免疫室常见问题结果分析 案例分析

ELISA法测抗-HCV假阳性
原因一：类风湿因子（RF）的干扰。 RF可大量存在于类风湿性关节炎及某
些患有自身免疫性疾病患者的血液中，多 为IgM，RF有一个特点，可变性IgG产生非 特异结合。
因此，在抗-HCV测定中，如血清标本 中存在RF，则其可以与酶标的IgG结合， 而出现假阳性反应。
ELISA法测抗-HCV假阳性
特异性高 敏感性中
原因三：抗体在体内持续时间不同
特异性抗体
感染2周(14天)后产生特异性IgM抗体, 四周以后达到高 峰，不能通过胎盘；
感染3周后出现特异性IgG抗体,4-5周达到高峰，可保留 终生，可通过胎盘。
原因三：抗体在体内持续时间不同
非特异性抗体
感染3-4周（约30天后）或硬下疳出现1-2周后产生非特 异性IgM抗体，很快达到高峰，以抗心磷脂抗体/反应素 为主，治疗后可消失。
第40天开始产生出现非特异IgG抗体，很快上升，1年后 达到高峰，治疗后可消失。
RPR 和 TRUST等方法可检出：5～7周或硬下疳后2～3周
完全治愈的早期梅毒可再感染。
梅毒抗体的产生时间与波峰图
原因四：假阳性与假阴性的出现
假阳性反应：
技术性：
标本的污染 溶血 操作失误 试剂质量差或过期
早期潜伏
晚期潜伏 期晚
三期
治疗前
治疗后
阳性
阴性
特异性梅毒抗体治疗前后结果解释示意图
治疗前
一期 早 二期 期
早期潜伏
晚 晚期潜伏 期 三期
阳性
治疗后 阴性
临床解释
TRUST 阴性（-） 阴性（-）
阳性（+）
阳性（+） 阴性（-）
阳性（+） 阳性（+）
TP-ELISA 阴性（-） 阳性（+）
阴性（-）
免疫室常见问题结果分析
例一：不同方法梅毒结果不一致？
项目 结果组合
1 2 3 4 5 6 7
TRUST 阴性（-） 阴性（-） 阳性（+） 阳性（+） 阴性（-） 阳性（+） 阳性（+）
TP-ELISA 阴性（-） 阳性（+） 阴性（-） 阳性（+） 阴性（-） 阴性（-） 阳性（+）
TPPA 阴性（-） 阳性（+） 阴性（-） 阳性（+） 阳性（+） 阳性（+） 阴性（-）
原因四：假阳性与假阴性的出现
假阴性反应：
在梅毒螺旋体感染后1～2周内可呈阴性反应； 梅毒螺旋体感染不久即开始治疗； 敏感性低的梅毒血清试验易出现阴性反应。
原因四：假阳性与假阴性的出现
假阴性反应：
在二期梅毒或三期梅毒（较多）时TRUST试验也可 出现阴性反应，即前带现象（血清中存在高浓度 的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结 果）。
（2）不用于观察疗效、复发和再感染：感染梅毒 螺旋体后，体内产生的抗螺旋体抗体持续存在， 甚至终生，即使经过足够的抗梅治疗，其血清反 应仍持续阳性。
明胶凝集实验（TPPA）
确证实验/确诊实验 采用梅毒螺旋体天然抗原作为诊断抗原特
异性和灵敏度高，检测的是IgM抗体，可以 检测到潜伏梅毒，但操作繁琐，费用高
原因一：检测物质不同
梅毒螺旋体侵入人体后产生两种抗体：
1.抗心磷脂抗体：即非特异性抗体、反应素 RPR、TRUST
2.抗梅毒螺旋体抗体：IgG、IgM TP-ELISA、TPPA
原因二：敏感度和特异性不同
真实的 梅毒抗体
TRUST
特异性低 敏感性高
TP-ELISA
特异性中 敏感性高
TPPA
甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)
原理： 抗原以胆固醇晶粒为载体，包被上心
磷脂或卵磷脂， 构成VDRL（抗类脂）抗原 颗粒。再把该抗原颗粒结合到甲基胺红上 ，当抗原与血清中反应素以一定的比例相 互作用时，出现红色凝集颗粒。
梅毒螺旋体抗体测定(TP-ELISA)
特点：检测总抗体 （1）用作筛查和确认试验：敏感性、特异性高
阳性（+） 阴性（-）
阴性（-） 阳性（+）
TPPA
临床解释
阴性（-） 健康人群；一期梅毒的早期
阳性（+） 曾有感染，已治疗或自愈； 早期梅毒经治疗后或晚期梅毒
阴性（-） 排除梅毒，生物学假阳性；
低滴度TRUST，可能为老年人、孕 妇、自身免疫性疾病患者等
阳性（+） 诊断确认现症梅毒感染（梅毒孕妇 所生的婴儿除外）
原因五：治疗后的血清反应
治疗后血清阴转；
血清滴度降低不阴转，血清抵抗（血清固定）：
（1）体内仍有潜在的活动性病变存在（如神经系统梅 毒）；
（2）病人体内的免疫力持久(反应素长久存在)； （3）对抗梅药物有耐药性或剂量不足。
复发再感染。
非特异性梅毒抗体治疗前后结果解释示意图
一期 早 二期 期
原因二：高免疫球蛋白血症 抗-HCV的间接法，最后一步加的是酶
标的抗人IgG，血清中的高浓度的非特异 IgG，可能会非特异地吸附于固相载体表面， 从而与后加的酶标抗人IgG结合，造成假阳 性。
ELISA法测抗-HCV假阳性
原因三：标本中超氧化物歧化酶（SOD）的 干扰
用于包被固相的重组HCV抗原片段C100，如为酵母菌产生的SOD融合蛋白，则 标本中SOD升高可能会造成抗-HCV假阳性结 果。
ELISA法测抗-HCV假阳性
原因四：用于固相包被的HCV基因工程抗原 不纯。
ELISA法测抗-HCV假阳性
有文献报道，44例HCV抗体阳性中有8例 （17.5%）HCV-RNA为阴性，其这部分 HCV抗体标本S/CO值无规律可循（S/CO在 2.7-15.3之间），肝功各项指标正常，推测 这些患者可能为既往感染。
那么，PⅢNP结果是否可以直接报告临床？
肝纤四项检测人群
慢性肝病患者都应做肝纤维化的检查：
1、感染性肝病（慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎、慢 性丁型肝炎患者）；
2、酒精性、化学毒物或药物性慢性肝病患者； 3、遗传代谢肝病（肝豆状核变性等）； 4、自身免疫性( 自身免疫性肝炎)。
PⅢNP
研究证实血清PCⅢNP含量与肝炎症，坏死 和肝纤维化有关，但以肝纤维化相关为主， 血PⅢNP水平与肝纤维化程度呈正相关, 是 反映肝纤维增生的指标。
乙肝两对半五项全阴，肝功各项指标正常。
例二：HCV不同方法结果不一致？
7月1日，抽血重测HCV（发光定量）， HCV定量阴性，同天，HCV-RNA送金域检 测， HCV-RNA 阴性。
将7月1日标本再次使用ELISA法进行检测， HCV定性阳性（双孔）。
HCV不同方法结果不一致？
标 本 6月21日 6月21日 7月1日
日期
7月1日
项目 HCV定性 胶体金法 HCV定量 HCV-RNA
结果 阳性
阴性 0.02Fra Baidu bibliotek阴性) 阴性
范围 s/co＞10
0-1C.O.I
7月1日
7月1日
HCV定性
阳性
ASO，RF IgG，IgA， IgM
正常范围
s/co＞10
≤200U/L ＜20U/L 7-16g/L 0.7-4g/L 0.4-2.3g/L
阳性（+） 曾有感染，已治疗或自愈， TP-ELISA假阴性
阳性（+） TP-ELISA假阴性
阴性（-） 少见，可出现于抗体浓度高时，可 稀释后重新检测。
三种方法联合检测
TRUST TP-ELISA TPPA
减少假阳性，假阴性
A1(TP-ELISA)
A1+
A1-
梅
毒
A2(TPPA）
检
A1+A2-
原因四：假阳性与假阴性的出现
生物学假阳性：
某些疾病：结核、疟疾、肝病、红斑狼疮、流感、 肺炎、类风湿性关节炎、风湿性心脏病、风疹、系 统性硬化症等，疾病发展过程中释放心磷脂，到血 液中假阳性（多见于TRUST）。
生理机能发生变化：少数老年人、孕妇可发生生物 学假阳性，1%正常人可能出现阳性。 但这类患者血清反应滴度低，很少超过1：8；而且 半年内渐转成阴性。
PⅢNP
血清PCⅢNP是反应成人肝纤维化活动的良 好指标，可弥补肝活检不能动态观察等不 足。
PCⅢNP对于诊断儿童肝疾病没有意义，它 随儿童年龄的增长有所升高。
问题一：
待解决疑问？
外斐试验：OXk总是阳性？（天润）
问题二：
待解决疑问？
ENA多肽谱酶（碱性磷酸酶）误加入血管炎 膜条（该膜条已加入HRP酶）中，立即倒去， 冲洗三次后重新加对应酶，结果出现假阳 性，为什么？
A1+A2+ 感染：既往或现在
测 流
程
A3（TRUST）
图
A1+A2+A3+ 梅毒现症感染 结合临床表现
A1+A2+A3结合临床表现， 考虑三期梅毒或者是既往感染
美国2009年指南
例二：HCV不同方法结果不一致？
某某某，男，29岁，6月17日，因十二指肠 球部溃疡A1和糜烂性胃炎入院，
6月21日检测传染病四项（军队医改， ELISA），HCV定性阳性（已复查，双 孔）,胶体金法阴性。
目前，美国已经采用CDC的新导则，现在 仅对筛查试验S/CO比值≥3.8的样本做PCR 确诊实验。
案例三： PⅢNP结果是否与临床不符？
某某某，男，11岁，右前臂肿物入院，查 传染病四项全阴，生化ALT:17U/L 、AST： 16U/L,ALP:247.7 U/L （45-125 U/L）肝 功能其他指标正常。肝纤四项除III型前胶 原N端肽P（PⅢNP）为350.2ng/ml（＜ 120ng/ml）外，其他各项正常。