能催化ATP的γ-位磷酸向DNA 和RNA的5′-羟基转移。
转化细胞内 由克隆载体 所携带的所 有 cDNA 片 段的集合29从基因组DNA或cDNA中筛选 目的DNA的策略
（亲和筛选法）筛选
重组DNA技术讲解
30
四、经PCR获取目的DNA
如果已经知道目的基因的序列，就能很 方便地用PCR反应，从基因组DNA或cDNA中 获得目的基因，可不必要经过复杂的DNA文 库构建过程。
《重组DNA技术》课件
合成生物学
通过合成DNA来构建新的生物 系统。
个性化医疗
根据个体基因信息制定个性化 治疗方案。
1 优势
能够精确操纵DNA序列，有很大的应用潜力。
2 挑战
涉及伦理和法律问题，需要审Fra bibliotek使用和监管。重组DNA技术的伦理和法律问题
1 隐私与安全
个人基因信息的保护和使 用。
2 知识产权
重组DNA技术的专利保护 和共享。
3 道德问题
生命伦理和人类基因改造 的道德考量。
重组DNA技术的未来发展趋势
基因组编辑
重组DNA技术的原理和步骤
1
1. DNA剪切
使用限制性内切酶切割DNA分子，产生特定的DNA片段。
2
2. DNA连接
将不同来源的DNA片段连接起来，形成重组DNA。
3
3. DNA修饰
可以进行DNA序列的修饰，例如插入或删除特定DNA序列。
常见的重组DNA技术方法
PC R
聚合酶链反应，用于扩增 DNA序列。
《重组DNA技术》PPT课 件
DNA重组技术是通过将不同来源的DNA分子进行切割、连接和修饰的一项技 术。它在现代生物技术和分子生物学领域有着广泛的应用。
DNA重组技术的定义
1 基因重组
通过DNA重组技术，可以将不同的基因组合到一起，产生新的基因组。
2 DNA重组
DNA重组技术包括以特定方式剪切、连接和修饰DNA分子，以改变其序列和功能。
蛋白质表达系统
利用重组DNA技术制备大量 特定蛋白质。
基因编辑技术
例如CRISPR-Cas9，用于精 确编辑DNA序列。
重组DNA技术的应用领域
高考一轮生物复习课件DNA重组技术的基本工人教版
基因工程的基本操基因：利用DNA复制的原理在体外特 异性的复制某DNA片段以获得呈指数方式增加的目的基因。 (3)人工合成法：通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。 2.基因表达载体的构建 (1)基因表达载体组成： ①启动子、终止子：是基因转录的起点和终点，在转录过程中 起调控作用。
【解题指南】 1.知识储备： （1）重组质粒必须具备的条件。 （2）目的基因导入成功的标志。 2.解题关键： （1）明确每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点。 （2）由题干信息“成功表达腺苷酸脱氨酶”推出目的基因导入 成功，并能表达腺苷酸脱氨酶分子。
【解析】选C。ada为目的基因，大肠杆菌为受体细胞，将目的 基因导入大肠杆菌时如果能成功表达说明每个大肠杆菌细胞至 少含一个重组质粒；要让目的基因与质粒形成重组质粒，两者 必须用同种限制性核酸内切酶切割，所以每个重组质粒至少含 一个限制性核酸内切酶识别位点；质粒作为载体的条件之一是 有多种限制性核酸内切酶的识别位点，但每种限制性核酸内切 酶只有一个识别位点，只能插入一个目的基因（ada）；ada 导入大肠杆菌成功的标志是表达腺苷酸脱氨酶，因此每个插入 的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子。
【解析】选D。目的基因即我们所需要的基因，有的目的基 因的核苷酸序列是已知的，但许多目的基因的核苷酸序列是 未知的。接受外源基因的生物只是发生了基因重组，并未与 原物种产生生殖隔离，故并没有成为一个新物种。肝脏细胞 是高度分化的细胞，其核基因中的人胰岛素原基因不表达， 故不可能从人肝脏细胞中提取胰岛素原的mRNA；由于动物 体细胞的全能性不易表达，所以培育转基因动物时常选择受 精卵作为受体细胞。
5.(2011·海南高考)回答有关基因工程的问题： （1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后， 可能产生黏性末端，也可能产生______末端。若要在限制酶切割 目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生 ______（相同、不同）黏性末端的限制酶。
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分子生物学复习题第八章重组D N A技术第八章重组DNA技术一、选择单选1、下列哪项不属于生物工程？A. PCR技术B.重组DNA技术C.蛋白质工程D.酶工程E.细胞工程2、重组DNA技术中所用的限制酶是哪类？A.Ⅰ型限制酶B.Ⅱ型限制酶C.Ⅲ型限制酶D.Ⅳ型限制酶E.Ⅴ型限制酶3、可以利用蓝白筛选法筛选用pUC转化的重组DNA克隆，是因为pUC包含以下哪种元件？A.复制起点B. amp RC.acZ'D.多克隆位点MCSE.调节基因lacI4、关于λ噬菌体，以下叙述错误的是A.基因组DNA的部分序列并非溶原性生长所必需B.基因组DNA感染大肠杆菌后形成闭环结构C.在溶原性生长时进行滚环复制D.复制时形成多联体结构E.其转化的细菌经过培养形成噬菌斑5、pBR322质粒包含两个抗性基因：氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，据此可以利用哪种方法筛选重组DNA克隆？A.α互补B. PCRC.插入失活D.核酸分子杂交E.蓝白筛选6、制备重组DNA首先要制备目的DNA，要保证目的DNA的量和纯度能满足重组要求。
常用的制备方法不包括A.PCR扩增B.从组织细胞分离基因组DNAC.化学合成D.逆转录合成cDNAE.限制酶截取7、第一种应用于临床的重组蛋白是A.基因工程疫苗B.基因工程抗体C.激素D. 生长因子E.细胞因子8、在重组DNA技术中，目的DNA与载体在体外连接的过程称为DNA的体外重组。
体外重组的方法不包括：A.加人工接头连接B.加同聚物尾连接C.互补黏端连接D.连接E.平移连接9、重组DNA的宿主细胞有原核细胞和真核细胞。
用于制备基因文库的宿主细胞主要是A.哺乳动物细胞B.大肠杆菌C.酵母D.枯草杆菌E.昆虫细胞10、哪种方法要求宿主细胞必须是感受态细胞？法 B.病毒感染法 C.脂质体载体法 D.显微注射法A.CaCl2E.穿刺法11、蓝白筛选属于筛选重组DNA克隆方法的哪种？A.PCR分析B.插入失活分析C.核酸分子杂交分析D.酶切分析E.免疫分析12、重组DNA技术领域常用的质粒DNA是A. T病毒基因组DNA的一部分B. 细菌染色体外的独立遗传单位C. 细菌染色体DNA的一部分D. 真核细胞染色体外的独立遗传单位E. 真核细胞染色体DNA的一部分13、某限制性内切核酸酶切割5’…GGGGGG▼AATTCC…3’序列后产生A. 5’突出末端B. 5’或3’突出末端C. 5’及3’突出末端D. 3’突出末端E. 平末端14、“克隆”某一目的DNA的过程不包括A. 重组DNA分子导人受体细胞B. 外源基因与载体的拼接C. 基因载体的选择与构建D. 筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞E. 表达目的基因编码的蛋白质15、关于基因文库及其构建，以下叙述错误的是A.基因文库包括基因组文库和cDNA文库B.构建基因组文库常用的克隆载体是λ噬菌体、粘粒和酵母人工染色体系统C.目前构建的cDNA文库可以包含一种生物基因组所含的全部编码序列D.真核生物cDNA文库中的目的基因可以在原核细胞内表达活性产物E.构建cDNA文库要用到逆转录酶多选：1、用目的DNA和质粒制备重组DNA，下列哪些工具酶是必需的？A.DNA聚合酶B.核酸酶C.连接酶D.限制酶E.修饰酶2、影响限制酶切割效率的因素有那些？A.底物纯度B.底物甲基化程度C.底物结构D.反应温度E.反应体系组成3、哪些因素会降低限制酶的特异性?A.高浓度限制酶B.高浓度甘油C.低离子强度D.用Mn2+取代Mg2+E.高pH值4、限制酶的应用非常广泛，包括:A.DNA重组B.质粒改造C. DNA杂交D.探针制备E.基因定位5、关于重组DNA技术使用的DNA 连接酶A.用以将目的DNA与载体共价连接成重组DNAB.包括大肠杆菌DNA连接酶和T4 DNA连接酶C.大肠杆菌DNA连接酶需要NAD，而T4 DNA连接酶需要ATPD.大肠杆菌DNA连接酶用于连接切口或互补黏端E.T4 DNA连接酶用于连接互补黏端或平端6、重组DNA技术常用的DNA聚合酶有A.DNA聚合酶ⅠB. Klenow片段C. Taq DNA聚合酶D. 逆转录酶E. T4 DNA聚合酶7、载体分为克隆载体和表达载体两类。
克隆载体含有以下基本元件A.复制起点B.克隆位点C.选择标记D.启动子E.核糖体结合位点8、表达载体的哪些元件是克隆载体不需要的？A.复制起点B.克隆位点C.选择标记D.启动子E.核糖体结合位点9、原核细胞表达载体的表达元件有A.核糖体结合位点B.加尾信号C.启动子D.增强子E.转录终止信号10、真核细胞表达载体的哪些表达元件是原核表达载体没有的A.核糖体结合位点B.加尾信号C.启动子D.增强子E.转录终止信号11、以下哪些是真核载体？A.质粒B.噬菌体C.酵母人工染色体D.逆转录病毒E.腺病毒12、以下哪些DNA分子可以通过化学合成法制备？A.CdnaB. PCR引物C.寡核苷酸探针D.较小的基因E.人工接头13、将外源DNA导入原核细胞，常用A.CaCl法 B.电穿孔法 C.病毒感染法 D.脂质体载体法 E.显2微注射法14、以下哪些是真核生物基因在原核细胞内表达存在的问题？A.真核生物基因的启动子不能被原核生物的RNA聚合酶识别B.真核生物基因含有内含子，原核细胞没有相应的剪接系统C.真核生物mRNA翻译起始位点不能被原核生物核糖体识别D.真核生物基因的表达产物往往需要后加工，原核细胞没有相应的加工系统E.真核生物基因表达的蛋白质容易被原核细胞的蛋白酶降解。
15、基因工程药物包括A.激素B.细胞因子C.生长因子D.基因工程疫苗E.基因工程抗体二、填空1.DNA克隆是从染色体中分离特定DNA片段，与一个DNA载体连接成，将其导入宿主细胞进行复制，并随细胞分裂而扩增，最终得到该特定DNA片段的。
2.重组DNA技术的核心内容之一是DNA重组，即将与连接成重组DNA。
3.限制酶是一种内切核酸酶，由细菌产生，能识别双链DNA的位点，并水解该位点内部或附近的键。
4.DNA重组需要连接酶，常用的DNA连接酶包括 DNA连接酶和DNA连接酶。
5.载体的化学本质是DNA。
载体不但能与重组，能导入，还能利用自身的调控系统，使目的DNA在宿主细胞内复制或表达。
6.载体分为载体和载体两类。
7.克隆载体含有以下基本元件：复制起点、和。
8.常用的载体有以原核细胞为宿主的载体和噬菌体载体，以真核细胞为宿主的载体。
9.质粒是游离于之外、能的闭环双链DNA，根据与宿主的相互关系分为寄生型质粒和共生型质粒。
10.pBR322质粒包含两个抗性基因：抗性基因和抗性基因。
11.λ噬菌体感染细菌后可以进行生长和生长。
12.λ噬菌体的DNA为线性双链分子，在分子两端各有12nt的，是天然黏端，称为位点。
13.制备目的DNA就是要保证目的DNA的量和纯度能满足重组要求。
常用的制备方法有分离纯化、、和化学合成。
14.化学合成法主要用于合成、、人工接头和较小的基因。
15.在重组DNA技术中，与载体在体外连接的过程称为DNA的体外重组。
体外重组的产物称为。
16.体外连接的方法有平端连接、端连接、加同聚物尾连接、连接。
17.外源DNA导入宿主细胞，使其获得新的遗传表型，称为；其中通过噬菌体或病毒完成的转化称为转导或，外源DNA转化培养的真核细胞称为转染。
18.将外源DNA导入原核细胞，常用法、法和病毒感染法。
溶液中，并置于低温（0～5℃）环境下19.将大肠杆菌悬浮在CaCl2一段时间，Ca2+使的结构发生变化，增加，外源DNA可以进入，这种细胞称为感受态细胞。
20.许多载体的选择标记内都有，插入目的DNA将导致该选择标记失活，称为。
21.与克隆载体相比，表达载体应具备表达元件，主要包括、和转录终止信号等。
22.基因文库是已经阐明的各物种基因的总称，包括文库和文库。
23.基因组文库是应用重组DNA技术构建的一个，它包含了一种生物的全部DNA序列。
三、解释1.重组DNA技术2.克隆3.DNA克隆4.宿主细胞5.限制酶6.载体7.克隆载体8.表达载体9.DNA重组10.转化11.感染12.转染13.感受态细胞14.基因组文库15.cDNA文库四、问答1、DNA克隆的基本步骤2、简述克隆载体及其基本元件3、简述表达载体及其基本元件4、简述pBR322质粒载体及其基本元件5、简述pUC质粒载体及其基本元件6、将外源DNA导入原核细胞的常用方法7、真核生物基因在原核细胞内表达存在那些问题8、用原核细胞表达真核生物基因应注意什么9、与基因组基因及基因组文库相比，cDNA和cDNA文库的优势答案单选1A 2B 3C 4C 5C 6E 7C 8E 9B10A 11B 12B 13E 14E 15C多选：1CDE 2ABCDE 3ABCDE 4ABCDE 5ABCDE 6ABCDE 7ABC 8DE 9ACE 10BD 11CDE 12BCDE 13ABC 14ABCDE 15ABCDE。