和记忆障碍持续时间及其两者的关系

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中 国 医 学 科 学 院 学 报
! ! 阿 尔 茨 海 默 病 （ "#$%&’(&)*+ ,’+&-+& ，". ） 的 主 要病理特征之一是由过度磷酸化 /-0 蛋白组成神经原 纤维缠 结 （ 1&0)23’4)’##-)5 /-16#&+ ，789 ） 。 /-0 蛋 白 是一种微管 相 关 蛋 白，能 增 加 微 管 组 装 速 度 并 在 生 长端降低微管分子解聚速度，在 ". 患者脑中异常磷 酸化的 /-0 蛋白已丧失其生物学功能，从而导致微管 解聚、轴突转运受损和神经元退行性变
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两组再各分为 ;E 、EP 和 ]; % 组，每组 :; 只。 行为学测 试 ! 采 用 ?2))’+ 水 迷 宫 系 统 测 试 大 鼠 的空间记忆能力。测试用圆形水池直 径 :;J >( ，高 HJ >( ；圆柱形有机玻璃平台直径 :J >( ，高 EJ >( 。 _ 。训 练 时 将 大 鼠 从 室温及水温均保持 在（ ;H a ; ） 任一象限 : I ; 弧 度 处 头 面 向 池 壁 轻 放 于 水 中，其 游 泳图像经水面上方 :< M >( 处摄像机拍摄并连接于路 径追踪系 统 采 集，最 后 通 过 微 机 分 析，可 提 供 潜 伏 期（ 即老鼠从入水点找到平台所用时间） 、路径、搜 索策略等指 标，本 实 验 选 用 潜 伏 期 和 游 泳 路 径 衡 量 大鼠学习和 记 忆 成 绩。每 只 大 鼠 每 天 在 E 个 象 限 各 训练 : 次，每次游泳时间 限 为 HJ + ，即 在 HJ + 内 未 找到平 台 者 系 统 自 动 停 止 记 录，潜 伏 期 记 为 HJ + ， 由测试者引导其上台，休息 =J + 后进行下一次训练。 采用的实验策略为每组大鼠注射前训练 M , ，以大鼠 第 ;J 次训练成绩作为正常组成绩。休息 : , 经侧脑 室给药处 理 后，再 在 不 同 时 间 点 行 行 为 学 测 试，将 各组所得成 绩 与 各 自 正 常 组 成 绩 作 比 较，可 反 映 大 鼠空间记忆保留情况。 侧脑 室 注 射 ! 大 鼠 称 重 后， 以 HX 水 合 氯 醛 （ J< H (# I :JJ 6 ） 腹腔麻醉。将大鼠 固 定 于 脑 立 体 定 位仪上，头 顶 局 部 常 规 备 皮、消 毒，头 顶 正 中 矢 状 切开约 :< M >( ，=X K; Z; 棉球擦拭使前囟暴露清晰。 确定前后 囟 在 同 一 水 平 线 上 后，于 前 囟 后 J< P (( 、 。 矢线左侧 :< M (( 处用手钻钻一孔（ 直径 J< H (( ） 用 MJ "# 微 量 注 射 器 取 PJ "(2# I Q 的 82)+C2#’1 EJ "# （ 人 工 脑 脊 液 稀 释 ） 或 人 工 脑 脊 液 （ :EJ ((2# I Q 7-Y# ，=< J ((2# I Q DY# ，;< M ((2# I Q>-Y#; ，:< J ((2# I Q ?6Y#; 和 :< ; ((2# I Q 7-; K@ZE ， BK ]< E ） EJ "# ，进 针至硬膜下约 E (( ，慢速注入，每只约为 M (’1 。注 射完毕后留针 P ^ :J (’1 ，再缓慢退针，以防药物沿 针道返流 颅 外。术 后 局 部 涂 抹 青 霉 素 粉 末、缝 合 皮 肤，再次消毒 创 处 预 防 感 染，将 大 鼠 置 于 空 笼 内 待 其苏醒。 免疫组织化学检测 ! 将大鼠麻醉后，用 EX 多聚 甲醛磷酸缓 冲 液 进 行 心 脏 灌 注 固 定 脑 组 织，取 出 脑 组织后再在上述固定液 中 后 固 定 ;E % ，行 连 续 振 荡 切片（ 每张片厚为 ;J "( ） 。J< =X 过氧化氢 I 甲醇室 温 孵 育 :J (’1 以 阻 断 内 源 性 过 氧 化 物 酶， J< J: ((2# I Q @RF 液冲洗 M (’1 b = 次；J< J;X 9)’/21 cA:JJ 孵育 :J (’1 ，J< J: ((2# I Q @RF 液冲洗 M (’1 b = 次； 加入 =X RF" 室温下封闭 =J (’1 ；加入一抗，E d Y 孵 育 EP % ，J< J: ((2# I Q @RF 液冲洗 M (’1 b = 次；滴
中 国 医 学 科 学 院 学 报 !"#! !"!$%&’!% &%$’"’(!% )’(’"!%
・论 ! 著・
大 鼠 侧 脑 室 单 次 注 射 $%&’(%)*+ 引 起 ,-. 蛋 白 异 常 磷 酸 化 和记忆障碍持续时间及其两者的关系&
张军霞，王 ! 玥，田 ! 青，朱铃强，王建枝 ,
（ 华中科技大学 + 同济医学院病理生理学系，武汉 -.//./ ）
! ! 摘要：目的 ! 探讨侧脑室单次注射 012341567 后，大鼠海马组织中 89: 蛋白异常磷酸化和记忆障碍持续时间及两者
关系。方法 + 向大鼠侧脑室内单次注射 ;/ !<15 = > 的 ?!&@A依赖性蛋白激酶 ! （ @B!） 激动剂 A012341567 -/ !5，用特定抗 体通过免疫印迹和免疫组织化学方法检测大鼠海马 89: 蛋白磷酸化水平的改变，同时用 &12263 水迷宫法检测大鼠空间记 忆能力。结果 + 侧脑室注射 012341567 后，大鼠海马 89: 蛋白磷酸化水平在 C- 、-; 和 DC E 均有显著升高（ " F /* /G ） ，在 -; E 达到高峰（ " F /* /H ） ，在 DC E 呈恢复趋势；大鼠在注射后 C- 、-; 和 DC E 均有空间记忆障碍（ " F /* /G ） ，这种记 忆障碍在 -; E 最明显（ " F /* /H ） ，在 DC E 时亦呈明显恢复趋势；大鼠空间记忆保留障碍与海马 89: 蛋白 @I0AH 位点的 ，与 #9:AH 位点的非磷酸化程度呈负相关（ # J L /* KM. ，" F /* /G ） ，与 N)CH磷酸化程度呈正相关（ # J /* KD ，" F /* /G ） 位点的磷酸化程度无相关性（ # J /* D/G ，" O /* /G ） 。结论 + 大鼠侧脑室单次注射 012341567 只在一定时间内引起 89: 蛋白 异常磷酸化和动物记忆障碍，且二者的改变趋势存在一定相关性。 关键词： ?!&@A依赖性蛋白激酶 !； 89: 蛋白；磷酸化；空间记忆；阿尔茨海默病 （ C//M ） /.A/.GGA/G 中图分类号： PD-G* D ；QGH.+ + 文献标识码： !+ + 文章编号：H///AG/.R
。目前国
际上尚无公 认 的 神 经 元 退 行 性 变 动 物 模 型，笔 者 近 期研究显 示：在 大 鼠 侧 脑 室 注 射 一 种 >"?@A依 赖 性 蛋白 激 酶 " （ >"?@A,&B&1,&1/ B)2/&’1 C’1-+& ， @D" ） 激动剂 82)+C2#’1 后，可 在 ;E % 时 引 起 /-0 蛋 白 异 常 磷酸化和大鼠记忆障碍
（ $YN928<Y78 1^ @98E1NE_36151Z_ ，#17Z‘6 &Ya6?95 "155YZY ，I:9]E17Z )?6Y7?Y 97a #Y?E76?95 [76bY2368_ ，W:E97 -.//./ ，"E679 ）
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、国家自然科学基金（ ./-///M; ，./-//HDH ，./-./CD/ ） ):NN128Ya c_ 8EY (9861795 @21Z29< & 基金项目：国家重点基础性研究项目（ C//M"eG//D/. ） 1^ BY_ e936? PY3Y92?E @21‘Y?8 1^ "E679 （ C//M"eG//D/. ）97a 8EY (9861795 (98:295 )?6Y7?Y 01:7a98617 1^ "E679（ ./-///M; ， ./-//HDH ， ./-./CD/ ） ； , "122YA 3N17a67Z 9:8E12 #Y5：/CDA;.MKCMCG ， 09V ：/CDA;.MK.;;. ， %A<965：d97Z‘]f<9653*8‘<:*Ya:*?7