薄层色谱
色谱学 第三章 薄层色谱
在吸附色谱过程中，溶质、溶剂和吸附剂三 者是相互联系而又相互竞争的，如此构成了 整个层析分离过程 。 在薄层吸附色谱过程中，主要为物理吸附， 无选择性。因之吸附剂与多元组分溶液接触 时，一方面任何溶质都可被吸附（当然单位 重量吸附剂所能吸附物质的量，即“吸附量” 会因物质种类而异），另一方面，吸附剂也 可吸附流动相分子。由于物理吸附是可逆的， 故被吸附的分子同时也可被解吸出来。
偶氮染料 偶氮苯 对甲氧基偶氮苯 苏丹黄 苏丹红 对氨基偶氮苯 对羟基偶氮苯
Ⅱ 0.61 0.28 0.18 0.11 0.04 0.01
表3-2 硅胶活度分级法 Rf Ⅲ Ⅳ 0.70 0.83 0.43 0.67 0.30 0.53 0.13 0.40 0.07 0.20 0.01 0.07
除上二种外，还有其他一些吸附剂。吸附剂品种如下： （1）硅胶：薄层色谱用为200~250目粒度，规格很多，一般如有石膏作粘 结剂，称硅胶G；石膏含量为5~20%，一般为10~13%，亦有用淀粉作粘 结剂的，称硅胶S，不加粘结剂者称硅胶H或硅胶N，为了便于观察组分的 斑点，也可在硅胶中加入荧光指示剂。如果又加有粘结剂时，则称为硅胶 GF或硅胶GF254，即吸收254nm紫外光。 （2）氧化铝：根据加有粘结剂情况不同，有H、G、HF、GF等品种。 （3）硅镁吸附剂：即费罗里硅土，使用前要在130℃下活化二小时。 （4）纤维素：长度仅为2~20微米的短纤维，分天然纤维和微晶纤维两种 形式，也可加粘合剂、一般用于亲水性物质的分离，如羟基化物等，但缺 点为不能用浓硫酸等腐蚀性溶剂进行显色。 （5）聚酰胺：这是一种使用广泛的有机吸附剂，多用于分离酚类化合物， 样品容量大，但粘结能力差，可加入纤维素或淀粉作粘结剂。 （6）烧结薄层板：这是一种多次使用的薄层板，是由200~300目石英或玻 璃粉，与200~300目硅胶或氧化铝按1：25重量混合，用乙醇调成浆料，涂 在玻璃板上。0.25~0.3毫米厚，然后在700~780℃高温下烧结，即成烧结板。 烧结板用一次后可用乙醇或其它有机溶剂洗涤，最后用水洗干净后烘干再 继续使用。
薄层色谱分析主要影响因素
薄层色谱分析主要影响因素薄层色谱（Thin Layer Chromatography，TLC）是一种常用的色谱技术，用于分离、鉴定和定量分析化学物质。
薄层色谱分析的主要影响因素包括色谱载体、流动相、样品溶液、色谱发展条件和检测方法等方面。
1.色谱载体：色谱载体是薄层色谱分析中的关键参数，它对分离性能和分析效果起着重要作用。
常用的薄层色谱载体包括硅胶、氧化铝和聚甲基丙烯酸酯等。
不同类型的载体具有不同的极性和吸附性质，对样品的分离能力和保留行为有所影响。
2.流动相：流动相是指在色谱过程中用于移动样品的溶剂系统。
选择合适的流动相可以有效地提高样品的吸附性能和分离效果。
流动相的组成和性质是影响色谱分离的关键因素，其pH值、溶剂极性和添加剂的类型与浓度等都会对分离效果产生影响。
3.样品溶液：样品的溶解性和浓度对薄层色谱的分析结果也有重要影响。
溶液的选择要根据目标化合物的极性和溶解性来确定，应尽量使样品溶解度高、稳定性好，避免出现沉淀和聚集现象。
此外，样品的浓度也会对分离效果和检测灵敏度产生影响。
4.色谱发展条件：色谱发展条件包括色谱层厚、溶剂的饱和度、发展时间和温度等因素。
色谱层厚的选择要根据目标化合物的性质和分析要求来确定，一般在0.1-0.25mm之间。
溶剂的饱和度和发展时间要适当控制，过度或不足都会对分离效果产生不良影响。
温度因素是影响分离的重要参数之一，合适的温度能加速色谱发展速度和提高分离效果。
5.检测方法：综上所述，薄层色谱分析的主要影响因素包括色谱载体、流动相、样品溶液、色谱发展条件和检测方法等。
研究者在进行薄层色谱分析时，需要合理选择上述参数，以获得准确、可靠的分析结果。
薄层色谱
表 1 一些常用的显色剂
显色剂
配制方法
检出对象
浓硫酸
10%H2SO4
大多数有机化合物在加热后可显 出黑色斑点
碘蒸气
将薄层板放入缸内被碘蒸气饱和数 很多有机化合物显黄棕色
分钟
碘的氯仿溶液
0.5%碘的氯仿溶液
同上
5%磷钼酸乙醇溶液，喷后 120℃烘
硝酸铈铵
6%硝酸铈铵的 2mol／L 硝酸溶液 显色剂，多元醇在黄色底色上有
棕黄色斑点
香兰素-硫酸
3g 香兰素溶于 100mL 乙醇中，再加 高级醇及酮呈绿色
入 0.5mL 浓硫酸
茚三酮
0.3g 茚三酮溶于 100mL 乙醇，喷 氨基酸、胺、氨基糖
后,110℃热至斑点出现
东北师范大学化学学院综合化学实验学习资料
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了荧光）。也可将展开完毕的薄 层板烘干后用显色剂喷雾显色。常用的显色剂有碘和三氯化铁水溶液等。许多有机化合物能 与碘生成棕色或黄色的络合物，利用这一性质，在一密闭容器中（一般用展开缸即可）放几 粒碘，将展开并干燥的薄层板放入其中，稍稍加热，让碘升华，当样品与碘蒸气反应后，薄 层板上的样品点处即可显示出黄色或棕色斑点。除饱和烃和卤代烃外，均可采用此方法。
有关，其活性随含水量的增加而下降。活化温度：硅胶板于烘箱中逐渐升温至 105～110℃ 烘 30min；氧化铝板于 150～160℃烘 4h。活化后的薄层板放在干燥器内保存备用。
（3）点样 在距薄层板底端 8~10mm 处，划一条线，作为起点线。用毛细管（内径小于 1mm）吸 取样品溶液（一般以氯仿、丙酮、甲醇、乙醇、苯、乙醚或四氯化碳等作溶剂，配成 1%溶 液），垂直轻轻地接触到薄层的起点线上。如溶液太稀，一次点样不够，第一次点样干后， 再点第二次、第三次，多次点样时，每次点样都应点在同一圆心上。点样次数依样品溶液浓 度而定，一般为 2~5 次。若样品量太少时，有的成分不易显出；若量太多时易造成斑点过大， 互相交叉或拖尾，不能得到很好的分离。点样后的斑点直径以扩散成 1~2mm 圆点为度。若 为多处点样时，则样点间距为 1~1.5cm。 （4）展开 薄层的展开需在密闭的容器中进行。先将选择的展开剂放在层析缸中，使层析缸内的空 气饱和 5~10min，再将点好试样的薄层板放入层析缸中进行展开。样点的位置必须在展开剂 液面之上。当展开剂上升到薄层的前沿（离顶端 5~10mm）或各组分已明显分开时，取出薄 层板，立即用铅笔或小针划出溶剂前沿的位置，晾干或烘干后即可显色。根据标样对照或 Rf 值的不同对各组分进行鉴定。 展开剂的选择主要是根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来综合考虑。溶剂 的极性越大，则对化合物的洗脱力越大，即 Rf 值也越大。如发现样品各组分的 R f 值 较大， 可考虑换用一种极性较小的溶剂，或在原来的溶剂中加入适量极性较小的溶剂展开，如原用 氯仿为展开剂，则可加入适量的苯。相反，如原用展开剂使样品各组分的 R f 值较小，则可 加入适量极性较大的溶剂，如氯仿中加入适量的乙醇试行展开，以达到分离的目的。 （5）显色 展开完毕，取出薄层板, 划出前沿线，如果化合物本身有颜色, 就可直接观察它的斑点。 如果本身无色，可用显色剂法或紫外光照射法显色。用硅胶 GF254 制成的薄板层，由于加入
薄层色谱
和颜色的深浅，并与标准品在相同条件下展开所得 到的一系列已知不同浓度的标准斑点相比较，而近 似地判断样品中所测成分的含量。 2 测面积法
展开后色谱上的斑点面积与化合物含量间，符 合一定的线性关系。 3 仪器测定法
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3 仪器测定法
用光密度计或称薄层扫描仪（TLC Scanner）扫描定量， 该方法已成为薄层定量的主要方法。 1.吸收测定法
相对比移值，即相对于某一物质x的Rf值，用Rx 表示。 其定义为：Rx＝组分的Rf值／物质x的Rf值 组分A相对于物质B的“相对比移值” RB =a/b
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三.薄层色谱的操作
吸附剂的选择 薄层板的制作 展开剂的选择 点样 展开 定位与显色 薄层层析的定量测定
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(一) 薄层层析用的吸附剂
常用的薄层层析吸附剂有硅胶、氧化铝、纤 维素、聚酰胺等。
吸附剂的选择：首先决定于样品成分的性质， 即它们的溶解性、酸碱性、极性以及是否与 吸附剂起化学反应等；
其次要考虑吸附剂、载体是否容易得到及其 价格等。
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(二) 薄层板的制作
层析板是用专门的涂布器把浆状的吸附剂（纸浆、纤维素、硅胶、 中性氧化物、聚酰胺、多孔性玻璃粉，硅烷化键合硅胶等）均匀 地涂在在薄层板（玻璃板、金属板或弹性塑料板）上，干燥 （110℃活化）后即可使用。
2.点样量
点样量的多少与薄层的性能、厚薄及显色剂的 灵敏度有关。一般来说，样品量最小为几ng，常用 量为几至几十µg，制备型的分离可以点样到mg量。 总之点样量随分离目的而定。
3.点样方式 最好是直径3—5mm的圆点。
常用的点样方式
a 一般点样 b 径向点样 c 条状点样 d 线形小孔点样
薄层色谱
实验二十薄层色谱一、实验目的1、学习薄层色谱法的原理和方法；2、掌握比移值的计算方法；3、了解比移值的影响因素。
二、实验原理薄层色谱(thin layer chromatography)常用TLC表示，依其所采用的薄层材料性质和物理、化学原理的不同，可分为吸附薄层色谱、分配薄层色谱、离子交换薄层色谱和排阻薄层色谱等。
吸附薄层色谱采用硅胶、氧化铝等吸附剂铺成薄层，将样品以毛细管点在原点处，用移动的展开剂将溶质解吸，解吸出来的溶质随着展开剂向前移动，遇到新的吸附剂，溶质又会被吸附，新到的展开剂又会将其解吸，经过多次的解吸-吸附-解吸的过程，溶质就会随着展开剂移动。
吸附力强的溶质随展开剂移动慢，吸附力弱的溶质随展开剂移动快，这样不同的组分在薄层板上就得以分离。
一个化合物在吸附剂上移动的距离与展开剂在吸附剂上移动的距离的比值称为该化合物比移值R f展开剂是影响色谱分离度的重要因素。
一般来说，展开剂的极性越大，对特定化合物的洗脱能力也越大，一般常用展开剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油醚<己烷<甲苯<苯<氯仿<乙醚<THF<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇<水<乙酸。
三、主要试剂和材料邻硝基苯胺对硝基苯胺薄层层析硅胶G 薄玻璃板乙酸乙酯石油醚 0.5%羧甲基纤维钠(CMC-Na)水溶液毛细管(内径小于1mm)四、实验装置五、实验步骤【操作要点及注意事项】1、调浆时要将硅胶加到CMC-Na中，以免生成太多的团块,浆液要有一定的流动性，稠度以能沿玻棒成细线性下滴为宜。
2、铺板时一定要铺匀，特别是边、角部分，晾干时要放在平整的地方。
3、点样时点要细，直径不要大于2mm,间隔0.5cm以上，浓度不可过大，以免出现拖尾、混杂现象。
4、展开用的烧杯要洗净烘干，放入板之前，要先加展开剂，盖上表面皿，让烧杯内形成一定的蒸气压。
点样的一端要浸入展开剂0.5cm以上,但展开剂不可没过样品原点。
薄层色谱的原理
薄层色谱的原理
薄层色谱（thin layer chromatography，TLC）是一种常用的色谱技术，其原理基于化合物在静止相（固定在玻璃或塑料基底上）和流动相（液体或气体）之间的分配行为。
利用该分配行为，可以将不同的化合物分离并检测。
在薄层色谱中，首先需要准备一层薄的静止相涂覆在玻璃或塑料基底上，这层涂层通常是硅胶或氧化铝。
准备好的薄板即为薄层色谱板。
然后将待分离的混合物溶解在流动相中，流动相通常是有机溶剂或混合溶液。
接下来，将薄层色谱板浸入流动相中，使浸湿并等待流动相上升。
当流动相从底部向上渗透时，化合物会根据其亲水性或亲油性在静止相和流动相之间发生分配。
亲水性较强的化合物会更多地留在静止相中，而亲油性较强的化合物则会随流动相上升。
这样，不同化合物在薄层色谱板上会形成不同的斑点。
为了可视化这些斑点，通常会使用染料或化学试剂对化合物进行标记。
染料或化学试剂与化合物发生反应后，能产生明显的色斑或荧光。
通过比较样品中斑点的相对位置、颜色或荧光强度，可以对待分离的化合物进行鉴定。
薄层色谱因其简便、快速且经济的特点，在实验室常用于药物分析、有机合成、食品检测、环境监测等领域。
它不仅可以用于分离化合物，还可以确定某一物质的纯度、判断反应的进行以及监测反应的过程。
它是一种常用的分离和分析工具，广泛应用于化学、生物化学和药学等领域。
薄层色谱名词解释
薄层色谱名词解释薄层色谱（Thin-Layer Chromatography，简称TLC）是一种分离、鉴定和质量检测分子间差别的实验技术，是按照分子大小、结合强弱及极性差异来分离和鉴定有机物质的一种实验技术，是现代分析实验中经常所用的一种为主的技术。
一、基本原理薄层色谱是一种浸透分析方法，它利用分子结合性大小和极性的差异，使混合物在固体涂布的表面中分离。
它是将样品淋到固定相（薄层沉积物）上，集中并在表面形成握样带，然后溶剂沿固定相传播和扩散，物质磁通的距离随着溶剂的运动而不断增加而发生分离，形成多条相峰，且每种物质出现的位置不同，因此可以用来鉴定其组成及监测已知物质在混杂物中的含量。
二、相关仪器薄层色谱所使用的关键仪器包括色谱柜、柜内溶剂槽、棉球、料筒、制备紫外线的拉曼管、微波辐照仪等。
其中，色谱柜用于分离混合物；柜内溶剂槽用于储存溶剂，一般选用四甲基橡皮筋或过滤纸固定；棉球可以帮助溶剂从料筒释放；料筒用来储存混合物；拉曼管可以用来制备紫外线用来无刺激地检测样品；微波辐照仪可以使混合物在固体表面样品重新分离。
三、步骤（1）准备固体涂布溶剂：取一定体积的固定相（例如硅胶、石英粉、均质膏），用溶剂在玻璃容器中调节，使其形成涂布液。
（2）涂布：在检测板上加入涂布液，使其稳定形成涂布，以便将混合物分离和拖提形成斑点。
（3）测试：将样品加在涂布板上，经过加热处理，取出产物后进行光学或电子观察。
（4）分析：分析各物质形成的斑点和拖提线之间的距离，用以检测混合物中物质的含量。
四、应用薄层色谱可以应用于天然产物、制药、食品、生物学等领域，可以用来检测毒素、除草剂、营养素、激素、抗生素，用于鉴定医药制剂中有效成份、白蛋白活性型/氧化型分析、杂质检测，另外，还可以用来检测食品中的色素、添加剂等。
薄层色谱操作规程
薄层色谱操作规程
《薄层色谱操作规程》
一、实验目的
通过薄层色谱进行化合物分离和鉴定，掌握薄层色谱操作技术，提高实验操作能力。
二、实验仪器和试剂
1. 薄层色谱仪
2. 薄层色谱板
3. 色谱柱
4. 样品溶液
5. 各种溶剂
三、实验操作步骤
1. 准备薄层色谱板，标出样品点和色谱进样位置。
2. 准备好样品溶液，进行前处理工作，如筛选、过滤等。
3. 用吸头将样品溶液均匀地吸附在薄层色谱板上的样品点上，待干燥后再进行操作。
4. 将干燥后的薄层色谱板放置在色谱槽中，加入适量的色谱溶剂，使之在薄层色谱板上上升，直至触及顶部。
5. 将色谱板拿出，标记出色带位置，用紫外灯照射和标记，记录色带的长度和颜色。
6. 根据色带的长度和颜色，与标准色谱图对照，确定其成分。
7. 根据色带的长度和颜色，计算Rf值，并与标准值对照鉴定
成分。
四、注意事项
1. 操作过程中需轻拿轻放，避免薄层色谱板受损。
2. 使用各种溶剂时，要注意其挥发性和易燃性。
3. 色带观测和鉴定时，要在相应的波长下观察，如紫外灯波长254nm。
4. 操作结束后，要对薄层色谱仪进行清洁和维护。
通过《薄层色谱操作规程》的实验操作，可以掌握薄层色谱技术的基本操作流程，提高化合物分离和鉴定的能力。
薄层色谱的操作方法 薄层色谱操作规程
薄层色谱的操作方法薄层色谱操作规程薄层色谱是一种较新的色谱法，兼具柱色谱和纸色谱的优点，能快速分别和定性分析少量物质。
薄层色谱性能优异，操作也较简单。
1.选择吸附剂吸附剂一般要求直径为10～40m，需要依据被分别物质的性质选择，常用的吸附剂有以下几种。
硅胶：微酸性极性固定相，适用于酸性、中性物质分别氧化铝：碱性极性固定相，适用于碱性、中性物质分别纤维素：含有羟基的极性固定相，适用于分类亲水性物质。
聚酰胺：含有酰胺基极性固定相，适用于酚类、醇类化合物的分别。
2.制备薄层板薄层板的质量将决议分别的效果，应当尽量均匀且厚薄一致。
薄层板的制备紧要有两种方法：①将干净干燥的玻璃板置于铺板器中心，在铺板槽中倒入糊状物，自左向右推，将糊状物均匀地涂在玻璃板上。
②将调成糊状物倒在玻璃板上，或用角匙舀到玻璃板上，再用玻璃棒或角匙铺平并用手捏住玻璃板一角，轻轻碰敲桌面，使薄层表面均匀并除去糊状物中的气泡。
制备完成后还需要将涂好的薄层板水平放置于室温下晾干，然后放在烘箱内加热活化。
（硅胶板需在烘箱内渐渐升温至105—110度后保温30分钟；氧化铝板需在200—220度烘4小时）3.点样将待测样品溶在极性尽可能低的溶剂中配成1%的溶液。
用一支平口的细毛细管蘸取少量样品溶液点在薄板上。
4.打开薄层层析有多种打开方式，可分为上行、下行、双向打开等，这里介绍一下上行法和下行法。
上行法：在缸中加入充重量的打开剂，将点好样品的薄层板放入打开缸的打开剂中，密封缸盖，待展开前沿离薄板上端1cm时，取出薄层板，并用铅笔轻轻画下溶剂前沿，晾干。
下行法：在打开缸的盖子上装一个小钩，将打开的纸片钩住，并通过一滤纸条将展开剂和纸片连起来。
待打开剂前沿离纸片下端1cm时，取出纸片，并用铅笔轻轻画下溶剂前沿，晾干。
5.显色晾干薄板溶剂后对板上的组分进行定位。
将显色剂以喷雾方式直接喷到薄层板上可显示不同颜色的斑点。
此外对于无色样品，可接受带荧光剂的吸附剂做薄板，打开后在紫外光下显暗色斑点；对于在光学条件下不显色的物质，可将薄板置于含有少量碘晶体的密闭容器中，与碘作用呈棕色斑点。
薄层色谱(TLC)
薄层色谱薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又称薄层层析，属于固－液吸附色谱。
是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法。
它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微克）的分离；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大，将样品点成一条线，则可分离多达500mg的样品。
因此，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。
此外，在进行化学反应时，薄层色谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种“预试”，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。
一、基本原理色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能的不同，或和其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组份分开。
薄层色谱是一种微量、快速和简便的色谱方法。
由于各种化合物的极性不同，吸附能力不相同，在展开剂上移动，进行不同程度的解析，根据原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离，计算比移值（Rf）。
化合物的吸附能力与它们的极性成正比，具有较大极性的化合物吸附较强，因此Rf值较小。
在给定的条件下（吸附剂、展开剂、板层厚度等），化合物移动的距离和展开剂移动的距离之比是一定的，即Rf值是化合物的物理常数，其大小只与化合物本身的结构有关，因此可以根据Rf值鉴别化合物，薄层色谱可适用小量样品（几到几十微克甚至0.01μg）的分离：也可用于多达500mg样品的分离，是近代有机化学中用于定性，定量的一种重要手段。
特别适用于那些挥发性小的化合物，以及在高温下易发生化学变化而不能用气相色谱分析的物质。
二、实验基本流程铺板点样展开显色计算Rf值铺板取7.5x2.5cm左右的载玻片5片，洗净晾干。
在50mL烧杯中，放置3g硅胶G，逐渐加入0.5﹪羧甲基纤维素钠水溶液(CMC)8mL，调成均匀的糊状，涂于上述洁净的载玻片上，用手将带浆的玻片在水平的桌面上做上下轻微的颠动，制成薄厚均匀、表面光洁平整的薄层板，涂好的硅胶G的薄层板置于水平的玻璃板上，在室温放置0.5h后，放入烘箱中，缓慢升温至110℃，恒温0.5h 后取出，稍冷后置于干燥器中备用。
薄层色谱法
4.点样过程 确定点样位置
吸取点样溶液
点样。
a.用铅笔在距薄层底边1.5-2.0cm处画一条起始线，在起始线上作 好记号作为点样位置，每个位置之间的距离为1.0-1.5cm； b.用点样设备吸取一定量的溶液； c.于点样位置上的吸附剂轻轻接触，点样设备内的溶液就会自动被 其吸附，形成直径最好为2-4mm的圆点或宽度为5-10mm的条带，完 成一次点样。 注意：若需要在同一个位置多次点样，则每点一次，应带溶剂挥干 后再点下一次，避免斑点扩散；当一块薄层板上需点几个样品时， 点样设备不能混用。
薄层板上的斑点位置确定之后，可对物质进 行定性鉴别、杂质检查和含量测定。
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第三节 在药物分析中的应用
主要用于中药、化学药物、生物制品等的定 性鉴别、杂质检查、含量测定。
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一、在鉴别方面的应用
通常采用对照物比较法进行定性鉴别。在保证 各斑点分离度达到标准的前提下，如果样品的 Rf与对照物的Rf相同，则可认为该组分与对照 物为同一物质。 为了结果的准确可靠，应采用多种不同的展开 系统进行展开，如果所得到的Rf都与对照品一 致，则可认定两者是同一物质。
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锯齿扫描
(1)单波长扫描：使用一种波长的光线对薄 层进行扫描。 (2)双波长扫描：是采用两种不同波长的光 束先后扫描所要测定的斑点，并记录下此两 波长吸光度之差，可以消除薄层背景吸收的 干扰。
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化合物斑点的吸收光谱
单波长与双波长扫描曲线的比较
6.定量方法
2.仪器：光源、单色器、薄层板台、检测器、色谱工作站 3.测量方法：根据对光测定方式的不同，可分为三种
透射法：测量反射光的强度 反射法：测量透射光的强度
L 光源；MC 单色 器；P 薄层板； S 斑点； PD 光电 检测器
薄层色谱法
第二部分色谱分析第一章薄层色谱法（TLC）一薄层色谱法概述薄层色谱法是一种基于混合物组分在固定相和流动相之间的不均匀分配或保留而将其分离的方法。
与HPLC不同，TLC将固定相涂铺在栽板上，使之形成均匀的薄层。
被分离的样品溶液点加在薄层板下沿的位置，再把下沿向下放入盛有流动相（深度约5mm）的密闭缸中，进行色谱展开，实现混合组分分离。
被展开的组分斑点即色谱谱带，通过适当技术对色谱谱带进行处理可得到定性和定量的检测结果。
薄层色谱法具有技术比较简单，操作容易，分析速度快，高分辨能力，结果直观，不需昂贵仪器设备就可以分离较复杂混合物等特点。
二薄层色谱法中的薄层板、薄层板的涂铺、点样和展开（一）薄层板TLC分离的选择性主要取决于固定相的化学组成及其表面的化学性质。
可通过改变涂层材料的化学组成或对材料表面进行化学改性来实现改变薄层色谱分离的选择性。
此外，固定相的物理性质，如比表面积、比空容、平均孔径等也对其色谱行为产生影响。
（1）载体对TLC载体的基本要求为：机械强度好、化学惰性好（对溶剂、显色剂等）、耐一定温度、表面平整、厚度均匀、价格适宜。
（2）固定相TLC固定相包括改性固定相和未改性固定相两类。
硅胶和氧化铝是最常用的两种未改性固定相。
（3）粘合剂在制备薄层板时，一般需在吸附剂中加入适量粘合剂，其目的是使吸附剂颗粒之间相互粘附并使吸附剂薄层紧密的附着在载板上。
常用的粘合剂可分为无机粘合剂和有机粘合剂两类。
（4）荧光指示剂荧光指示剂是便于在薄层色谱图上对一些基本化合物斑点（无颜色斑点、无特征紫外吸收斑点）定位的试剂。
加入荧光指示剂后，可以使这些化合物斑点在激发光波照射下显出清晰的荧光，便于检测。
（二）薄层板的涂铺涂板方法可以分为涂布法、倾注法、喷洒法及浸渍法四类，其中涂布法是应用最广泛的涂板方法。
TLC固定相薄层涂铺大多采用湿法匀浆，要求薄层均匀、平整、无气泡、不易造成凹坑和龟裂。
薄层板活化处理可以获得适宜活性，提高色谱分离效率和选择性。
薄层色谱
薄层色谱，或称薄层层析（Thin-Layer Chromatography），是以涂布于支持板上的支持物作为固定相，以合适的溶剂为流动相，对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术，是一种快速分离诸如脂肪酸、类固醇、氨基酸、核苷酸、生物碱及其他多种物质的特别有效的层析方法。
薄层色谱法是一种微量、快速而简单的色谱法，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点。
一方面适用于小量样品（几到几十微克，甚至0.01μg）的分离；另一方面若在制作薄层板时，把吸附层加厚，将样品点成一条线，则可分离多达500mg的样品，因此又可用来精制样品。
因此，薄层色谱法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物资。
此外，在进行化学反应时，常利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。
在我国新推出的2010版药典中，降低了薄层色谱分析所占的比例，这似乎表明着薄层色谱分析方法将会逐渐被替代，但是在实际的工作中，薄层色谱法以其快速、简便的优势一直活跃在分析检测的一线，加上电动点样机和薄层扫描仪的出现，加快了点样和检测的速度和质量，使得这一技术在生产分析中起到了重要作用。
一、薄层色谱的分类1、常规薄层色谱TLC分离的选择性主要取决于固定相的化学组成及其表面的化学性质。
常规薄层色谱的固定相为未改性的硅胶、氧化铝、硅藻土、纤维素和聚酰胺等，平均颗粒度20μm，点样量1~5μL，展开时间30~200min，检测限1~5ng。
以正相色谱占主导地位，设备简单，所需资金投入少；不足之处是分离所需时间长，有明显的扩散效应。
2高效薄层色谱高效薄层色谱（HPTLC）采用更细、更均匀的改性硅胶和纤维素为固定相，对吸附剂进行疏水和亲水改性，可以实现正相和反相薄层色谱分离，提高了色谱的选择性。
C2、C8和C18化学键合硅胶板为常见反相薄层板。
高效板厚平均100~250μm、点样量0. 1~0. 2μL，展距3~6cm，展开时间3~20min，最小检测量0. 1~0. 5μg，较常规TLC可改善分离度，提高灵敏度和34重现性，适用于定量测定。
薄层色谱法的原理
薄层色谱法的原理
薄层色谱法是一种基于吸附作用的分离和纯化技术，其原理是根据化合物在高效吸附材料上的亲和性不同，通过在涂层在薄层状的基底上，由于不同物质对于固定相的亲和力、扩散速度等不同的影响，从而使样品分离出不同的成分。
其主要分离机制是通过涂层在薄层基底上的吸附效应，使样品中各成分间在固态载体上得到分离、富集和纯化的过程。
具体来说，薄层色谱的样品溶液滴于薄层板表面，待样品挥发后，以流动相为带动，并沿着固定相的吸附效应分离样品中的各组分。
在样品组分移动的过程中，移动速度越快，与涂层吸附的能力也越弱，所以分离程度越高；同时，结合了碘和紫外光的显色处理，可以明显地看到样品分离后的各组分。
因此，薄层色谱法的分离机理是基于各样品成分吸附在高效吸附材料的不同能力，而且吸附能力与溶剂有关，适用于非极性、微极性和极性物质的分离和检测。
它可以在分离效率高、分离时间短、简单方便以及样品损失小等方面显示出独特的优势。
薄层色谱层析的作用
薄层色谱层析的作用
薄层色谱层析（Thin Layer Chromatography, TLC）是一种常用的分离和分析技术，主要用于对混合物中各组分的分离和鉴定。
其作用如下：
1. 分离混合物中的各组分：薄层色谱层析可以将混合物中的各组分分离开来，使得每一个组分都能够在薄层色谱板上形成单独的色带。
这样就可以通过观察色带的位置、颜色和长度等特征，来确定混合物中各组分的存在及其相对含量。
2. 鉴定混合物中的化合物：通过对混合物中各组分的分离和鉴定，可以确定混合物中所含有的化合物种类及其结构。
这对于化学合成、药物研究、食品分析等领域都具有重要的意义。
3. 定量分析：薄层色谱层析还可以用于定量分析。
通过对同一混合物进行多次分析，并对结果进行比较和统计，可以得出各组分的相对含量，从而实现对混合物的定量分析。
总之，薄层色谱层析是一种非常有用的分离和分析技术，在化学、药学、食品科学等领域得到广泛应用。
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简述薄层色谱操作步骤。
简述薄层色谱操作步骤
薄层色谱（Thin Layer Chromatography，TLC）是一种常用的分离和鉴定化合物的方法。
以下是薄层色谱操作的简要步骤：
1. 制备薄层板：将硅胶、氧化铝等吸附剂与粘结剂混合均匀，涂布到玻璃、金属等基板上，制成薄层色谱板。
2. 点样：将待分离的混合物溶于适当的溶剂中，用微量移液器将样品溶液滴在薄层板上，吹干后，重复点样 2-3 次。
3. 展开：将点样后的薄层板放入密闭的层析槽中，下端浸入展开剂高度不超过 0.5cm。
展开距离一般为 10～15cm。
根据溶剂移动的方向，分为上行展开和下行展开。
4. 晾干：取出薄层板，晾干，使其易于显色。
5. 显色：用喷洒显色试剂或紫外光线照射的方法使被分离的化合物显色。
常见的显色试剂有碘蒸气、磷钼酸、紫外灯等。
6. 观察和分析：通过观察显色后的薄层板，可以分析化合物的分离情况。
根据 Rf 值（相对移动距离）比较各组分的相对含量。
7. 收集和鉴定：将分离后的化合物进行收集，可以通过复溶、浓缩等方法纯化化合物。
然后进行进一步的鉴定，如质谱、红外、核磁共振等。
需要注意的是，在操作过程中要严格控制实验条件，如温度、湿度、溶剂系统等，以获得较好的分离效果。
薄层色谱紫外光显色原理
薄层色谱紫外光显色原理薄层色谱（TLC）是一种常用的色谱技术，广泛用于化学分析和有机合成中，特别是用于化合物纯度和分离程度的快速评估。
紫外光显色是TLC中常用的检测方法之一，其原理基于化合物对紫外光的吸收特性。
在TLC中，样品分离在薄层板上的吸附剂上，通常为硅胶或氧化铝。
样品会在溶剂流动的作用下，根据其亲水性或亲油性的不同，沿着薄层板上移。
这种移动过程中，若要将化合物可视化，则需要使用染色剂或显色剂，其中紫外光显色是一种常见的方法。
紫外光显色原理基于化合物对紫外光的吸收特性。
通常，紫外光的波长范围为200到400纳米。
化合物中存在各种各样的化学键，如π键、σ键、烷基等，它们对紫外光的吸收能力也各不相同。
正因如此，可以利用这种吸收特性来检测化合物。
显色过程中，TLC板需要暴露在紫外光源下，如紫外灯或紫外光柜。
这些紫外光源通常会产生254纳米或366纳米的紫外光。
而紫外光的波长也会影响显色效果。
通常来说，较短波长的紫外光（254纳米）适用于化合物含有含氮或含有芳香族化合物的显色，而较长波长的紫外光（366纳米）适用于大多数有机化合物的显色。
当TLC板暴露在紫外光下时，吸附在板上的化合物会对紫外光产生吸收，产生吸收峰。
这些吸收峰可以通过专门的检测器，如紫外光谱仪或紫外光显色仪，进行定性和定量分析。
根据化合物的吸收峰的位置和强度，可以判断化合物的存在与含量。
总体而言，紫外光显色原理是一种利用化合物对紫外光的吸收特性来检测和分析化合物的方法。
通过紫外光源下的显色，可以对TLC板上的化合物进行可视化，并通过分析吸收峰的位置和强度，确定化合物的存在与含量。
这种原理的简单性和快速性使紫外光显色成为TLC中常用的检测方法之一。
第二章 薄层色谱
3、展开 、 吹干样点， 吹干样点，竖直放入盛有展开剂的有盖展开 瓶中。薄层色谱的展开， 瓶中。薄层色谱的展开，需要在密闭容器中进行 为使溶剂蒸气迅速达到平衡， 。为使溶剂蒸气迅速达到平衡，可在展开槽内衬 一滤纸。在层析缸中加入配好的展开溶剂， 一滤纸。在层析缸中加入配好的展开溶剂，使其 高度不超过1cm。将点好的薄层板小心放入层析 高度不超过 。 缸中，点样一端朝下，浸入展开剂中。 缸中，点样一端朝下，浸入展开剂中。盖好瓶盖 观察展开剂前沿上升到一定高度时取出， ，观察展开剂前沿上升到一定高度时取出，尽快 在板上标上展开剂前沿位置。晾干，观察斑点位 在板上标上展开剂前沿位置。晾干， 计算Rf值 展开剂要接触到吸附剂下沿， 置，计算 值。展开剂要接触到吸附剂下沿，但 切勿接触到样点。盖上盖子，展开。 切勿接触到样点。盖上盖子，展开。待展开剂上 行到一定高度（由试验确定适当的展开高度）， 行到一定高度（由试验确定适当的展开高度）， 取出薄层板，再画出展开剂的前沿线。 取出薄层板，再画出展开剂的前沿线。
第二章 食品分析中常用仪器 检测方法
1
薄层色谱法
一、原理 最常用的薄层色谱也属于液-固吸附色谱 固吸附色谱。 最常用的薄层色谱也属于液 固吸附色谱。吸 附剂被涂布在玻璃板上，形成薄薄的平面涂层。 附剂被涂布在玻璃板上，形成薄薄的平面涂层。 干燥后在涂层的一端点样 涂层的一端点样， 干燥后在涂层的一端点样，竖直放入一个盛有少 量展开剂的的有盖容器中。展开剂接触到吸附剂 量展开剂的的有盖容器中。 涂层，借毛细作用向上移动。 涂层，借毛细作用向上移动。经过在吸附剂和展 开剂之间的多次吸附 溶解作用， 多次吸附-溶解作用 开剂之间的多次吸附 溶解作用，将混合物中各组 分分离成孤立的样点，实现混合物的分离 分离。 分分离成孤立的样点，实现混合物的分离。
薄层色谱法的5个步骤
薄层色谱法的5个步骤薄层色谱法是一种常用的色谱分析方法，它可以将样品中的各个组分分离出来，并且可以用于定性定量分析。
下面是薄层色谱法的五个步骤：1.分离薄层色谱法的第一步是分离。
这一步是通过将样品溶液点样在薄层板上，然后将其放入色谱缸中，加入流动相，使流动相在薄层板上行走，将样品中的各个组分分离出来。
分离的效果取决于流动相的性质、点样量、流动相的流速和薄层板的性质等因素。
2.涂层在薄层色谱法中，涂层是非常重要的一步。
涂层可以防止样品中的各个组分在分离过程中扩散，同时也可以提高分离的效果。
常用的涂层材料有硅胶、纤维素和聚酰胺等。
涂层的厚度和均匀度都会影响分离的效果。
3.喷洒喷洒是指在分离之后，将固定相喷洒在薄层板上，使固定相与薄层板结合。
这样可以提高分离效果，并且可以使薄层板更加稳定。
常用的固定相有硅胶、纤维素和聚酰胺等。
4.显色在薄层色谱法中，显色是非常重要的一步。
通过显色可以清楚地观察到样品中的各个组分的分离情况。
常用的显色方法有物理显色和化学显色两种。
物理显色是基于不同物质对光的反射和吸收能力的不同来实现的；化学显色则是基于物质之间的化学反应来实现的。
5.识别在薄层色谱法中，识别是非常重要的一步。
通过识别可以确定样品中的各个组分。
常用的识别方法有观察颜色、测量Rf值和比较标准品等方法。
观察颜色可以初步判断组分的性质；测量Rf值可以确定组分的移动距离；比较标准品可以确定组分的具体种类。
以上就是薄层色谱法的五个步骤：分离、涂层、喷洒、显色和识别。
在实际操作中，可以根据不同的需求和目的进行相应的调整和优化。
薄层色谱法
点样直径不超过 5mm，点样距离一般为 1~1.5cm 即可。 样品在溶剂中的溶解度很大，原点将呈空心环——环形色谱效应。因此配制样品溶液时 应选择对组分溶解度相对较小的溶剂。 点样方式有点状点样和带状点样。 展开 展开剂也称溶剂系统，流动性或洗脱剂，是在平面色谱中用作流动相的液体。展开剂的 主要任务是溶解被分离的物质，在吸附剂薄层上转移被分离物质，使个组分的 Rf 值在 0.2~0.8 之间并对被分离物质要有适当的选择性。作为展开剂的溶剂应满足以下要求：适当的纯度、 适当的稳定性、低黏度 、线性分配等温线、很低或很高的蒸气压一级尽可能低的毒性。 展开方式总的来讲平面色谱的展开有线性、环形及向心 3 种几何形式。 A 单次展开 用同一种展开剂一个方向展开一次，这种方式在平面色谱中应用最为广泛。 （垂直上行展开，垂直下行展开，一向水平展开，对向水平展开） B 多次展开 单向对此展开，用相同的展开剂沿同一方向进行相同距离的重复展开，直 至分离满意，广泛应用于薄层色谱法 C 双向展开 用于成分较多、性质比较接近的难分离组分的分离。 薄层展开展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二 条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定 操作。将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边 0.5～ 1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，待展开至规定距离（一般为 10～15cm），取 出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。 显色 A 光学检出法 a 自然光（400~800nm） b 紫外光（254nm 或 365nm） c 荧光 一些化合物吸收了较短波长的光，在瞬间发射出比照射光波长更长的光，而在
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薄层色谱（TLC）——APC薄片的剖析
应091-3 十一组
200921501340 张桂起
200921501338 徐成成
200921501315 李倩
指导老师：赵老师
2012.04.13
一、实验原理
1、学习薄层色谱的原理与应用；
2、掌握制作及应用薄层色谱板；
3、鉴定阿司匹林药品的成分。
二、实验原理
1、色谱法的基本原理
色谱法是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，让混合物的溶液流经该物质，经过反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。
固定不动的物质称为固定相，固定相可以是固体吸附剂，也可以是液体（吸附在支持剂上）。
根据组分在固定相中的作用原理不同，可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、排阻色谱等；按操作条件可分为薄层色谱、柱色谱、气相色谱和高压液相色谱等。
流动相的极性小于固定相极性时为正相色谱，而流动相的极性大于固定相时为反相色谱。
三、薄层色谱的原理与应用
薄层色谱简称TLC，它是一种固液吸附色谱的形式。
用薄层色谱分离混合物的时，将已溶解的样品滴到薄层板上，吸附在固定相(吸附剂)上，然后用展开剂（流动相）进行展开，流动相带着混合物的组分上移。
样品中各组分再吸附剂上的吸附能力不同，一般来说，极性大的吸附能力强，极性小的吸附能力相对弱一些。
各组分在展开剂中的溶解度不一样，被解析的能力也就不同。
非极性组分由于在固定相中的吸附能力弱，首先被解析出来随流动相向上移动。
而极性组分由于吸附能力强，因此不易被解析出来。
TLC的最大优点是：简易，快速，灵敏，高效，范围广（定性—定量，0.01ug~500mg）。
TLC常应用于有机物的鉴定和分离，如通过与已知结构的化合物相比较，可鉴定有机混合物的组成；在有机化学反应中可以用于对反应进行跟踪；在柱色谱分离中，经常用其来确定分离条件和监控分离的过程。
TCL不仅可以分离少量样品（几微克），而且也可以分离较大量的样品（可达500毫克），特别适用于挥发性较低，或在高温下易发生变化而不能用气相色谱进行分离的化合物。
在TLC中所用的吸附剂颗粒比柱色谱中用的要小得多，一般为260目以上。
当颗粒太大时，表面积小，吸附量少，样品随展开剂移动速度快，斑点扩散较大，分离效果不好；当颗粒太小时，样品随展开剂移动速度慢，斑点不集中，效果也不好。
薄层色谱所用的硅胶有多种：硅胶H不含粘合剂；硅胶G含粘合剂（煅石膏）；硅胶GF254含有粘合剂和荧光剂，可在波长254nm紫外光下发出荧光；硅胶HF254只含荧光剂。
同样氧化铝也可分为氧化铝G、氧化铝GF254及氧化铝HF254。
氧化铝的极性比硅胶大，易用于分离极性小的化合物。
硬板∕软板：加粘合剂的薄板为硬板，不加粘合剂的薄板为软板。
样品溶剂要求：溶解性好，沸点尽量低。
展开剂的洗脱能力与其极性成正相关：石油醚﹤环己烷…苯﹤乙酸乙酯…﹤甲醇﹤水﹤乙醇。
板活性要与其含水量有关，可用标准样品进行实验测得。
常用显色方法有：碘熏法、特性反应、UV灯等。
比移值R f=（样品组分最高浓度中心距原点距离）∕（展开剂前沿距原点距离）。
影响R f的因素有粒度、厚度、均匀度、活性、展开剂极性及杂质含量、环境温度等。
在TLC中要特别注意吸附剂的确定、展开剂的选择及薄板的制板技术
四、实验仪器和试剂
仪器：载玻片（5块）、烧杯（100ml）、玻璃棒、分液漏斗、WFH-三用紫外分析仪、烘箱、毛细管（一根）、广口瓶、镊子、量筒（10ml）、锥形瓶（250ml）
试剂：羧甲基纤维纳水溶液、硅胶GF254、无水硫酸镁、APC药片（一片）、二氯甲烷、乙酰水杨酸标准液、咖啡因标准液、乙酰苯胺标准液、展开剂（苯：乙醚：冰乙酸：甲醇=120：60：18：1）
五、实验步骤
1、薄层板的制备
取3g硅胶GF254与9.5ml羧甲基纤维素钠水溶液混合，调成和糊状。
将糊状硅胶均匀快速地（5min之内完成）倒在五块载玻片上，用手轻轻震动至平。
2、薄板层的活化
薄层经过自然干燥后，放入烘箱中活化，进一步除去水分，加热30min。
3、样品液的准备
1片APC药片用纸包住碾碎，在烧杯中加10ml水溶解，搅拌、静置。
将上层液倾至分液漏斗中，加5mlCH2Cl2，振摇分层，取有机层于锥形瓶中，加入少量无水硫酸镁干燥，盖上表面皿溶液备用。
4、点样
在距薄层板一端1cm处，用铅笔在薄板的两边做轻微的标记（不能将薄板层破坏）。
用内径小于1mm干净并且干燥的毛细管吸取少量样品液，轻轻触及薄层板的起点线左侧，然后立即抬起。
同样方法在起点线右侧距离样品约1cm处点乙酰水杨酸标准样。
同样方法制备样品液和咖啡因，样品液和乙酰苯胺的薄层板。
5、展开
取约5ml展开剂于广口瓶中，将薄层板放入广口瓶中，盖上瓶盖。
待展开剂距薄层板上沿约1cm处时，取出薄层板标记前沿，用吹风机吹干。
干燥后在254nm 波长的紫外灯下观察，将薄层板上的样品点和标准样品点用铅笔画好，画出原板图。
6、将薄层板上的硅胶刮到垃圾袋内，冲洗干净放回原处，收拾整理仪器和桌面
六、注意事项
1、铺板时，尽可能将吸附剂铺均匀，不能有气泡或颗粒等；
2、铺板时，吸附剂的厚度不能太后也不能太薄，太厚展开时会出现拖尾，太少样品分不开，一般厚度为0.5- 1mm；
3、湿板铺好后，应放在比较平的地方晾干，不可快度干燥，否则薄层板会出现裂痕；
4、控制点样的量，太多展不开，太少斑点不明显或看不到；
5、取羧甲基纤维素钠的量筒和盛放萃取的有机层的锥形瓶一定要充分干燥，除去水分；
6、样品液要用表面皿盖好，防止空气中的水分进入；
7、展开时要盖好广口瓶的玻璃盖。
六、数据处理
乙酰水杨乙酸
2、数据处理
（1）薄层板一
样品中各组分移动离开原点的距离：D乙酰水杨酸3=4.6cm，D乙酰苯胺3=3.2cm，D咖啡因3=1.7cm 乙酰水杨酸标准液移动离开原点的距离：D咖啡因0=1.6cm
展开剂前沿距原点中心的距离：D3=5.1cm
比移值:
样品 R乙酰水杨酸3= D乙酰水杨酸3/D3=4.6/5.1=0.90
R f乙酰苯胺3= D乙酰苯胺3/ D3=3.2/5.1=0.62
Rf咖啡因3= D咖啡因3/ D3=1.7/5.1=0.33
标准液R f咖啡因= D咖啡因0/ D3=1.6/5.1=0.31
样品于标准液的相对误差为（0.33-0.31）/0.31×100%=6.45%
结论：APC药片组成中含有咖啡因。
（2）薄层板二
样品中各组分移动离开原点的距离：D乙酰水杨酸1=4.1cm，D乙酰苯胺1=3.0cm，D咖啡因1=1.7cm 乙酰水杨酸标准液移动离开原点的距离：D乙酰水杨酸0=4.1cm
展开剂前沿距原点中心的距离：D1=5.3cm
比移值:
样品 R乙酰水杨酸1= D乙酰水杨酸1/D1=4.1/5.3=0.77
R f乙酰苯胺1= D乙酰苯胺1/ D1=3.0/5.3=0.56
Rf咖啡因1= D咖啡因1/ D1=1.7/5.3=0.32
标准液R f乙酰水杨酸= D乙酰水杨酸0/ D1=4.1/5.3=0.77
样品于标准液的相对误差为（0.77-0.77）/0.77×100%=0.00%
结论：APC药片组成中含有乙酰水杨酸。
（3）薄层板三
样品中各组分移动离开原点的距离：D乙酰水杨酸2=3.7cm，D乙酰苯胺2=2.7cm，D咖啡因2=1.3cm 乙酰水杨酸标准液移动离开原点的距离：D乙酰苯胺0=3.0cm
展开剂前沿距原点中心的距离：D2=5.3cm
比移值:
样品 R乙酰水杨酸2= D乙酰水杨酸2/D2=3.7/5.3=0.70
R f乙酰苯胺2= D乙酰苯胺2/ D2=2.7/5.3=0.51
Rf咖啡因2= D咖啡因2/ D2=1.3/5.3=0.24
标准液R f乙酰苯胺= D乙酰苯胺0/ D2=3.0/5.3=0.57
样品于标准液的相对误差为（0.51-0.57）/0.57×100%=10.52%
结论：APC药片组成中可能含有乙酰苯胺。
七、实验注意事项
1、铺板时一定要铺匀，特别是边、角部分，晾干时要放在平整的地方。
2、点样时点要细，直径不要大于2mm,间隔0.5cm以上，浓度不可过大，以免出现拖尾、混杂现象。
3、展开用的烧杯要洗净烘干，放入板之前，要先加展开剂，盖上表面皿，让烧杯内形成一定的蒸气压。
点样的一端要浸入展开剂0.5cm以上,但展开剂不可没
过样品原点。
当展开剂上升到距上端0.5－1cm时要及时将板取出，用铅笔标示出展开剂前沿的位置
八、误差分析和结果讨论
影响R f值的因素较多，如点样量、展开剂、吸附剂、薄层板的厚度温度等均能影响R f值，实验中由于制得的板的厚度不一样，及点样量的不同对实验影响大一些。
在所画的图中最上面的斑点是半月牙形状，是因为上层的展开剂由于蒸汽压的影响没有达到饱和，中心偏下一点。