薄层色谱法注意事项
【最新】薄层色谱法操作注意事项
薄层色谱法操作注意事项
薄层色谱法是一种常用的分离和检测技术，以下是一些操作注意事项：
1 .选择合适的色谱板：根据需要选择合适的色谱板，如硅胶板、氟化纤维素板等。
不同的样品需要不同的色谱板来实现良好的分离效果。
2 .准备色谱层：将色谱板放在合适的托盘上，均匀地涂抹上薄层色谱剂。
涂层应该均匀、细致，避免出现孔隙和不均匀的现象。
3 .样品处理：样品中的杂质和溶剂可能影响色谱的分离结果，因此在样品处理前，需要根据需要进行前处理，如稀释、过滤等。
4 .样品施加：将经过前处理的样品加到色谱层上，可以使用毛细管或者微量移液器进行施加，避免过量的样品施加。
5 .吸附和分离：将施加样品的色谱板放入合适的溶剂系统中，让溶剂自己上升或者使用上下法进行分离。
注意，溶剂上升的速度要适中，避免迅速上升导致分离不完整。
6 .显色和检测：将分离好的色谱板放在适当的显色剂中，让目标物质显色。
可以使用紫外灯、红外线检测器或者目视观察等方法进行检测。
7 .记录结果和分析：根据实验结果，记录分离和检测的结果，并进行分析解读。
注意，结果必须要有明确的标识和记录，以便于后续的分析和比较。
这些是薄层色谱法操作时需要注意的一些主要事项。
具体操作时还需根据实验要求和仪器设备进行相应的调整和操作。
薄层色谱法标准操作规程
薄层色谱法标准操作规程依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。
内容：1 简述：薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。
等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。
2 仪器与材料：2.1 玻板：除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格，要求光滑，平整、洗净后的不附水珠，晾干。
2.2 固定相或载体：最常用的有硅胶G、硅胶GF、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。
其颗粒大小，一般要求直径为10—40µm。
薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10—15%煅石膏（CaSO4·2H2O在140℃烘4小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.5—0.7%）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。
也有含一定展开液或缓冲液的薄层。
2.3 涂布器：应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。
2.4 点样器：常用具支架的微量注射器或定时毛细管，应能使点样位置正确集中。
2.5 展开室：应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。
3 操作方法：3.1 薄层板制备：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2—0.3mm），取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟。
即置有干燥剂的干燥箱中备用。
使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。
3.2 点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边 2.0cm，点样直径为2——4mm，点间距离约为1.5—2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。
黄连的薄层色谱鉴别注意事项
黄连的薄层色谱鉴别需要注意以下几点：
1.展开剂的选择：根据黄连中的化学成分，选择适合的展开剂进行薄层色谱鉴别。
常用的展开剂包括苯-醋酸乙醇、甲醇、异丙醇等有机溶剂。
2.薄层板的制备：使用硅胶G薄层板作为固定相，按照薄层色谱法的常规方法制备薄层板。
3.点样和展开：将黄连样品溶液点样在薄层板上，然后使用选择的展开剂进行展开。
4.显色和观察：在紫外灯下观察黄连的薄层色谱斑点，通常呈现黄色荧光斑点。
可以使用对照药材进行对比分析，以确认黄连的特征斑点。
另外，在进行黄连的薄层色谱鉴别时，需要注意以下几点：
1.样品溶液的制备：将黄连样品经过适当的处理和提取，制成供试品溶液。
2.对照药材的选择：选择合适的对照药材，用于比对和鉴别黄连中的特征成分。
3.展开剂的选择和优化：根据实际情况选择适合的展开剂，并优化展开条件，以提高鉴别的准确性和灵敏度。
4.斑点辨认：在薄层色谱中，黄连的特征斑点通常呈现黄色荧光，
可以根据斑点的颜色、位置和形状进行辨认。
5.重复性和稳定性考察：为了确保薄层色谱鉴别的可靠性和稳定性，需要考察不同时间、不同批次样品的重复性和稳定性。
总之，黄连的薄层色谱鉴别需要注意细节和条件的选择与优化，以提高鉴别的准确性和灵敏度。
薄层色谱操作注意事项
薄层色谱操作注意事项影响薄层色谱分析的因素有很多，比如样品处理方法、薄层板制备技巧、点样方法、展开剂的遴选、温湿度的掌控等等很多方面，在这里对其操作要点作一下简单介绍:1铺制薄层板：铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水蒸发后，板表面较粗糙。
匀浆配比一般是硅胶G:水=1：2～3，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。
研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断，越稠越难下滴。
匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。
涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么明显。
通常，板的质量对薄层鉴别的影响不是很大，影响最大的是展开剂的配制和展开系统的饱和。
2点样：尽量用小的点样管。
如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。
这样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。
样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。
样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。
点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。
薄层色谱用于定量时，点样是最主要的误差来源。
供试液的溶剂均有不同程度的洗脱力，所以在点样的同时，样品在原点就可是成环形展开，原点直径的扩散促进了这种展开，Kaiser称之为“上样环形色谱效应”。
如果样品在溶剂中的溶解度很大，原点将变成空心环。
这种效应对随后的先行展开造成很不利的影响。
供试液的溶剂在原点的残留，也会改变展开的选择性，特别是供试液的溶剂与展开剂的极性相差较大时更明显。
再者，亲水性溶剂残留在原点吸收大气中的水分（特别在高湿度环境）对色谱的影响也不可低估。
因此点样时的同步干燥或继后干燥以除去原点残存的溶剂是需要的。
但应尽可能避免高温加热，如用吹风筒加热，样品变为固态后，部分或全部强烈的吸附在吸附剂的颗粒上，而促进了硅胶的有催化作用的活性表面故态化学反应，导致样品的变性（尤其热不稳定物质），至少移动相在展开时对这部分样品的溶解速度比移动速度慢得多而形成拖尾（斑点拖尾的原因之一）。
薄层色谱法注意事项
薄层色谱法注意事项薄层色谱法是一种常用的化学分析技术，用于分离、鉴定和定量分析化合物。
在进行薄层色谱实验时，需要注意以下几点：1. 实验前准备：在进行薄层色谱实验之前，应先准备好所需的试剂、溶剂、色谱板和开发室等实验器材。
同时，要确保色谱板的纯净度和质量良好，避免板上有杂质或损坏。
2. 样品的处理：样品在进行薄层色谱之前需要进行合适的处理，如提取、纯化等操作。
样品的处理要严格控制条件，避免产生不必要的干扰物。
3. 色层施加：色层施加是薄层色谱实验的关键步骤，要注意施加的均匀性和厚度的控制。
色层应均匀地覆盖在色谱板上，厚度一般为0.1-0.3毫米。
施加色层时要避免过程中的振荡或晃动，以确保色层的平整度。
4. 试剂的选择：在进行薄层色谱实验时，要根据不同的分析目的选择适当的试剂和溶剂。
试剂和溶剂的选择要有一定的理论基础，避免对被测物质产生干扰或损坏。
5. 开发条件的控制：开发是薄层色谱的重要步骤，要控制好开发室的湿度和温度。
湿度和温度的变化会影响色层的分离效果，因此要保持开发室的相对稳定。
6. 结果的解读：薄层色谱实验得到的结果需要进行正确的解读和分析。
需要注意结合实验数据和色谱数据来对结果进行推断和判断，避免因误解结果而导致错误的结论。
7. 安全操作：在进行薄层色谱实验时，要注意安全操作，避免接触有毒、易燃、腐蚀性的物质。
实验时要佩戴适当的防护装备，如实验手套、护目镜等。
总之，薄层色谱法是一种常用的化学分析技术，能够在短时间内对混合物进行分离和鉴定。
在进行实验时，注意以上几点，可以保证实验结果的准确性和可靠性。
薄层色谱法实验报告
薄层色谱法实验报告一、实验目的1、掌握薄层色谱法的基本原理和操作方法。
2、学习利用薄层色谱法分离和鉴定混合物中的成分。
二、实验原理薄层色谱法（Thin Layer Chromatography，TLC）是一种快速、简便、灵敏的分离和分析方法。
它基于混合物中各组分在固定相（吸附剂）和流动相（展开剂）之间的分配系数不同，从而在薄层板上实现分离。
吸附剂通常是硅胶、氧化铝等具有吸附性能的物质，它们均匀地涂布在玻璃板或塑料板上形成薄层。
展开剂则是一种能够在吸附剂上移动的溶剂系统。
当样品点在薄层板的一端，放入装有展开剂的层析缸中时，展开剂在毛细作用下沿着薄层上升，样品中的各组分随着展开剂的移动而在薄层上发生不同程度的吸附和解吸，导致它们在薄层上的移动速度不同，最终实现分离。
通过与已知标准物质在相同条件下的色谱行为进行比较，可以对样品中的成分进行定性分析。
同时，根据斑点的大小和颜色深浅，可以进行半定量分析。
三、实验仪器与试剂1、仪器玻璃板（5×20cm）层析缸点样毛细管（内径 05mm）喷雾器紫外光灯（254nm 和 365nm）烘箱2、试剂硅胶 G羧甲基纤维素钠（CMCNa）水溶液（05%）展开剂（石油醚乙酸乙酯体系，不同比例）样品溶液（混合有机化合物）标准物质溶液（已知有机化合物）四、实验步骤1、制板将硅胶 G 与适量的 05% CMCNa 水溶液在研钵中充分研磨，调成均匀的糊状。
用涂布器将糊状物均匀地涂布在玻璃板上，厚度约为 025 05mm。
置于水平台上晾干，然后在 105℃烘箱中活化 30 分钟，取出后置于干燥器中备用。
2、点样用点样毛细管吸取样品溶液和标准物质溶液，在距薄层板一端 1 15cm 处轻轻点样，点样直径一般不超过 2mm，每次点样后用电吹风冷风吹干，重复点样 2 3 次，以保证样品量足够。
3、展开在层析缸中倒入适量的展开剂，使其高度不超过 1cm。
将点样后的薄层板小心放入层析缸中，盖上盖子，使展开剂蒸气饱和层析缸 5 10 分钟。
薄层层析和纸色谱操作注意事项
关于薄层色谱的一点体会总结：薄层层析和纸色谱操作注意事项一、应用：薄层色谱是一种微量、快速、简便的分析方法。
适用于微量样品的分离、鉴定和制备。
在中药制剂制备过程中，经适宜的工艺来取舍处方中各药材的各类成分，从而达到保持或改变药物作用性质或降低其毒副作用的目的。
而薄层色谱法具有分离与鉴定的双重功能，通过薄层图谱与对照品、对照药材的图谱相比较，除了能鉴出有效成分或特征成分外，还以完整的色谱图作为一个整体对制剂加以鉴别，提高了鉴别的准确性，尤其当有效成分尚不确切时，更显示出薄层色谱法的实用性。
薄层色谱分析法由于适合国情、简便、快速，能有效地、直观地反映药品地真实性、稳定性，现已成为中药制剂的鉴别和质量控制的行之有效的方法之一。
操作二、操作要点：（一）薄层层析1、铺制薄层板：将吸附剂1份和水2.5-3.0份（或加入黏合剂的水溶液）在研钵中向一方向研磨混合,去除表面的气泡后，进行涂布（厚度为0.2～0.3mm）,颠板，于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透视光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染，于100-110℃烘30分钟,冷却后立即使用或置干燥箱中备用。
2、点样：用点样器点样于薄层板上,一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。
若因样品溶液太稀，可重复点样，但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样，以防样点过大，造成拖尾、扩散等现象，而影响分离效果。
点样时必须注意勿损伤薄层表面。
注：在薄层色谱中，样品的用量对物质的分离效果有很大影响，所需样品的量与显色剂的灵敏度、吸附剂的种类、薄层的厚度均有关系。
样品太少，斑点不清楚，难以观察，但样品量太多时往往出现斑点太大或拖尾现象，以至不易分开。
3、展开将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密封，待展开至规定距离（一般为8～15cm），取出薄层板，晾干，待检测。
简述采用硅胶板薄层色谱分离实验时具体的操作步骤和注意事项
简述采用硅胶板薄层色谱分离实验时具体的操作步骤和注意事项一、实验操作步骤采用硅胶板薄层色谱分离实验的操作步骤如下：1.硅胶板的制备：选择合适的硅胶板，如硅胶G板或硅胶H板。
将硅胶与适量的黏合剂混合，搅拌均匀后涂在玻璃板上，制成硅胶薄层板。
薄层板制成后需干燥，然后活化处理，以提高分离效果。
2.点样：将待分离的样品溶液点在硅胶板上，用毛细管或自动点样器进行点样操作。
点样时需注意控制点样量，过量的样品可能导致拖尾、边缘效应等。
3.展开：在密闭的容器中进行展开，选择合适的展开剂，确保待分离的组分能够得到较好的分离。
展开剂的选择应根据样品的性质进行优化。
4.显色：展开后的薄层板需进行显色处理，以便观察和检测组分的斑点。
根据待分离组分的性质选择合适的显色剂，如荧光剂、金属盐等。
5.检测与记录：通过合适的方法对薄层板上的组分进行检测，如紫外可见吸收光谱法、荧光法等。
记录各组分的斑点位置、大小及颜色等信息，以便后续的分析和处理。
6.薄层板的回收和处理：实验结束后，需对薄层板进行回收和处理。
对于有价值的组分，可进行进一步分离和纯化。
对于不再需要的薄层板，需按照实验室规定进行处理，避免对环境造成污染。
二、注意事项在进行硅胶板薄层色谱分离实验时，需要注意以下几点：1.硅胶板的选择与制备：根据实验需求选择合适的硅胶板类型（如硅胶G 板或硅胶H板）。
制备时需确保硅胶与黏合剂的比例合适，搅拌均匀，避免出现硅胶颗粒等杂质。
同时，制成的薄层板需干燥并活化处理，以提高分离效果。
2.点样操作：点样时需控制点样量，避免过量的样品导致拖尾、边缘效应等问题。
可以采用毛细管或自动点样器进行点样，提高点样精度和效率。
3.展开剂的选择与优化：展开剂的选择对于薄层色谱分离的效果至关重要。
应根据待分离组分的性质选择合适的展开剂，并进行优化实验，以提高分离效果。
同时，需注意展开剂的配比和组成，以获得最佳的分离效果。
4.显色处理：选择合适的显色剂对展开后的薄层板进行显色处理，以便观察和检测组分的斑点。
薄层色谱法测定操作规程
标准操作规程目的：为规范薄层色谱法测定检查操作，确保实验的准确性，依据《中国药典》2020版四部和《药品生产质量管理规范》（2010年修订），特制定本规程。
适用范围：适用于用薄层色谱法进行鉴别、检查或含量测定。
依据：《中国药典》2020版第四部57页0502“薄层色谱法”《药品生产质量管理规范》2010年修订责任：检验员负责本规程的实施。
内容：1.简述：薄层色谱法系将供试品溶液点样于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的标准物质按同法所得的色谱图对比，亦可用薄层色谱扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。
2.TLC的原理：通常所说的薄层色谱一般是指吸附薄层色谱，可根据TLC所采用的涂层材料性质的不同，其物理化学原理也有所不同，可分为：2.1 吸附薄层色谱：采用硅胶、氧化铝等吸附剂铺成薄层，利用吸附剂表面对不同组分吸附能力的差别达到分离的方法。
最为广泛的方法由于混合物中的各个组分对吸附剂（固定相）的吸附能力不同，当展开剂（流动相）流经吸附剂时，发生无数次吸附和解吸过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前移动，吸附力强的组分滞留在后，由于各组分具有不同的移动速度，最终得以在固定相薄层上分离。
2.2 分配薄层色谱：由硅胶、纤维素铺成薄层，不同组分在指定的两相中有不同的分配系数。
2.3 离子交换薄层色谱：由含有交换活性基团的纤维素辅成薄层。
2.4 排阻薄层色谱：利用样品中分子大小不同，受阻情况不同加以分离，也称凝胶薄层。
3.仪器与材料：3.1 薄层板：按支持物的材质分为玻璃板、塑料板或铝板等；按固定相种类分为硅胶薄层板、键合硅胶板、微晶纤维素薄层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等。
固定相中可加入黏合剂、荧光剂。
硅胶薄层板常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254、G、H表示含或不含石膏黏合剂。
F254为在紫外光254nm波长下显绿色背景的荧光剂。
按固定相粒径大小分为普通薄层板(10～40μm)和高效薄层板(5～10μm)。
体内药物分析薄层色谱法
对样品量和分离能力有一定的限制，某些 复杂样品需要结合其他分析方法进行确定。
TLC的样品制备和染色方法
在进行薄层色谱之前，样品需要经过适当的制备处理，如溶解、浓缩和纯化， 并进行染色以便观察分离效果。
实验操作技巧和注意事项
• 保持实验环境清洁，避免杂质对试验结果的干扰。 • 准确控制溶剂的流动速度和温度，以获得可靠的分离和定性分析。 • 在解释结果时要考虑实验条件和其他可能影响的因素，以获得准确有效的结论。
体内药物分析薄层色谱法
体内药物分析薄层色谱法是一种常用的分析技术，通过薄层色谱纸上的化学 反应与样品分离，实现对药物成分的定性和定量分析。
什么是薄层色谱法？
薄层色谱法是一种分离技术，通过固定相（薄层色谱板）和移动相（溶剂）的相互作用，实现对物质混 合物中成分的分离和ayer Chromatography）技术基于不同物质在固定相上的亲 疏水性差异，利用游离和吸附作用原理实现物质的分离。
TLC的步骤
1
样品预处理
样品必须充分溶解并去除不需要的杂质，以获得准确的分离和识别结果。
2
样品施加
将待分析的样品分子施加在薄层色谱板上的固定相区域，通常使用微量注射器或 标准样品施加方法。
3
运移过程
将带有样品施加的薄层色谱板放入移动相中，待溶剂沿薄层色谱板上升，并在固 定相上分离样品。
TLC在药物分析中的应用
成分鉴定
薄层色谱法可用于药物中成分的鉴定，帮助确定药物的质量和效力。
含量测定
通过标准曲线法，薄层色谱法可用于测定药物中活性成分的含量。
控制质量
薄层色谱法可用于检测药物制剂中的杂质和未反应原料，确保药物的质量和安全性。
TLC的优点和限制
1 优点
薄层色谱法实验报告
1. 掌握薄层色谱的基本原理。
2. 熟悉薄层色谱的操作步骤。
3. 学会利用薄层色谱法分离和鉴定有机化合物。
二、实验原理薄层色谱法（Thin Layer Chromatography，简称TLC）是一种用于分离和鉴定混合物中各组分的层析技术。
其原理基于混合物中各组分在固定相（吸附剂）和流动相（展开剂）中的分配系数不同。
当混合物在薄层板上展开时，各组分会在板上形成不同的斑点，从而实现分离。
在薄层色谱中，固定相通常为吸附剂，如硅胶、氧化铝或纤维素。
展开剂则是一种液体或气体，用于携带混合物在固定相上移动。
当展开剂流过固定相时，混合物中的各组分会发生吸附、解吸和再分配的过程，导致不同组分在固定相上的移动速度不同，从而实现分离。
三、实验仪器与药品1. 仪器：- 薄层板（硅胶板）- 展开剂（正己烷、乙酸乙酯、甲醇）- 层析缸- 毛细管- 点样器- 显色剂（如紫外灯、碘蒸气）2. 药品：- 有机混合物样品（如苯、甲苯、乙苯等）- 吸附剂（硅胶）- 溶剂（正己烷、乙酸乙酯、甲醇）1. 薄层板的制备：- 称取适量的硅胶，加入适量的水，搅拌均匀。
- 将混合物均匀涂布在玻璃板上，厚度约为0.2-0.3mm。
- 将涂布好的玻璃板在105℃下烘烤1小时，取出备用。
2. 点样：- 用毛细管吸取少量样品，在薄层板下端约2cm处轻轻点样。
- 点样后，用铅笔在点样位置画一个圈作为原点。
3. 展开剂的选择与制备：- 根据待分离混合物的极性，选择合适的展开剂。
- 将展开剂倒入层析缸中，液面高度约为1-2cm。
4. 展开与显色：- 将薄层板放入层析缸中，盖好盖子。
- 待展开剂上升到薄层板顶部时，取出薄层板，晾干。
- 用紫外灯或碘蒸气对薄层板进行显色，观察各组分在薄层板上的位置。
5. 结果分析：- 计算各组分在薄层板上的比移值（Rf值）。
- 比较不同样品的Rf值，鉴定各组分。
五、实验结果与分析1. 薄层色谱图：- 从薄层色谱图上可以看出，混合物中的各组分在薄层板上形成了不同的斑点，实现了分离。
薄层色谱法(TLC)
cm×20cm、20 cm×20cm
1.1.2薄层板的自制方法：
1、初步溶解CMC钠盐（0.5%-0.8%）
2、恒温再次溶解
3、离心或抽滤（取上清液）
4、溶解硅胶（1:3）注：超声溶解。
5、涂布
6、晾干活化
2、固定相：
最常用固定相： ⑴硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254； ⑵氧化铝； ⑶硅澡土； ⑷纤维素等。
风的热风吹干或放入干燥器里晾干。
展开
• 以直立展开为多
• 展开剂用量：展开后仍留有三分之二以上
体积为宜；浸入展开剂的深度以距原点
0.5cm为宜；
• 展开距离：8-15cm
• 溶剂蒸气预饱和：15-30分钟
展开系统的饱和
• 一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放 展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待 展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖 上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展 开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防 止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。 展开时难免要打开盖子把薄层板放入展开 剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影 响不大，当然动作应该尽量轻、快
压缩气体可使试剂呈均匀细雾状喷出
• 浸渍显色
• 蒸气熏蒸显色
显色剂的要求：
⑴至少可以把微克级的被分离物质显示出来；
⑵能给出一个确定的显示区域；
⑶显示区域有一定的稳定 性。
显色剂可以分成两大类：
• 一类是检查一般有机化合物的通用显色剂；
• 另一类是根据化合物分类或特殊官能团设
计的专属性显色剂。
常用通用显色剂
吸附剂：直径10-40μ m
黏合剂：0.2%-0.5%羧甲基纤维素钠、10%-15%煅石膏、淀粉、 有机高分子聚合物、特殊要求可用缓冲液、稀碱液等。
薄层色谱法注意事项
3
点样
圆点点样直径为2～3mm，（高效薄层 板一般不大于2mm），点间距离可视斑 点扩散情况以不影响检出为宜，一般为 1.0～2.0cm .点样基线距底边10 ～ 15mm.
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点样
尽量用小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。这样， 点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品溶液的含水量越 小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无 水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或 放入干燥器里晾干。 薄层色谱用于定量时，点样是最主要的误差来源。 供试液的溶剂均有不同程度的洗脱力，所以在点样的同时，样品在原点就 可是成环形展开，原点直径的扩散促进了这种展开，Kaiser称之为“上样 环形色谱效应”。如果样品在溶剂中的溶解度很大，原点将变成空心环。 这种效应对随后的先行展开造成很不利的影响。 供试液的溶剂在原点的 残留，也会改变展开的选择性，特别是供试液的溶剂与展开剂的极性相差 较大时更明显。再者，亲水性溶剂残留在原点吸收大气中的水分（特别在 高湿度环境）对色谱的影响也不可低估。因此点样时的同步干燥或继后干 燥以除去原点残存的溶剂是需要的。但应尽可能避免高温加热，如用吹风 筒加热，样品变为固态后，部分或全部强烈的吸附在吸附剂的颗粒上，而 促进了硅胶的有催化作用的活性表面故态化学反应，导致样品的变性（尤 其热不稳定物质），至少移动相在展开时对这部分样品的溶解速度比移动 速度慢得多而形成拖尾（斑点拖尾的原因之一）。
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展开系统的饱和
一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放展开剂， 另一槽可加入氨水或硫酸。把待展开的板放入两槽 间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子。让展开剂 的蒸气充满展开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和， 防止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。展开时 难免要打开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄 层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该尽 量轻、快。
薄层色谱分离试验指导
薄层色谱分离试验指导一、实验目的1、了解薄层色谱法分离有机物的方法。
2、掌握薄层色谱法的实验操作技术。
二、基本原理薄层色谱法是将固定相吸附剂均匀地涂在玻璃板上制成薄层板，试样中的各组分在固定相和作为展开剂的流动相之间不断地发生溶解、吸附、再溶解、再吸附的分配过程。
不同物质上升的距离不同而形成彼此分开的斑点从而达到分离。
薄层色谱可分为吸附薄层色谱（以硅胶氧化铝等吸附剂）、分配薄层色谱（用硅藻土和纤维素等）和离子交换薄层色谱。
薄层色谱是近年来发展起来的一种微量、简单并能快速分离和定性分析少量物质的色谱法，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。
适用于少量样品（几到几十微克，甚至0.01μg）的分离；若在制作薄层板时，把吸附层加厚，将样品点成一条线，则可分离多达500mg的样品。
因此又可用来精制样品。
故此法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。
此外，在进行化学反应时，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。
基本操作过程（1）根据被分离物质的性质选择吸附剂，最常用的是硅胶和氧化铝，其次是纤维素、硅藻土、聚酰胺等；（2）薄层板的制备；（3）点样；（4）展开；（5）显色，Rf值计算。
三、具体操作1、选择吸附剂（1）硅胶：微酸性极性固定相，适用于酸性、中性物质分离（可制备成酸性不同或碱性硅胶扩大使用范围）。
（2）氧化铝：碱性极性固定相，适用于碱性、中性物质分离（可制备成中性或酸性氧化铝扩大使用范围）。
（3）纤维素：含有羟基的极性固定相，适用于分类亲水性物质。
（4）聚酰胺：含有酰胺基极性固定相，适用于酚类、醇类化合物的分离。
最常用的吸附剂是硅胶G（含有煅石膏作黏合剂）、硅胶H（不黏合剂或其他添加剂）、硅胶HF 254（含有荧光剂，可在254nm 紫外光下观察）、硅胶GF254（含有煅石膏和荧光剂），其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。
薄层色谱分析步骤及注意事项
薄层色谱分析步骤及注意事项薄层色谱法(thin layer chromatography简写TLC)是物理化学的分离技术，常用于药物的分离与分析现对此方法的分析步骤及注意事项提点建议。
薄层色谱分析步骤完成TLC分析通常需经制板、点样、展开、检出4步操作。
⑴制板在一平面支持物(通常玻璃)上，均匀地涂制硅胶、氧化铝或其他吸附剂薄层、样品的分离、检测就在此薄层色谱板上进行。
一般选用适当规格的表面光滑平整的玻璃板。
常用的薄层板规格有：10cm×20cm、5cm ×20cm、20cm×20cm等。
称取适量硅胶，加入0.2％～0.5%羧甲基纤维素钠溶液（CMC-Na），充分搅拌均匀，进行制板。
一般来说10cm×20cm的玻璃板，3～5g硅胶/块；硅胶与羧甲基纤维素钠的比例一般为1：2～1：4。
制好的玻璃板放于水平台上，注意防尘。
在空气中自然干燥后，置1l0℃烘箱中烘0.5～lh，取出，放凉，并将其放于紫外光灯(254nm)下检视，薄层板应无花斑、水印，方可备用。
⑵点样用微量进样器进行点样。
点样，先用铅笔在层析上距末端lcm 处轻轻画一横线，然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样，如果要重新点样，一定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点样，以免点样斑点过。
一般斑点直径大于2mm，不宜超过5mm.底线距基线1～2．5cm，点间距离为lcm左右，样点与玻璃边缘距离至少lcm，为防止边缘效应，可将薄层板两边刮去1～2cm，再进行点样。
⑶展开将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中，由于毛细管作用，展开溶剂在薄层板上缓慢前进，前进至一定距离后，取出薄层板，样品组分固移动速度不同而彼此分离。
①展开室应预饱和。
为达到饱和效果，可在室中加入足够量的展开剂；或者在壁上贴两条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖。
②展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂，并且临用时新配为宜。
③薄层板点样后，应待溶剂挥发完，再放人展开室中展开。
薄层色谱法操作步骤及注意事项
薄层色谱法操作步骤及注意事项嘿，咱今儿就来聊聊这薄层色谱法！这玩意儿可有意思啦，就像是一场小小的实验冒险。
先说说操作步骤哈。
你得准备好那薄如蝉翼的层析板，这就好比是冒险的舞台。
然后呢，把样品小心翼翼地配好，就像给舞台上的主角化好妆。
接着，用那细细的毛细管或者微量注射器，把样品轻轻地点在层析板上，可别太用力啦，不然就把舞台给戳破咯！点好样后，把层析板放进那装着展开剂的层析缸里，看着展开剂慢慢地往上爬，就像看着主角在舞台上慢慢展现风采。
等展开到合适的位置，赶紧把层析板拿出来，让它晾干或者烘干。
嘿，这不，一幅漂亮的图谱就出来啦，就像主角完成了一场精彩的表演！那注意事项可不少呢！你想啊，要是不注意，这表演不就搞砸啦？首先呢，层析板得选好，质量差的可不行，那不是给表演添乱嘛！然后，样品的浓度可要把握好，太浓了就像化了个大花脸，太淡了又看不出来，这可得拿捏准咯！展开剂也很关键呀，得选对适合的，不然怎么能让主角好好发挥呢？还有啊，操作的时候要轻手轻脚的，别毛手毛脚把一切都搞乱了。
在这个过程中，就像烹饪一道美味佳肴，每个环节都不能马虎。
你要是不小心在点样的时候手抖了一下，哎呀，那图谱可能就不那么完美啦！就像做菜时盐放多了一样。
又或者展开剂没选对，那图谱就可能变得乱七八糟，好比做出来的菜味道怪怪的。
所以呀，每一步都得认真对待，可不能敷衍了事哟！咱再想想，这薄层色谱法不就像是人生的一场小旅途嘛！每一步都要走得稳稳当当，注意着各种细节，才能欣赏到最美的风景。
要是粗心大意，那可能就会错过很多精彩呢！总之呢，薄层色谱法看似简单，实则暗藏玄机。
只有用心去体会，认真去操作，才能让它发挥出最大的作用。
可别小瞧了它哟，它能帮我们解决很多问题呢！大家都好好去试试吧，相信你们会爱上这个小小的实验冒险的！。
薄层板,跑版注意事项
薄层色谱法-——跑板1.点样用微量进样器进行点样。
点样前,先用铅笔在层析上距末端2cm 处轻轻画一横线，然后用毛细管吸取样液在横线上轻轻点样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。
如果要重新点样，一定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点样（用电吹风的热风吹干再点），以免点样斑点过大.一般斑点直径大于2mm，不宜超过5mm.点好样的薄层板用电吹风的热风吹干。
底线距基线1~2．5cm，点间距离为lcm左右，样点与玻璃边缘距离至少lcm，为防止边缘效应，2.展开将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中，由于毛细管作用,展开溶剂在薄层板上缓慢前进，前进至一定距离后,取出薄层板，样品组分固移动速度不同而彼此分离。
①展开室应预饱和.为达到饱和效果,可在室中加入足够量的展开剂，密封室顶的盖.②展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂，并且临用时新配为宜。
强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。
绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。
混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。
各组成溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度，比如:取1ml的溶剂，应使用1ml 的单标移液管，③薄层板点样后，应待溶剂挥发完，再放人展开室中展开。
④展开应密闭，展距一般为8～15cm。
薄层板放入展开室时,展开剂不能没过样点.一般情况下，展开剂浸入薄层下端的高度不宜超过0。
5cm。
⑤展开剂每次展开后，都需要更换，不能重复使用.（展开缸中得展开剂弃去，密封在容量瓶中得展开剂可在当天使用）⑥展开后的薄层板用适当的方法，使溶剂挥发完全,然后进行检视。
⑦Rf值一般控制在0。
3~0。
8,当Rf值很大或很小时，应适当改变流动相的比例。
3。
斑点的检出展开后的薄层板经过干燥后，常用紫外光灯照射或用显色剂显色检出斑点。
对于无色组分，在用显色剂时，显色剂喷洒要均匀，量要适度。
薄层色谱操作流程注意事项
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1. 制备薄层板。
使用洁净的玻璃板或铝箔板，厚约 0.25-0.50mm。
薄层色谱注意事项
薄层色谱注意事项
薄层色谱是一种常用的分离和分析技术，但在使用过程中需要注意以下几点：
1. 薄层板的选择：不同的薄层板材料和厚度适用于不同的分析目的，应根据实验要求选择适当的薄层板。
2. 样品的制备：样品的制备要求纯度高、溶解度适宜、浓度适中，样品沉淀或悬浮物应去除。
3. 样品施加量：样品施加量不宜过多，一般为2-5μL，避免施加过量导致结果失真。
4. 开始实验前的预处理：薄层板应先蒸发干燥，同时保持操作环境干燥，以避免水汽和污染物对实验结果的干扰。
5. 显色剂的使用：显色剂的选择应与样品性质匹配，显色后应立即照相或测量和记录扫描结果。
6. 扫描条件的选择：扫描条件的选择应根据样品性质、显色剂和仪器的特点选择适当的条件，以获得最佳的扫描结果。
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温湿度的控制
温湿度的控制 温湿度对薄层影响都很大。 不冻结的前提下，通常温度越低分离越 好，较难的分离需在低温下分离，例如 人参皂苷。湿度的影响，估计主要是影 响薄层板的吸附能力，导致选择性（容 量因子）的变化，湿度应根据实际情况 确定。温度控制使用空调器或冰柜，湿 度控制是通过在另一展开槽放置相应浓 度的硫酸。
薄层色谱法检验注意事项
定义
薄层色谱法系指以适宜的固定相涂布于玻璃 板、铝箔片或聚酯薄膜上使成一均匀的薄层， 将供试品与相应的对照物点于薄层板的一端， 以适宜的溶剂置展开容器内展开，使供试品 所含的相应成分分离,采用适宜的显色剂或显 色方法显色，将供试品色谱与对照物色谱相 比较，或采用薄层扫描仪扫描，以进行鉴别、 检查或含量测定的方法。
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展开
浸入展开剂的深度为距原点5mm(切 勿将样点浸入展开剂中)，上行展距一 般为8～15cm，高效板上行展距为5～
8cm. 若展距过长，各个物质的分离更大，能够 提高分离效果。但是斑点的扩散也更大， 影响了斑点的集中。
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展开剂的配置
选择合适的量器把各组成溶剂移入分液 漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放 置，如果分层，取用体积大的一层作为 展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入 展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。混 合不均匀和没有分液的展开剂，会造成 层析的完全失败。各组成溶剂的比例准 确度对不同的分析任务有不同的要求，
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展开系统的饱和
一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放展开剂， 另一槽可加入氨水或硫酸。把待展开的板放入两槽 间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子。让展开剂 的蒸气充满展开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和， 防止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。展开时 难免要打开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄 层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该尽 量轻、快。
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薄层扫描法——定义
系指用一定波长的光照射在薄层板上， 对薄层色谱中可吸收紫外光或可见光的 斑点，或经激发后能发射荧光的斑点进 行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据 用于药品的鉴别、检查或含量测定的方 法。
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薄层扫描法——供试品制备和点样
供试品溶液至少制备2份，,供试品 溶液和对照品溶液应交叉点于同一 薄层色谱板上,供试品点样不得少 于2个,对照品溶液每一浓度不得少 于2个。
3
点样
圆点点样直径为2～3mm，（高效薄层 板一般不大于2mm），点间距离可视斑 点扩散情况以不影响检出为宜，一般为 1.0～2.0cm .点样基线距底边10 ～ 15mm.
4
点样
尽量用小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。这样， 点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品溶液的含水量越 小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无 水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或 放入干燥器里晾干。 薄层色谱用于定量时，点样是最主要的误差来源。 供试液的溶剂均有不同程度的洗脱力，所以在点样的同时，样品在原点就 可是成环形展开，原点直径的扩散促进了这种展开，Kaiser称之为“上样 环形色谱效应”。如果样品在溶剂中的溶解度很大，原点将变成空心环。 这种效应对随后的先行展开造成很不利的影响。 供试液的溶剂在原点的 残留，也会改变展开的选择性，特别是供试液的溶剂与展开剂的极性相差 较大时更明显。再者，亲水性溶剂残留在原点吸收大气中的水分（特别在 高湿度环境）对色谱的影响也不可低估。因此点样时的同步干燥或继后干 燥以除去原点残存的溶剂是需要的。但应尽可能避免高温加热，如用吹风 筒加热，样品变为固态后，部分或全部强烈的吸附在吸附剂的颗粒上，而 促进了硅胶的有催化作用的活性表面故态化学反应，导致样品的变性（尤 其热不稳定物质），至少移动相在展开时对这部分样品的溶解速度比移动 速度慢得多而形成拖尾（斑点拖尾的原因之一）。
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薄层扫描法——点样
根据实际情况，可调整供试品溶液与 对照品溶液的点样量，以便测定。 待测成分斑点与相邻斑点的分离度至 少在1.0以上，背景干扰尽量小。
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以上介绍供参考！
谢谢！
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薄层板的制备
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
将1份固定相和3份水(或加有黏合剂如0.2～ 0.5%羧甲基纤维素钠水溶液)在研钵中向同一方 向研磨混合,去除表面的气泡后,倒入准备好的玻 璃板上,用洁净玻棒涂铺成一个均匀的薄层,再稍 加振动,使整板薄层均匀。
0.2～0.5%羧甲基纤维素钠溶液:称取2—5g羧甲基纤维 素钠,加1升水煮沸溶解,过滤, 静置，用时取上清液。 110℃活化30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。