《兽医免疫学》实验课件：实验二 沉淀反应

阴性：受检孔与中央孔之间无沉淀线。
作业：
完成实验报告，画出你所观察到的 沉淀线，并对其进行简要说明。
一、环状沉淀反应
2．炭疽标准抗原 3、炭疽阴性抗原（健康组织浸出液） 4．阳性、阴性炭疽沉淀素血清 5．毛细吸管
沉淀反应管（Φ 0.3-0.4cm ）
一、环状沉淀反应
用毛细吸管吸取炭疽沉淀
素，插入沉淀反应管底部， 设
实 验
缓慢注入到距管底的1/3 处。
阳 性 、
步 骤
阴
min
用另一支毛细吸管吸取被检 材料，插入离沉淀管底近1/3 处，沿管壁缓慢加入到沉淀 素的上面，边注边提使达到
Ag
生理
?
盐水
Ab
带现象（zone phenomenon）
一种抗原-抗体反应的现象。在凝集反应或沉淀 反应中，由于抗体过剩或抗原过剩，抗原与抗 体结合但不能形成大的复合物，从而不出现肉 眼可见的反应现象。
抗体过剩：前带现象；
抗原过剩：后带现象。
二、双向琼脂扩散试验
结果判断：
阳性：标准对照孔之间有明显的沉淀线时， 受检孔与中央孔之间形成沉淀线并与 阳性对照沉淀线融合。
实验二 沉淀反应
一、环状沉淀反应 二、双向琼脂扩散试验
一、环状沉淀反应
目的：以炭疽环状沉淀反应为例，掌握 沉淀反应原理、操作方法及结果 的判定方法。
原理：将可溶性抗原层积于抗体之上，如 果二者相应，则可在抗原、抗体两 液接触界面形成白色的沉淀环。
一、环状沉淀反应
实验材料：
1．被检抗原（沉淀原）的制备： （1）热浸法 取可疑材料约1克，研碎，加入510mL生理盐水混合，转至试管内，煮沸30min，取出 冷却，用滤纸过滤，滤液即为被检的沉淀原。 （2）冷浸法 取疑为炭疽的皮革和兽毛，高压灭 菌后，取1cm2或兽毛数克浸于5-10倍的0.5%石炭酸生 理盐水中，4℃浸渍18-24小时，同上法过滤。
原理：
可溶性Ag与Ab在含有电解质的半固体（1%）琼 脂内进行自由扩散，当两者由高浓度向低浓度扩散相 遇时，如果二者相对应而且比例适当，则可在相遇处 形成白色的沉淀线，为阳性反应。另外，沉淀带对于 组成它的Ag、Ab具有特异地不可透过性，而对其它 的Ag与Ab是可透过的，所以一条沉淀带仅代表一种 AgAb系统的沉淀物。
性 对 照
静 置 5 － 10
结 果 观 察
2/3高度处即可。
一、环状沉淀反应
试验组
阳性对照组 阴性对照组
一、环状沉淀反应
结果判定：
两液面交界处出现清晰、致密 如线的白轮，是炭疽阳性。 无此现象为炭疽阴性。
二、双向琼脂扩散试验
目的：掌握双向琼脂扩散试验的原理、
操作方法及结果判定方法。
二、双向琼脂扩散试验
B
B
A
A抗体中针对B抗原 的抗体可以 跨越透过C抗原
B
C
A
二、双向琼脂扩散试验
实验材料：
1、鸡传染性法氏囊病毒标准抗原； 2、鸡传染性法氏囊病毒标准阳性血清； 3、待检血清：来自受检鸡的新鲜血清； 4、平皿（Φ6cm）、打孔器、微量加样器等；
二、双wenku.baidu.com琼脂扩散试验
5、琼脂凝胶板： 将琼脂糖1.0克、NaCl 8.0克、蒸馏水100ml装
入三角烧瓶，煮沸，然后用吸管吸取7ml加入平皿 内（勿有气泡）使成约3mm厚的凝胶，待冷却凝 固后按如下图方式打孔。 注意:孔间距为孔的直径大小,打孔完毕要封底）
二、双向琼脂扩散试验
实验步骤：
中间孔加标准抗原， 外周孔加被检血清及阳性 血清（如要测被检血清的 效价，外周孔可倍比稀释 后依次加入）。加样后盖 上皿盖，37℃扩散24小时， 观察结果。