血细胞分析仪原理一 PPT
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血液分析仪检验ppt课件
1．电阻抗法 即库尔特原理（图3-1）。电阻抗 法是三分群血液分析仪的核心技术，可准确测出细胞 （或类似颗粒）的大小和数量。
电阻抗法还与其他 检测原理组合应用于 五分类血液分析仪中。
图3-1 电阻抗法细胞计数原理
例如，电阻抗法红细胞 计数和血小板计数是在相应 通道内进行计数，并根据二 者体积不同，采用浮动界标 法进行区分（图3-2）。
电导性特别有助 于鉴别体积相同、但 内部结构 不同的细胞 （或相似体积的颗粒。
图3-4 射频电流检测原理
（二）光（化）学检测原理 1．激光散射法 将稀释、染色（化学染色或核酸
荧光染色）、球形化的细胞悬液注入鞘液流中央，单个 细胞沿着悬液和鞘液流 两股液流整齐排列，以 恒定流速定向通过石英 毛细管，即流体动力学 聚焦技术（图3-5） 。
第一节 血液分析仪的检测原理
现代血液分析仪综合应用了电学和光（化）学两 大原理，用以测定血液有形成分（细胞）和细胞内容 物（血红蛋白）。
电学检测原理包括电阻抗法和射频电导法； 光（化）学检测原理包括激光散射法和分光光度 法。 激光散射法检测的对象有2类：染色的和非染色的 细胞核、胞质颗粒等成分。
一、电学检测原理
第三章 血液分析仪检验
自动血液分析仪（AHA）[血细胞计数仪（blood cell counter）] ,是临床检验最常用的筛检仪器之一 。
传统的显微镜血细胞计数或分类方法: 速度慢、误差大、影响因素多，且难以满足临床 大量标本检测需求。 AHA可进行：
①全血细胞计数及其相关参数的计算。②白细胞分类。③血细胞计 数和分类的扩展功能，包括：有核红细胞计数、网织红细胞计数及其相关 参数检测；幼稚粒细胞、未成熟粒细胞、造血干细胞计数；未成熟血小板 比率；淋巴细胞亚型计数；细胞免疫表型检测等。
电阻抗法还与其他 检测原理组合应用于 五分类血液分析仪中。
图3-1 电阻抗法细胞计数原理
例如，电阻抗法红细胞 计数和血小板计数是在相应 通道内进行计数，并根据二 者体积不同，采用浮动界标 法进行区分（图3-2）。
电导性特别有助 于鉴别体积相同、但 内部结构 不同的细胞 （或相似体积的颗粒。
图3-4 射频电流检测原理
（二）光（化）学检测原理 1．激光散射法 将稀释、染色（化学染色或核酸
荧光染色）、球形化的细胞悬液注入鞘液流中央，单个 细胞沿着悬液和鞘液流 两股液流整齐排列，以 恒定流速定向通过石英 毛细管，即流体动力学 聚焦技术（图3-5） 。
第一节 血液分析仪的检测原理
现代血液分析仪综合应用了电学和光（化）学两 大原理，用以测定血液有形成分（细胞）和细胞内容 物（血红蛋白）。
电学检测原理包括电阻抗法和射频电导法； 光（化）学检测原理包括激光散射法和分光光度 法。 激光散射法检测的对象有2类：染色的和非染色的 细胞核、胞质颗粒等成分。
一、电学检测原理
第三章 血液分析仪检验
自动血液分析仪（AHA）[血细胞计数仪（blood cell counter）] ,是临床检验最常用的筛检仪器之一 。
传统的显微镜血细胞计数或分类方法: 速度慢、误差大、影响因素多，且难以满足临床 大量标本检测需求。 AHA可进行：
①全血细胞计数及其相关参数的计算。②白细胞分类。③血细胞计 数和分类的扩展功能，包括：有核红细胞计数、网织红细胞计数及其相关 参数检测；幼稚粒细胞、未成熟粒细胞、造血干细胞计数；未成熟血小板 比率；淋巴细胞亚型计数；细胞免疫表型检测等。
血常规分析ppt课件
整理版课件
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嗜碱粒细胞增多：
1.骨髓增殖性疾病；2. 慢性溶血；3.脾切除后； 4.铅中毒，等等。
嗜碱粒细胞减少：
无临床意义
整理版课件
13
单核细胞增多：
1.病毒、立克次体感染； 2.慢性细菌、螺旋体或寄 生虫感染；3.急性传染病 或急性感染恢复期；4.淋 巴瘤、单核细胞白血病， 等等。
单核细胞减少：
2.虽采集静脉血，但采血过程不顺利，多次穿刺组织损伤，使组织凝血因子混 入血标本，产生肉眼看不见的小凝块，造成血小板减少。
3.血标本室温下放置时间过短。用EDTA－K2作抗凝剂时，会使血小板形态发生 变化，在采血后30分钟内形成血小板可逆聚集体，使血小板计数下降，在采血 30分钟后进行分析可提高结果的正确性。
4.EDTA依赖性血小板减少，其主要原因是由于EDTA作为抗凝剂诱导抗凝血中 血小板互相聚集、堆积和发生卫星现象，致使全自动血细胞计数仪不能确认血小 板而使血小板计数偏低。对临床上无任何出血症状与体征、出血和凝血时间正常 而血小板计数明显减少者，应改用肝素抗凝管或手工计数血小板，推片复查。
5.血标本室温下也不可放置时间过长。血小板是体积较小的细胞，胞膜薄易于 粘附、聚集和破坏，室温下离体时间过长，可发生变形、自溶、体积缩小，标本 放置时间越长破坏越多。许多学者研究认为，超过120分钟将显著减低血小板数 值，因此应在采血后30～120分钟内完成测定。
1.需要结合临床表现，必要时排除假性血小 板减少
2.参考范围以外不一定需要采取特殊处理， 譬如血小板300~400×109/L左右。如果长期 在450 ×109/L以上可以酌情完善骨髓等检查
整理版课件
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血小板减少非病理性因素
1.采集手指末梢血时，因进针浅，出血慢，挤压采血部位，使组织液渗入血液中， 造成血小板减少（较常见的原因）。
现代五分类血细胞分析仪的原理及使用[可修改版ppt]
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（3）电阻抗和射频电导联合检测法
• 这种方法是分别采用四个检测系统来检测不同类 型的细胞
• ①淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞检测系统:在 细胞悬浮液中加入溶血剂使红细胞溶解,而使白细 胞保持完整细胞浆及核形态近似于生理状态,当这 些细胞通过检测系统时,对白细胞进行电阻抗法(测 量细胞体积)和射频电导法(检测细胞核和颗粒密 度)的联合检测,结果将细胞分成淋巴细胞、单核细 和中性粒细胞三个群体。
血液分析仪优势 检测项目多 速度快 精度高 易操作
• 血液细胞分析仪是医院检验科、化验室的常规设备之一， 也是发展最快、应用最普及的检验仪器，当前血液细胞分 析仪分为三分群和五分类两种。国际市场上五分类血液细 胞分析仪已经成为发达国家医院血液临床检验的主流产品， 但由于五分类血液细胞分析仪需集光学、电子、气路、液 路、计算机等技术于一体，技术含量非常高，纵观全球， 也仅有美国、法国、日本等国家的 6 个厂家能够生产真正 意义上的五分类血液细胞分析仪。
一、常见血细胞分析仪品牌
• 1、库尔特 • 2、希思美康 • 3、迈瑞 • 4、雅培 • 5、光电 • 6、拜耳 • 7、……
二、五分类血细胞分析仪的检测原理
（一）、仪器基本结构 1、机械系统 2、电学系统 3、光学系统
（二）、分类计数的基本原理
• 1、电阻抗的利用
• 2、激光技术、射频技术、组织化学技术的 应用
• 白细胞化学染色
• 在稀释液中加入过氧化酶(MPO)的底物及显 色剂,根据白细胞对MPO的反应分类。中性 细胞MPO为强阳性,嗜酸性细胞阳性更强,单 核细胞为弱阳性,淋巴细胞阴性,嗜碱性细胞 亦为阴性,故综合光散射和细胞化学染色的特 点, 可得到二维或三维图像-----不同颜色的散 点图。由于嗜碱性细胞不含此酶,不能被检测, 因此一些仪器专门设置了嗜碱性细胞检测系 统,它的测量通道采用时间差的方法,与RBC、 PLT的测量系统共用一个通道。
血细胞分析仪工作原理
血细胞分析仪工作原理
血细胞分析仪是一种常用于临床实验室的仪器，用于分析血液中的各种血细胞和血细胞指标。
其工作原理如下：
1. 血液样本制备：首先，需要对采集到的血液样本进行预处理。
常见的方法是使用试剂将红细胞溶解，以便单独分析血液中的白细胞和血小板数据。
2. 细胞计数：接下来，将样本置于血细胞分析仪中。
在仪器内部，存在一个微细通道，血细胞会逐个通过该通道。
在通道中，血细胞会受到激光束的照射，从而产生散射光。
根据散射光的特点，仪器可以计算每种血细胞的数量。
3. 细胞分类：通过分析细胞的大小、形状和散射光的强度等特征，血细胞分析仪可以将血细胞分为不同的类别，如白细胞、红细胞和血小板等。
这种分类通常是通过数学算法完成的。
4. 细胞计数统计：血细胞分析仪还可以统计每种血细胞的数量，并计算比例和百分比。
这有助于医生或实验室技术人员评估血液中的细胞组成，为疾病诊断和治疗提供依据。
5. 血细胞指标测量：除了计数，血细胞分析仪还可以测量各种血细胞的指标，如平均红细胞体积、血红蛋白含量和白细胞分类计数等。
这些指标可以提供更详细的血细胞信息，更全面地评估患者的健康状况。
血细胞分析仪通过上述工作原理，能够准确、快速地分析血液
样本中的各种血细胞和指标，为临床诊断和治疗提供重要的数据支持。
血细胞分析仪培训PPT课件
临床应用价值
一、诊断临床疾病 WBC HGB和RBC PLT 二、常规检查 判断身体的健康情况和免疫能力
临床应用
血细胞参数的临床意义
红细胞计数： 1. 生理变异：随年龄和性别不同有差异。 新生婴儿、位处高原、情绪激动可使红细胞增加。 2. 病理意义：先天性心脏病、慢性肺疾患、慢性一氧化碳中毒、高原病等慢性缺氧可刺激红细胞生成引起红细胞增加。严重呕吐、腹泻等引起脱水时，血液浓缩，红细胞相对增多。反之，慢急性失血缺乏造血原料，骨髓造血障碍等引起的贫血时，红细胞数减少。 白细胞计数： 1. 生理变异：随年龄不同时间不同，季节不同，变异较大。早上低、下午高，饭前较饭后低，冬季较夏季高，激烈运动及体力劳动都可使白细胞数增多。 2.病理意义：急性化脓性感染，如脓肿、扁桃体炎、肺炎、阑尾炎 、脑膜炎、败血症等白细胞数增多。外烧伤，手术后，尿毒症等也会增高。 障碍性贫血，部分急性白血病等造血干细胞疾病，某些传染性疾病如伤寒、黑热病、流感、传染性肝炎等白细胞数减少。
血细胞分析原理 血小板分析原理
阻抗法
电阻阻抗法计数原理
血细胞分析仪是利用小孔换能装置实现的,是一个用阻抗法计数的核心部件---阻抗法测试传感器（见下页示意图），管内充满导电液体，两电极接上恒流电源，中部为一小孔，小孔孔径与细胞成比列，在负压的作用下，细胞通过小孔瞬间，排开等体积的电解液，使电解液的等效电阻瞬间变大，这个变大的电阻在恒流源作用下引起一个等比例增大的电压。细胞离开小孔电解液的等效电阻又恢复正常，直到下一个细胞到达小孔，这样细胞连续的通过小孔，就在电极两端产生一连串的电压脉冲。脉冲的个数与通过小孔的细胞数相当，脉冲的幅度与细胞的体积成正比。将这些脉冲经过整形、放大，计算、储存、处理，就得到了细胞分类、计数的原始数据。
一、诊断临床疾病 WBC HGB和RBC PLT 二、常规检查 判断身体的健康情况和免疫能力
临床应用
血细胞参数的临床意义
红细胞计数： 1. 生理变异：随年龄和性别不同有差异。 新生婴儿、位处高原、情绪激动可使红细胞增加。 2. 病理意义：先天性心脏病、慢性肺疾患、慢性一氧化碳中毒、高原病等慢性缺氧可刺激红细胞生成引起红细胞增加。严重呕吐、腹泻等引起脱水时，血液浓缩，红细胞相对增多。反之，慢急性失血缺乏造血原料，骨髓造血障碍等引起的贫血时，红细胞数减少。 白细胞计数： 1. 生理变异：随年龄不同时间不同，季节不同，变异较大。早上低、下午高，饭前较饭后低，冬季较夏季高，激烈运动及体力劳动都可使白细胞数增多。 2.病理意义：急性化脓性感染，如脓肿、扁桃体炎、肺炎、阑尾炎 、脑膜炎、败血症等白细胞数增多。外烧伤，手术后，尿毒症等也会增高。 障碍性贫血，部分急性白血病等造血干细胞疾病，某些传染性疾病如伤寒、黑热病、流感、传染性肝炎等白细胞数减少。
血细胞分析原理 血小板分析原理
阻抗法
电阻阻抗法计数原理
血细胞分析仪是利用小孔换能装置实现的,是一个用阻抗法计数的核心部件---阻抗法测试传感器（见下页示意图），管内充满导电液体，两电极接上恒流电源，中部为一小孔，小孔孔径与细胞成比列，在负压的作用下，细胞通过小孔瞬间，排开等体积的电解液，使电解液的等效电阻瞬间变大，这个变大的电阻在恒流源作用下引起一个等比例增大的电压。细胞离开小孔电解液的等效电阻又恢复正常，直到下一个细胞到达小孔，这样细胞连续的通过小孔，就在电极两端产生一连串的电压脉冲。脉冲的个数与通过小孔的细胞数相当，脉冲的幅度与细胞的体积成正比。将这些脉冲经过整形、放大，计算、储存、处理，就得到了细胞分类、计数的原始数据。
血细胞分析仪常见检测原理浅谈
激光波长 633nm
血液样本经过吸液和定量、 稀释至指定的稀释比，并进行 染色。然后将该样品送入流动 池。
半导体激光束通过该流动池 照射到血细胞上。
通过二极管接受前向散色光； 由光电倍增管（PMT）接受侧 向散色光和侧向荧光。光信号 转化为电脉冲，从而可以得到 有关血液细胞的信息。
侧向荧光 反应RNA和DNA ➢ 前向散射光(Forward Scatter,FSC) ：
入硫化氨基酸，电阻抗原理计数。
RF:射频电流 细胞内部结构信息
DC:直流电 细胞大小的信息
(五)双鞘流动力连续系统 (DHSS)
DHSS技术：在流式通道
中有2个鞘流装置，细胞经第 1束鞘流后通过阻抗微孔测定 细胞的真实体积，然后经第2 束鞘流后到达光窗，测定细 胞的光吸收，分析细胞内部 结构。
Ⅲ、网织红细胞检测原理
✓其白细胞分类原理是 利用细胞大小不同，其 散射光强度也有差异， 再结合五种白细胞过氧 化物酶活性的差异（嗜 酸性>中性>单核,淋巴 和嗜碱无此酶）
（三）多角度激光散射联合检测技术
白细胞计数 用含DNA染料碘化丙啶试剂可破坏有
核红细胞膜和细胞质，只留下细胞核，裸核易于染 色。染料对有活性的白细胞只有极小渗透性或无渗透 性，故不出现细胞核染色。从而鉴别有核红细胞和活 性白细胞，计算活性白细胞比率。
MAPSS
0°,前向散射光：细胞大小、数量
7°，侧向散射光：细胞内部结构及 核染色质的复杂性
90°，垂直角度散射光：细胞内部 颗粒及分叶状况
90°D，垂直角度去偏振散射 光，鉴别E与N
（四）电阻抗、射频与细胞化学联合
➢ 嗜酸性粒细胞检测系统：用特殊溶血剂，电阻抗原理计数 ➢ 嗜碱性粒细胞检测系统：用特殊溶血剂，电阻抗原理计数 ➢ 淋巴、单核和粒细胞检测系统 ➢ 幼稚细胞检测系统：细胞膜上脂质比成熟细胞少，在细胞悬液中，加
血常规血细胞分析仪直方图ppt课件
桑葚状。 • PH对红细胞的影响： • 酸性尿中，红细胞膜脂质内层面积增加，体积变小。碱性
红细胞 吞噬细胞
白细胞
.
上皮细胞
33
1.红细胞
• 未染色的正常红细胞为双凹圆盘状，淡黄色，直径大约 7～8μm
• 渗透压对红细胞的影响： • 低渗透压尿中红细胞胀大，使血红蛋白溢出，仅留下细胞
膜，成为大小不等的空环形或面包圈样，称为影红细胞。 • 高渗透压尿中红细胞皱缩，体积变小，似锯齿形、棘形或
.
24
.
25
尿液分析的内容
➢ 尿液理学检查 ➢ 化学检查 ➢ 显微镜形态学检查
.
26
一、尿液的理学检查
☺包括对尿量、颜色、透明度、比密、气味、 （酸碱度）、渗透量、电导率等物理指标 进行分析检验。
.
27
二 尿液的常规化学检查
☺尿液干化学检验项目主要有：pH、比密、 蛋白质、葡萄糖、酮体、胆红素、尿胆原、 亚硝酸盐、红细胞（潜血）、白细胞（粒 细胞酯酶）；维生素C。
.
28
干化学检查和镜检
• 已经有很多研究和文献证明，尿干化学检查中的红 细胞和白细胞项目，不能取代尿液有形成分的检查， 尿液干化学检查的所有内容也都是过筛性检查内容， 并不能取代显微镜检查内容；而显微镜检查也不能 取代化学检查。
• 在某些情况下干化学检查与湿化学检查的敏感性、 特异性和应用价值也有不同。
– 尽可能同一体位（血红蛋白、血细胞比容、红 细胞计数于站位时增加）、一定时间和近似生 理条件下采血
.
3
血细胞分析仪
血细胞分析仪实质上是指
对一定体积内血细胞数量及异
质性进行分析的仪器，包括血
细胞计数与分类、血红蛋白测
红细胞 吞噬细胞
白细胞
.
上皮细胞
33
1.红细胞
• 未染色的正常红细胞为双凹圆盘状，淡黄色，直径大约 7～8μm
• 渗透压对红细胞的影响： • 低渗透压尿中红细胞胀大，使血红蛋白溢出，仅留下细胞
膜，成为大小不等的空环形或面包圈样，称为影红细胞。 • 高渗透压尿中红细胞皱缩，体积变小，似锯齿形、棘形或
.
24
.
25
尿液分析的内容
➢ 尿液理学检查 ➢ 化学检查 ➢ 显微镜形态学检查
.
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一、尿液的理学检查
☺包括对尿量、颜色、透明度、比密、气味、 （酸碱度）、渗透量、电导率等物理指标 进行分析检验。
.
27
二 尿液的常规化学检查
☺尿液干化学检验项目主要有：pH、比密、 蛋白质、葡萄糖、酮体、胆红素、尿胆原、 亚硝酸盐、红细胞（潜血）、白细胞（粒 细胞酯酶）；维生素C。
.
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干化学检查和镜检
• 已经有很多研究和文献证明，尿干化学检查中的红 细胞和白细胞项目，不能取代尿液有形成分的检查， 尿液干化学检查的所有内容也都是过筛性检查内容， 并不能取代显微镜检查内容；而显微镜检查也不能 取代化学检查。
• 在某些情况下干化学检查与湿化学检查的敏感性、 特异性和应用价值也有不同。
– 尽可能同一体位（血红蛋白、血细胞比容、红 细胞计数于站位时增加）、一定时间和近似生 理条件下采血
.
3
血细胞分析仪
血细胞分析仪实质上是指
对一定体积内血细胞数量及异
质性进行分析的仪器，包括血
细胞计数与分类、血红蛋白测
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⑥计数系统 将整形后的血细胞脉冲信号显 示为不同类群的细胞数。
二、激光散射法
激光散射法应用了流式细胞术(flow cytometry, FCM) 检测原理。
流式细胞术检测原理：细胞通过激光束被照射 时，产生与细胞特征相应的各种角度的散射 光。对经信号检测器接收的散射光信息进行 综合分析，即可准确区分正常类型的细胞。
流式细胞仪的技术特点
流式细胞仪在设计上采用了许多独特的技术， 比如液流系统、光路系统、信号测量和细胞 分选方面都有自己的技术特点。着重讲述液 流系统——鞘流原理。
通常把标本流的流速控制在10m/s以内，就 能保持标本流处于稳流状态。
外面包被有高速流动的鞘液，实现标本与 鞘液稳定的同轴流动状态。
溶血剂 λ＝540nm
血红蛋白
血红蛋白 衍生物
Hbቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ度
吸光度
血红蛋白测定的溶血剂
溶血剂
含氰化物的溶血剂 不含氰化物的溶血剂
分群
经溶血素处理脱水后，血细胞体积大小发生了变 化！！！
第一群（35～90fl）小细胞区：淋巴细胞（体积最 小）。
第二群（90～160fl）单个核细胞区，（中间细胞）： 单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始、 幼稚细胞、异常细胞等。
当有一个细胞通过小孔时，由于电阻增 加，于瞬间引起电压变化——通过脉冲。
细胞体积越大，脉冲振幅越高；细胞数 量越多，脉冲数量也越多。
脉冲信号经过下列步骤，得出细胞计数 结果：
1. 放大 由于血细胞通过微孔时产生的脉冲 信号微弱，必须通过放大器将讯号放大。
2. 阈值调节 在一定范围内调节参考电平的 大小，使计数结果尽可能符合实际。
第三群（160fl以上）大细胞区：嗜中性粒细胞（体 积最大）。
同时利用液流聚焦原理，使标本流直径变 小，通常只有10～20μm，避免细胞多个 重叠进入检测区。
激光散射法系统基本组成
1、光源 气体（氦－氖）激光或固体（半导 体）激光（单色光）；钨光源（多色光）。
2、鞘流 维持颗粒于液流中央，顺序、单个、 恒速向前流动，即流体动力学聚焦。
3、细胞悬液 被检测细胞（颗粒）的悬 液，由气压导入流动池。
3. 甄别 利用甄别器根据阈值调节器提供的 参考电平，将低于参考电平的假讯号（细 胞碎片，杂质微粒）去掉。
4. 整形 通过整形器作用，将脉冲讯号波形 修整成一致标准的平顶波，才能触发电路
5 计数 血细胞的脉冲信号 放大 甄别 整形后，送入计数系统，得出计数结果。
电阻抗法可准确测量出细胞（或类似颗粒） 的大小，是三分群血液分析仪的主要应用 原理，并与光学检测原理组合应用于五分 类血液分析仪中。
四、分光光度法
Lambert-Beer定律：A=lg(I0 / I) A:吸光度，或称光密度；I0：单色入射光强度；
I ：透过光强度
分光光度法仪器的组成：单色光源、检测池和 比色容器、光检测器。
分光光度法是所有类型的血细胞分析仪检测 Hb 的原理：被稀释的血液加入溶血剂后， 红细胞溶解，释放血红蛋白，后者与溶血剂 结合形成Hb衍生物，在特定波长（530～ 550nm）下比色，吸光度的变化与液体中 Hb含量成比例。
三分群血液分析仪基本组成
① 信号发生器 各种微粒通过检测小孔产生电 阻抗脉冲信号的检测源。
②放大器 将血细胞微弱脉冲信号放大以触发 电路系统。
③阈值调节器 调节能区分不同群细胞合适的 信号电平。
④甄别器 去除非参考电平的各种假信号以 提高计数的准确性。
⑤整形器 将不一致的脉冲波形信号调整为 标准的波形后触发计数电路系统。
血细胞分析仪原理一
重点 : 血液分析仪测定的原理、方法
血液分析仪优势 检测项目多 速度快 精度高 易操作
血液分析仪功能： ①全血细胞计数功 能。 ②白细胞分类功能。 ③扩展功能。
§2 检测原理
电阻抗法
电学
检
测
射频电导法
原
理
激光散射法
光学
分光光度法
血细胞计数原理
悬浮在电解质溶液中的血细胞相对于电解质溶 液为非导电颗粒，其电阻比溶液大。利用两者 导电性能的差异，当体积大小不同的血细胞通 过计数小孔时，可引起小孔内，外电流或内电 压的变化，形成与血细胞数量相当，体积大小 相应的脉冲电压，从而间接区分血细胞群，并 分别计数即电阻抗原理（库尔特原理）
半导体激光的流式细胞术
侧向荧光 （RNA/DNA含量）
侧向散射
（细胞内部结构，如 核的大小）
激光 （波长633nm）
前向散射光 （细胞大小）
低角度散射光（前向散射光）：反映细胞的 数量和表面体积大小。
高角度散射光（侧向散射光）：反映细胞的 内部颗粒、细胞核等复杂性。
激光散射法在区别体积相同而类型不同 的细胞特征时，比电阻抗法分群更加准 确。故激光散射法已成为现代五分类血 液分析仪的主要检测原理之一。
4、光检测器 接受来自各种角度的散射 光或吸收光信号，并转换成相应特征的 电信号
三、射频电导法
射频（radio frequency, RF) 指射频电流， 是每秒变化大于10 000次的高频交流电磁波。 高频电流能通过细胞壁。
用高频电磁探针渗入细胞膜脂质可测定细胞 的导电性，提供细胞内部化学成分、细胞核 和细胞质、颗粒成分等特征信息。
一、电阻抗法
血细胞计数原理即库尔特原理（Coulter principle):根据血细胞非传导的性质，以 电解质溶液中悬浮的血细胞在通过计数 小孔时引起的电阻变化进行检测为基础， 进行血细胞计数和体积测定。
大家学习辛苦了，还是要坚持
继续保持安 静
小孔管是电阻抗法细胞计数的一个重要组 成部分。检测期间，当电流接通后，位于 小孔两侧的电极产生稳定的电流。如果供 给的阻抗也是稳定的，则小孔的电压是不 变的。
二、激光散射法
激光散射法应用了流式细胞术(flow cytometry, FCM) 检测原理。
流式细胞术检测原理：细胞通过激光束被照射 时，产生与细胞特征相应的各种角度的散射 光。对经信号检测器接收的散射光信息进行 综合分析，即可准确区分正常类型的细胞。
流式细胞仪的技术特点
流式细胞仪在设计上采用了许多独特的技术， 比如液流系统、光路系统、信号测量和细胞 分选方面都有自己的技术特点。着重讲述液 流系统——鞘流原理。
通常把标本流的流速控制在10m/s以内，就 能保持标本流处于稳流状态。
外面包被有高速流动的鞘液，实现标本与 鞘液稳定的同轴流动状态。
溶血剂 λ＝540nm
血红蛋白
血红蛋白 衍生物
Hbቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ度
吸光度
血红蛋白测定的溶血剂
溶血剂
含氰化物的溶血剂 不含氰化物的溶血剂
分群
经溶血素处理脱水后，血细胞体积大小发生了变 化！！！
第一群（35～90fl）小细胞区：淋巴细胞（体积最 小）。
第二群（90～160fl）单个核细胞区，（中间细胞）： 单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始、 幼稚细胞、异常细胞等。
当有一个细胞通过小孔时，由于电阻增 加，于瞬间引起电压变化——通过脉冲。
细胞体积越大，脉冲振幅越高；细胞数 量越多，脉冲数量也越多。
脉冲信号经过下列步骤，得出细胞计数 结果：
1. 放大 由于血细胞通过微孔时产生的脉冲 信号微弱，必须通过放大器将讯号放大。
2. 阈值调节 在一定范围内调节参考电平的 大小，使计数结果尽可能符合实际。
第三群（160fl以上）大细胞区：嗜中性粒细胞（体 积最大）。
同时利用液流聚焦原理，使标本流直径变 小，通常只有10～20μm，避免细胞多个 重叠进入检测区。
激光散射法系统基本组成
1、光源 气体（氦－氖）激光或固体（半导 体）激光（单色光）；钨光源（多色光）。
2、鞘流 维持颗粒于液流中央，顺序、单个、 恒速向前流动，即流体动力学聚焦。
3、细胞悬液 被检测细胞（颗粒）的悬 液，由气压导入流动池。
3. 甄别 利用甄别器根据阈值调节器提供的 参考电平，将低于参考电平的假讯号（细 胞碎片，杂质微粒）去掉。
4. 整形 通过整形器作用，将脉冲讯号波形 修整成一致标准的平顶波，才能触发电路
5 计数 血细胞的脉冲信号 放大 甄别 整形后，送入计数系统，得出计数结果。
电阻抗法可准确测量出细胞（或类似颗粒） 的大小，是三分群血液分析仪的主要应用 原理，并与光学检测原理组合应用于五分 类血液分析仪中。
四、分光光度法
Lambert-Beer定律：A=lg(I0 / I) A:吸光度，或称光密度；I0：单色入射光强度；
I ：透过光强度
分光光度法仪器的组成：单色光源、检测池和 比色容器、光检测器。
分光光度法是所有类型的血细胞分析仪检测 Hb 的原理：被稀释的血液加入溶血剂后， 红细胞溶解，释放血红蛋白，后者与溶血剂 结合形成Hb衍生物，在特定波长（530～ 550nm）下比色，吸光度的变化与液体中 Hb含量成比例。
三分群血液分析仪基本组成
① 信号发生器 各种微粒通过检测小孔产生电 阻抗脉冲信号的检测源。
②放大器 将血细胞微弱脉冲信号放大以触发 电路系统。
③阈值调节器 调节能区分不同群细胞合适的 信号电平。
④甄别器 去除非参考电平的各种假信号以 提高计数的准确性。
⑤整形器 将不一致的脉冲波形信号调整为 标准的波形后触发计数电路系统。
血细胞分析仪原理一
重点 : 血液分析仪测定的原理、方法
血液分析仪优势 检测项目多 速度快 精度高 易操作
血液分析仪功能： ①全血细胞计数功 能。 ②白细胞分类功能。 ③扩展功能。
§2 检测原理
电阻抗法
电学
检
测
射频电导法
原
理
激光散射法
光学
分光光度法
血细胞计数原理
悬浮在电解质溶液中的血细胞相对于电解质溶 液为非导电颗粒，其电阻比溶液大。利用两者 导电性能的差异，当体积大小不同的血细胞通 过计数小孔时，可引起小孔内，外电流或内电 压的变化，形成与血细胞数量相当，体积大小 相应的脉冲电压，从而间接区分血细胞群，并 分别计数即电阻抗原理（库尔特原理）
半导体激光的流式细胞术
侧向荧光 （RNA/DNA含量）
侧向散射
（细胞内部结构，如 核的大小）
激光 （波长633nm）
前向散射光 （细胞大小）
低角度散射光（前向散射光）：反映细胞的 数量和表面体积大小。
高角度散射光（侧向散射光）：反映细胞的 内部颗粒、细胞核等复杂性。
激光散射法在区别体积相同而类型不同 的细胞特征时，比电阻抗法分群更加准 确。故激光散射法已成为现代五分类血 液分析仪的主要检测原理之一。
4、光检测器 接受来自各种角度的散射 光或吸收光信号，并转换成相应特征的 电信号
三、射频电导法
射频（radio frequency, RF) 指射频电流， 是每秒变化大于10 000次的高频交流电磁波。 高频电流能通过细胞壁。
用高频电磁探针渗入细胞膜脂质可测定细胞 的导电性，提供细胞内部化学成分、细胞核 和细胞质、颗粒成分等特征信息。
一、电阻抗法
血细胞计数原理即库尔特原理（Coulter principle):根据血细胞非传导的性质，以 电解质溶液中悬浮的血细胞在通过计数 小孔时引起的电阻变化进行检测为基础， 进行血细胞计数和体积测定。
大家学习辛苦了，还是要坚持
继续保持安 静
小孔管是电阻抗法细胞计数的一个重要组 成部分。检测期间，当电流接通后，位于 小孔两侧的电极产生稳定的电流。如果供 给的阻抗也是稳定的，则小孔的电压是不 变的。