薄层色谱法操作规程

1.目的

建立薄层色谱法检测操作规程。

2.适用范围

本规程适用于薄层色谱法。

3.编制依据

《药品生产质量管理规范（1998年修订）》国家药品监督管理局（1999）

4.责任

4.1 QC质检员对本规程的实施负责。

4.2 QC主管对本规程的有效执行承担监督检查责任。

5.正文

5.1简述

，经展开、检视所得的色谱图，与适宜的对照物按同法所行的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别或杂质检查的方法。

5.2仪器与材料

除另有规定外,玻板要求光滑、平整、洗净后不附珠，晾干。最常用的固定相有硅胶G、

硅胶GF

254、硅胶H和硅胶HF

254

，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤

维素、微晶纤维素F

254

等。其颗粒大小，一般要求直径为5～40μm。

薄层涂布，一般可分无黏合剂和含黏合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻板上，

后者系在固定相中加入一定量黏合剂，一般常用10%～15%煅石膏（CaSO

4·2H

2

O在140℃

加热4小时），混匀后加水适量使用，或用0.2%～0.5%羧甲基纤维素钠水溶液（取羧甲基纤维素适量，加水适量，加热煮沸至完全溶解）适量，调成糊状，均匀涂布于玻板上。使用涂布器应能使固定相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。

分普通薄层板和高效薄层板，如硅胶薄层板、硅胶GF

254

薄层板、聚酰胺薄膜和铝基片薄层板等。

有手动、半自动或自动点样器，一般采用微量注射器或定量毛细管。

应使用适合薄层板大小的专用薄层色谱展开缸，并有严密的盖子，底部应平整光滑，或有双槽。

按各品种项下规定。可采用喷雾显色、浸渍显色或置碘蒸气中显色，检查斑点。

喷雾显色可使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可使用专用玻璃器皿或适宜的玻璃缸代替；碘汽熏碘显色可用双槽玻璃缸

或适宜大小的干燥器代替。

为装有可见光、短波紫外光（254nm）、长波紫外光（365）光源及相应滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄色谱图用，暗箱内光源应有足够的光照度。

5.3操作方法

除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2～0.3mm），取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃活化30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视），表面应均匀、平整、光滑，无麻点，无气泡，无破损及污染。

临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的层板底边的硅胶层不得有破损，如在储放期间被空气中杂质，使用前可用适宜的溶剂在展开容器中上行展开预洗，110℃活化后，放在干燥器中备用。除另有规定外，在洁净干燥的环境下，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，应能使点样位置正确、集中。点样基线距底边2.0cm，样点直径为2～4mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般为1.0～2.0cm。点样时必须注意勿损伤薄层表面。展开缸如需预先用展开剂饱和，可在缸中加入足够量的展开剂，并在壁上贴两条与缸一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封顶盖，一般保持15～30分钟，使系统平衡或按品种规定操作。

将点好样品的薄层板入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点0.5～1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封顶盖，待展开至规定距离（一般为10～15cm），取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。

展开可以向一个方向进行，即单向展开；也可以进行双向展开，即先向一个方向展开，取出，待展开剂完全挥发后，将薄层板转动90°，再用原展开剂或另一种展开剂进行展开；亦可多次展开。

荧光薄层板可用荧光淬灭法；普通薄层板，有色物质可在日光下直接检视；无色物质可用物理或化学方法检视。物理方法是检出斑点的荧光颜色及强度；化学方法一般用化学试剂显色后，立即覆盖相同大小的玻板，在日光下检视。

如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果的因素很多，帮应在保证供试品的斑在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较度计算定量，以减少误差。各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。

5.4注意事项

自制薄层板和市售薄层板在使用前均应继续活化，活化后的薄层板应立即置于有干燥剂的干燥器中保存，保存时间不宜过长，最好随用随制，放入干燥箱中保存仅作为使用前的一种过渡。

溶剂选择是否适当影响点样原点及分离后斑点的形状，一般应选择极性小的溶剂；只有在供试品极性较大，薄层板的活性较大时，才选择极性大的溶剂。除特殊情况外，试液的浓度要适宜，最好控制在使点样量不超过10μl。

薄层板上样品容积的负荷量极为有限，普通薄层板的点样量最好在10μl以下。点样量过多可造成原点“超载”，展开剂产生绕行现象，使斑点拖尾。点样速度要快，在空气中点样以不超过10分钟为宜，以减少薄层板和大气的平衡时间。点样时必须注意勿损害薄层表面。

实验环境的相对湿度和温度对薄层分离效果有着较大的影响（实验室一般要求相对湿度在65%以下为宜），因此应保持实验环境的相对恒定。对温、湿度敏感的品种必须按品种项下的规定，严格控制实验环境的温、湿度。

展开缸预先饱和可避免边缘效应，展开距离不宜过长，通常为10～15cm。

6.相关文件与记录

分发部门：

起草人：起草日期：年月日

审核人：审核日期：年月日

批准人：批准日期：年月日