薄层色谱法实践技巧
薄层色谱经验总结
关于配制CMC-Na:1.先将称好的CMC加入所需水量的8/10,让其充分溶涨后,在加热煮沸,然后将剩余水慢慢加入.这样在煮沸过程中不易形成颗粒,煮沸时间短.2.CMC溶液的浓度0.3-0.7%比较合适,实际操作中0.4%~0.5%最为实用,浓度高了将来显色时如果有加热过程稍不小心板子容易发黑,浓度低了铺出来的板子不结实,轻轻一碰就掉渣,不好保存,而且点样时会很紧张,容易出洞.3.0.5%CMC-Na与水浴溶涨至充分搅拌溶涨,如果不好溶涨,可在溶胀前加几滴乙醇,比较好溶,但是尽量不加,因为加入乙醇后使CMC-Na的粘合性降低。
充分溶胀后,用脱脂棉垫到布氏漏斗上抽滤。
封口冷藏待用。
4.(1)CMC-Na溶液煮了以后不能再用冷水兑,否则,几天以后就会变绿,起霉。
注意放置时间太长的CMC-Na溶液可能会发黄,而且可能有霉菌出现,绝对不能再使用。
(2)如果有抽滤装置你可以直接把CMC-Na溶液滤过,就可以不必等它沉淀再取上清液了(嘿嘿,我是急性子),还有两个好处一是节省CMC-Na溶液,二是倒滤过的CMC-Na溶液的时候不必担心会把下层的不溶物倒出来了!)有个办法过滤CMC溶液,在布氏漏斗上平铺薄薄一层脱脂棉,千万保证每个小孔都没漏掉哦!用蒸馏水润湿脱脂棉,启动真空泵,抽紧后就可以放心大胆的倒CMC溶液了,保证滤过的溶液澄清透明,而且长时间放置不沉淀。
5.CMC-Na是一种高分子材料,而高分子材料的溶解必然都会有一个溶胀,溶解的过程,所以配制的时候,应该将称好的CMC-Na少量的撒在水的表面,让其自然沉降,注意要散开平铺,这样能够充分浸润,使其溶胀,之后可以置于水浴锅内加热溶解,当然如果你不是很急着用的话也完全可以,直接用水泡着放那,估计十天半月的也可以用了.6..CMC-Na的配制,大家也说了很多,我只是想说一下在CMC-Na的溶解过程中,可以使用可进行加热操作的磁力搅拌器,大概搅拌5小时,应该可得到满意的效果。
薄层色谱法实践技巧大总结
薄层色谱法实践技巧大总结薄层色谱法(TLC)是一种快速、简便、灵敏的分离和分析方法,在化学、药学、生物学等领域得到了广泛的应用。
然而,要想获得准确、可靠的实验结果,掌握一些实践技巧是非常必要的。
接下来,就为大家详细总结一下薄层色谱法的实践技巧。
一、实验准备1、选择合适的吸附剂常用的吸附剂有硅胶、氧化铝等。
硅胶适用于大多数有机化合物的分离,氧化铝则对某些极性较大的化合物有较好的分离效果。
在选择吸附剂时,要根据样品的性质和分离目的来确定。
2、制备薄板可以购买商品化的预制薄板,也可以自己制备。
自制薄板时,将吸附剂与适量的黏合剂(如羧甲基纤维素钠水溶液)混合均匀,调成糊状,均匀地涂布在玻璃板上,然后在室温下晾干,活化备用。
3、选择展开剂展开剂的选择是影响分离效果的关键因素之一。
一般根据“相似相溶”的原则,先尝试单一溶剂,如石油醚、乙酸乙酯、甲醇等,如果分离效果不理想,再考虑混合溶剂。
可以通过查阅相关文献或进行预实验来确定合适的展开剂。
4、样品的制备样品要尽可能纯净,溶解在适当的溶剂中,浓度不宜过高,以免出现斑点拖尾现象。
二、点样技巧1、点样量点样量要适中,过多会导致斑点扩散、重叠,过少则可能检测不到。
通常,点样量在 1-10μL 之间。
2、点样方式可以使用微量注射器、毛细管或点样器进行点样。
点样时,要保持点样点的直径小于 5mm,且尽量集中,以保证分离效果。
3、点样位置点样位置距离薄板底边 15-2cm 为宜,点与点之间的距离要适中,一般不少于 1cm,以避免斑点之间相互干扰。
三、展开技巧1、展开缸的准备展开缸要预先饱和,即将展开剂倒入展开缸中,盖上盖子,让缸内的气氛达到饱和状态。
这样可以减少边缘效应,提高分离效果。
2、展开方式可以采用上行展开、下行展开或水平展开等方式。
上行展开是最常用的方式,展开速度适中,分离效果较好。
3、展开距离展开距离一般为薄板长度的 3/4 左右,不宜过长或过短。
过长会导致斑点扩散,过短则可能分离不完全。
【最新】薄层色谱法操作注意事项
薄层色谱法操作注意事项
薄层色谱法是一种常用的分离和检测技术,以下是一些操作注意事项:
1 .选择合适的色谱板:根据需要选择合适的色谱板,如硅胶板、氟化纤维素板等。
不同的样品需要不同的色谱板来实现良好的分离效果。
2 .准备色谱层:将色谱板放在合适的托盘上,均匀地涂抹上薄层色谱剂。
涂层应该均匀、细致,避免出现孔隙和不均匀的现象。
3 .样品处理:样品中的杂质和溶剂可能影响色谱的分离结果,因此在样品处理前,需要根据需要进行前处理,如稀释、过滤等。
4 .样品施加:将经过前处理的样品加到色谱层上,可以使用毛细管或者微量移液器进行施加,避免过量的样品施加。
5 .吸附和分离:将施加样品的色谱板放入合适的溶剂系统中,让溶剂自己上升或者使用上下法进行分离。
注意,溶剂上升的速度要适中,避免迅速上升导致分离不完整。
6 .显色和检测:将分离好的色谱板放在适当的显色剂中,让目标物质显色。
可以使用紫外灯、红外线检测器或者目视观察等方法进行检测。
7 .记录结果和分析:根据实验结果,记录分离和检测的结果,并进行分析解读。
注意,结果必须要有明确的标识和记录,以便于后续的分析和比较。
这些是薄层色谱法操作时需要注意的一些主要事项。
具体操作时还需根据实验要求和仪器设备进行相应的调整和操作。
薄层色谱分析步骤及注意事项
薄层色谱分析步调及注意事项之青柳念文创作薄层色谱法(thin layer chromatography简写TLC)是物理化学的分离技术,常常使用于药物的分离与分析现对此方法的分析步调及注意事项提点建议.薄层色谱分析步调完成TLC分析通常需经制板、点样、展开、检出4步操纵.⑴制板在一平面支持物(通常玻璃)上,平均地涂制硅胶、氧化铝或其他吸附剂薄层、样品的分离、检测就在此薄层色谱板上停止.一般选用适当规格的概况光滑平整的玻璃板.常常使用的薄层板规格有:10cm×20cm、5cm×20cm、20cm×20 cm等.称取适量硅胶,加入0.2%~0.5%羧甲基纤维素钠溶液(CMC-Na),充分搅拌平均,停止制板.一般来讲10cm×20cm的玻璃板,3~5g硅胶/块;硅胶与羧甲基纤维素钠的比例一般为1:2~1:4.制好的玻璃板放于水平台上,注意防尘.在空气中自然干燥后,置1l0℃烘箱中烘0.5~lh,取出,放凉,并将其放于紫外光灯(254nm)下检视,薄层板应无花斑、水印,方可备用.⑵点样用微量进样器停止点样.点样,先用铅笔在层析上距结尾lcm 处轻轻画一横线,然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样,如果要重新点样,一定要等前一次点样残存的溶剂挥发后再点样,以免点样黑点过.一般黑点直径大于2mm,不宜超出5mm.底线距基线1~2.5cm,点间间隔为lcm左右,样点与玻璃边沿间隔至少lcm,为防止边沿效应,可将薄层板双方刮去1~2cm,再停止点样.⑶展开将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中,由于毛细管作用,展开溶剂在薄层板上缓慢前进,前进至一定间隔后,取出薄层板,样品组分固移动速度分歧而彼此分离.①展开室应预饱和.为达到饱和效果,可在室中加入足够量的展开剂;或者在壁上贴两条与室一样高、宽的滤纸条,一端浸入展开剂中,密封室顶的盖.②展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂,而且临用时新配为宜.③薄层板点样后,应待溶剂挥发完,再放人展开室中展开.④展开应密闭,展距一般为8~15cm.薄层板放入展开室时,展开剂不克不及没过样点.一般情况下,展开剂浸入薄层下端的高度不宜超出0.5cm.⑤展开剂每次展开后,都需要换,不克不及重复使用.⑥展开后的薄层板用适当的方法,使溶剂挥发完全,然后停止检视.⑦ Rf值一般节制在0.3~0.8,当Rf值很大或很小时,应适当改变活动相的比例.⑷黑点的检出展开后的薄层板颠末干燥后,常常使用紫外光灯照射或用显色剂显色检出黑点.对于无色组分,在用显色剂时,显色剂喷洒要平均,量要适度.紫外光灯的功率越大,暗室越暗,检出效果就越好.展开分离后,化合物在薄层板上的位置用比移值(Rf值)来暗示.化合物黑点中心至原点的间隔与溶剂前沿至原点的间隔的比值就是该化合物的Rf值.注意事项铺板用的匀浆不宜过稠或过稀:过稠,板容易出现拖动或停顿造成的层纹;过稀,水蒸发后,板概况较粗糙匀浆配比般是硅胶G:水=1:2~3,硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2.研磨匀浆的时间,根据经历来定,与空气湿度有关,一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来断定,越稠越难下滴.匀浆的稀稠除影响板的平滑外,也影响板涂层的厚度,进一步影响上样量.涂层薄,点样易过载;涂层厚,显色不那末分明.通常,板的质量对薄层鉴此外影响不是很,影响最大的是展开剂的配制和展开系统的饱和.点样尽可能用小的点样管.如果有足够的耐性,最好只用1微升的点样管.样,点的黑点较小,展开的色谱图分离度好,颜色分明.样品溶液的含水量越小越好,样品溶液含水量大,点样黑点分散大.样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯.点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干.展开剂配制选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗,强烈振摇使混合液充分混匀,放置,如果分层,取用体积大的一层作展开剂.相对不该该把各组成溶液倒入展开缸,振摇展开缸来配制展开剂.混合不平均和没有分液的展开剂,会造成层析的完全失败.各组成溶剂的比例准确度对分歧的分析任务有分歧的要求,尽可能达到实验室仪器的最高切确度,比方:取1ml的溶剂,应使用1ml的单标移液管,移液管应符合计量认证要求,虽然时候这不是必须的.展开系统的饱和一般使用的是双槽的展开缸,一槽用来放展开剂,另外一槽可加入氨水或硫酸.把待展开的板放入两槽间的平台,斜架着,盖上展开缸的盖子.让展开剂的蒸气充满展开缸,并使薄层板吸附蒸气达到饱和,防止边沿效应,饱和时间在半小时左右.展开时不免要打开盖子把薄层板放入展开剂中,不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大,当然动作应该尽可能轻、快.温湿度的节制温湿度对薄层影响都很大.不冻结的提下,通常温度越低分离越好,较难的分离需在低温下分离,例如人参皂苷.湿度的影响,估计主要是影响薄层板的吸附才能,导致选择性(容量因子)的变更,湿度应根据实际情况确定.温度节制使用空调器或冰柜,湿度节制是通过在另外一展开槽放置相应浓度的硫酸.显色喷显色剂显色最重要是有好的雾化器.。
薄层色谱操作
薄层色谱操作
薄层色谱是一种在实验室中广泛应用的色谱技术。
它可以用于化合物的分离和纯化。
以下是薄层色谱的操作步骤和注意事项:
操作步骤:
1. 准备样品和薄层色谱板。
将样品溶解在合适的溶剂中, 然后在薄层色谱板上刷上一条样品线。
2. 将薄层色谱板放入色谱槽中, 槽中可以加入一定的溶剂, 使其与样品线平齐。
等到溶剂逐渐向上爬升并到达一定高度时, 停止操作。
3. 取出薄层色谱板, 然后标记各化合物的RF值。
4. 如果需要, 可以使用紫外光或其他检测方法进行分析验证。
注意事项:
1. 选用合适的薄层色谱板和溶剂。
不同的化合物需要使用不同的薄层色谱板和溶剂。
选择错误的材料可能会导致不准确的结果。
2. 操作时应避免色谱板上有空气泡。
空气泡可能会对结果产生误差。
3. 薄层色谱板应在封闭的环境下储存。
开盖情况下储存的薄层色谱板
可能会受到空气中湿度和灰尘的影响, 从而影响测试结果。
4. 建议使用培养皿盖板盖住色谱槽。
这可以减少溶剂挥发, 从而提高色谱板的稳定性。
总之, 在进行薄层色谱操作时, 应严格按照操作步骤并遵守注意事项。
这将有助于获得准确和可重复的结果。
薄层色谱法注意事项
薄层色谱法注意事项薄层色谱法是一种常用的化学分析技术,用于分离、鉴定和定量分析化合物。
在进行薄层色谱实验时,需要注意以下几点:1. 实验前准备:在进行薄层色谱实验之前,应先准备好所需的试剂、溶剂、色谱板和开发室等实验器材。
同时,要确保色谱板的纯净度和质量良好,避免板上有杂质或损坏。
2. 样品的处理:样品在进行薄层色谱之前需要进行合适的处理,如提取、纯化等操作。
样品的处理要严格控制条件,避免产生不必要的干扰物。
3. 色层施加:色层施加是薄层色谱实验的关键步骤,要注意施加的均匀性和厚度的控制。
色层应均匀地覆盖在色谱板上,厚度一般为0.1-0.3毫米。
施加色层时要避免过程中的振荡或晃动,以确保色层的平整度。
4. 试剂的选择:在进行薄层色谱实验时,要根据不同的分析目的选择适当的试剂和溶剂。
试剂和溶剂的选择要有一定的理论基础,避免对被测物质产生干扰或损坏。
5. 开发条件的控制:开发是薄层色谱的重要步骤,要控制好开发室的湿度和温度。
湿度和温度的变化会影响色层的分离效果,因此要保持开发室的相对稳定。
6. 结果的解读:薄层色谱实验得到的结果需要进行正确的解读和分析。
需要注意结合实验数据和色谱数据来对结果进行推断和判断,避免因误解结果而导致错误的结论。
7. 安全操作:在进行薄层色谱实验时,要注意安全操作,避免接触有毒、易燃、腐蚀性的物质。
实验时要佩戴适当的防护装备,如实验手套、护目镜等。
总之,薄层色谱法是一种常用的化学分析技术,能够在短时间内对混合物进行分离和鉴定。
在进行实验时,注意以上几点,可以保证实验结果的准确性和可靠性。
薄层色谱的操作方法
薄层色谱的操作方法薄层色谱(Thin-Layer Chromatography,TLC)是一种常用的色谱技术,用于分离和分析混合物中的化合物。
以下是薄层色谱的基本操作方法:1. 准备薄层色谱板:选择合适的薄层色谱板,通常是由玻璃、铝箔或塑料片涂覆一层吸附性物质(如硅胶或氧化铝)制成。
根据需要,可以选择不同类型和厚度的色谱板。
2. 准备样品和标准溶液:准备待测样品和相应的标准溶液。
将它们溶解在适当的溶剂中,以得到均匀的溶液。
通常使用无色的溶剂,如氯仿、甲醇或丙酮等。
3. 准备开发槽:选择一个适当大小的玻璃槽或容器,添加足够的色谱溶剂,使其深度约为1-2厘米。
常用的色谱溶剂包括正己烷、乙酸乙酯和甲苯等。
4. 应用样品:使用微量注射器或吸管,在色谱板的一端(通常是底端)上沿直线或点状均匀地涂抹样品溶液。
注意,样品斑点的大小和浓度应适度,以避免过度扩散和重叠。
5. 进行开发:将涂有样品的色谱板垂直放入装有色谱溶剂的开发槽中,确保样品斑点不接触溶剂。
盖上盖子,使色谱槽密封。
色谱溶剂会在色谱板上升,沿着样品斑点上的吸附物向上运移。
6. 干燥和可视化:当溶剂前进到色谱板的一端时,取出色谱板,并迅速将其放在通风处晾干。
然后,根据所需的可视化方法,使用适当的染色剂、紫外线灯或热激发等技术,对色谱板上的斑点进行可视化。
7. 测量和解释:测量每个化合物斑点的迁移距离,并计算相对迁移率(Rf 值)。
Rf 值是化合物前进距离与溶剂前进距离之比,可用于标识和解释化合物。
薄层色谱操作的关键在于控制涂样、开发溶剂、色谱板和环境的条件,以获得准确、可重复和可靠的分离和分析结果。
根据需要,可以采用不同的变体和改进技术来适应特定的分离目标和样品特性。
实验三薄层色谱法
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1.1 概念:
薄层色谱法通常是指以吸附剂为固定相,将供试品溶液点在薄层 板上,在展开容器内用展开剂展开,使供试品所含成分分离,所得色 谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比,并可用薄层扫描仪进 行扫描,用于中药的鉴别、检查或含量测定的分析方法。由于吸附剂 对不同成分的吸附能力不同(或不同成分在固定相和移动相中的分配 系数不同),在板上的移动速度不同,因而可以分离。
三.操作步骤 供试液制备 取本品粉末0.1 g,加甲醇20ml浸渍1小时,滤过,取 滤液5 ml.蒸干,加水1Oml使溶解,再加盐酸l ml。 置水浴上加热30分钟,立即冷却,用乙醚提取两 次.每次 20ml.合并乙醚液,蒸干,残渣加氯仿溶 解,使成l ml,作为供试品溶液。
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对照液制备 取大黄对照药材0.lg,同法制成对照药材溶液;另取大黄酸对照品 ,加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液,作为对照品溶液。 薄 层 板:硅胶G板 点 样:供试液与对照药材溶液及对照品溶液分别点样4 ul
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试验方案格式 1.试验操作详细步骤 2.预期结果 3.参考文献
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大黄薄层色谱鉴别
一. 试验目的 为了建立大黄的质量标准检测,以及学习中药薄层
鉴别方法。 二. 试验器材 三角瓶2个、1mL移液管2只、10mL和5mL移液管各1 只、分液漏斗2只、小烧杯4只。
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如果参照别人的方法进行试验不行,我们就考虑换 展开剂,或者找不同的方法进行实验。
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4. 注意事项及影响TLC的因素
4.1 注意事项
4.1.1 边缘效应
增加展开缸中展开剂蒸气的饱和度;选用适宜的单一展开剂代 替混合展开剂;在薄层板两边个刮去约5mm的吸附剂。
薄层色谱法分析实验报告
薄层色谱法分析实验报告一、实验目的1、掌握薄层色谱法的基本原理和操作方法。
2、学会使用薄层色谱法分离和鉴定混合物中的成分。
3、熟悉薄层色谱法在有机化学中的应用。
二、实验原理薄层色谱法(Thin Layer Chromatography,TLC)是一种快速、简便、灵敏的分离和分析方法。
它基于混合物中各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同,从而实现分离。
在薄层色谱中,固定相通常是涂在玻璃板或塑料板上的吸附剂,如硅胶、氧化铝等。
流动相则是一种挥发性的有机溶剂或其混合物。
当样品溶液点在薄板的一端,并将薄板放入装有流动相的层析缸中时,流动相通过毛细作用沿薄板上升,样品中的各组分在固定相和流动相之间不断进行吸附、解吸、再吸附、再解吸的过程,使得不同组分在薄板上移动的速度不同,从而达到分离的目的。
分离后的组分可以通过显色剂显色,或者在紫外灯下观察荧光,从而实现定性和定量分析。
三、实验仪器与试剂1、仪器薄层板:硅胶 G 板层析缸点样毛细管紫外灯喷雾器烘箱2、试剂展开剂:正己烷乙酸乙酯(体积比 7 : 3)显色剂:碘蒸气样品:混合有机化合物(如苯甲酸、苯甲醛、苯胺)四、实验步骤1、制板取适量硅胶 G 粉,加入适量蒸馏水,搅拌均匀成糊状。
将糊状硅胶均匀涂布在玻璃板上,厚度约为 025 05 mm。
水平放置,自然晾干后,在 110℃烘箱中活化 30 分钟,取出,置于干燥器中备用。
2、点样用毛细管吸取样品溶液,在距薄板底边 15 2 cm 处,轻轻接触薄板,形成直径约 2 3 mm 的样点。
每个样点之间相距 1 15 cm。
3、展开将适量展开剂倒入层析缸中,高度约为 05 1 cm。
将点样后的薄板放入层析缸中,密封,使展开剂的液面低于样点。
待展开剂上升至距薄板顶端 1 2 cm 时,取出薄板,晾干。
4、显色将晾干后的薄板放入盛有碘蒸气的容器中,进行显色。
或者在紫外灯下观察荧光。
5、计算比移值(Rf 值)测量原点至样点中心的距离(a)和原点至展开剂前沿的距离(b)。
仪器分析实验薄层色谱
仪器分析实验薄层色谱仪器分析实验薄层色谱是一种常用的分离和鉴定物质的方法。
薄层色谱是一种在平面上进行的色谱技术,它主要依靠样品组分的吸附、分配和迁移现象来实现物质的分离和分析。
以下是对仪器分析实验薄层色谱进行详细介绍的文章。
薄层色谱是一种简单、快速、灵敏且易于操作的物质分离和鉴定方法。
其原理是利用固定在薄层支持剂上的吸附剂对物质进行分离,通过比较样品与标准物质的色谱行为来进行鉴定。
薄层色谱实验的基本步骤如下:1.准备薄层板:薄层板通常由玻璃或铝质材料制成,其表面涂覆有吸附剂(常见的有硅胶、藤黄果酸等)。
准备薄层板时,首先需使用刮刀将吸附剂涂抹在板面上,待其干燥后即可使用。
2.准备样品:样品可以是单一化合物或混合物,根据待测物质的性质选择适当的分离方式。
对于固态样品,通常需先进行溶解、萃取等预处理。
3.样品上样:将准备好的样品点滴于薄层板上,一般可使用微量移液管逐点滴于吸附剂上。
注意,每次滴液的量应尽量相同,以保证结果的可比性。
4.色谱开展:将装有样品的薄层板放置于色谱槽中,加入溶剂并封闭。
溶剂的选择应根据待测物质的极性特征进行,一般常用的有甲醇、二氯甲烷等。
溶剂的极性需根据样品的极性进行调整。
5.迁移与可视化:将色谱槽置于恒温槽内,通过升温、降温或恒温的方式进行迁移。
当样品迁移至一定距离后,取出薄层板并进行可视化。
常用的可视化方法有紫外灯照射、碘蒸气显色法等。
6.数据分析:根据样品与标准物质的色谱行为进行对比,进一步进行鉴定和分析。
可以通过Rf值计算、色谱图形态分析等方式进行。
仪器分析实验薄层色谱的优点在于其操作简便、快速、准确。
由于其样品用量少、试剂费用低等特点,常被广泛应用于药物分析、食品检测、环境监测等领域。
但其缺点在于分离度相对较低,不适用于样品数量过大或分离度要求较高的情况。
综上所述,仪器分析实验薄层色谱是一种常用的分离和鉴定方法,具有操作简便、快速、准确等优点。
在实际应用中,需要根据待测物质的特性选择合适的溶剂体系和色谱条件进行分析。
薄层色谱法实验范文
薄层色谱法实验范文实验目的:1.学习薄层色谱法的原理和操作方法。
2.了解化合物的相对亲和性和极性。
3.学会使用TLC进行物质的分离和纯化。
实验原理:薄层色谱法基于化合物在一个固定相上由于不同的相对亲和性和极性而分离的原理。
实验中,将待测样品涂布在薄层板上,然后将其放置在溶剂中使其进行上升或下降。
与非极性成分相对亲和性较大的化合物将上升较慢,而与极性成分较亲和性大的化合物将上升较快。
实验步骤:1.准备试样:将待测样品溶解在合适的溶剂中,以得到一个适合于TLC的样品溶液。
2.准备薄层板:将薄层板切割成需要的大小,并标记起点线。
3.涂布试样:使用一根玻璃棒或吸管,在薄层板上涂布适量的样品溶液。
4.开展分离:将涂布了试样的薄层板放入装有一定量移液溶剂的密闭容器中,使其进行分离。
5.进行定性和定量分析:将分离结束的薄层板拿出,用目视或紫外灯照射来观察分离效果。
根据色带的位置和形状,进行化合物的定性和定量分析。
实验注意事项:1.在操作过程中要注意个人安全,如佩戴实验手套、护目镜等防护用品。
2.在溶剂的选择上要注意其与试样是否相容,避免溶解度不佳或化学反应的发生。
3.涂布试样时要均匀、避免过浓。
过浓的试样会使分离效果不佳,不利于化合物的定性和定量分析。
4.容器要密封好,以防挥发性的溶剂逸出。
5.注意记录实验结果,包括色带的颜色、形状、迁移距离等。
实验结果和讨论:实验中可以观察到样品在薄层板上的分离效果。
根据色带的位置和形状,可以判断样品中存在的化合物以及它们的相亲和性和极性。
此外,还可以使用色带的迁移距离进行化合物的定量分析。
根据分离结果进行化合物的纯化和鉴定。
可以将色带切下,使用溶剂进行洗提或再结晶等方法,得到纯化的化合物。
通过对纯化后化合物的物理性质和光谱分析等进行鉴定,可以确定化合物的结构和纯度。
总结:薄层色谱法是一种快速、简便、低成本的分析方法,广泛应用于化学实验室中。
在实验中,根据化合物在固定相薄层上的不同相对亲和性和极性,可以进行分离和纯化,并通过对分离结果的观察和分析,确定化合物的结构和纯度。
简述薄层色谱法的操作方法 薄层色谱操作规程
简述薄层色谱法的操作方法薄层色谱操作规程(薄层色谱)法是指依据各成分对同一吸附剂的吸附本领不同,在流动相流动固定相的过程中,连续发生吸附、解吸、再吸附、再解吸,实现各成分的相互分别的吸附薄层色谱法分别法。
以下,依据网上的资料,整理在薄层色谱法的使用中可以做的步骤1.订立薄层板,将固定相和水用研钵向一个方向研磨混合,除去表面气泡后,放入涂布器,将涂布器顺畅地移动到玻璃板上进行涂布,取下涂布在薄层上的玻璃板,放置在水平台上在室温下干燥后,在规定的温度下干燥,放入干燥剂进行干燥使用前检查均匀度。
2.点样除另有规定外,点基线距底边规定距离,点直径和点间距与纸色谱法相同,点间距看点扩散情况,不影响检测做样品的时候,注意不要损伤薄层表面。
3.打开油缸时,事先用打开剂使之饱和。
在汽缸中加入充重量的打开剂,将与汽缸相同高度、宽度的滤纸贴在墙壁上,一端浸在打开剂中,密封汽缸顶部的盖子,使系统平衡,或依照本文的规定操作。
将样品薄片放入打开缸的打开剂中,浸渍在打开剂中的深度从薄片的底边开始(请勿将样品点浸入打开剂),密封盖板,打开至规定距离取出薄板晾干,依照各品种以下的规定进行检查。
4.用薄层扫描仪扫描检测色谱斑点,或直接扫描色谱斑点到薄层上定量上可以利用薄层扫描法。
薄层扫描的方法除另有规定外,还依据各种薄层扫描仪的结构特征和使用说明依据实在情况,选择吸取法或荧光法,以二波长或一波上进行扫描。
对薄层扫描的结果产生影响原因很多,在保证供试品的斑点在确定浓度范围内形成线形的基础上,与供试品对比品在同一薄层打开扫描,比较定量,削减误差。
有各种各样的供试品只有得到分别度和再现性好的(薄层色谱),才能得到充分的结果。
由于资料有限,因而上述内容并不全面,欢迎补充。
薄层色谱仪的适用薄层色谱又叫薄板层析,是色谱法中的一种,是快速分别和定性分析少量物质的一种很紧要的试验技术,属固—液吸附色谱;它兼备了柱色谱和纸色谱的优点,一方面适用于少量样品(几到几微克,甚至0.01微克)的分别;另一方面在制作薄层板时,把吸附层加厚加大;因此,又可用来精制样品,此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的质。
薄层色谱技巧
薄层色谱技巧(点板子)展开剂的选择一种简单的办法是根据你产物的溶解性选择一种极性最强的溶剂学(如醇类,乙氰等),再根据你实际展开的情况慢慢加入极性弱的溶剂(如四氯化碳、石油醚、二氯甲烷等)调节体系的极性。
以得到最好的展开效果。
把我的祖传秘方告诉你吧PE(60-90)EtAc/PE=1:2EtAc/PE/AcOH=15:5:1EtAc/AcOH/n-Butanol/H2O=2:1:1:18年来我用这四种体系,没有出现过什么问题我一直在用的是乙酸乙酯:环已烷,不断调节比例,直到有满意的Rf值,有拖尾时可能要加酸或碱,我一般乙酸和三乙胺。
我用了好几年了,都还好。
不妨一试!氨基酸都有专用的展开剂,常用丁醇和水,再加酸碱选择展开剂一般要用混合溶剂:一般要有一种对所要展开样品溶解度较大的溶剂,视样品的极性,再选用相应的体系。
极性小的用乙酸乙酯:石油醚系统极性较大的用甲醇:氯仿系统极性大的用甲醇:水:正丁醇:醋酸系统拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸(应该交好)甲醇:氯仿对于胺类比较好我常用的展开剂有:氯仿/甲醇;环已烷/丙酮;醋酸乙酯/石油醚;甲醇/吡啶/水;等.本人用过的展开系统中,苯-丙酮用的最多,通过调节不同比例可以得到较好的效果俺的:EtOAc/HexanesCh2Cl2(EtOAc)/MeOH, 0-1% TEA or NH3极性乙酸乙酯和非极性的石油醚按不同比例混合对一般的都能适应人民卫生出版社的《分析化学》(下册)有专门的介绍,很详细。
我一般用乙酸乙酯和石油醚配成不同比例的混合溶剂。
实验时调整至Rf=0.3--------0.5我们做的氨基酸,用的都是丁醇:醋酸:水二氯甲烷:甲醇,调节不同的配比基本解决大多数问题. 用二氯甲烷与甲醇体系非常有用,只要调整好比例。
展开剂的使用一看自己的喜爱;二看产品特点。
我多用氯仿/甲醇或石油醚/乙酸乙酯!主要是调节比例!掌握了几种展开剂的比例和极性,处理起来就容易多了!用乙酸乙酯/正己烷,必要时加醋酸或三乙胺。
实验室中的薄层色谱正确操作薄层色谱仪器的注意事项
实验室中的薄层色谱正确操作薄层色谱仪器的注意事项实验室中的薄层色谱:正确操作薄层色谱仪器的注意事项薄层色谱是一种广泛应用于实验室分析的技术,它通过将待测物质与移动相沿着一层固定相上进行分离,实现对化合物的定性和定量分析。
在进行薄层色谱实验时,正确操作薄层色谱仪器是确保实验成功的关键。
本文将介绍薄层色谱仪器的正确操作注意事项。
一、样品处理和施加样斑在进行薄层色谱实验之前,首先需要将待测样品进行准备和处理。
样品应当经过充分的提纯和浓缩,以保证实验结果的准确性。
在处理样品时,应注意避免样品与皮肤直接接触,并注意合理使用个人防护措施,如实验手套等。
处理好样品后,可使用微量注射器或玻璃毛细管将样品滴在薄层色谱板的样品点处。
二、适当的上样量和样斑位置在进行薄层色谱实验时,选择适当的上样量对于实验结果的准确性至关重要。
上样量过多或过少都可能导致色斑不清晰,影响分离效果。
一般来说,对于常规薄层色谱板,上样量应控制在1-2微升左右。
此外,样斑位置的选择也是重要的。
应将样斑施加在离色谱板底部约1.5厘米处,以避免样斑扩散到上部分离系统。
三、色谱板的放置和开展色谱在将样斑施加在色谱板上后,需要将色谱板放置在色谱槽或色谱缸中,用适当的溶剂进行溶剂移动相的插入。
为了保证色谱的准确性,在放置色谱板时应确保色谱板的底部与移动相不接触,通常采用满料装填等方式来保持适当的距离。
此外,溶剂前处理也是至关重要的一步,可采用对称浸润法或双向浸润法,以保证溶剂在色谱板上均匀分布。
四、色谱结果的显现和分析完成色谱过程后,需要将色谱板取出,并根据需要对其进行显现。
显现方法包括紫外灯照射法、荧光染料显现法、化学显现法等。
选择适当的显现方法可以提高实验结果的清晰度和可读性。
完成显现后,可以使用扫描仪或色谱仪进行色谱图的分析和解读。
根据样斑的迁移距离和相对位置,可以准确确定各组分的相对含量和对应化合物的鉴定。
五、安全措施和仪器检查在进行薄层色谱实验时,安全措施必不可少。
薄层色谱法实验报告
薄层色谱法实验报告薄层色谱法实验报告引言:薄层色谱法(Thin Layer Chromatography,TLC)是一种常用的分离和鉴定化合物的方法。
其原理是利用物质在固定相(薄层)和流动相(溶剂)之间的分配和移动差异,实现对混合物中化合物的分离。
本实验旨在通过薄层色谱法对某种未知化合物进行分离和鉴定。
实验材料和仪器:- 薄层色谱板- 未知化合物溶液- 标准溶液- 液相色谱仪- 显色剂- 注射器- 色谱柱- 移液枪实验步骤:1. 准备薄层色谱板:将薄层色谱板剪成适当大小,并在底部标记出起点线。
2. 准备样品:将未知化合物溶液和标准溶液分别用注射器吸取,滴在薄层色谱板的起点线上。
3. 开展色谱:将薄层色谱板放入液相色谱仪中,选择适当的流动相,启动仪器,使流动相在薄层色谱板上上升。
4. 观察色谱带:当流动相上升到适当高度时,取出薄层色谱板,用显色剂喷洒在上面,观察出现的色谱带。
5. 计算Rf值:测量色谱带的迁移距离和起点线至色谱带的距离,计算出Rf值。
6. 鉴定未知化合物:将未知化合物的Rf值与标准溶液的Rf值进行对比,确定未知化合物的成分。
结果与讨论:在实验中,我们成功地进行了薄层色谱法的分离和鉴定。
观察色谱带后发现,未知化合物在薄层色谱板上呈现为多个色谱带,而标准溶液只出现一个色谱带。
通过计算Rf值,我们发现未知化合物的Rf值与标准溶液中某一化合物的Rf值相近,推测未知化合物可能含有该化合物。
然而,由于薄层色谱法的分离效果受多种因素影响,如流动相的选择、色谱板的质量等,因此我们的推测仍需进一步确认。
在今后的实验中,我们可以尝试使用不同的流动相和色谱板,以提高分离效果和鉴定准确性。
结论:薄层色谱法是一种简单、快速、经济的分离和鉴定化合物的方法。
通过本实验,我们成功地利用薄层色谱法对某种未知化合物进行了分离和鉴定,并初步推测其成分。
然而,为了提高实验的准确性和可靠性,我们需要进一步优化实验条件,并进行更多的验证实验。
薄层色谱法实践技巧大总结
薄层色谱法实践技巧大总结目的:1. 药典:薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上,在展开容器内用展开剂展开,使供试品所含成分分离,所得色谱图与事宜的对照物按同法所得的色谱图对比,并可用薄层扫描仪进行扫描,用于鉴别、检查或含量测定。
2. 如果你是做鉴别的话,薄层的系统适用性主要是做检测限和分离度;3. 如果你是做含量测定,比如说用薄层扫描法,薄层的系统适用性应该做线性范围、同板精密度、异板精密度、回收率;4. 手工铺制的板子,只适宜于定性分析,不宜于分离定量;5. 化学药一般是作有关物质,需要一定的载药量,所以要适当增加厚度;6. 中药一般较难分离,需要薄板,以增加分离度;7. 手工铺制的板子常用的有:硅胶G板和硅胶CMC-Na板。
前者是煅石膏(石膏经140℃烘烤3—4小时)与硅胶按1—1.3:10混合均匀。
每份硅胶G加水2—3份调成糊状,即可使用。
后者的操作各位大虾已有论述。
8. 如果你铺板目的是做分析用的话,肯定得很仔细用心;如果仅是天然药化那种粗略检查过柱子得到的馏分纯度,那就没有必要这么复杂了,也就是说速度可以快点,板的要求也没有必要这么高;9. 单纯的手铺板,技巧要求很高的,如果有铺板器(也是完全手动的那种),铺出的板子基本上可以保证均一的。
10. 要喷硫酸乙醇并定量的最好铺水板;铺水板是最考技术的,主要是碾磨技术,大家可以探讨一下;11. 硫酸乙醇显色作定量分析的品种,但凡加了CMC-Na的板都易烘糊,尤其是温度高于100度时,后改用不加CMC辅的水板来作,就不会有烘糊现象,故也可推论CMC易于与硫酸起糊化反应。
感觉辅水板关键是硅胶G与水的比例要达1:3.5左右,而且研磨后要尽快涂布,不能易于凝固而难于涂布。
展开:12. 药典:展开容器应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸,并有严密的盖子,底部应平整光滑,或有双槽。
上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸,展开时须能密闭。
薄层色谱板的制备
这个东西也算是一种高分子材料,而高分子材料的溶解必然都会有一个溶胀,溶解的过程,所以配制的时候,应该将称好的CMC-Na少量的撒在水的表面,让其自然沉降,注意要散开平铺,这样能够充分浸润,使其溶胀,之后可以置于水浴锅内加热溶解;当然如果你不是很急着用的话也完全可以,直接用水泡着放那,估计十天半月的也可以用了。
26. 板子炸裂也可能是CMC-Na中有絮状沉淀所致。
27. 但凡加了CMC的板都易烘糊,尤其是温度高于100度时,若改用不加CMC辅的水板来作,就不会有烘糊现象,但不加CMC辅的板又太软,点样时容易点出洞,有个好办法是将CMC的浓度调至0.1%,这样就不易烘黑的。
28. 系统适用性:如果你是做鉴别的话,薄层的系统适用性主要是做检测限和分离度。
17. 如果经过一次展开后,展开槽内仍剩下足够的展开剂,可以展开第二块板子吗?
个人认为最好不要。一般来说为得到较好的分离效果,应先饱和一下,第二次使用如果还要饱和就会造成另一侧残留的展开剂附着在板子上,造成影响。而且有机溶剂一般较易挥发。
18. 自己手铺的薄层板怎么都没有买来的高效板好用,用过之后也可以用极性大些的展开剂将展开的点,二次展开跑过,这样就可以重复利用了。
24. 板铺好后,自然凉干最好,一定是要从玻板后看也是干的,注意一定要放平,最好控制空气流动;然后再放到烘箱中活化,这样就不会有裂开的现象了; 如果直接铺好后或者只是硅胶表面是干的,放进烘箱都会有裂开的。
25. “晾干的板子放在烘箱里怎么全炸裂了,有什么方法可以避免板子炸裂。”
你的板没有完全干透,表面看是干了,但是最中间的没有干,所以你直接放入105度的烘箱烘,当然会炸裂了,所以应该先用低温大约40度左右烘30分钟左右,再用105度活化,就可以解决这个问题了。
薄层色谱实践经验技巧总结
7. 手工铺制的板子常用的有:硅胶G板和硅胶CMC-Na板。前者是煅石膏(石膏经140℃烘烤3—4小时)与硅胶按1—1.3:10混合均匀。每份硅胶G加水2—3份调成糊状,即可使用。后者的操作各位大虾已有论述。
8. 如果你铺板目的是做分析用的话,肯定得很仔细用心;如果仅是天然药化那种粗略检查过柱子得到的馏分纯度,那就没有必要这么复杂了,也就是说速度可以快点,板的要求也没有必要这么高;
15. 当展开剂极性差别很大时,特别是极性大的成分所占比例很小时,往往会出现溶剂脱混现象。在这种情况下,展开槽 饱和与不饱和差别没有显著性差异,薄层板上往往会出现类似分层的现象,所以只有换展开系统来调整。
16. 甲醇用量较小,而甲醇又易挥发,容易产生边缘效应,要特别注意展开剂的平衡和层析缸的密封。
14. 展开剂的选择(分离单体):
(1)粗分,也就是当你的样品极性范围比较大的时候,可以直接采用极性较小的流动相。然后将前沿、原点以及前沿及原点间的硅胶分别刮下,提取。这样,样品就被分为几个部分,而各个部分的极性相差也比较小了。然后
再将这几部分分别进行下面的细分TLC 。
40. 制备CMC-Na时,我的方法是将CMC-Na加入沸腾的水中,慢加快搅,防止成团,完全溶解之后,自然沉降或者是抽滤(建议不用滤纸,太慢了,脱脂棉是个不错的选择)。
41. 对于CMC-Na溶液的配置,我认为最好提前几日配好,放置再用。配置时可用超声分散,对少量没有立即溶解的,放置后会逐渐消失。
薄层层析(TLC)实践经验技巧总结:
1. 药典:薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上,在展开容器内用展开剂展开,使供试品所含成分分离,所得色谱图与事宜的对照物按同法所得的色谱图对比,并可用薄层扫描仪进行扫描,用于鉴别、检查或含量测定。
薄层色谱法操作步骤及注意事项
薄层色谱法操作步骤及注意事项嘿,咱今儿就来聊聊这薄层色谱法!这玩意儿可有意思啦,就像是一场小小的实验冒险。
先说说操作步骤哈。
你得准备好那薄如蝉翼的层析板,这就好比是冒险的舞台。
然后呢,把样品小心翼翼地配好,就像给舞台上的主角化好妆。
接着,用那细细的毛细管或者微量注射器,把样品轻轻地点在层析板上,可别太用力啦,不然就把舞台给戳破咯!点好样后,把层析板放进那装着展开剂的层析缸里,看着展开剂慢慢地往上爬,就像看着主角在舞台上慢慢展现风采。
等展开到合适的位置,赶紧把层析板拿出来,让它晾干或者烘干。
嘿,这不,一幅漂亮的图谱就出来啦,就像主角完成了一场精彩的表演!那注意事项可不少呢!你想啊,要是不注意,这表演不就搞砸啦?首先呢,层析板得选好,质量差的可不行,那不是给表演添乱嘛!然后,样品的浓度可要把握好,太浓了就像化了个大花脸,太淡了又看不出来,这可得拿捏准咯!展开剂也很关键呀,得选对适合的,不然怎么能让主角好好发挥呢?还有啊,操作的时候要轻手轻脚的,别毛手毛脚把一切都搞乱了。
在这个过程中,就像烹饪一道美味佳肴,每个环节都不能马虎。
你要是不小心在点样的时候手抖了一下,哎呀,那图谱可能就不那么完美啦!就像做菜时盐放多了一样。
又或者展开剂没选对,那图谱就可能变得乱七八糟,好比做出来的菜味道怪怪的。
所以呀,每一步都得认真对待,可不能敷衍了事哟!咱再想想,这薄层色谱法不就像是人生的一场小旅途嘛!每一步都要走得稳稳当当,注意着各种细节,才能欣赏到最美的风景。
要是粗心大意,那可能就会错过很多精彩呢!总之呢,薄层色谱法看似简单,实则暗藏玄机。
只有用心去体会,认真去操作,才能让它发挥出最大的作用。
可别小瞧了它哟,它能帮我们解决很多问题呢!大家都好好去试试吧,相信你们会爱上这个小小的实验冒险的!。
薄层色谱法的操作步骤
薄层色谱法的操作步骤
嘿,朋友!今天咱们来聊聊薄层色谱法的操作步骤,这可是个挺有趣的小实验呢。
第一步呀,得准备好咱们要用的东西。
比如说薄层板,这就像是咱们画画的画布一样。
还有展开剂,这可是让样品能在板子上跑起来的关键。
另外,样品溶液也不能少,这就是咱们要观察的主角啦。
还有各种小工具,像点样毛细管、显色剂等等。
准备好东西之后,就该处理样品溶液啦。
把咱们要检测的东西溶解在合适的溶剂里,让它变成均匀的溶液。
这一步可得细心点,要是溶液不均匀,后面的结果可能就不准确喽。
点好样之后,把薄层板放进装有展开剂的层析缸里。
这就像是让样品们开始赛跑啦。
展开剂会慢慢地沿着薄层板往上爬,带着样品一起跑。
这个时候咱们得耐心等待,看着展开剂一点点往上走,就好像在期待一场精彩的比赛结果。
等展开剂差不多爬到板子的顶部了,就把板子拿出来,放在通风的地方让它晾干。
这时候呀,样品们已经在板子上跑出了不同的距离,形成了一道道的痕迹。
然后就是显色啦。
根据样品的性质,选择合适的显色剂。
把显色剂喷在板子上或者把板子泡在显色剂里,这时候样品的痕迹就会变得更加明显。
有的会变成五颜六色的斑点,可好看啦。
呢,咱们就可以观察和分析结果啦。
看看样品在板子上形成的斑点位置、形状、颜色等等。
通过和标准样品的对比,就能知道咱们检测的东西到底是什么啦。
怎么样,朋友,薄层色谱法的操作步骤是不是没有想象中那么复杂呀?只要咱们一步一步认真做,就能得到想要的结果啦。
多练习几次,你一定会越来越熟练的!。
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薄层层析硅胶板薄层层析硅胶板是用高纯度薄层层析硅胶(粉状)调入一定量的粘结剂喷制成,板面纯白、平整均匀、细密。
主要成分为SiO2·nH2O,化学性质稳定,除强碱和氢氟酸外,不与其他酸碱反应。
薄层层析硅胶板可直接用于多种类型有机物质的定性或定量分析,在医药、农药、中草药、有机化工产品及粮食、食品的微量杂质及主要成份的鉴定中已得到普遍应用。
硅胶板的规格分为:G ,H,GF254,HF254。
那这些型号到底代表什么意思?他们的依据是什么呢?"硅胶H"--不含粘合剂;"硅胶G"--含煅石膏粘合剂;"硅胶HF254"--含荧光物质,可用于波长为254nm紫外光下观察荧光;"硅胶GF254"--既含煅石膏又含荧光剂。
还有一个非常简单的判别分类的办法就是,不同型号的硅胶在于其中石膏含量的不同,这一点体现在硅胶的粘稠度不同,石膏含量越高越粘稠。
这个在卖硅胶的瓶子上都有标识,比如硅胶H就很稀松,硅胶G一般粘稠度还是比较适中的。
硅胶板化工行业上的名词“硅胶板”只是一个简称,其全称应该叫薄层层析硅胶板,它用高纯度薄层层析硅胶(粉状)调入一定量的粘结剂喷制成,其板面一般为玻璃,今年来,国外比较流行使用铝箔来做附着板面。
要求板面纯白、平整均匀、细密。
主要成分为SiO2·nH2O,化学性质稳定,除强碱和氢氟酸外,不与其他酸碱反应。
薄层层析硅胶板可直接用于多种类型有机物质的定性或定量分析,在医药、农药、中草药、有机化工产品及粮食、食品的微量杂质及主要成份的鉴定中已得到普遍应用。
硅胶板的规格分为:G ,H,GF254,HF254。
H是Hard的简称G是Glutinous的简称F是Fluorescent的简称硅胶H-------------------不含粘合剂,不含荧光剂;硅胶G-------------------不含荧光剂,含煅石膏粘合剂;硅胶HF254------------含荧光物质,可用于波长为254nm紫外光下观察荧光;硅胶GF254------------既含煅石膏又含荧光剂,可用于波长为254nm紫外光下观察荧光还有一个非常简单的判别分类的办法就是,不同型号的硅胶在于其中石膏含量的不同,这一点体现在硅胶的粘稠度不同,石膏含量越高越粘稠。
这个在卖硅胶的瓶子上都有标识,比如硅胶H就很稀松,硅胶G一般粘稠度还是比较适中的。
硅胶板的使用尺寸一般是:30×100 MM,50×100 MM,50×200 MM,100×200 MM,200×200MM,也可以根据客户的特殊需求制作。
前面说的铝箔板面的一个优点就是使用过程中可以根据使用面积的大小来裁剪。
薄层色谱法实践技巧目的:1. 药典:薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上,在展开容器内用展开剂展开,使供试品所含成分分离,所得色谱图与事宜的对照物按同法所得的色谱图对比,并可用薄层扫描仪进行扫描,用于鉴别、检查或含量测定。
2. 如果你是做鉴别的话,薄层的系统适用性主要是做检测限和分离度;3. 如果你是做含量测定,比如说用薄层扫描法,薄层的系统适用性应该做线性范围、同板精密度、异板精密度、回收率;4. 手工铺制的板子,只适宜于定性分析,不宜于分离定量;5. 化学药一般是作有关物质,需要一定的载药量,所以要适当增加厚度;6. 中药一般较难分离,需要薄板,以增加分离度;7. 手工铺制的板子常用的有:硅胶G板和硅胶CMC-Na板。
前者是煅石膏(石膏经140℃烘烤3—4小时)与硅胶按1—1.3:10混合均匀。
每份硅胶G加水2—3份调成糊状,即可使用。
后者的操作各位大虾已有论述。
8. 如果你铺板目的是做分析用的话,肯定得很仔细用心;如果仅是天然药化那种粗略检查过柱子得到的馏分纯度,那就没有必要这么复杂了,也就是说速度可以快点,板的要求也没有必要这么高;9. 单纯的手铺板,技巧要求很高的,如果有铺板器(也是完全手动的那种),铺出的板子基本上可以保证均一的。
10. 要喷硫酸乙醇并定量的最好铺水板;铺水板是最考技术的,主要是碾磨技术,大家可以探讨一下;11. 硫酸乙醇显色作定量分析的品种,但凡加了CMC-Na的板都易烘糊,尤其是温度高于100度时,后改用不加CMC辅的水板来作,就不会有烘糊现象,故也可推论CMC易于与硫酸起糊化反应。
感觉辅水板关键是硅胶G与水的比例要达1:3.5左右,而且研磨后要尽快涂布,不能易于凝固而难于涂布。
展开:12. 药典:展开容器应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸,并有严密的盖子,底部应平整光滑,或有双槽。
上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸,展开时须能密闭。
水平展开用专用的水平展开缸。
13. 药典:将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中,浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜(切勿将样点侵入展开剂中),密封顶盖,待展开至规定距离,除另有规定外,一般为8~15 cm,溶剂前沿达到规定的展距,取出薄层板,晾干,按正文项下的规定检测。
14. 展开剂的选择(分离单体):(1)粗分,也就是当你的样品极性范围比较大的时候,可以直接采用极性较小的流动相。
然后将前沿、原点以及前沿及原点间的硅胶分别刮下,提取。
这样,样品就被分为几个部分,而各个部分的极性相差也比较小了。
然后再将这几部分分别进行下面的细分TLC。
(2)细分。
经过粗分之后,我们一般对各个部分的极性都能够做到心中有数了。
比如,被冲到前沿的样品,要采用更小极性强度的流动相,而死吸附部分,则需要较大强度的流动相。
我们在初步确定了流动相的极性强度之后,可以自己设计几个溶剂系统。
在选择流动相的组成的时候,可以参考snyder的溶剂分类,从质子受体,质子给体和偶极作用的溶剂中各选择一种,然后再选择一个强度调节剂。
当然,也可以参考文献中采用的流动相。
选好了要用的流动相,就可以根据我们初步确定的极性强度得到流动相的配比了(如果是二元流动相的话)。
如果是三元及以上的流动相,可以采用Glajch和Youngstrom的七种溶剂系统的方案进行选择流动相的配比。
然后从中选择分离效果比较好的组合。
最开始可以采用微量圆环法(将样品点在中间,然后将流动相用毛细管从原点向圆周扩散)和小板实验法来摸索,然后再应用于大的制备TLC。
我也曾直接采用圆环法,也称为环形展开,来进行制备的。
本来是应该有专门的U形展开室来展开,但是因为我们这里没有这个设备,所以我一般采用简易的方法:即将样品点在中央,然后用尖头的滴管源源不断的向圆心滴加流动相的。
样品会分出不同的同心圆而得到分离。
这样的好处有三:(1)只要操作小心,各个同心圆真的就非常圆,即不会出现线性层析中的边缘效应等。
(2)分离效果更好,拖尾现象小于线性层析。
(3)由于圆心式展开的Rfc是线性展开的Rf的平方根,要大于线性展开的Rf,所以分的更开。
弊端在于将各个组分从板上刮下的时候需更小心才不会使之混杂。
15. 当展开剂极性差别很大时,特别是极性大的成分所占比例很小时,往往会出现溶剂脱混现象。
在这种情况下,展开槽饱和与不饱和差别没有显著性差异,薄层板上往往会出现类似分层的现象,所以只有换展开系统来调整。
16. 甲醇用量较小,而甲醇又易挥发,容易产生边缘效应,要特别注意展开剂的平衡和层析缸的密封。
17. 如果经过一次展开后,展开槽内仍剩下足够的展开剂,可以展开第二块板子吗?个人认为最好不要。
一般来说为得到较好的分离效果,应先饱和一下,第二次使用如果还要饱和就会造成另一侧残留的展开剂附着在板子上,造成影响。
而且有机溶剂一般较易挥发。
18. 自己手铺的薄层板怎么都没有买来的高效板好用,用过之后也可以用极性大些的展开剂将展开的点,二次展开跑过,这样就可以重复利用了。
显色:19. 药典:显色装置喷雾显色要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出;浸渍显色可用专用的玻璃器皿或用适宜的玻璃缸代替;蒸气熏蒸显色可用双槽玻璃缸或适宜大小的干燥器代替。
20. 说关于薄层板加热变黑的问题,其实很容易解决:当喷完显色剂后不用在放烘箱里烘了,可以用电吹风在板子背面吹吹就能显色了。
我们实验室里一般都采用此法,简便、快洁.如果一非想使用烘箱烘的话,一定要用带玻璃窗的,当看到显色了就取出,不然不好控制显色时间,时间过长,CMC容易碳化变黑。
21. 根据我的经验,薄层版变黑与CMC-Na的浓度过大有关,如果你留意的话,你会发现,当显色剂中有浓硫酸时,加热时间稍长就会变黑(其他显色剂是没事的),我老师说这是因为浓硫酸把CMC-Na炭化了,其实[color=blue=这种情况你只要适当降低CMC-Na的浓度就可以了,当然如果不加CMC-Na的话容易把板弄破。
22. 显色剂R6:称取100mgDC红色19号(染料索引号No 45170)溶于150ml二乙醚、70ml 95%乙醇和15ml水。
此溶液可保存一周。
薄层板喷布显色剂R6后,立即在366nm下观察和记录。
问题与应用:23. 板子会裂口,一则可能是因为硅胶的比例太大,二则可能是,板子要在常温下晾干后,再在烘箱中活化。
如果铺完不久就在较高温度下,裂口的几率就比较高的。
24. 板铺好后,自然凉干最好,一定是要从玻板后看也是干的,注意一定要放平,最好控制空气流动;然后再放到烘箱中活化,这样就不会有裂开的现象了;如果直接铺好后或者只是硅胶表面是干的,放进烘箱都会有裂开的。
25. “晾干的板子放在烘箱里怎么全炸裂了,有什么方法可以避免板子炸裂。
”你的板没有完全干透,表面看是干了,但是最中间的没有干,所以你直接放入105度的烘箱烘,当然会炸裂了,所以应该先用低温大约40度左右烘30分钟左右,再用105度活化,就可以解决这个问题了。
26. 板子炸裂也可能是CMC-Na中有絮状沉淀所致。
27. 但凡加了CMC的板都易烘糊,尤其是温度高于100度时,若改用不加CMC辅的水板来作,就不会有烘糊现象,但不加CMC辅的板又太软,点样时容易点出洞,有个好办法是将CMC的浓度调至0.1%,这样就不易烘黑的。
28. 系统适用性:如果你是做鉴别的话,薄层的系统适用性主要是做检测限和分离度。
如果你是做含量测定,比如说用薄层扫瞄法,应该做线性范围,同板精密度,异板精密度,回收率。
CMC-Na溶液的配制:29. 药典规定CMC-Na浓度为0.2%~0.5%,实际操作中0.4%~0.5%最为实用;CMC-Na溶液的溶剂应用蒸馏水,以尽量减少污染。
30. 配制CMC-Na溶液,根据实际经验一般将溶液浓度配成0.3%,需要铺厚板可配成0.5%左右,薄板可配成0.2%即可。
CMC-Na溶解最好是自然溶解(浓度不是太高),也可在水浴中加热促溶(用时还是过滤一下好,避免铺出的板子有麻坑)。