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大肠菌群是革兰氏阴性、无芽孢、氧
化酶阴性的杆状细菌，可需氧或兼性厌 氧地生长在含胆盐（或其他具有同样抑 制生长性能的表面活性剂）的培养基上， 当在36 ±2℃培养时，通常能于48hr内发 酵乳糖产酸和醛。它们还具有ß-半乳糖 苷酶。
4、依据ß-半乳糖苷酶快速测定大肠菌群的原理
➢ 大肠菌群产生的ß-半乳糖苷酶可分解培养基中的酶底物（即色 基与ß-半乳糖的结合物），使带色基团游离而显色或发荧光。该 反应灵敏快速。
（1）最近拟数法（MPN）（GB4789.2-1994）
0.1g×3
样品
0.01g × 3
0.001g × 3
乳糖胆盐发酵管 37 ℃ 24hr
产酸产气管
伊红美蓝平板（分离）
37 ℃ 24hr可疑菌落
乳糖发酵管（证实）
37 ℃ 24hr
根据经证实的乳糖胆盐发酵管 阳性管数，查MPN表。
（2）平板直接计数法（SN0169-92）
➢ 以自制MUGal肉汤与LST肉汤比较检测66份样 品中大肠菌群，其24h阳性检出率是LST肉汤 48h的1.5倍，但延长LST肉汤培养时间至96小 时后，两者结果逐步接近。表明MUGal多检出 的阳性部分多为受伤生长缓慢或迟缓发酵乳糖 的大肠菌群类菌株所致。
➢ 将MUGal肉汤阳性管中的可疑菌株进行触酶、 氧化酶和硝酸盐还原试验，并任选其中18株用 API 20E鉴定。证明95.1%的MUGal肉汤阳性 管中含有大肠菌群。
大肠菌群检验
二、大肠菌群的定义及检测方法
1、大肠菌群的传统定义 大肠菌群（Coliform group）系指一群需氧
及兼性厌氧，在37 ℃24小时能发酵乳糖产酸产 气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
包括肠杆菌科的艾希氏菌属、柠檬酸杆菌 属、肠杆菌属和克雷伯菌属。其中以艾希氏菌 属为主，称为典型大肠杆菌，其它三属习惯上 称为典型大肠杆菌。 2、大肠菌群检验的标准方法
➢ 2000年James等独家报导了一种新的检测大肠菌群的酶底物—— 茜素-β-D-半乳糖苷（Aliz-gal）。该试剂具有比同类酶底物更灵 敏的性能，在固体培养基中可使大肠菌群呈现带色菌落，色素为 脂溶性不扩散，易与辨别，另还可以和不同的阳离子（Fe、Al、 K、NH4）形成带色的螯合物，这样就便于和其他的显色剂合用， 组成具有多种性能的鉴别培养基，以提高检测的灵敏度。目前， 国内外均无商品化试剂出售。
MUGal肉汤：
胰蛋白胨20g
氯化钠5g
无水磷酸氢二钾2.75g
无水磷酸二氢钾2.75g
月桂基硫酸钠0.1g
MUGal0.08g
水1000ml
加热使溶化，调Ph7.4， 分装试管，每管10ml， 116℃高压灭菌10min。待 培养基冷却后，以无菌手 续在每管培养液内加入 0.1mL经过滤除菌的 500ug/mL头孢磺啶稀释 液。
测食品中大肠菌群作为一种推荐的标准方法加 以应用是可行的。
四、应用茜素-β-D-半乳糖苷快速检验食品中的大肠菌群
1、检测步骤
样品
0.1g×2
0.01g × 2 0.001g × 2
Aliz-gal琼脂37 ℃ 24hr
计数紫色和红色菌落，乘以稀释倍数报告
大肠菌群β-D-半乳糖苷酶
茜素-β-D-半乳糖苷
➢ 综上所述，自制MUGal肉汤检测大肠菌群灵
敏、快速、准确，无需验证，可一次完成。自 制MUGal性质稳定，无游离荧光，可替代昂贵 的进口产品使用。鉴于以MUGal检测大肠菌群 的方法早在1995年即为美国国家环境保护署采 纳 ，有关大肠菌群具有ß-半乳糖苷酶的特性， 也在ISO 9308-1:2000给予了明确的定义。因此， 经过本次试验我们认为，以MUGal肉汤快速检
茜素—Fe.NH4.Al.K（紫色和红色）
茜素-β-D-半乳糖苷琼脂 （Alig-gal琼脂）：
Aliz-gal 50mg 蛋白胨20g 无水磷酸氢二钾2.75g 无水磷酸二氢钾2.75g 氯化钠5g 月桂基硫酸钠0.1g 异丙基硫代半乳糖苷0.03g 硫酸铝钾0.5g 柠檬酸铁铵0.5g 琼脂15g 蒸馏水1000mL。 调Ph7.4
2、试验情况简介
➢ 当在MUGal肉汤中生长的大肠菌群数量较少时 也可在紫外灯下呈现明显的蓝色荧光，反应较 乳糖产酸显色快速灵敏，结果易读。
➢ 以13株与肠杆菌科相关的标准菌株验证MUGal 肉汤，其结果与在LST和乳糖胆盐肉汤中的乳 糖发酵结果完全一致，符合相关菌株的特性。
➢ 将自制MUGal与SIGMA产MUGal比较测试26 份样品，两者阳性符合率为94.6%。
三、应用4-甲基伞形ຫໍສະໝຸດ -β-D-半乳糖苷快速检验食 品中的大肠菌群
1、检测步骤
样品
0.1g×3
0.01g × 3 0.001g × 3
MUGal肉汤 37 ℃ 24hr
在紫外光下观察产荧光管数，查MPN表得MPN值
大肠菌群β-D-半乳糖苷酶
4-甲基伞形酮-β-D-半乳糖苷
4-甲基伞形酮（兰色荧光）
2、试验情况简介
• Aliz-gal检测食品中大肠菌群可在18-24h内显示出半 乳糖苷酶反应，在同类性质的酶底物中，Aliz-gal的 用量较低，做倾注培养时在琼脂深层菌落特征较明 显。
样品
0.1g×2
0.01g × 2 0.001g × 2
结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）37 ℃ 24hr 计数紫红色菌落，乘以稀释倍数报告
3、ISO关于大肠菌群的定义（ISO9308-1：2000）
（ISO：INTERNATIONAL STARDIZATION ORGANIZATION国际标准化组织）
➢ 测定ß-半乳糖酶常用的底物有4-甲基伞形酮-ß-D半乳糖苷 （MUGal）、5-溴-4氯-3-吲哚-ß-D-半乳糖苷（X-gal）、3，4-环 已酮-ß-D-半乳糖苷和8-羟基喹啉-ß-D-半乳糖苷等。
➢ 1993年Brenner等人用加4-甲基伞形酮-ß-D-半乳糖苷（MUGal） 和吲哚氧基-ß-D-葡糖醛酸苷的培养基检测大肠菌群和大肠杆菌 [3]，取得满意结果。1995年该方法被美国国家环境保护署采纳 （Code of Federal Regulation 40,141.21 Protection Of Environment）。美国SIGMA公司有商品化试剂，但价格昂贵。
化酶阴性的杆状细菌，可需氧或兼性厌 氧地生长在含胆盐（或其他具有同样抑 制生长性能的表面活性剂）的培养基上， 当在36 ±2℃培养时，通常能于48hr内发 酵乳糖产酸和醛。它们还具有ß-半乳糖 苷酶。
4、依据ß-半乳糖苷酶快速测定大肠菌群的原理
➢ 大肠菌群产生的ß-半乳糖苷酶可分解培养基中的酶底物（即色 基与ß-半乳糖的结合物），使带色基团游离而显色或发荧光。该 反应灵敏快速。
（1）最近拟数法（MPN）（GB4789.2-1994）
0.1g×3
样品
0.01g × 3
0.001g × 3
乳糖胆盐发酵管 37 ℃ 24hr
产酸产气管
伊红美蓝平板（分离）
37 ℃ 24hr可疑菌落
乳糖发酵管（证实）
37 ℃ 24hr
根据经证实的乳糖胆盐发酵管 阳性管数，查MPN表。
（2）平板直接计数法（SN0169-92）
➢ 以自制MUGal肉汤与LST肉汤比较检测66份样 品中大肠菌群，其24h阳性检出率是LST肉汤 48h的1.5倍，但延长LST肉汤培养时间至96小 时后，两者结果逐步接近。表明MUGal多检出 的阳性部分多为受伤生长缓慢或迟缓发酵乳糖 的大肠菌群类菌株所致。
➢ 将MUGal肉汤阳性管中的可疑菌株进行触酶、 氧化酶和硝酸盐还原试验，并任选其中18株用 API 20E鉴定。证明95.1%的MUGal肉汤阳性 管中含有大肠菌群。
大肠菌群检验
二、大肠菌群的定义及检测方法
1、大肠菌群的传统定义 大肠菌群（Coliform group）系指一群需氧
及兼性厌氧，在37 ℃24小时能发酵乳糖产酸产 气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
包括肠杆菌科的艾希氏菌属、柠檬酸杆菌 属、肠杆菌属和克雷伯菌属。其中以艾希氏菌 属为主，称为典型大肠杆菌，其它三属习惯上 称为典型大肠杆菌。 2、大肠菌群检验的标准方法
➢ 2000年James等独家报导了一种新的检测大肠菌群的酶底物—— 茜素-β-D-半乳糖苷（Aliz-gal）。该试剂具有比同类酶底物更灵 敏的性能，在固体培养基中可使大肠菌群呈现带色菌落，色素为 脂溶性不扩散，易与辨别，另还可以和不同的阳离子（Fe、Al、 K、NH4）形成带色的螯合物，这样就便于和其他的显色剂合用， 组成具有多种性能的鉴别培养基，以提高检测的灵敏度。目前， 国内外均无商品化试剂出售。
MUGal肉汤：
胰蛋白胨20g
氯化钠5g
无水磷酸氢二钾2.75g
无水磷酸二氢钾2.75g
月桂基硫酸钠0.1g
MUGal0.08g
水1000ml
加热使溶化，调Ph7.4， 分装试管，每管10ml， 116℃高压灭菌10min。待 培养基冷却后，以无菌手 续在每管培养液内加入 0.1mL经过滤除菌的 500ug/mL头孢磺啶稀释 液。
测食品中大肠菌群作为一种推荐的标准方法加 以应用是可行的。
四、应用茜素-β-D-半乳糖苷快速检验食品中的大肠菌群
1、检测步骤
样品
0.1g×2
0.01g × 2 0.001g × 2
Aliz-gal琼脂37 ℃ 24hr
计数紫色和红色菌落，乘以稀释倍数报告
大肠菌群β-D-半乳糖苷酶
茜素-β-D-半乳糖苷
➢ 综上所述，自制MUGal肉汤检测大肠菌群灵
敏、快速、准确，无需验证，可一次完成。自 制MUGal性质稳定，无游离荧光，可替代昂贵 的进口产品使用。鉴于以MUGal检测大肠菌群 的方法早在1995年即为美国国家环境保护署采 纳 ，有关大肠菌群具有ß-半乳糖苷酶的特性， 也在ISO 9308-1:2000给予了明确的定义。因此， 经过本次试验我们认为，以MUGal肉汤快速检
茜素—Fe.NH4.Al.K（紫色和红色）
茜素-β-D-半乳糖苷琼脂 （Alig-gal琼脂）：
Aliz-gal 50mg 蛋白胨20g 无水磷酸氢二钾2.75g 无水磷酸二氢钾2.75g 氯化钠5g 月桂基硫酸钠0.1g 异丙基硫代半乳糖苷0.03g 硫酸铝钾0.5g 柠檬酸铁铵0.5g 琼脂15g 蒸馏水1000mL。 调Ph7.4
2、试验情况简介
➢ 当在MUGal肉汤中生长的大肠菌群数量较少时 也可在紫外灯下呈现明显的蓝色荧光，反应较 乳糖产酸显色快速灵敏，结果易读。
➢ 以13株与肠杆菌科相关的标准菌株验证MUGal 肉汤，其结果与在LST和乳糖胆盐肉汤中的乳 糖发酵结果完全一致，符合相关菌株的特性。
➢ 将自制MUGal与SIGMA产MUGal比较测试26 份样品，两者阳性符合率为94.6%。
三、应用4-甲基伞形ຫໍສະໝຸດ -β-D-半乳糖苷快速检验食 品中的大肠菌群
1、检测步骤
样品
0.1g×3
0.01g × 3 0.001g × 3
MUGal肉汤 37 ℃ 24hr
在紫外光下观察产荧光管数，查MPN表得MPN值
大肠菌群β-D-半乳糖苷酶
4-甲基伞形酮-β-D-半乳糖苷
4-甲基伞形酮（兰色荧光）
2、试验情况简介
• Aliz-gal检测食品中大肠菌群可在18-24h内显示出半 乳糖苷酶反应，在同类性质的酶底物中，Aliz-gal的 用量较低，做倾注培养时在琼脂深层菌落特征较明 显。
样品
0.1g×2
0.01g × 2 0.001g × 2
结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）37 ℃ 24hr 计数紫红色菌落，乘以稀释倍数报告
3、ISO关于大肠菌群的定义（ISO9308-1：2000）
（ISO：INTERNATIONAL STARDIZATION ORGANIZATION国际标准化组织）
➢ 测定ß-半乳糖酶常用的底物有4-甲基伞形酮-ß-D半乳糖苷 （MUGal）、5-溴-4氯-3-吲哚-ß-D-半乳糖苷（X-gal）、3，4-环 已酮-ß-D-半乳糖苷和8-羟基喹啉-ß-D-半乳糖苷等。
➢ 1993年Brenner等人用加4-甲基伞形酮-ß-D-半乳糖苷（MUGal） 和吲哚氧基-ß-D-葡糖醛酸苷的培养基检测大肠菌群和大肠杆菌 [3]，取得满意结果。1995年该方法被美国国家环境保护署采纳 （Code of Federal Regulation 40,141.21 Protection Of Environment）。美国SIGMA公司有商品化试剂，但价格昂贵。