植物实验材料的采集、培养与保存

实验四植物实验材料的采集、培养与保存

一、目的与要求

1、使学生学习和掌握一些常用实验材料的采集、培养和保存方法。

2、掌握普通浸制标本及绿色浸制标本的制作方法和步骤，并了解其它特殊标本的浸制方法。

二、材料和用品

采集用具（如浮游生物网、标本瓶、镊子、采集刀、枝剪、塑料筒、标本夹、吸水纸等等），配制固定液的化学药品（如甲醛、酒精、甘油、冰醋酸、醋酸铜、氯化铜、碘、碘化钾等等），恒温培养箱，培养皿，培养缸，高压蒸汽灭菌锅及一些其它与本实验有关的实验用品及用具。

三、实验内容

1、藻类植物的采集、培养和保存

2、菌类植物的采集、培养和保存

3、地衣植物的采集和保存

4、苔藓植物的采集、培养和保存

5、蕨类植物的采集、培养和保存

6、种子植物的采集和保存

四、实验方法

1、藻类植物的采集、培养和保存

（1）藻类植物的采集

藻类植物分布很广，其中大多数生活在各种不同的水体中，此外，还有些生活在潮湿的土壤表面、树皮、墙壁、石璧和花盆璧上，极少数种类生于常年积雪的高山上，还有少数种类与其它动植物共生或寄生在别的生物体中。

A、浮游藻类：这些藻类个体微小，单细胞或群体。没有鞭毛，完全借水力漂浮在水中，或具鞭毛在水体中仅有微弱的运动能力。采集这些藻类可视具体情况进行采集。

直接取水样、沉淀浓缩：在小水体中，如小池塘、水库、积水坑等静水中单细胞藻类的数量比较多，可直接用大的标本瓶采水样，每1公升水样，加15毫升鲁格氏液，静置24小时，使其沉淀后，将瓶内上部的清液倒掉。在沉淀好的水样中，加入8%～10%甲醛溶液固定。将填写有编号、采集地点、日期的标签纸投入标本瓶中。

用浮游生物网采集：在大型水体中，如湖泊、江河等处，标本不易直接采取，可用浮游生物网（一般用25号生物网）。使用浮游生物网之前，先将网系于2米长的竿上，检查网头，关好阀门。把网放入水面下并以“8”字形来回缓缓捞取。水色较清、藻类数量少时可多捞一会儿，反之可少捞一会儿。最后将网垂直提出水面，浮游藻类集聚网头，用标本瓶收集网头中的水样，立即用鲁格氏液（配方见后面）或甲醛液固定，也可用波恩氏液（配方见后面）固定保存。

注意：采集标本液以不超过标本瓶容积的2/3为宜。如需观察有鞭毛的藻类的运动，可不加固定液，但时间不能过长，一般不能超过数小时至一天的时间，标本带回实验室以后应立即将瓶盖打开。如果所采标本需保存，应随采随固定。

B、附生藻类：这些藻类包括有固着器或假根着生在石头、水生植物、泥底或其它物体上的藻类。如刚毛藻、丝藻、鞘藻等。它们的植物体一般较大些，可用镊子或手采集，但为保存标本的完整性，最好用采集刀将其从石面或其它物体上刮下，对于在急流或流水的石头上固着生长的藻类可用锤子将石头砸下一些小块连标本一起装入瓶中，或从小石块上用刀将标本刮入标本瓶中。对于生长在水生植物或其它物体上的藻类，可折取一些枝叶、茎秆装入瓶中。对生于泥底中的藻类，如轮藻，可用手或耙将其从泥底捞取，洗去污泥装入标本瓶中。在土表生长的藻类，可用小铲或刀铲取，但需注意尽量少带泥土。上述这些藻类采入标本瓶中后，再倒入8%～10%甲醛液固定。

C、漂浮藻类：有些藻类如水绵、颤藻、四胞藻等有时成团块状漂浮水面，可用镊子或用粗纱布制作的小网采集，甚至可用大口瓶直接将标本连水一同灌入。对于在水面形成“水花”的藻类，同样可用标本瓶直接灌入。

D、冰雪中的藻类：可用小铲连同一层雪铲取，并立即盛入装有1/3瓶8%的福尔马林固定液的标本瓶中。

（2）藻类标本的保存

藻类标本最常用的保存法是用保存液浸泡起来，常用的保存液有一般固定液和保色固定液两类。

一般固定液

A、甲醛（福尔马林）水溶液：浮游藻类一般可用2～4%的浓度，固定蓝藻时，用2%甲醛液即可保存，固定裸藻和绿藻用3%甲醛液，固定鼓藻时，加甲醛液之后，再加几滴醋酸为好。对于较大一些的丝状或枝状体可用4～6%，而一些海藻如紫菜、水云、海带、鹿角菜等，则宜用10%的海水溶液。

注意：甲醛水溶液既是固定液也是保存液，如若加几毫升甘油，则保存时间更长。但不保色，而且时间一长易氧化为甲酸，所以，可加入适量吡啶、碳酸钙或碳酸镁，也可放几块大理石以中和酸性。

B、鲁格氏液（Lugol's solution）：此固定液最适于固定浮游藻类，其优点能防止鞭毛收缩，使绿藻的淀粉核变为黑紫色，便于识别绿藻或计算绿藻的数量。但缺点是标本不能长期保存（由于碘易升华）。如24小时后再加入甲醛液（使其浓度为3%），标本方可长期保存。

提示：鲁格氏液的配制方法是：先将6克碘化钾溶于20毫升蒸馏水中，搅拌溶解后再加入4克碘，搅拌溶解后加入80毫升蒸馏水即可。

C、波恩氏溶液（Bouin's solution）：此固定液的优点是细胞变化小，有利于种的鉴定和观察，特别对固定浮游藻类的效果较佳。用此液固定的标本，经1～2天后，须换4%的甲醛液保存。

提示：波恩氏溶液的配制方法为：在100毫升的蒸馏水中加入苦味酸结晶，边加边搅动，直至苦味酸溶解达饱和时止，再经静置沉淀后，取上清的饱和液75毫升，注入烧杯中，加40%甲醛25毫升，冰醋酸3毫升即可。（注意：苦味酸易燃易爆，平时应在苦味酸中加入20%的水，放在阴凉处，以避免危险。）

D、FAA固定保存液：即福尔马林—冰醋酸—酒精混合固定液，效果好，可长期保存。

提示：其配方为：甲醛液（40%）5毫升，冰醋酸5毫升，50%酒精90毫升。

注意：如固定团藻效果最好的是碘—甲醛—醋酸液，固定时不要使其群体之间互相聚集成块。配方为：碘化钾2克，碘1克，甲醛液（40%）24毫升，冰醋酸4毫升，蒸馏水400毫升。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待溶解后，再加其它成分。

保色固定液

A、配方：水35毫升，硫酸铜2克，冰醋酸5毫升，福尔马林10毫升，95%酒精50毫升。先将硫酸铜溶于水，再加入其它成分。

B、材料先放入用2%福尔马林配成的0.5%或1%的醋酸铜溶液内24小时，然后取出，保存于5%福尔马林中。（保存绿藻）

C、配方：乳酸20毫升，酚20克，甘油40毫升，氯化钙0.2克，醋酸铜0.2克，水95毫升。

D、配方：明矾0.5克，甘油10毫升，水90毫升。（此溶液适合保存绿藻）（3）硅藻标本的清除处理

为了能看清硅藻细胞壁上的花纹，可将标本进行处理，除去内含物。另外，硅藻往往与泥沙等杂物混杂在一起，影响观察效果。常用酸化法来对硅藻标本进行清除处理，具体方法如下：

A、将标本水样摇匀，用吸管取适量的标本水样注入试管中，注意尽量少带泥沙等杂物。

B、加入与标本水样等量的浓硫酸。

C、慢慢滴加与标本水样等量的浓硝酸，此时产生褐色的亚硝酸气体。标本渐渐变白，直到液体变成无色透明为止。

D、将液体静置24小时或在离心机上以3000转/分离心5分钟，使硅藻沉于试管底部。

E、吸出上清液，加入适量重铬酸钾饱和溶液，将液体静置24小时或在离心机上以3000转/分离心5分钟，使硅藻沉于试管底部。

F、吸出上清液，用蒸馏水重复洗4～5次。每次换水后必须将液体静置24小时或在离心机上以3000转/分离心5分钟，使硅藻沉于试管底部。

G、洗到溶液呈中性时，即可将材料保存在95%酒精中或4%的甲醛中。

（4）淡水藻类的培养

土壤浸出液培养法浸出液制备：取有机质丰富的菜园或花园土1000克，加水2000毫升，搅拌后放置1～2天。取上清液过滤，将所得滤液稀释2～5倍（稀释倍数视土壤含有机质多少而定）。将稀释后的土壤浸出液用高压灭菌锅在摄氏120度条件下消毒20分钟，冷却后即可使用。此法主要用于培养衣藻和水绵。

注意：衣藻常生于有机质较丰富的池塘或河水中，于春秋季将衣藻采回后，置于向阳处，不久可见培养缸壁的水表面有一条绿线，这是集聚的衣藻。用吸管自绿线处吸取绿水，可得纯衣藻种群。室内培养时，应放在日光灯下培养，温度以摄氏15～25度为宜。水绵多生于池塘、水沟和稻田中，在春季、初夏和秋季最多，采回后放于培养液中，置于有散射光的地方培养，一般能培养几个月，若长期培养，水绵容易腐烂。培养时切忌阳光直射，否则水绵极易腐烂。若将水绵放在冰箱冷藏室（2～6℃）中培养约一周，就会产生接合生殖。

克诺普氏培养基培养法培养基配制：硝酸钙4克，硝酸钾1克，硫酸镁1克，