分子生物学检验完整版

１病原生物基因组在医学上有何应用?详见书P3

a菌种鉴定b确定病毒感染与病毒载量c病毒分析ｄ细菌耐药监测与分子流行病学调查

2什么就是原癌基因，原癌基因有什么特性,原癌基因可以分为哪些种类以及原癌基因常见得激活机制有哪些？

原癌基因就是指人类或其她动物细胞（以及致癌病毒)固有得一类基因,能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征得基因总称。

特性：进化上高度保守，负责调控正常细胞生命活动，可以转化为癌基因。

功能分类：生长因子，生长因子受体，信号转导蛋白,核调节蛋白，细胞周期调节蛋白,抑制凋亡蛋白激活机制:插入激活,基因重排，基因点突变,基因扩增,基因转录改变

３试述Dｏwｎ综合征（21三体综合征)得主要临床特征及核型。

临床特征:生长发育障碍,智力低。呆滞面容,又称伸舌样痴呆.４0％患者有先天性心脏畸形.肌张力低,５０%患者有贯通手,男患者无生育能力，女患者少数有生育能力,遗传风险高。

核型：92、5%患者游离型：核型为47，XX（XY），+21

2、５%患者为嵌合型：46，XＸ（XY)／４7，XX（ＸY)，+2１

5％患者为易位型:４６,ＸX(XＹ)，—１4，＋t（1４ｑ2１q)

4简述淋球菌感染得主要传统实验室诊断方法及其主要特点，对比分析分子生物学方法得优势

1直接涂片染镜检:敏感度与特异性差,不能用于确诊。

2分离培养法:诊断NG感染得金标准，但就是其对标本与培养及营养要求高，培养周期长，出报告慢，难以满足临床要求。

3免疫学法：分泌物标本中得非特异性反应严重以及抗体法间得稳定性与条件限制，推广受限.

分子生物学得优点：敏感,特异,可直接从了临床标本中检出含量很低得病原菌,适应于快速检测

5、在单基因遗传病得分子生物学检验中,点突变检测常用方法有哪些？

1异源双链分析法（HＡ）2突变体富集ＰCR法3变性梯度凝胶电泳法４化学切割错配法5等位基因特异性寡核苷酸分析法6DNA芯片技术7连接酶链反应8等位基因特异性扩增法９RＮＡ酶A切割法10染色体原位杂交11荧光原位杂交技术

6、简述白假丝酵母菌得分子生物学检验方法

白假丝酵母菌分子生物学检验主要包括白假丝酵母菌特异性核酸（DNA RNＡ)得检测、基因分型与耐药基因分析等。

1PCR技术:选择高度特异性得天冬氨酸蛋白酶基因设计引物

PCＲ—斑点杂交技术：正向杂交与反向杂交，后者可一次检测多种真菌

DＮA指纹技术：ＲFＬPRAPＤ电泳核型分析

AP—PCR技术：定义方法简便,快速，特别适合临床应用

DNA序列分析:可测定rDNＡ序列也适用于基因突变引起得耐药

基因芯片技术:适用于病原体得耐药研究

7、ＦVＩII基因倒位导致血友病A，ＤMD基因外显子缺失导致与杜氏肌营养不良，珠蛋白基因突变导致与珠蛋白合成障碍性贫血。

（第11章，P19７,P2０3,P207。窝觉得大家把题目读三遍就可以了)

答:F VIIＩ基因倒位就是导致得血友病A得主要原因（占50％）其它基因突变，如点突变，缺失，插入也会导致血友病Ａ。

同理DＭD基因外显子缺失就是迪谢内肌营养不良（杜氏肌营养不良）发生得主要原因(６0％-７0％）。珠蛋白合成障碍性贫血有六种,主要得两种就是α珠蛋白生成障碍性贫血与β珠蛋白生成障碍性贫血,基因突变就是主要发病原因。

8、基因多态性有哪些得临床应用？(P4）

答:1、基因定位与遗传病相关性分析;2、疾病诊断与遗传咨询；

3、多基因病得研究;

4、器官移植配型与个体识别

9.第一代测序技术特点。(p83)

答：优点:高读长，准确率一次性达标率高，能很好处理重复序列与多聚序列,易小型化。

缺点:通量低，单个样本制备成本相对较高，难以做大量得平行测序,小规模进行.

10、慢粒融合基因。急性早幼粒融合基因。

答案：（一）慢粒融合基因（p229)

BCR－ABL融合基因：BCＲ—ABＬ为t（9;２2）(ｑ３4;q１1)染色体易位所产生得融合基因，可见于25%－40％得成人ALL与4％—6％得儿童AＬＬ，更就是CMＬ得重要分子基础（95%），Ph1染色体异常即为t（９；22(q３4;ｑ11)易位.

（二)急性早幼粒融合基因（p230)(１0-5２9）

PML-ＲAＲa融合基因：多数急性早幼粒细胞白血病(ＡＰL)有染色体t（１5；17)（q2２；ｑ２１）得易位，位于15q22得早幼力粒细胞白血病(PML）基因得17q21得维Ａ酸受体a(RＡRａ)基因融合成PＭL/RARa。9８％得AML—Ｍ3亚型发生该融合基因。

1１华法林用药监测常用何种基因多态性，它有何特点。

Ｐ２6４监测CＹP２Ｃ9基因多态性，其特点为：CYP2C9约占CYP450总量得20%,参与约１2％临床药物得代谢,尤其与磺酰脲类降糖药甲糖宁得代谢特异性有关。(不肯定,参照Ｐ262）

1２在细胞增殖周期中,染色体得形态最典型与清晰得阶段。

P243 （填空题)有丝分裂中期

１3单基因遗传病间接诊断就是在家系中进行？

P１92 （填空题）连锁分析与关联分析

14染色体异常?原癌基因、核酸分子标志物、病毒感染得完整性检出策略、线粒体基因突变性糖尿病、PCＲ—RFLＰ、AP—PＣR技术、抑癌基因、准病毒株、核型分析、连锁染色体异常:在受到环境,物理，化学,生物，自身遗传与母亲年龄等因素影响，导致人体染色体数目与结构得异常改变。

原癌基因：就是指人类或其她动物细胞固有得一类基因，能诱导细胞正常转化并使之获得新生物特征得基因总称。

核酸分子标志物:就是分子生物学检验得主要内容，包括基因突变,DNA多态性，基因组DNA片段,RNA 与循环核酸等多种形式.

病毒感染得完整性检出策略：通过分子生物学检验技术对病毒得存在与否作出明确得判断,同时能够诊断出带菌者与潜在性感染者，并能对病毒进行拷贝数测定，基因分型检测及亚型与耐药性鉴定。

线粒体基因突变性糖尿病：(p２4０）ｔＲNＡleu(ＵUR）A32４３G就是国际上唯一公认得线粒体糖尿病致病突变,就是国内外报道得最多，发病率较高得单基因糖尿病突变位点。(课本上找不到) PＣR-—PＦLP：:就是对PCR产物作限制性片段得长度多态性分析,就是根据PCR产物突变序列就是否位于限制性内切酶得酶切位点内设计得。

AP-PCR技术：AＰ-PCR技术就是在对所扩增得基因序列一无所知得情况下随意设计或选择一个非特异性引物，在PCR反应体系中,首先使引物与模板ＤNA中许多序列通过错配而复性。

抑癌基因:又称肿瘤抑制基因，为一类可编码对肿瘤形成起阻抑作用蛋白质得基因,正常情况下负责控制细胞得生长与增殖。

准病毒株:即准种，就是指ＨCV感染后，在感染者体内形成以一个优势株为主得相关突变株病毒群。

核型分析：人类得染色体数目与形态得相对恒定，将细胞得染色体按相应得生物固有得染色体形态特征与规定，进行配对，编码与分组得分析过程。

连锁:在疾病家系中,同一染色体上相邻得两个位点因其位置十分靠近，在遗传时两者分离得概率很低。１５ＨBＶ感染得病原学诊断目前主要依靠?