实验三抗体形成细胞能力的检测QHS和次免疫培训课件
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医学免疫学免疫学检测技术ppt课件
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双抗体夹心法、间接法ELISA
15
间接法ELISA
16
ELISA操作图
可调移液器
8孔道可调移液器 17
3. 放射免疫测定（RIA）
常用 125I，测定微量物质 4. 化学发光免疫分析
常用 鲁米诺，测定超微量物质 5. 免疫印迹法（Western Blotting）
先做凝胶电泳将蛋白质分区 再将蛋白质转移至固相载体 后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定
1. 免疫荧光法（IFA ）
荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位
（1）直接荧光法 荧光素一抗 对每种抗体作标记 特异 测Ag
（2）间接荧光法： 荧光素二抗 不必标记每种抗体 敏感 测Ag/Ab
12
免疫荧光法
13
2. 酶免疫测定（EIA）: ELISA与酶免疫组化
（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原
10
II ) Precipitation （二）沉淀反应
可溶性抗原 + 相应抗体肉眼可见的沉淀物 使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散
1. 单向免疫扩散：抗原 的定量（Ig、C3 ）
2. 双向免疫扩散：抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析 3. 免疫电泳： 电泳 + 双向免疫扩散 （抗原分析）
21
3. 细胞因子检测
（1）免疫学检测法—— 夹心法ELISA FCM
（2）生物学检测法—— 细胞增殖（或细胞增殖抑制）试验 细胞毒（或细胞毒抑制）试验
（3） 分子生物学检测法 RT-PCR测定mRNA
4. 皮肤试验： 测试IV型超敏反应能力
22
（二）B细胞功能测定
1. B细胞增殖试验 小鼠：LPS 人： SPA；抗IgM
双抗体夹心法、间接法ELISA
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间接法ELISA
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ELISA操作图
可调移液器
8孔道可调移液器 17
3. 放射免疫测定（RIA）
常用 125I，测定微量物质 4. 化学发光免疫分析
常用 鲁米诺，测定超微量物质 5. 免疫印迹法（Western Blotting）
先做凝胶电泳将蛋白质分区 再将蛋白质转移至固相载体 后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定
1. 免疫荧光法（IFA ）
荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位
（1）直接荧光法 荧光素一抗 对每种抗体作标记 特异 测Ag
（2）间接荧光法： 荧光素二抗 不必标记每种抗体 敏感 测Ag/Ab
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免疫荧光法
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2. 酶免疫测定（EIA）: ELISA与酶免疫组化
（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原
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II ) Precipitation （二）沉淀反应
可溶性抗原 + 相应抗体肉眼可见的沉淀物 使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散
1. 单向免疫扩散：抗原 的定量（Ig、C3 ）
2. 双向免疫扩散：抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析 3. 免疫电泳： 电泳 + 双向免疫扩散 （抗原分析）
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3. 细胞因子检测
（1）免疫学检测法—— 夹心法ELISA FCM
（2）生物学检测法—— 细胞增殖（或细胞增殖抑制）试验 细胞毒（或细胞毒抑制）试验
（3） 分子生物学检测法 RT-PCR测定mRNA
4. 皮肤试验： 测试IV型超敏反应能力
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（二）B细胞功能测定
1. B细胞增殖试验 小鼠：LPS 人： SPA；抗IgM
免疫检验课件ppt
移植免疫监测
器官移植后，患者需要接受免疫抑制治疗以防止排斥反应。通过监测免疫功能和相关抗体，有助于评估患者的免疫状态和移植效果。
02
CHAPTER
免疫检验基础知识
抗原是指能够刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答的物质，包括外源性抗原和内源性抗原。
抗原
抗体是指机体在抗原刺激下产生的具有高度特异性的蛋白质分子，能够与相应抗原结合，发挥免疫效应。
通过检测T细胞增殖和转化能力，评估机体的细胞免疫功能。
通过检测细胞因子表达水平，了解机体的免疫应答状态。
通过检测免疫细胞的杀伤、吞噬、释放细胞因子等功能，评估机体的免疫功能。
利用基因芯片等技术对免疫相关基因的表达水平进行检测，了解机体的免疫应答机制。
基因表达谱分析
通过制备针对特定抗原的单克隆抗体，用于免疫学检测和免疫治疗。
通过检测炎症因子（如IL-1、IL-6、TNF等）的水平，了解机体的炎症反应状态。
通过检测自身抗体（如类风湿因子、抗核抗体等）的水平，了解机体的自身免疫状态。
04
CHAPTER
常见免疫检验项目及解读
总结词
乙肝两对半检测是常见的免疫检验项目之一，用于检测乙型肝炎病毒的抗原和抗体。
详细描述
乙肝两对半检测包括乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、表面抗体（HBsAb）、e抗原（HBeAg）、e抗体（HBeAb）和核心抗体（HBcAb）的检测。通过检测这些抗原和抗体，可以了解个体是否感染了乙型肝炎病毒，以及感染阶段和免疫状态。
01
免疫组学技术
利用免疫组学方法，研究免疫细胞和分子的功能和相互作用，为免疫疾病的诊断和治疗提供新思路。
02
生物信息学
结合生物信息学技术，对免疫相关基因和蛋白质进行大数据分析，挖掘免疫相关疾病的发病机制和潜在治疗靶点。
体外抗体形成细胞检测—定量溶血分光光度计法(QHS)
脾脏B细胞 ＋SRBC＋ 补体
成抗原抗体复合物，激活补 体系统，裂解SRBC而释放
补体经典激活途径
出血红蛋白，以分光光度计 定量测定。所测值反映了抗
SRBC裂解
体形成细胞产生抗体的功能。
分光光度计检测
2
实验步骤
❖ SRBC及其制备 脱纤维防凝处理的SRBC，以NS洗涤二次，
每次2000rpm 离心5min。弃上清，制成 SRBC悬液，然后用血细胞计数板计数细胞， 最后稀释成1.5×108 sRBC/ml。
时间也要严格控制。
7
细胞计数法
WBC
1mm WBC 1mm
WBC
WBC
细胞浓度/ml
= 4个大方格中的细胞总数/4 × 104
RBC
细胞浓度/ml
= 5个中方格中的细胞总数 ×5 ×1804
W
W
1mm
W
W
1mm×1mm×0.1mm=0.1mm3=0.1×10-3ml =10-4ml
细胞浓度: 细胞数/ml =5个中格的细胞数 ×5×104（RBC计数法）
细胞数/ml = 4个大格的细胞总数/4 ×104 （WBC计数法） 9
抗体制备
原理： 抗原免疫小鼠，激活免疫系统，B细
胞活化并分化为浆细胞，产生针对特定 抗原的特异性抗体。
10
方法
❖ 1.用移液管吸取脱纤维防凝处理的绵羊血适量
❖ 2.加2-3倍体积生理盐水，混匀，2000rpm离 心5分钟，小心吸尽上清。
实验管 1ml
1ml
1ml
—
3ml
3. 混匀，37℃水浴1小时。 4. 3000rpm 离心 5 min，取上清 5.721分光光度计测413nm处OD值（Hb 量）
免疫实验免疫学和免疫检测技术试验培训课件
免疫实验免疫学和免疫检测技术试
6
验
本次实验检测血清IgG，应用的是双抗体夹心法。
免疫实验免疫学和免疫检测技术试
7
验
二、实验方法：
1、包被抗体： 包被抗体浓度为：用包被液稀释（包被聚苯乙烯要
在偏碱性条件下进行，所以该包被液用pH9.6的碳酸盐 缓冲溶液）抗体至10或20ug/ml，每孔加100ul。加18孔
•标准抗原1-5的浓度分别为： 50，100，200，300，500ng/ml (都从500ng/ml加，分别加10，20，40，60，100ul至各 孔，再分别补加90，80，60，40，0ul保温液即可)
•荧光各孔：阴性对照：Ab-Ag-FITC-Ab，阳性对照用 200ng/ml，500ng/ml
4、洗涤：同样营免养疫实液验免洗疫涤学和2免次疫检，测洗技术去试 淋巴细胞分离
2
液，离心： 500g 10min 验
5、检查细胞存活率： （1）将1滴细胞悬液和1滴台盼兰混匀，静置5-10分钟。 （2）上述混合液滴入细胞计数板，在显微镜下观察细 胞，计数活细胞数和死细胞数。
三、注意事项：
1。血液制品
免疫实验免疫学和免疫检测技术试
15
验
三、注意事项：
1．斑点大小控制。 2．勿用力戳破膜。 3．给第一抗体和封闭蛋白（BSA）一定吸附时间。 4．把你的实验结果粘贴于实验报告上，报告测定结果， 指出阳性点和阴性点。
免疫实验免疫学和免疫检测技术试
16
验
实验四、免疫荧光检测技术
一、基本原理：
荧光双抗夹心法定位与定量抗原
免疫实验免疫学和免疫检 测技术试验
2、加于淋巴细胞分离液上层，离心：500g 20min
细胞免疫功能检测方法PPT课件
了自己的最大努力时，失败也是伟大的， 所以不要放弃，坚持就是正确的。
When You Do Your Best, Failure Is Great, So Don'T Give Up, Stick To The End
19
感谢聆听
不足之处请大家批评指导
Please Criticize And Guide The Shortcomings
11
➢ 在ELISPOT板的移动过程中 也要避免ELISPOT板的摇动， 否则会造成斑点的分布不均。
➢ 在细胞培养完成之前一定要 进行严格的无菌操作，试验 过程中各步的洗涤工作一定 要充分。否则会造成背景的 不清晰，针尖样杂斑的增多。
12
13
ELISPOT应用实例
跟据间接ELISA结果判定标准（P/N>2.1），由表1OD450值可以看出， 小鼠免疫后第1、3、5、7天的P/N值分别为1.02、1.33、1.97和2.22， 抗体水平呈现逐渐升高的趋势，在第7天才出现抗体阳性。而机体的 IFN-γ水平则呈现先升高后降低的趋势，在免疫后的第三天达最高值， 此时分泌IFN-γ脾淋巴细胞比率177/106。分析可知，在NDV免疫小 鼠时，细胞免疫与体液免疫存在着一定的时差关系，在血清抗体阳性 检出的前期IFN-γ的分泌降至最低水平。
14
应用及展望
白细胞中能够分泌IFN-γ的细胞为TH2和CTL细胞,
活化条件对细胞内免疫染色IFNγ和IL-4法检测人外周血Th1和Th2细 胞的影响
➢ Th0/Th1/Th2 细胞转换（Th1与Th2细胞亚群均来源于共同的Th0前体细 胞，抗原呈递细胞(APC)可活化Th0细胞。遗传因素、抗原类型、剂量、 有无佐剂以及抗原进入体内的途径，均可影响APC活化Th0细胞时的微环 境，而微环境中细胞因子的类型决定Th0细胞是否分化为Th1细胞或Th2 细胞）。
When You Do Your Best, Failure Is Great, So Don'T Give Up, Stick To The End
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感谢聆听
不足之处请大家批评指导
Please Criticize And Guide The Shortcomings
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➢ 在ELISPOT板的移动过程中 也要避免ELISPOT板的摇动， 否则会造成斑点的分布不均。
➢ 在细胞培养完成之前一定要 进行严格的无菌操作，试验 过程中各步的洗涤工作一定 要充分。否则会造成背景的 不清晰，针尖样杂斑的增多。
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ELISPOT应用实例
跟据间接ELISA结果判定标准（P/N>2.1），由表1OD450值可以看出， 小鼠免疫后第1、3、5、7天的P/N值分别为1.02、1.33、1.97和2.22， 抗体水平呈现逐渐升高的趋势，在第7天才出现抗体阳性。而机体的 IFN-γ水平则呈现先升高后降低的趋势，在免疫后的第三天达最高值， 此时分泌IFN-γ脾淋巴细胞比率177/106。分析可知，在NDV免疫小 鼠时，细胞免疫与体液免疫存在着一定的时差关系，在血清抗体阳性 检出的前期IFN-γ的分泌降至最低水平。
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应用及展望
白细胞中能够分泌IFN-γ的细胞为TH2和CTL细胞,
活化条件对细胞内免疫染色IFNγ和IL-4法检测人外周血Th1和Th2细 胞的影响
➢ Th0/Th1/Th2 细胞转换（Th1与Th2细胞亚群均来源于共同的Th0前体细 胞，抗原呈递细胞(APC)可活化Th0细胞。遗传因素、抗原类型、剂量、 有无佐剂以及抗原进入体内的途径，均可影响APC活化Th0细胞时的微环 境，而微环境中细胞因子的类型决定Th0细胞是否分化为Th1细胞或Th2 细胞）。
最新3抗体教学讲义ppt
3抗体
内容
一、基本概念 二、免疫球蛋白的分子结构 三、免疫球蛋白的特点与功能 四、抗体的生物学活性 五、免疫球蛋白的免疫原性 六、人工制备的抗体
一、基本概念：
抗体（antibody,Ab)是B细胞识别抗原后增殖 分化为桨细胞所产生的一种蛋白质，主要存在 于血清等体液中，能与相应抗原特异性地结合， 具有免疫功能。
的出现标志着B细胞成熟 对防止免疫耐受有一定作用
(五)IgE
血清中含量最低 可与肥大细胞、嗜碱性粒细胞上的高亲和力Fcε受
体（FcεRⅠ）结合，引起Ⅰ型超敏反应 FcεRⅡ分布于巨噬细胞、B细胞、嗜酸粒细胞
四、免疫球蛋白的生物学活性
V区的功能: 识别和结合特异性抗原
C区的功能： ☆激活补体:IgM,IgG1-3;IgG4,IgA,IgE
面的FcR结合(免疫调理,I型 超敏反应)
三、五类免疫球蛋白的特性与功能
（一）IgG
IgG多为单体，是唯一能通过胎盘的抗体 据重链（链）免疫原性，IgG分4个亚型
IgG的特点
IgG1、IgG2和IgG3能通过经典途径激活补 体
血清含量最高(75%～85%),也是丙种球蛋白 的主要成分
IgM是抗原刺激后出现最早的抗体，半衰期短， 故检测IgM水平可用于传染病的早期诊断。
mIgM是B细胞抗原受体（BCR）的主要成分 也可参与II、III型超敏反应
(三)Ig
A
分为血清型和分泌型两种。
血清型IgA主要由肠系膜淋巴组织中的浆细 胞产生，为单体。而分泌型IgA（sIgA）是 由呼吸道、消化道、泌尿生殖道等处的固有 层中浆细胞产生，为双体、三体或多体。
天然Ig分子中，重链同类，轻链同型
2.可变区与恒定区
根据氨基酸排列顺序的不同分为： 可变区（V）和恒定区（C）
内容
一、基本概念 二、免疫球蛋白的分子结构 三、免疫球蛋白的特点与功能 四、抗体的生物学活性 五、免疫球蛋白的免疫原性 六、人工制备的抗体
一、基本概念：
抗体（antibody,Ab)是B细胞识别抗原后增殖 分化为桨细胞所产生的一种蛋白质，主要存在 于血清等体液中，能与相应抗原特异性地结合， 具有免疫功能。
的出现标志着B细胞成熟 对防止免疫耐受有一定作用
(五)IgE
血清中含量最低 可与肥大细胞、嗜碱性粒细胞上的高亲和力Fcε受
体（FcεRⅠ）结合，引起Ⅰ型超敏反应 FcεRⅡ分布于巨噬细胞、B细胞、嗜酸粒细胞
四、免疫球蛋白的生物学活性
V区的功能: 识别和结合特异性抗原
C区的功能： ☆激活补体:IgM,IgG1-3;IgG4,IgA,IgE
面的FcR结合(免疫调理,I型 超敏反应)
三、五类免疫球蛋白的特性与功能
（一）IgG
IgG多为单体，是唯一能通过胎盘的抗体 据重链（链）免疫原性，IgG分4个亚型
IgG的特点
IgG1、IgG2和IgG3能通过经典途径激活补 体
血清含量最高(75%～85%),也是丙种球蛋白 的主要成分
IgM是抗原刺激后出现最早的抗体，半衰期短， 故检测IgM水平可用于传染病的早期诊断。
mIgM是B细胞抗原受体（BCR）的主要成分 也可参与II、III型超敏反应
(三)Ig
A
分为血清型和分泌型两种。
血清型IgA主要由肠系膜淋巴组织中的浆细 胞产生，为单体。而分泌型IgA（sIgA）是 由呼吸道、消化道、泌尿生殖道等处的固有 层中浆细胞产生，为双体、三体或多体。
天然Ig分子中，重链同类，轻链同型
2.可变区与恒定区
根据氨基酸排列顺序的不同分为： 可变区（V）和恒定区（C）
免疫学基础-免疫学检测与防治(全科医生培训) ppt课件
ppt课件 5
2.沉淀反应
可溶性抗原与相应抗体结合后出 现沉淀物称沉淀反应。 ★单向免疫扩散
★双向免疫扩散 ★对流免疫电泳
★免疫比浊法
ppt课件 6
3.中和反应 如抗“O”试验 4.免疫标记技术 用荧光素、酶、同位素等标记抗 体或抗原用以测定相应抗原或抗体的 技术称为免疫标记技术。常用方法有 免疫荧光技术、酶免疫技术、放射免 疫检测技术等。 特点：敏感、特异、快速，能定 性、定量、定位。
2
免疫学诊断
●抗原或抗体的检测 ●免疫细胞及其功能检测
ppt课件
3
一、抗原或抗体的检测 (一) 检测的原理
1. 已知抗体测抗原（多用于定性）
2.已知抗原测抗体（多用于定量）
ppt课件
4
（二）常见抗原抗体反应的种类
1.凝集反应
细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗 体结合后形成凝集团块称凝集反应。 ★直接凝集反应 ★间接凝集反应 ★间接凝集抑制试验 ★协同凝集试验
ppt课件 7
★免疫荧光技术
★酶免疫测定法(ELISA) ★放射免疫测定法
★斑点金结合试验 ★免疫印迹法
ppt课件 8
渗滤法、层析法
二、淋巴细胞的测定
（一）T细胞总数及亚群的测定
（二）T细胞功能的测定 1.淋巴细胞增殖试验 形态学方法、3H-TdR掺入法等。 2.细胞毒试验 3.细胞因子测定
ppt课件 9
38
接种剂量次数 量较大，2~3次 副作用 免疫效果 较大 较差，维持 数月~数年 疫苗保存 较易保存
ppt课件
ppt课件
39
13
一、人工免疫的概念及种类
人为地给机体输入抗原 以增强机体 的免疫功能，或直接输入免疫血清、
2.沉淀反应
可溶性抗原与相应抗体结合后出 现沉淀物称沉淀反应。 ★单向免疫扩散
★双向免疫扩散 ★对流免疫电泳
★免疫比浊法
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3.中和反应 如抗“O”试验 4.免疫标记技术 用荧光素、酶、同位素等标记抗 体或抗原用以测定相应抗原或抗体的 技术称为免疫标记技术。常用方法有 免疫荧光技术、酶免疫技术、放射免 疫检测技术等。 特点：敏感、特异、快速，能定 性、定量、定位。
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免疫学诊断
●抗原或抗体的检测 ●免疫细胞及其功能检测
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一、抗原或抗体的检测 (一) 检测的原理
1. 已知抗体测抗原（多用于定性）
2.已知抗原测抗体（多用于定量）
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（二）常见抗原抗体反应的种类
1.凝集反应
细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗 体结合后形成凝集团块称凝集反应。 ★直接凝集反应 ★间接凝集反应 ★间接凝集抑制试验 ★协同凝集试验
ppt课件 7
★免疫荧光技术
★酶免疫测定法(ELISA) ★放射免疫测定法
★斑点金结合试验 ★免疫印迹法
ppt课件 8
渗滤法、层析法
二、淋巴细胞的测定
（一）T细胞总数及亚群的测定
（二）T细胞功能的测定 1.淋巴细胞增殖试验 形态学方法、3H-TdR掺入法等。 2.细胞毒试验 3.细胞因子测定
ppt课件 9
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接种剂量次数 量较大，2~3次 副作用 免疫效果 较大 较差，维持 数月~数年 疫苗保存 较易保存
ppt课件
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一、人工免疫的概念及种类
人为地给机体输入抗原 以增强机体 的免疫功能，或直接输入免疫血清、
21_细胞免疫功能检测方法-ppt课件
3
ELISPOT的流程
4
5
底板与捕捉抗体的包被
➢ 底板类型：硝酸纤维素膜板、PVDF膜板等 ➢ 捕捉抗体：如抗某细胞因子抗体（Purified
Rat Anti-Mouse IFN-r Monoclonal Antibody ）。 ➢ 抗体包被：用无菌PBS（PH9.6）来稀释包被抗 体，包被量通常在1-2μg/mL（1.25ug/ml ）。 ➢ 次日倾倒包被液，PBS洗涤数次，在灭菌吸水 纸上扣干后，用完全培养基37℃封闭2h。 ➢ 倾倒封闭液， 加入检测细胞进行细胞培养。
17
18
突变型乙型肝炎病毒前C-C DNA疫苗的基础研究张 敏中国人民解放军军医进修学院2007-07-052007博 士
19
20
欢迎各位老师同学提出宝贵意见！
ELISPOT与其他细胞免疫检测方法的 比较
当特异性抗原和T细胞结合后激活细胞释放出 IFN-Y，IFN-YELISPOT可灵敏的检测出T细胞 释出的IFN-Y，该方法己被用于多种CTL的检 测。Yang.J的研究表明，ELISPOT方法检测 CTL不但有高度的敏感性还有高度的特异性和 HLA限制性，在用LMP2肽段CLG作为激刺原 检测CTL时发现，只有相同HLA型别(HLA-A2) 的CDS+细胞能起阳性反应。
8
培养时间对斑点数的影响
9
NDV抗原浓度对斑点数的影响
10
影响试验效果的其他因素
➢ 细胞是否具有活力是 试验成功进行的先决 条件，凡是活力高功 能保持完好的细胞， ELISPOT检测时必定 背景干净，阴性对照 斑点少，而试验组斑 点圆润鲜亮。
11
➢ 在ELISPOT板的移动过程中也 要避免ELISPOT板的摇动，否 则会造成斑点的分布不均。
ELISPOT的流程
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底板与捕捉抗体的包被
➢ 底板类型：硝酸纤维素膜板、PVDF膜板等 ➢ 捕捉抗体：如抗某细胞因子抗体（Purified
Rat Anti-Mouse IFN-r Monoclonal Antibody ）。 ➢ 抗体包被：用无菌PBS（PH9.6）来稀释包被抗 体，包被量通常在1-2μg/mL（1.25ug/ml ）。 ➢ 次日倾倒包被液，PBS洗涤数次，在灭菌吸水 纸上扣干后，用完全培养基37℃封闭2h。 ➢ 倾倒封闭液， 加入检测细胞进行细胞培养。
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突变型乙型肝炎病毒前C-C DNA疫苗的基础研究张 敏中国人民解放军军医进修学院2007-07-052007博 士
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欢迎各位老师同学提出宝贵意见！
ELISPOT与其他细胞免疫检测方法的 比较
当特异性抗原和T细胞结合后激活细胞释放出 IFN-Y，IFN-YELISPOT可灵敏的检测出T细胞 释出的IFN-Y，该方法己被用于多种CTL的检 测。Yang.J的研究表明，ELISPOT方法检测 CTL不但有高度的敏感性还有高度的特异性和 HLA限制性，在用LMP2肽段CLG作为激刺原 检测CTL时发现，只有相同HLA型别(HLA-A2) 的CDS+细胞能起阳性反应。
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培养时间对斑点数的影响
9
NDV抗原浓度对斑点数的影响
10
影响试验效果的其他因素
➢ 细胞是否具有活力是 试验成功进行的先决 条件，凡是活力高功 能保持完好的细胞， ELISPOT检测时必定 背景干净，阴性对照 斑点少，而试验组斑 点圆润鲜亮。
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➢ 在ELISPOT板的移动过程中也 要避免ELISPOT板的摇动，否 则会造成斑点的分布不均。
免疫细胞功能检测技术概述课件
原理(yuánlǐ)：
N-N-
C
+ H+
N=N-R-
四氮唑基（淡黄色）
N-NH2
C
N=NH
甲臜（紫黑色）
免疫细胞功能检测技术概述
第三十五页，共四十三页。
中性 粒细胞 (zhōngxìng)
NBT
甲臜颗粒(kēlì)沉积于胞质中
免疫细胞功能检测技术概述
第三十六页，共四十三页。
二、巨噬细胞功能(gōngnéng)检测
免疫细胞功能检测技术概述
第二十二页，共四十三页。
2. 方法学：
➢ 经典(jīngdiǎn)溶血空斑形成试验 ➢ 被动溶血空斑试验
免疫细胞功能检测技术概述
第二十三页，共四十三页。
3．临床应用(yìngyòng)与评价
➢溶血空斑试验主要用于测定 药物和手术等因素(yīn sù)对体液 免疫功能的影响 ➢评价免疫治疗或免疫重建后 机体产生抗体免的疫细胞能功能力检测。技术概述
2. 淋巴细胞转化(zhuǎnhuà)的刺激物
非特异性刺激物：
PHA ------T细胞 ConA -------T细胞
PWM -------T、 B细胞
LPS -------B细胞 特异性刺激物：
异种(yì zhǒnɡ)抗原
同种组织抗原
免疫细胞功能检测技术概述
第七页，共四十三页。
3. 检测(jiǎn cè)方法
（2）3H-TdR掺入法
培养 液 PHA
3H-TdR
淋巴细胞
全
血
离
心
分层 液
过滤 测 量 放 射 性
免疫细胞功能检测技术概述
第十一页，共四十三页。
试验孔A均值 SI对照孔 57A 0n均 m 值
抗体生成细胞检测.
试剂与器材
1. 小鼠；
2. 绵羊红细胞悬液（2.5%）；
3. 指示细胞悬液： 含10% 绵羊红细胞悬液
0.5ml，补体0.3ml，Hank’s液2.0ml；
4. 细胞裂解液0.17mol的NH4Cl； 5. Hank’s 液（pH7.2）、凡士林油；
6. 动物解剖器械、注射器（5ml）、平皿、试管、 吸管、载玻片、盖玻片、双面胶；
溶血空斑试验
制作反应板 加样：30ul 温箱10分钟
双面胶 盖玻片
Department of Immunology
Department of Immunology
定量溶血分光光度法（quantitative hemolysis spectrophotometry，QHS）
该法又称B细胞介导的红细胞定量溶血分光光 度法，是根据溶血空斑试验的原理衍化而来， 可用以测定由B细胞产生和分泌的抗体裂解红 细胞所释放的血红蛋白(以吸光值表示)，从而 反映机体的体液免疫功能。试验时，将免疫的 脾细胞与SRBC及新鲜豚鼠血清等体积混合，于 37℃水浴1小时，离心后测上清吸光值，其与 产生抗体的量成正比。
将SRBC免疫过的小鼠脾细胞制成细胞悬液， 与一定量的SRBC在琼脂凝胶内混合，在补 体参与下，使抗体产生细胞周围的SRBC溶 解，形成一个肉眼可见的溶血空斑。主要 用于测定B细胞抗体产生能力。
Department of Immunology
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实验原理
ELISPOT不仅可应用于B细胞分泌抗体功 能的测定，也能检测分泌细胞因子的T细 胞和巨噬细胞。
Department of Immunology
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免疫实验诊断PPT课件
局限性
尽管免疫实验诊断在许多方面具有重要价值， 但仍存在一定的局限性。例如，某些疾病可 能无法通过免疫实验诊断确诊；实验结果可 能受到多种因素干扰，如试剂质量、操作误 差等；此外，部分免疫实验诊断方法可能存 在一定的假阳性或假阴性风险。
THANKS
感谢观看
通过检测肿瘤标志物、细胞因子等， 有助于肿瘤的早期发现、疗效监测和 预后评估。
移植免疫诊断
通过检测供、受体的免疫状态，有助 于提高移植成功率，预防排斥反应。
02
免疫实验诊断技术
抗原抗体反应技术
抗原抗体反应技术是利用抗原 和抗体特异性结合的原理，通 过检测抗原抗体反应来诊断疾 病的一种技术。
常见的抗原抗体反应技术包括 沉淀反应、凝集反应、补体结 合试验等。
抗原抗体反应技术具有操作简 便、敏感性高、特异性强等优 点，在临床诊断中广泛应用。
酶联免疫吸附试验
酶联免疫吸附试验是一种常用的免疫 学检测方法，通过酶标记的抗体或抗 原与特异性抗原或抗体结合，再加入 底物显色，达到检测目的。
酶联免疫吸附试验具有灵敏度高、特 异性强、操作简便等优点，适用于大 量样品的快速检测。
04
免疫实验诊断的临床意义
感染性疾病的诊断
细菌性疾病
01
通过检测病原体抗原、抗体或细胞因子等，有助于诊断和鉴别
常见的细菌感染，如肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌等。
病毒性疾病
02
检测病毒抗原、抗体或病毒核酸等，有助于诊断和监测病毒感
染，如流感病毒、乙型肝炎病毒等。
寄生虫感染
03
检测寄生虫抗原、抗体或细胞因子等，有助于诊断和鉴别寄生
肿瘤的早期诊断与监测
肿瘤标志物检测
通过检测肿瘤标志物，如癌胚抗 原、甲胎蛋白等，有助于早期发 现和监测肿瘤的生长和扩散。
免疫实验结果分析培训ppt课件
谓之假阴性。其原因与组织处理不当，组 织细胞抗原丢失或试剂错误(如漏加、错 加、失效、变质等),操作失误等有关。
免疫实验结果分析
35
对照结果判断：
阳性对照 1 ( －) 2 ( ＋) 3 ( ＋) 4 ( －) 5 ( ＋) 6 ( ＋) 7 ( ＋)
阴性对照 ( －) ( ＋) ( ＋)
( －) ( －) ( －) ( －)
⑶ 吸收试验 是指用事先经过量抗原吸收的
第一抗体上清液取代第一抗体，其他步骤不
变的免疫染色试剂对照。结果应是阴性或阳
性着色明显减弱 (吸收不全时) 。
免疫实验结果分析
15
⑷抑制试验 是指用标记抗体和未标记抗 体 (可以是一抗，也可以是二抗或桥抗
体) 两者的混合物作试剂，其他步骤不 变的免疫组化染色试剂对照，结果其阳 性着色应成比例的减弱 (等量或1：9) 。 此试剂对照多用于直接法。
免疫实验结果分析
第一节 免疫组化结果的判断原则
免疫组化结果的判断原则概括起来有 以下几点：
免疫实验结果分析
2
⒈ 必须同时设对照染色 。没有对照染 色的免疫组化染色结果是不可信的。
⒉抗原表达必须在特定部位。如LCA应 定位在细胞膜上；CK应定位在细胞浆内； PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内；EMA应 定位在细胞膜上，等等。不在抗原所在部
替代对照 检测结果
结果判断
( －) ( ＋)
( －) ( ＋)
抗体失活，操作有误 非特异性染色
( －) ( －) ( ＋)
(＋)(－) ( ＋)
( ＋)
阴性对照内含定位抗原 阳性对照不含定位抗原 非特异染色
( －)
( －)
检测标本不含抗体结合可靠
细胞免疫的检查培训ppt
杀伤T细胞亚群 Tc（CD8+CD28+） CD8+ 抑制T细胞亚群 Ts （CD8+CD28-）
2. 功能
Ti： CD4+CD45RA+பைடு நூலகம்
对ConA和同种异 体抗原刺激有强烈 反应，但不产生记 忆应答。
不同阶段的
诱导
Ts 细胞产生
Th 调节 B
Th： CD4+CD29+
诱导
B 细胞
诱导细胞介导的淋 巴细胞溶解作用
抗体
Tc: CD8+CD28+
特点
•特异性杀伤作用 •杀伤作用受MHC-I类分子限定 •效应性细胞Tc可连续杀伤靶细胞
标志物
流式细胞术
T细胞 表面分化抗原：CD3\4\8\25等
B细胞
膜表面IgG测定(smIg)
(Surface membrane immunoglobulin SmIg)
表面分化抗原(CD19\20\22等)
NK细胞 表面分化抗原 …
T淋巴细胞转化试验
（形态学）原理：
PHA 48~72小时
结果判定：每份标本数200个细胞
转化的淋巴细胞数
淋巴细胞转化率 =
×100%
转化的淋巴数 +未转化的淋巴数
正常参考值（PHA） 60%~80%
优点：简便易行，便于基层推广 缺点：易受主观因素影响，重复性差
讨论1、为什么用PHA刺激T细胞可使T 细胞分裂增生？
2、B淋巴细胞转化试验应该如何 进行？
美洲商陆OR葡萄球菌A蛋白
NK细胞活性测定
细胞免疫检查
Examination of Cellular immunity
学习公约
2. 功能
Ti： CD4+CD45RA+பைடு நூலகம்
对ConA和同种异 体抗原刺激有强烈 反应，但不产生记 忆应答。
不同阶段的
诱导
Ts 细胞产生
Th 调节 B
Th： CD4+CD29+
诱导
B 细胞
诱导细胞介导的淋 巴细胞溶解作用
抗体
Tc: CD8+CD28+
特点
•特异性杀伤作用 •杀伤作用受MHC-I类分子限定 •效应性细胞Tc可连续杀伤靶细胞
标志物
流式细胞术
T细胞 表面分化抗原：CD3\4\8\25等
B细胞
膜表面IgG测定(smIg)
(Surface membrane immunoglobulin SmIg)
表面分化抗原(CD19\20\22等)
NK细胞 表面分化抗原 …
T淋巴细胞转化试验
（形态学）原理：
PHA 48~72小时
结果判定：每份标本数200个细胞
转化的淋巴细胞数
淋巴细胞转化率 =
×100%
转化的淋巴数 +未转化的淋巴数
正常参考值（PHA） 60%~80%
优点：简便易行，便于基层推广 缺点：易受主观因素影响，重复性差
讨论1、为什么用PHA刺激T细胞可使T 细胞分裂增生？
2、B淋巴细胞转化试验应该如何 进行？
美洲商陆OR葡萄球菌A蛋白
NK细胞活性测定
细胞免疫检查
Examination of Cellular immunity
学习公约
《细胞免疫检测技术》课件
应用
细胞免疫检测技术在医学领域广泛应用于感染性疾病、肿瘤 、自身免疫性疾病等的诊断、治疗监测和预后评估。
发展趋势
自动化与高通量
随着技术的发展，细胞免疫检测 正朝着自动化、高通量、高灵敏 度的方向发展，以提高检测效率
和准确性。
标准化与规范化
为了确保检测结果的可靠性和可比 性，需要建立和完善细胞免疫检测 技术的标准化和规范化体系。
机遇
随着科技的不断进步，新的技术和方法不断涌现，为细胞免疫检测技术的发展提供了更多的机遇和可能性。
未来研究方向与展望
研究方向
未来细胞免疫检测技术的研究方向主要包括 提高检测的灵敏度和特异性、降低检测成本 、开发新的技术和方法等。
展望
随着科技的不断进步和研究的深入，细胞免 疫检测技术有望在未来得到更广泛的应用， 为疾病的诊断、治疗和预防提供更多的帮助 和支持。
《细胞免疫检测技术 》PPT课件
xx年xx月xx日
• 引言 • 细胞免疫检测技术概述 • 细胞免疫检测技术的基本方法 • 细胞免疫检测技术在医学中的应
用 • 案例分析 • 总结与展望
目录
01
引言
课程背景
01
细胞免疫检测技术是生物学、医 学等领域的重要研究手段，广泛 应用于疾病诊断、治疗和预防。
肿瘤免疫诊断中常用的细胞免疫检测技术包括流式细胞术、 免疫组织化学、酶联免疫吸附试验等。这些技术能够检测肿 瘤细胞表面的标志物、分泌的细胞因子和免疫细胞浸润等情 况，为肿瘤的诊断和治疗提供重要依据。
自身免疫病诊断
自身免疫病是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身 组织损害的疾病。细胞免疫检测技术在自身免疫病诊断中 具有重要作用。
常用的细胞免疫检测技术包括混合淋巴细胞培养、细胞毒试验、抗体检测等。这 些技术能够检测供、受体之间的免疫差异和排斥反应的标志物，为移植后管理和 治疗提供指导。
细胞免疫检测技术在医学领域广泛应用于感染性疾病、肿瘤 、自身免疫性疾病等的诊断、治疗监测和预后评估。
发展趋势
自动化与高通量
随着技术的发展，细胞免疫检测 正朝着自动化、高通量、高灵敏 度的方向发展，以提高检测效率
和准确性。
标准化与规范化
为了确保检测结果的可靠性和可比 性，需要建立和完善细胞免疫检测 技术的标准化和规范化体系。
机遇
随着科技的不断进步，新的技术和方法不断涌现，为细胞免疫检测技术的发展提供了更多的机遇和可能性。
未来研究方向与展望
研究方向
未来细胞免疫检测技术的研究方向主要包括 提高检测的灵敏度和特异性、降低检测成本 、开发新的技术和方法等。
展望
随着科技的不断进步和研究的深入，细胞免 疫检测技术有望在未来得到更广泛的应用， 为疾病的诊断、治疗和预防提供更多的帮助 和支持。
《细胞免疫检测技术 》PPT课件
xx年xx月xx日
• 引言 • 细胞免疫检测技术概述 • 细胞免疫检测技术的基本方法 • 细胞免疫检测技术在医学中的应
用 • 案例分析 • 总结与展望
目录
01
引言
课程背景
01
细胞免疫检测技术是生物学、医 学等领域的重要研究手段，广泛 应用于疾病诊断、治疗和预防。
肿瘤免疫诊断中常用的细胞免疫检测技术包括流式细胞术、 免疫组织化学、酶联免疫吸附试验等。这些技术能够检测肿 瘤细胞表面的标志物、分泌的细胞因子和免疫细胞浸润等情 况，为肿瘤的诊断和治疗提供重要依据。
自身免疫病诊断
自身免疫病是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身 组织损害的疾病。细胞免疫检测技术在自身免疫病诊断中 具有重要作用。
常用的细胞免疫检测技术包括混合淋巴细胞培养、细胞毒试验、抗体检测等。这 些技术能够检测供、受体之间的免疫差异和排斥反应的标志物，为移植后管理和 治疗提供指导。
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抗原+抗体
结合补体
抗原+抗体+补体
补体活化，形成MAC
靶细胞裂解
本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据定量溶血分光光度计法体外检测 细胞产生抗体的能力
( QHS——Quantitative Hemolytic Spectrophotometric determination )
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结合抗原之前
结合抗原之后
Fc段
CH1
C1q 结合
CH2
位点被屏
障
IgM CH3区，IgG CH2区
暴露的 C1q结 合位点
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3. 方法：
1ml
Hank’s
脾细胞
2）抗原-抗体-补体反应：
加1ml SRBC 溶液 加1ml补体
彻底混匀
37℃孵育1h 离心，3000rpm，5min
分光光度计检测上清液 413nm波长下的吸光值
2. 材料：
SRBC免疫小鼠 新鲜SRBC溶液 (1.5×108/ml) 经SRBC吸收的补体溶液
来自豚鼠血清 经SRBC吸收去除非特异性抗体
本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之 处，请联系网站或本断人颈处删死除S。RBC免疫的小鼠
3. 方法：
取脾，以Hank’s 液漂洗 经200钼铜网，以针拴研磨脾脏成单细胞悬液
1） 制备脾细胞
收集细胞悬液，加适量Hank’s 洗涤
离心1500rpm, 5min 弃上清
细胞沉淀中加入4.5ml蒸馏水，用力混匀 40s 迅速加入0.5ml 9%NaCl 离心 1500rpm, 5min 弃上清，加入1.2ml Hank’s溶液
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1. 原理： 处，请联系网站或本人删除。
抗原
脾脏
IgM
SRBC
免疫小鼠
4 days later
+ SRBC 补体
浆细胞
分光光度计 定量分析
Hb
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4. 注意事项：
新鲜SRBC溶液，用前晃匀 保持脾细胞活性
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Test 2 第三次免疫
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2. 方法:
处，请联系网站或本人删除。
脱纤维绵羊红细胞（SRBC）
加入3ml 生理盐水，混匀 2000rpm, 离心，5min
弃上清 加入3ml 生理盐水，混匀
2000rpm, 离心，5min
弃上清
制备绵羊红细胞溶液20%、 25%、30%、40%
取0.1ml 皮下注射 免疫小鼠
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Complementbinding site
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WBC
1mm WBC 1mm
WBC
WBC
细胞浓度/ml = 4个大方格中的细胞总数/4 x 104
RBC
细胞浓度/ml = 5个中方格中的细胞总数 x 5 x 104
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结合补体
抗原+抗体+补体
补体活化，形成MAC
靶细胞裂解
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( QHS——Quantitative Hemolytic Spectrophotometric determination )
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结合抗原之后
Fc段
CH1
C1q 结合
CH2
位点被屏
障
IgM CH3区，IgG CH2区
暴露的 C1q结 合位点
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3. 方法：
1ml
Hank’s
脾细胞
2）抗原-抗体-补体反应：
加1ml SRBC 溶液 加1ml补体
彻底混匀
37℃孵育1h 离心，3000rpm，5min
分光光度计检测上清液 413nm波长下的吸光值
2. 材料：
SRBC免疫小鼠 新鲜SRBC溶液 (1.5×108/ml) 经SRBC吸收的补体溶液
来自豚鼠血清 经SRBC吸收去除非特异性抗体
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3. 方法：
取脾，以Hank’s 液漂洗 经200钼铜网，以针拴研磨脾脏成单细胞悬液
1） 制备脾细胞
收集细胞悬液，加适量Hank’s 洗涤
离心1500rpm, 5min 弃上清
细胞沉淀中加入4.5ml蒸馏水，用力混匀 40s 迅速加入0.5ml 9%NaCl 离心 1500rpm, 5min 弃上清，加入1.2ml Hank’s溶液
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抗原
脾脏
IgM
SRBC
免疫小鼠
4 days later
+ SRBC 补体
浆细胞
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Hb
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Test 2 第三次免疫
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脱纤维绵羊红细胞（SRBC）
加入3ml 生理盐水，混匀 2000rpm, 离心，5min
弃上清 加入3ml 生理盐水，混匀
2000rpm, 离心，5min
弃上清
制备绵羊红细胞溶液20%、 25%、30%、40%
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Complementbinding site
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WBC
1mm WBC 1mm
WBC
WBC
细胞浓度/ml = 4个大方格中的细胞总数/4 x 104
RBC
细胞浓度/ml = 5个中方格中的细胞总数 x 5 x 104
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