不同碳_氮源对番茄两种内生真菌菌丝生长的影响研究

Lm, 顶端膨大呈圆 形或椭圆形, 上面着生 1 ~ 2 层放射状分布的瓶状小梗, 内生芽殖型分生孢子
聚集在分生孢子梗顶 部呈头状。分生孢子近球
形, 粗糙或有刺, 2. 5 ~ 3. 0 Lm, 并可观察到直立 的分生孢子梗和膨大的头部。 Fg2 在 PDA 培养
基上为白色棉垫状, 菌丝稠密, 且菌丝较厚, 产孢 量特大。分生孢子约 2. 5 Lm, 圆形, 无色。菌丝
差异 显著性
15. 3 18. 5
C
14. 8 17. 6
D
18. 9 21. 3
B
19. 1 20. 8
B
21. 8 24. 5
A
10. 8 14. 3
E
白僵菌
菌落直径
差异
3 d 5 d 显著性
15. 6 20. 5
D
16. 9 22. 5
C
21. 3 28. 6
A
20. 4 26. 9
B
20. 5 27. 3
体有菌丝融合现象, 分生孢子梗有明显的主轴,
孢子梗细长单分枝, 然后又作二叉状分枝。根据 许志刚的 5普通植物病理学 6初步鉴定两菌株都
为半知 菌, 菌株 Fg1 为 黄 曲霉 ( Saspergillus f lavus) , Fg2为球孢白僵菌 ( B eauveria bassiana ) [ 7] 。
D
无糖 2. 0 5. 9
E
白僵菌
菌落直径
差异
3 d 5 d 显著性
18. 5 21. 4
B
18. 6 20. 8
B
17. 3 21. 6
B
20. 8 25. 9
A
12. 6 15. 3
C
803 10. 9
D
注: 大写字母代表 1%差异显著性。表 2同。
由表 1可知, 两种真菌在不同碳源的固体培 养基上生长速度均比无碳条件下快, 曲霉菌在以
3 结论与讨论
2. 4 两种内生真菌在不同氮源培养基上菌落直
径
由表 2可知, 对有机氮的利用明显优于对无
机氮的利用, 其中对生物素的利用最好, 培养 5 d 菌落直径达 24. 5 mm。其次是天门冬氨酸 ( Asp)
和谷氨酸 ( G lu), 菌落直径分别 为 20. 8 和 21. 3
mm, 与其他处理之间差异显著。白僵菌在不 同
山西农业科学 2008, 36( 11): 75~ 77
*
J ournal of Shanx i Agr icultural Sciences
不同碳、氮源对番茄两种内生真菌 菌丝生长的影响研究
王美琴 1, 陈俊美 2, 李新凤1
( 1. 山西农业大学农学院, 山西 太谷 030801; 2. 偏关县农业局, 山西 偏关 036400)
葡萄糖为碳源的固体培养基上生长最快, 5 d后 菌落直径达到 23. 6 mm, 与其他处理呈显著性差
异。其次是乳糖、蔗糖和麦芽糖为碳源的固体培
养基。可溶性淀粉的利用最差, 5 d 菌落直径才 达到 12. 9 mm。白僵菌在以乳糖为碳源的固体
培养 基 上生 长 最 快, 5 d 后 菌 落 直 径达 到
25. 9 mm, 与其他处理形成显著性差异。其次是 以葡萄糖、蔗糖和麦芽糖为碳源的固体培养基, 5
d菌落直径分别为 21. 4, 20. 8 和 21. 6 mm, 三者 之间没有显著性差异。可溶性淀粉的利用最差,
5 d菌落直径才达到 15. 3 mm。
2. 3 两种内生真菌在不同碳源培养液中的菌丝 生长量
由各种碳源对菌丝生长的影响 ( 图 1) 可知, 供试的 5种糖均可被两种内生真菌利用, 两种真
菌在不同碳源的培养液上生长量均比无碳条件
下大。曲霉菌对葡萄糖和蔗糖的利用最高, 菌丝 干重分别达到 410 和 390 m g。其次为乳糖。在
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王美琴等: 不同碳、氮源对番茄两种内生真菌菌丝生长的影响研究
内生真菌的玻片培养镜检: 在灭菌的载玻片 上加少量琼 脂培养 基, 接 种真菌 后放 在培养 皿 中, 在 25e 培养箱 中培养。经 过一定时期的 培 养, 当部分菌丝体和孢子结构已经形成在载玻片 上时, 除去琼脂培 养基, 加一滴水浮载剂在 显微 镜下观察 [ 5] 。 1. 2 不同碳、氮源培养基对两种内生真菌 菌落 生长的影响 [ 6]
用直径为 4 mm 的打孔器在培养 3 d的待测 菌的菌落边缘打块接种, 对两种内生真菌不同的 碳源 (葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖和可溶性淀粉 ) 和氮源 ( NH4 C,l KNO 3, G lu, A sp和 生物素 ) 固 体 培养基 ( 以无糖无氮作为对照 ) 放入 25e 的培养 箱中培养, 分别测定 3和 5 d的菌落直径, 用 SAS 软件对数据进行统计分析。 1. 3 不同碳、氮源培养液对两种内生真菌 菌丝 生长的影响 [ 6]
可溶性淀粉为碳源的培养液中生长量最小。白 僵菌对乳糖的利用最高, 菌丝干重达到 360 m g。 其次为蔗糖和麦芽糖。
由图 2可知, 曲霉菌在液体培养基中对天门 冬氨酸的利用 最好, 菌丝 的干重 达到甚 至超过 400 m g, 其次是谷氨酸。白僵菌在液体培养基中 对生物素的利用最好, 菌丝干重接近 400 m g, 其 次是天门冬氨酸和谷氨酸。
Abstrac t: Tw o endophy tic funga l stra ins w ere isolated from the shoot of tam oto. A ccord ing to the cultural character and basic properties o fm orpho log ic, Fg1 and Fg2 w ere iden tified as Sasp erg illus flavus and B eauveria bass iana respecitive ly. Tw o endophytic fung al strains w ere ino culated in d ifferen t ca rbon and n itrogen cu lture m id ium. The results show ed that F g1 and Fg2 g rew w e ll in g locuse and lactose sources respec itive ly. Bo th o f the tw o endophytic strains w ere g rew w e ll in b lo tin, G lu and A sp m ed ium.
2. 2 两种内生真菌在不同碳源培养基上的菌落
直径
表 1 曲霉菌和白僵菌在不同碳源
培养基上的菌落直 径
mm
曲霉菌
培养基 葡萄糖
菌落直径 3d 5d 15. 8 23. 6
差异 显著性
A
蔗糖 10. 8 17. 1 BC
麦芽糖 9. 9 16. 6
C
乳糖 9. 5 18. 3
B
可溶性淀粉 9. 5 12. 9
B
11. 8 15. 8
E
2. 5 两种内生真菌在不同氮源培养液中的菌丝
生长量
近十几年的研究表明, 内生真菌对植物某些 活性成分的形成有重要的影响, 通常会产生与其 宿主植物相同或相似的生理活性物质, 来促进宿 主植物对干旱等非生物胁迫的抵抗能力; 还可以 起到阻抑食草动物和昆虫的采食, 抑制病原真菌 侵染的作用 [ 3] 。本研究所测定的两菌株对葡萄 糖和蔗糖的利用都较好, 其他报道也证实了这一 点 [ 4, 6 ] 。所以, 我们在不了解某一真菌的生长习 性时, 一般以葡萄糖或蔗糖作为碳源。两株内生 真菌对氮素营养的要求不严格, 在含硝态氮、氨 态氮和有机氮等氮源的培养基中均可生长, 但利 用程度不同, 总的结果是对有机氮的利用明显高 于对无机氮的利用。
W ANG M e-i q in1, CH EN Jun-m e i2, L I X in-feng1
( 1. A gronomy Co llege, Shanx i Agr icultural University, T aigu 030801, Ch ina; 2. P ianguan Agr icultural B ureau, Shanx i Province, P ianguan 036400, China)
生真菌逐渐受到人们的关注。 草本植物内生真菌侵染种子内部, 播种后真
菌随着幼苗的生长和植株的发育成熟而生长, 受 侵染的植株在营养生长阶段不表现出对内生真 菌侵染的特点, 但是当植物开花的时候就可以观 察到侵染的真菌 [ 3 ] 。
近十几年的研究表明, 内生真菌对植物某些 活性物质的形成有重要的影响。从细胞水平、分 子水平等不同层次上研究内生真菌与寄主作物 相互作用的基础, 将为人 们认识、改造和利用内
K ey word s: Endophytic fung;i Ca rbon sources; N itrogen sources
与植物共生的真菌按照共生的部位不 同可 分为两类: 一类是存在于植物根部的菌根真菌; 另一类是 存在于 健康植 物茎叶 的内生 真菌 [ 1] 。 内生真 菌 ( Endophy tic fung i) 是 指在整个生活 史 或生活史的某个阶段生活在活体植物组织内, 却 没有引起明显侵染的真菌, 包括那些在其生活史 中的某一阶段营表面生的腐生菌, 对宿主暂时没 有伤害的潜伏性病原菌和菌根菌 [ 2 ] 。由于 内生 真菌和宿主之间的特有关系以及在生物进化、生 态学、生物防治和 药物开发方面的研究进展, 内
氮源的培养基上生长也不同, 其中对谷氨酸的利 用最好, 菌落直径达到 28. 6 mm, 其次是天门冬氨酸
和生物素, 菌落直径分别为 26. 9和 27. 3 mm。
表 2 曲霉菌和白僵菌 在不同氮源
培养基上的菌落直径
mm
培养基
NH 4C l KNO 3
G lu A sp 生物素 无氮
曲霉菌
菌落直径 3 d 5d
为碳源的条件下生长最好; 两菌株对生物素、G lu和 A sp的利用率最高。
关键词: 内生真菌; 碳源; 氮源
中图分类号: S436. 412. 1
文献标识码: A
文章编号: 1002- 2481( 2008) 11- 0075- 03
Study on M ycelial G row th of Tw o T om ato Endophytic Fungi in D ifferent Carbon and N itrogen M edium
用直径为 4 mm 的打孔器在培养 3 d的待测 菌的菌落边缘打菌块, 将 5块移植到 150 m l不同 碳、氮源改良后的 L illy- Barnett液体培养基中, 25e 避光振荡培养 8 d后, 将发酵液过滤, 自来水 淋洗至流出液无色, 装入离心管, 加适量自来水, 3 000 r / s离心至不再有带色发酵液为止, 在 60e 恒温箱中烘干至恒重, 称重, 再换算成干重。
生真菌提供科学依据 [ 4] 。本试验从健康番 茄植 株内分离内生真菌并进行 鉴定, 对其生长的碳、 氮源条件进行了初步研究。
1 材料和方法
1. 1 内生真菌的分离和鉴定 采用组织分离法, 即将健康番茄Fra Baidu bibliotek株用自来
水冲洗 干净, 分别切 取小块 根、幼 茎 ( 2 mm @ 2 mm ) , 在 75% 的酒精 中浸泡 3 m in, 在 0. 1% 的 H gC l2 溶液中浸泡 30 m in, 最后用无 菌水冲洗 3 ~ 4次, 移至琼脂培养基平板上培养。培养 2~ 3 d后, 挑取组织边缘的菌 丝培养, 得到纯化的 菌 株, 观察菌落在培养基上的生长性状。
摘 要: 从健康 番茄植株中分离出两株内生真菌, 根据其培养性状及 形态特征鉴定 出 Fg1菌株为黄 曲霉菌
( Sasp erg illus f lavus )和 F g2菌株为球孢白僵菌 (B eauveria bassiana) 。把两株内生 真菌接种 在不同碳源 和氮
源的固体培养基和培养液中, 结果表明, Fg1菌株在以葡萄糖为碳源的条 件下生长最 好, Fg2菌株在 以乳糖
2 结果与分析
2. 1 内生真菌的分离和鉴定 共得到 两 株内 生 真菌 F g1 与 Fg2。 Fg1 在
PDA培养基上生长性状为菌落生长较快, 呈圆形 菌落, 中间灰绿色, 周围呈淡绿色, 最外层一圈白 色, 背面无色或略呈褐色。镜检观察到, 分 生孢
子梗直立, 暗褐色至浅褐色, 壁粗糙, 长 100~ 150
* 收稿日期: 2008- 05- 22 项目来源: 山西农业大学创新基金项目 ( 2004007) ; 山西省自然基金项目 ( 2008011066) 作者简介: 王美琴 ( 1973- ) , 女, 山西平定人, 副教授, 主要从事植物病害研究工作。
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山西农业科学 2008年第 36卷第 11期