ELISA基础知识和注意事项PPT课件
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ELISA检测技术ppt课件
优点: 1. 特异性高、准确性好； 2. 实验操作简便，用时短。
缺点: 1. 应用范围较小，生产难度大。
——需制备各种酶标抗原或抗体。
.
11
间接法ELISA
间接法ELISA是将酶标记在二抗上，当抗体（一抗）和包被 在酶标板的抗原结合形成抗原-抗体复合物后，再以酶标二抗和 复合物结合，通过测定酶反应产物的颜色可以（间接）反映一抗 和抗原的结合情况，进而计算出抗原或抗体的量（见后图）。
竞争法ELISA的实验原理：将包被了抗体的酶标板的微孔分
为测定孔和对照孔，在对照孔中加入已知浓度的系列标准品溶液
和酶标记物（酶标抗原）；在测定孔中同时加入酶标抗原和待检
样本（抗原），酶标抗原和样品互相竞争包被抗体的结合点，形
成酶标记的抗原-抗体复合物固定在微孔内，没有吸附的酶标抗
原通过洗涤去除，加入底物后，复合物上的酶催化底物生成有色
.
2
ELISA的发展概况
自从Engvall和Perlman（瑞典，1971）首次报道建立酶联免 疫吸附试验（ELISA）以来，由于ELISA技术具有快速、敏感、 简便、易于标准化等优点，使其得到迅速的发展和广泛应用 。
随着生物技术的快速发展，将利用基因工程技术制备的抗原 或单克隆抗体包被酶标板后，极大地提高了ELISA检测技术的 特异性，加之电脑化程度极高的ELISA检测仪的使用，使 ELISA更为简便实用和标准化，从而使其成为最广泛应用的检 测方法之一。
.
5
酶标板
.
6
ELISA常用酶类
辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)
DH2+ H2O2
D + H2O
上式中，DH2为供氢体，H2O2为受氢体。
ELISA原理与应用-很详细PPT课件
它具有高灵敏度、高特异性和可定量等优点，广泛应用于生物医学研究、临床诊 断、食品安全等领域。
ELISA的原理
酶联免疫吸附测定的基本原理是抗原 -抗体反应，即利用抗原与抗体之间 的特异性结合，实现对目标分子的检 测。
随后加入酶标记的抗体或抗原，与固 相载体上的抗原或抗体发生特异性结 合，形成酶标记的抗原-抗体复合物。
Elisa技术简介
简要介绍Elisa技术的原理、特点、 分类和应用范围，让读者对Elisa技 术有一个初步的了解。
结合图表和图片，形象生动地展示 Elisa技术的操作流程和实验设计，便 于读者理解和记忆。
02
Elisa原理
酶联免疫吸附测定（ELISA）的定义
酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种基于抗原-抗体反应的检测技术，通过酶标记的 方法，将抗原或抗体结合到固相载体上，实现对目标分子的定量或定性检测。
标准化问题
不同实验室间Elisa检测结果 的标准化问题尚未完全解决，
导致结果可比性不高。
对操作人员要求高
虽然Elisa技术操作简便，但 对操作人员的专业知识和技能
要求较高。
06
Elisa技术的发展趋势和未来展望
技术创新和改进
自动化技术
提高检测的自动化程度，减少人 工操作，提高检测效率。
纳米技术
利用纳米材料提高检测的灵敏度 和特异性，实现更精确的检测。
食品安全检测
食品中微生物检测
检测食品中的细菌、病毒和寄生虫等微生物，确保食品的安全性。
食品中农药残留检测
检测食品中农药残留量，控制食品中的农药污染。
食品添加剂检测
检测食品中的添加剂种类和含量，保证食品的质量和安全。
环境监测
水质监测
ELISA的原理
酶联免疫吸附测定的基本原理是抗原 -抗体反应，即利用抗原与抗体之间 的特异性结合，实现对目标分子的检 测。
随后加入酶标记的抗体或抗原，与固 相载体上的抗原或抗体发生特异性结 合，形成酶标记的抗原-抗体复合物。
Elisa技术简介
简要介绍Elisa技术的原理、特点、 分类和应用范围，让读者对Elisa技 术有一个初步的了解。
结合图表和图片，形象生动地展示 Elisa技术的操作流程和实验设计，便 于读者理解和记忆。
02
Elisa原理
酶联免疫吸附测定（ELISA）的定义
酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种基于抗原-抗体反应的检测技术，通过酶标记的 方法，将抗原或抗体结合到固相载体上，实现对目标分子的定量或定性检测。
标准化问题
不同实验室间Elisa检测结果 的标准化问题尚未完全解决，
导致结果可比性不高。
对操作人员要求高
虽然Elisa技术操作简便，但 对操作人员的专业知识和技能
要求较高。
06
Elisa技术的发展趋势和未来展望
技术创新和改进
自动化技术
提高检测的自动化程度，减少人 工操作，提高检测效率。
纳米技术
利用纳米材料提高检测的灵敏度 和特异性，实现更精确的检测。
食品安全检测
食品中微生物检测
检测食品中的细菌、病毒和寄生虫等微生物，确保食品的安全性。
食品中农药残留检测
检测食品中农药残留量，控制食品中的农药污染。
食品添加剂检测
检测食品中的添加剂种类和含量，保证食品的质量和安全。
环境监测
水质监测
ELISA检测技术培训ppt课件精品模板分享(带动画)
目的：通过室内质控，可以及时发现检 测过程中可能存在的问题，并采取相应 的措施加以纠正，从而提高检测结果的 准确性和可靠性
实施：实验室应建立完善的室内质控体系， 并定期对检测过程进行质控，以确保检测 结果的准确性和可靠性
室间质评计划：制定并执行统一的质评计划，确保各实验室之间的质评活动相互协调
室间质评样品：由权威机构制备和分发统一的质评样品，各实验室使用相同的质评样品进行 检测
试剂质量不稳定：选择高质量的试剂，确保试剂在有效期内使用 试剂盒灵敏度低：调整试剂盒的灵敏度，提高检测的准确性 试剂盒特异性差：选择特异性好的试剂盒，避免交叉反应
试剂盒保存不当：按照试剂盒说明书正确保存试剂盒，避免受潮、污染等影响
自动化技术：提高ELISA检测 效率和质量的关键
智能化技术：实现ELISA检测 的自动化和智能化
通过将抗原或抗体与酶结合形 成酶标抗原或抗体，使其具有 酶的催化作用
酶联 测方法
在固相载体表面进行抗原抗体 反应，加入底物后根据颜色变
化判断结果
酶联免疫吸附试验具有灵敏度 高、特异性强、操作简便、易
于定量等优点
临床诊断：用于检测各种疾病相关的抗原、抗体和细胞因子等 食品安全：检测食品中的微生物、毒素和过敏原等 生物安全：检测实验室中的生物因子和微生物等 环保监测：检测环境中的污染物和有害物质等
ELISA检测技术在临床诊断中的应用：用于疾病早期诊断、疗效评估和预后判断 在科研领域的应用：用于疾病的基础研究和临床试验，提高研究质量和效率 未来发展趋势：随着技术进步和应用拓展，ELISA检测技术将更加便捷、准确和高效 展望：随着医疗科技的发展，ELISA检测技术将在未来发挥更加重要的作用
汇报人：
样本类型：血清、血浆、细胞培养 上清等
ELISA实验 ppt课件
1.4 免疫测定在临床检验中的应用
由于各种抗原成份，包括小分子的半抗原，均可用以制备 特异性的抗血清或单克隆抗体，利用此抗体作为试剂就可 检测标本中相应的抗原，因此免疫测定的应用范围极广。
2 ELISA的类型
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方 法中有三个必要的试剂： （1）固相的抗原或抗体，即"免疫吸附剂"（immunosorbent ）； （2）酶标记的抗原或抗体，称为"结合物"（conjugate）； （3）酶反应的底物。
4 对照设定
阳性对照品(positive control)和阴性对照品(negative control)是检验试验有效性的控制品，同时也作为判断结果 的对照。
阳性对照品的基本组成应尽量与检测标本的组成相一致，多以含 蛋白保护剂的缓冲液为基质。
加入的量应与试剂的敏感度相称； 在测定中得到的吸光值与受检标本吸光值比较，可以估计标本物 质的量。
1.1.2 特异性
抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之 间。化学结构和空间构型互补关系，具有高度的特异性。
测定某一特定的物质，而不需先分离待检物。
1.1.3 最适比例
1.1.4 敏感性
化学比色法的敏感度为mg/ml水平 酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/ml 免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿 标记的免疫敏感度可提高数千倍，达ng/ml水平 例如，HBsAg，其敏感度可达0.1ng/ml。
ELISA的试剂准备A
固相载体 聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋 白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性。
聚氯乙烯。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但 空白值也略高。
elisa检测技术 ppt课件 共25页
优点: 1. 特异性高、准确性好； 2. 实验操作简便，用时短。
缺点: 1. 应用范围较小，生产难度大。 ——需制备各种酶标抗原或抗体。
间接法ELISA
间接法ELISA是将酶标记在二抗上，当抗体（一抗）和包被 在酶标板的抗原结合形成抗原-抗体复合物后，再以酶标二抗和 复合物结合，通过测定酶反应产物的颜色可以（间接）反映一抗 和抗原的结合情况，进而计算出抗原或抗体的量（见后图）。
洗涤3次，拍干
加底物溶液 (空孔除外)
避光 37℃, 10-30min
加终止液 (空孔除外)
加酶标抗体 (空孔除外)
上机检测、结果判定 (空孔调零)
双抗夹心法检测血清IL-2含量
设计加板次序 (空孔、阴、阳、标准)
加板 (阴、阳、标准、样)
37℃, 30min 洗涤3次, 拍干
加酶标抗体 (空孔除外)
酶标板
ELISA常用酶类
辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)
DH2+ H2O2
D + H2O
上式中，DH2为供氢体，H2O2为受氢体。
常用底物：
1. 邻苯二胺(OPD)，产物为橙红色（492nm检测）； 2. 四甲基联苯胺(TMB)，产物为蓝色，酸性条件下变为
谢谢！
xiexie!
ELISA试剂盒的组成
完整的ELISA试剂盒通常包含以下各组分： （1）已包被抗原或抗体的固相载体（俗称酶标板）； （2）酶标记的抗原或抗体（酶标记物）； （3）酶的底物； （4）参考标准品（定量试剂盒）及其稀释液； （5）酶标记物及样本的稀释液； （6）洗涤液（通常为浓缩液，用前按比例稀释）； （7）反应终止液； （8）封口膜若干、说明书一份。
缺点: 1. 应用范围较小，生产难度大。 ——需制备各种酶标抗原或抗体。
间接法ELISA
间接法ELISA是将酶标记在二抗上，当抗体（一抗）和包被 在酶标板的抗原结合形成抗原-抗体复合物后，再以酶标二抗和 复合物结合，通过测定酶反应产物的颜色可以（间接）反映一抗 和抗原的结合情况，进而计算出抗原或抗体的量（见后图）。
洗涤3次，拍干
加底物溶液 (空孔除外)
避光 37℃, 10-30min
加终止液 (空孔除外)
加酶标抗体 (空孔除外)
上机检测、结果判定 (空孔调零)
双抗夹心法检测血清IL-2含量
设计加板次序 (空孔、阴、阳、标准)
加板 (阴、阳、标准、样)
37℃, 30min 洗涤3次, 拍干
加酶标抗体 (空孔除外)
酶标板
ELISA常用酶类
辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)
DH2+ H2O2
D + H2O
上式中，DH2为供氢体，H2O2为受氢体。
常用底物：
1. 邻苯二胺(OPD)，产物为橙红色（492nm检测）； 2. 四甲基联苯胺(TMB)，产物为蓝色，酸性条件下变为
谢谢！
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ELISA试剂盒的组成
完整的ELISA试剂盒通常包含以下各组分： （1）已包被抗原或抗体的固相载体（俗称酶标板）； （2）酶标记的抗原或抗体（酶标记物）； （3）酶的底物； （4）参考标准品（定量试剂盒）及其稀释液； （5）酶标记物及样本的稀释液； （6）洗涤液（通常为浓缩液，用前按比例稀释）； （7）反应终止液； （8）封口膜若干、说明书一份。
ELISA检测技术培训ppt课件
试剂准备
按照试剂说明书要求，正确配制和保 存试剂，避免试剂污染和失效。
操作流程规范
01
02
03
操作前准备
熟悉实验流程，准备好所 需试剂和器材，确保实验 环境的清洁和安静。
操作过程规范
严格遵守实验操作规范， 避免操作失误和交叉污染 ，确保实验结果的准确性 和可靠性。
操作后处理
及时清洗实验器材，整理 实验数据，做好实验记录 和结果分析。
与其他技术联用
将ELISA技术与质谱、荧光定量PCR等其他检测技术相结合，实现多 组学数据的整合分析，为精准医学和个性化治疗提供有力支撑。
06
ELISA检测技术前沿动态及发展 趋势预测
前沿动态关注焦点
新型ELISA试剂盒的开发
01
针对新兴疾病标志物的高灵敏度、高特异性试剂盒的研制和应
用。
自动化ELISA检测系统的研究
ELISA技术发展历程
1971年，Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（Enzyme Linked Immunosorbent Assay）用于IgG定量测定的文章，使得ELISA 技术开始得到广泛应用。
随着方法的不断改进、材料的不断更新，尤其是基因工程技术的引入， 促进了抗原、抗体的制备，各种新型酶标抗体、抗原问世，ELISA在敏感
生物医学是现代医学的重要分支，研究生物大分子、细胞、组织及器官的结构 与功能，对于揭示生命现象本质及疾病发生机制具有重要意义。
ELISA在生物医学中的应用
ELISA作为一种高灵敏度、高特异性的免疫学检测方法，在生物医学研究中广泛 应用于蛋白质、抗体、激素等生物标志物的检测，为疾病诊断、治疗及预防提 供了有力支持。
性、特异性、应用范围等方面得到不断的发展和完善。
按照试剂说明书要求，正确配制和保 存试剂，避免试剂污染和失效。
操作流程规范
01
02
03
操作前准备
熟悉实验流程，准备好所 需试剂和器材，确保实验 环境的清洁和安静。
操作过程规范
严格遵守实验操作规范， 避免操作失误和交叉污染 ，确保实验结果的准确性 和可靠性。
操作后处理
及时清洗实验器材，整理 实验数据，做好实验记录 和结果分析。
与其他技术联用
将ELISA技术与质谱、荧光定量PCR等其他检测技术相结合，实现多 组学数据的整合分析，为精准医学和个性化治疗提供有力支撑。
06
ELISA检测技术前沿动态及发展 趋势预测
前沿动态关注焦点
新型ELISA试剂盒的开发
01
针对新兴疾病标志物的高灵敏度、高特异性试剂盒的研制和应
用。
自动化ELISA检测系统的研究
ELISA技术发展历程
1971年，Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（Enzyme Linked Immunosorbent Assay）用于IgG定量测定的文章，使得ELISA 技术开始得到广泛应用。
随着方法的不断改进、材料的不断更新，尤其是基因工程技术的引入， 促进了抗原、抗体的制备，各种新型酶标抗体、抗原问世，ELISA在敏感
生物医学是现代医学的重要分支，研究生物大分子、细胞、组织及器官的结构 与功能，对于揭示生命现象本质及疾病发生机制具有重要意义。
ELISA在生物医学中的应用
ELISA作为一种高灵敏度、高特异性的免疫学检测方法，在生物医学研究中广泛 应用于蛋白质、抗体、激素等生物标志物的检测，为疾病诊断、治疗及预防提 供了有力支持。
性、特异性、应用范围等方面得到不断的发展和完善。
elisa课件
药物活性评价
通过检测药物与靶点的结合活性，ELISA可用于评价药物的生物活 性和药效。
药物代谢动力学研究
ELISA可用于检测生物样品中药物的浓度，为药物代谢动力学研究 提供数据支持。
其他生物医学领域的应用拓展
免疫学研究
ELISA可用于检测各种免疫分子 ，如细胞因子、趋化因子等，为
免疫学研究提供重要工具。
适用范围广
可用于检测各种抗原和抗体，包 括蛋白质、多肽、激素、病毒等 。
02
ELISA实验设计与操作
实验设计原则与步骤
特异性
确保抗原与抗体的特异性结合。
敏感性
选择高灵敏度的检测方法和试剂。
实验设计原则与步骤
• 重复性：确保实验条件和操作的稳定性，以获得可靠的结 果。
实验设计原则与步骤
实验设计步骤 明确实验目的和检测指标。
操作流程规范
• 样本稀释：根据实验需要，用适当的稀释液稀释 样本。
操作流程规范
加样
将处理好的样本和试剂按照实验设计 加入相应的孔中。
温育
将加样后的酶标板放入温箱中，控制 适当的温度和时间进行温育。
操作流程规范
洗涤
用洗涤液充分洗涤酶标 板，去除未结合的抗原
或抗体。
显色
加入显色剂，使结合的 酶标记物催化底物显色
准确性。
多重ELISA技术
02
实现在同一反应体系中同时检测多种目标物，提高检测效率。
自动化ELISA技术
03
通过自动化设备和机器人技术，实现ELISA检测的自动化和智能
化。
面临的挑战和机遇分析
挑战
样本复杂性和多样性、检测灵敏度和特异性、交叉反应和干 扰等问题。
机遇
新技术和新方法的不断涌现、市场需求不断增长、政策支持 不断加强等。
通过检测药物与靶点的结合活性，ELISA可用于评价药物的生物活 性和药效。
药物代谢动力学研究
ELISA可用于检测生物样品中药物的浓度，为药物代谢动力学研究 提供数据支持。
其他生物医学领域的应用拓展
免疫学研究
ELISA可用于检测各种免疫分子 ，如细胞因子、趋化因子等，为
免疫学研究提供重要工具。
适用范围广
可用于检测各种抗原和抗体，包 括蛋白质、多肽、激素、病毒等 。
02
ELISA实验设计与操作
实验设计原则与步骤
特异性
确保抗原与抗体的特异性结合。
敏感性
选择高灵敏度的检测方法和试剂。
实验设计原则与步骤
• 重复性：确保实验条件和操作的稳定性，以获得可靠的结 果。
实验设计原则与步骤
实验设计步骤 明确实验目的和检测指标。
操作流程规范
• 样本稀释：根据实验需要，用适当的稀释液稀释 样本。
操作流程规范
加样
将处理好的样本和试剂按照实验设计 加入相应的孔中。
温育
将加样后的酶标板放入温箱中，控制 适当的温度和时间进行温育。
操作流程规范
洗涤
用洗涤液充分洗涤酶标 板，去除未结合的抗原
或抗体。
显色
加入显色剂，使结合的 酶标记物催化底物显色
准确性。
多重ELISA技术
02
实现在同一反应体系中同时检测多种目标物，提高检测效率。
自动化ELISA技术
03
通过自动化设备和机器人技术，实现ELISA检测的自动化和智能
化。
面临的挑战和机遇分析
挑战
样本复杂性和多样性、检测灵敏度和特异性、交叉反应和干 扰等问题。
机遇
新技术和新方法的不断涌现、市场需求不断增长、政策支持 不断加强等。
《ELISA检测技术》课件
总结词
通过间接利用酶标记的抗抗体与待测 样本中的抗原反应。
详细描述
间接ELISA是在固相载体上包被已知 抗原，然后加入酶标记的抗抗体与待 测样本中的抗原反应，再加入底物显 色，达到检测抗原的目的。
夹心ELISA
总结词
通过酶标记的二抗将待测样本中的抗原夹在固相载体和酶标记的抗体之间。
详细描述
夹心ELISA是在固相载体上包被特异性抗体，然后加入待测样本与酶标记的二抗 反应，形成固相抗体-抗原-酶标记抗体的复合物，再加入底物显色，达到检测 抗原的目的。
《elisa检测技术》ppt 课件
目录
• ELISA检测技术概述 • ELISA检测技术的分类 • ELISA检测技术实验步骤 • ELISA检测技术的影响因素 • ELISA检测技术的优缺点 • ELISA检测技术的应用实例
01
ELISA检测技术概述
ELISA检测技术的定义
要点一
酶联免疫吸附分析（EnzymeLinked Immu…
一种基于抗原-抗体反应的检测技术，通过酶标记的方法将 免疫反应与化学信号放大，实现对目标分子的定量或定性 分析。
要点二
特点
灵敏度高、特异性强、操作简便、适用于大量样本检测。
ELISA检测技术的原理
抗原或抗体与固相载体表 面的抗原或抗体结合，形 成固相复合物；
加入酶标记的抗原或抗体 ，与固相复合物结合；
基因表达研究
通过ELISA检测技术可以检测基因表达产物的含量和活性，了解基因表达的规律和调控机制。
THANKS
感谢观看
显色
01
02
03
显色
加入显色底物，使抗原抗 体复合物呈现颜色反应。
显色底物
《elisa检测技术》ppt课件(2024)
拓展ELISA检测技术在生物医学、环境监测 、食品安全等领域的应用，推动相关产业的 发展。
2024/1/28
22
06 ELISA实验操作技巧与注 意事项
2024/1/28
23
实验前准备工作建议
01
仔细阅读试剂盒说明书 ，了解实验原理、操作 步骤和注意事项。
2024/1/28
02
准备好所需的试剂、耗 材和仪器，确保它们的 质量和性能符合要求。
去除异常值、缺失值等， 保证数据质量。
2024/1/28
数据转换
对数据进行对数转换、归 一化等处理，以满足后续 分析需求。
统计分析
采用t检验、方差分析等统 计方法，对实验组和对照 组数据进行比较，评估差 异显著性。
13
结果解读与报告撰写
结果解读
根据统计分析结果，结合专业知 识对实验数据进行解读，如判断 样品中目标物质的含量是否超标
《elisa检测技术》ppt课件
2024/1/28
1
目 录
2024/1/28
• ELISA检测技术概述 • ELISA实验方法与步骤 • ELISA实验数据分析与解读 • ELISA技术在生物医学领域应用 • ELISA技术挑战与发展趋势 • ELISA实验操作技巧与注意事项
2
01 ELISA检测技术概述
发展多重ELISA检测技术，实现对多个目标物的同时检测，提高检 测效率。
20
新型ELISA技术发展趋势
数字化ELISA
利用微流控、微阵列等技术，实现ELISA检测的数字化、自 动化和智能化。
免疫荧光ELISA
结合免疫荧光技术，提高ELISA检测的灵敏度和特异性。
化学发光ELISA
ELISA实验基础知识培训PPT参考幻灯片
2/15/2020
14
2.可逆性
抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可 解离为游离抗原与抗体
3. 阶段性
第二阶段
第一阶段
特异性结合阶 段：反应快， 不可见
反应可见阶段： 反应慢，但会 出现凝集、沉 淀和细胞溶解 等现象
我可找到你了
2/15/2020
15
抗原抗体反应的特点 4.比例性 抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比例关系
沉淀反应中沉淀量与抗原抗体的比例关系
只有当二者浓度比例适当时才
出现可见反应，形成的免疫复合
沉 淀 物 形
物沉淀最多、最大。而当抗原抗 体比例超过此范围时，反应速度 和沉淀物量都会迅速降低甚至不
成
出现抗原抗体可见沉淀反应。
量
2/15/2020
16
2/15/2020
你们都看不见我
17
放射性免疫标记技术
2020/2/15
辣根过氧 化物酶
抗体蛋 白
21
将抗原（抗体） 固定在什么固相
载体上？
在实验中，为了分离游离和结合的酶标记物， 洗板的过程是必不可少的，所以，将抗原 （抗体）固定在固相载体上就是必须的了
在恢复后期出现，并可维 持多年，IgG 抗体使得机体 对同型病毒的再感染有免 疫力。
2/15/2020
13
什么是抗原抗体反应
抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性 结合反应
抗原抗体反应的特点
1. 特异性
抗原与抗体结合反应的专一性，是 指抗原分子表面的抗原决定簇与抗 体的分子结合的特异性，这两个分 子的空间结构是完全互补的。
可以引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚
至常败引血起症严、脓重毒腹症泻等和全败身血感症染
14
2.可逆性
抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可 解离为游离抗原与抗体
3. 阶段性
第二阶段
第一阶段
特异性结合阶 段：反应快， 不可见
反应可见阶段： 反应慢，但会 出现凝集、沉 淀和细胞溶解 等现象
我可找到你了
2/15/2020
15
抗原抗体反应的特点 4.比例性 抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比例关系
沉淀反应中沉淀量与抗原抗体的比例关系
只有当二者浓度比例适当时才
出现可见反应，形成的免疫复合
沉 淀 物 形
物沉淀最多、最大。而当抗原抗 体比例超过此范围时，反应速度 和沉淀物量都会迅速降低甚至不
成
出现抗原抗体可见沉淀反应。
量
2/15/2020
16
2/15/2020
你们都看不见我
17
放射性免疫标记技术
2020/2/15
辣根过氧 化物酶
抗体蛋 白
21
将抗原（抗体） 固定在什么固相
载体上？
在实验中，为了分离游离和结合的酶标记物， 洗板的过程是必不可少的，所以，将抗原 （抗体）固定在固相载体上就是必须的了
在恢复后期出现，并可维 持多年，IgG 抗体使得机体 对同型病毒的再感染有免 疫力。
2/15/2020
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什么是抗原抗体反应
抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性 结合反应
抗原抗体反应的特点
1. 特异性
抗原与抗体结合反应的专一性，是 指抗原分子表面的抗原决定簇与抗 体的分子结合的特异性，这两个分 子的空间结构是完全互补的。
可以引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚
至常败引血起症严、脓重毒腹症泻等和全败身血感症染
ELISA技术要点及质量管理PPT课件
原理
ELISA技术利用抗原或抗体与固相载体表面的抗原或抗体结合，再加入酶标记的 抗原或抗体，通过酶催化底物显色反应，实现对目标分子的检测。
ELISA技术的分类和应用
01 间接ELISA
02 夹心ELISA
03 竞争ELISA
04 重组ELISA
05 应用
用于检测抗体，将抗原吸 附在固相载体上，然后加 入待测血清，最后加入酶 标记的二抗，通过底物显 色反应检测抗体。
1 2
自动化与智能化
随着技术的发展，ELISA技术将进一步实现自动 化和智能化，提高检测效率和准确性。
多指标并行检测
未来ELISA技术将朝着多指标并行检测的方向发 展，能够同时检测多种指标，提高检测效率。
3
纳米技术与ELISA的结合
纳米技术将为ELISA技术带来新的突破，如纳米 探针、纳米酶等，提高检测灵敏度和特异性。
ELISA技术在食品安全检测中的应用实例
农药残留检测
ELISA技术可用于检测食品 中的农药残留，确保食品 的安全性。
兽药残留检测
ELISA技术可用于检测肉类、 禽蛋等食品中的兽药残留， 保障消费者的健康。
生物毒素检测
ELISA技术可用于检测食品 中的生物毒素，如细菌毒 素、真菌毒素等。
ELISA技术的发展前景和展望
选择适当的读数仪器和方法，确保实验结果的准确性和可靠性。
操作步骤
按照实验要求，进行加样、孵育、洗涤、显色等操作，确保实验过程的规范性和 准确性。
03
ELISA技术的质量控制
实验前的准备和要求
试剂准备
确保所有试剂都符合质 量标准，没有过期，且
在有效期内使用。
设备校准
确保所有的实验设备， 如酶标仪、洗板机等， 都经过校准，以确保结
ELISA技术利用抗原或抗体与固相载体表面的抗原或抗体结合，再加入酶标记的 抗原或抗体，通过酶催化底物显色反应，实现对目标分子的检测。
ELISA技术的分类和应用
01 间接ELISA
02 夹心ELISA
03 竞争ELISA
04 重组ELISA
05 应用
用于检测抗体，将抗原吸 附在固相载体上，然后加 入待测血清，最后加入酶 标记的二抗，通过底物显 色反应检测抗体。
1 2
自动化与智能化
随着技术的发展，ELISA技术将进一步实现自动 化和智能化，提高检测效率和准确性。
多指标并行检测
未来ELISA技术将朝着多指标并行检测的方向发 展，能够同时检测多种指标，提高检测效率。
3
纳米技术与ELISA的结合
纳米技术将为ELISA技术带来新的突破，如纳米 探针、纳米酶等，提高检测灵敏度和特异性。
ELISA技术在食品安全检测中的应用实例
农药残留检测
ELISA技术可用于检测食品 中的农药残留，确保食品 的安全性。
兽药残留检测
ELISA技术可用于检测肉类、 禽蛋等食品中的兽药残留， 保障消费者的健康。
生物毒素检测
ELISA技术可用于检测食品 中的生物毒素，如细菌毒 素、真菌毒素等。
ELISA技术的发展前景和展望
选择适当的读数仪器和方法，确保实验结果的准确性和可靠性。
操作步骤
按照实验要求，进行加样、孵育、洗涤、显色等操作，确保实验过程的规范性和 准确性。
03
ELISA技术的质量控制
实验前的准备和要求
试剂准备
确保所有试剂都符合质 量标准，没有过期，且
在有效期内使用。
设备校准
确保所有的实验设备， 如酶标仪、洗板机等， 都经过校准，以确保结
酶联免疫吸附实验ppt课件
作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通 过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。 3、若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后 重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 4、试剂盒灵敏度：最小可测人TNF-a达4pg/ml。
19
20
第四.五部分: 注意事项(1)
1、手工洗板时，甩尽孔内液体，每孔加洗涤 液350μl，静止30秒后甩尽液体，在厚迭吸 水纸上拍干，洗4次。
23
工作液 100ul/孔，封住板孔， 37℃孵育60分钟。
16
第四.三部分: 实验方法和步骤
9、洗板4次。 10 、除空白孔外，加入1：100稀释的酶结合
工作液(100 ul/孔).封住板孔, 37℃孵育30分 钟. 11 、洗板4次. 12、各孔加入显色剂100 ul/孔,避光37℃孵育 10-20分钟。 13、各孔加入终止液100ul/孔,混匀后即刻测 A450值(5分钟内)。15ຫໍສະໝຸດ 第四.三部分: 实验方法和步骤
5、从密封袋中取出所需板条，其它板条密封放回 4℃
6、除空白孔外，分别将不同浓度标准品/标本100ul/ 孔加入板条的相应孔中，标准品和标本应作双复 孔或三复孔。用封板胶纸封住反应孔，37℃孵育 90分钟。
7、洗板4次。 8、除空白孔外，加入1:100稀释的生物素化抗体(2a)
• 2、将浓缩洗涤液（4）用双蒸水稀释(1:20)。未 用完的放回4℃。
• 3、标准品:以标准品/标本稀释液(1b)1.0ml复溶冻 干标准品(1a), 静置15分钟后混匀，按说明稀释至 所需浓度，再进行倍比稀释至所需浓度。未用完 的复溶标准品放入-20℃保存, 稀释的标准品不应 重复使用。
• 4、可根据实际情况，将标本做适当倍数稀释(可 做预实验，以确定稀释倍数)。
19
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第四.五部分: 注意事项(1)
1、手工洗板时，甩尽孔内液体，每孔加洗涤 液350μl，静止30秒后甩尽液体，在厚迭吸 水纸上拍干，洗4次。
23
工作液 100ul/孔，封住板孔， 37℃孵育60分钟。
16
第四.三部分: 实验方法和步骤
9、洗板4次。 10 、除空白孔外，加入1：100稀释的酶结合
工作液(100 ul/孔).封住板孔, 37℃孵育30分 钟. 11 、洗板4次. 12、各孔加入显色剂100 ul/孔,避光37℃孵育 10-20分钟。 13、各孔加入终止液100ul/孔,混匀后即刻测 A450值(5分钟内)。15ຫໍສະໝຸດ 第四.三部分: 实验方法和步骤
5、从密封袋中取出所需板条，其它板条密封放回 4℃
6、除空白孔外，分别将不同浓度标准品/标本100ul/ 孔加入板条的相应孔中，标准品和标本应作双复 孔或三复孔。用封板胶纸封住反应孔，37℃孵育 90分钟。
7、洗板4次。 8、除空白孔外，加入1:100稀释的生物素化抗体(2a)
• 2、将浓缩洗涤液（4）用双蒸水稀释(1:20)。未 用完的放回4℃。
• 3、标准品:以标准品/标本稀释液(1b)1.0ml复溶冻 干标准品(1a), 静置15分钟后混匀，按说明稀释至 所需浓度，再进行倍比稀释至所需浓度。未用完 的复溶标准品放入-20℃保存, 稀释的标准品不应 重复使用。
• 4、可根据实际情况，将标本做适当倍数稀释(可 做预实验，以确定稀释倍数)。
《ELISA培训》课件
ELISA的发展历史
1
1950s
首次提出免疫酶法的概念，开创了ELISA技术的前身。
2
1971
首次发表了酶联免疫吸附试验的核心原理和方法。
3
1980s
ELISA技术经过不断改进和完善，成为一种常用的临床和实验室检测方法。
ELISA的类型和原理
直接ELISA
通过检测目标分子与检测抗体的特异性结合来实现分析和检测。
浓度。
涂覆抗原或抗体
将抗原或抗体溶液均匀涂覆在酶标板 上，形成固相。
添加检测抗体
添加特异性的检测抗体，形成抗原/抗 体/检测抗体复合物。
ELISA实验中的问题及解决方法
1 高背景信号
优化洗涤步骤，使用适 当浓度的底物。
2 非特异性结合
3 假阳性结果
调整样品和抗体的浓度， 增加洗涤次数。
使用质量可靠和特异性 好的抗体和底物。
ELISA应用领域
医学研究
食品安全
ELISA在疾病诊断、药物开发 和生物学研究中起着重要作用。
ELISA用于检测食品中潜在的A可以检测环境中的污染 物，保护生态环境和人类健康。
ELISA操作注意事项
1 实验操作规范
遵循操作规程，保证实 验结果的可靠性和准确 性。
《ELISA培训》PPT课件
探索ELISA的奥秘和应用，揭示ELISA技术的发展历程，介绍ELISA的类型、 原理以及实验步骤，解决ELISA实验中常见问题，并深入探讨ELISA的应用领 域。
什么是ELISA
ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的实验技术，用于检测目标分子（如抗体、抗原、蛋白质等 ）在样本中的存在和浓度。
间接ELISA
通过先与目标分子特异性结合的一抗，再与检测抗体特异性结合的二抗进行分析和检测。
《ELISA基础》课件
样品处理：将待测样品进行 适当处理，如稀释、离心等
显色：加入显色剂，使结合 的物质发生颜色变化
孵育：将酶标板放入孵育器中， 在适当温度下孵育一段时间
读数：使用酶标仪读取吸光 度值，计算结果
实验准备：准备所需试剂和仪器， 包括酶标板、抗体、抗原、洗涤
液等
洗涤：用洗涤液洗涤酶标板，
去除未结合的物质
加样：将待测样品和标准品加入 酶标板中，注意加样顺序和体积
,
汇报人：
01
02
03
04
05
06
ELISA是一种免疫学检测方法，用于检测样品中的抗原或抗体
原理：利用抗原-抗体特异性结合，通过酶催化反应产生颜色变化，从而检测样品中 的抗原或抗体
步骤：样品处理、加样、孵育、洗涤、显色、终止、结果分析
应用：广泛应用于医学、生物学、食品科学等领域
酶联免疫吸附试验（ELISA）的分类：间接法、夹心法、竞争法 ELISA的应用领域：临床检测、生物药物研究、食品安全检测等 ELISA在临床检测中的应用：肿瘤标志物、传染病、自身免疫病等 ELISA在生物药物研究中的应用：抗体药物、细胞因子等的检测和定量
终止：加入终止液，终止反
应
注意事项：避免交叉污染，确保 实验环境清洁，严格按照操作规
程进行实验。
抗原和抗体的选择：选择合适的抗原和抗体，确保实验结果的准确性 实验条件的控制：控制实验温度、时间、pH值等条件，确保实验结果的稳定性 实验步骤的优化：优化实验步骤，提高实验效率和准确性 数据分析和结果解释：对实验数据进行分析和解释，确保实验结果的可靠性和可重复性
技术挑战：ELISA技术在检测过程中存在假阳性和假阴性的问题，需要进一步改进和优化。
发展趋势：未来ELISA技术将朝着自动化、高通量、高灵敏度、高特异性的方向发展，以满 足科学研究和临床诊断的需求。
elisa原理、方法及操作细节ppt课件
成本较高
高质量的抗体和酶标仪等设备 的成本较高，限制了其在一些
领域的应用。
2024/1/24
30
技术挑战与发展趋势
提高自动化程度
开发自动化ELISA检测系统，减 少人为操作误差，提高检测效 率。
2024/1/24
发展多重检测技术
在同一反应体系中同时检测多 种目标分子，提高检测通量。
提高特异性
通过改进抗体设计和筛选方法 ，提高抗体的特异性，减少交 叉反应。
优点
适用于检测大分子抗原，如病毒 、细菌等。
缺点
需要针对每种抗原制备特异性抗 体，成本较高。
2024/1/24
9
竞争法
1 2
原理
将特异性抗体与固相抗原竞争结合待检抗原，形 成抗体-抗原复合物，再加入酶标二抗与复合物 结合，最后加入底物显色。
优点
适用于检测小分子抗原或半抗原，如激素、药物 等。
3
缺点
抗原与抗体的特异性结合
免疫记忆
抗原表位与抗体超变区互补，形成稳 定的抗原-抗体复合物。
免疫系统对再次遇到的相同抗原产生 更快、更强的应答。
免疫应答
机体对抗原的识别、应答和清除过程 ，包括细胞免疫和体液免疫。
2024/1/24
4
ELISA技术原理
01
02
03
酶标记抗体/抗原
利用酶的催化作用放大抗 原-抗体结合的信号，提高 检测灵敏度。
2024/1/24
28
优点分析
高灵敏度
ELISA技术能够检测到非 常低浓度的目标分子，
适用于痕量分析。
2024/1/24
特异性
通过使用特定的抗体-抗 原反应，可以实现高特 异性的检测，减少假阳
ELISA知识简介PPT课件
27 Nhomakorabea06
总结与展望：ELISA技术发展趋 势预测
2024/1/26
28
新型标记物在ELISA中应用前景探讨
荧光标记物
高灵敏度、宽线性范围，适用于低丰度蛋白检测 。
酶标记物
高催化活性，可放大信号，提高检测灵敏度。
纳米材料标记物
独特的光学、电学性质，可增强信号并降低背景 干扰。
2024/1/26
29
2024/1/26
肿瘤治疗监测
利用ELISA技术监测肿瘤患 者治疗过程中肿瘤标志物 的变化，评估治疗效果和 预后。
肿瘤复发监测
定期采用ELISA方法检测肿 瘤患者康复期肿瘤标志物 的水平，及时发现肿瘤复 发迹象。
16
药物滥用检测中ELISA方法应用
毒品滥用检测
采用ELISA技术检测尿液或血液中的毒品代谢物，如吗啡、可卡 因等，用于毒品滥用的筛查和确认。
多重检测技术在提高通量方面优势分析
1 2
多通道检测
同时检测多个样本，提高检测效率。
多重荧光标记
实现多目标蛋白同时检测，减少实验误差。
3
微流控芯片技术
集成化、微型化，降低样本消耗和检测成本。
2024/1/26
30
自动化和智能化设备在ELISA领域应用前景
自动化样本处理
减少人工操作，提高实验可重复性。
等疾病。
2024/1/26
03
其他自身抗体检测
ELISA还可应用于抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）、抗磷脂抗体（
APL）等自身抗体的检测，为自身免疫性疾病的诊断提供依据。
15
肿瘤标志物筛查与监测进展
肿瘤标志物筛查
采用ELISA方法检测肿瘤标 志物，如AFP、CEA、 CA19-9等，实现肿瘤的早 期发现和筛查。
总结与展望：ELISA技术发展趋 势预测
2024/1/26
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新型标记物在ELISA中应用前景探讨
荧光标记物
高灵敏度、宽线性范围，适用于低丰度蛋白检测 。
酶标记物
高催化活性，可放大信号，提高检测灵敏度。
纳米材料标记物
独特的光学、电学性质，可增强信号并降低背景 干扰。
2024/1/26
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2024/1/26
肿瘤治疗监测
利用ELISA技术监测肿瘤患 者治疗过程中肿瘤标志物 的变化，评估治疗效果和 预后。
肿瘤复发监测
定期采用ELISA方法检测肿 瘤患者康复期肿瘤标志物 的水平，及时发现肿瘤复 发迹象。
16
药物滥用检测中ELISA方法应用
毒品滥用检测
采用ELISA技术检测尿液或血液中的毒品代谢物，如吗啡、可卡 因等，用于毒品滥用的筛查和确认。
多重检测技术在提高通量方面优势分析
1 2
多通道检测
同时检测多个样本，提高检测效率。
多重荧光标记
实现多目标蛋白同时检测，减少实验误差。
3
微流控芯片技术
集成化、微型化，降低样本消耗和检测成本。
2024/1/26
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自动化和智能化设备在ELISA领域应用前景
自动化样本处理
减少人工操作，提高实验可重复性。
等疾病。
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其他自身抗体检测
ELISA还可应用于抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）、抗磷脂抗体（
APL）等自身抗体的检测，为自身免疫性疾病的诊断提供依据。
15
肿瘤标志物筛查与监测进展
肿瘤标志物筛查
采用ELISA方法检测肿瘤标 志物，如AFP、CEA、 CA19-9等，实现肿瘤的早 期发现和筛查。
elisa检测技术 ppt课件
生物素是一种生长因子，广泛分布于动、植物体内，又称辅 酶R或维生素H。亲和素由四个亚单位组成，对生物素具有高度 亲和力，即一个亲和素可以结合4个生物素分子。因此，本方法 具有信号放大功能（特点）。
该方法可用于抗原、抗体以及DNA和RNA（生物素）检测。
BAS-ELISA实验原理
竞争法ELISA
竞争法ELISA的实验原理：将包被了抗体的酶标板的微孔分 为测定孔和对照孔，在对照孔中加入已知浓度的系列标准品溶液 和酶标记物（酶标抗原）；在测定孔中同时加入酶标抗原和待检 样本（抗原），酶标抗原和样品互相竞争包被抗体的结合点，形 成酶标记的抗原-抗体复合物固定在微孔内，没有吸附的酶标抗 原通过洗涤去除，加入底物后，复合物上的酶催化底物生成有色 产物。当测定孔内的样本不含抗原时，固相上的抗体将和酶标抗 原结合，加入底物后显色较深；当样本含有抗原时，样本中的抗 原和酶标抗原共同竞争抗体的结合位点。酶标抗原结合的比例越 高，说明结合在固相抗体上的待测抗原就越少，反之亦然；在一 定的条件下，复合物上酶的量和酶产物呈现的色泽成正比，用分 光光度计进行测定，从而计算出参与反应的抗原和抗体的量，从 而进一步得知样本中抗原的多少。
37℃, 30min
洗涤3次, 拍干 加底物溶液 (空孔除外) 避光 37℃, 10-30min 加终止液 (空孔除外)
上机检测、绘制标准曲线 (空孔调零)
从标准曲线上 读取样品含量
ELISA试验中的注意事项
必须设立阳性、阴性和空孔对照孔，控制试验条件并检验 试剂盒的质量； 待测样品应设立双复孔或三复孔； 酶标板洗涤时确保洗涤干净，避免假阳性过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)
DH2+ H2O2
D + H2O
该方法可用于抗原、抗体以及DNA和RNA（生物素）检测。
BAS-ELISA实验原理
竞争法ELISA
竞争法ELISA的实验原理：将包被了抗体的酶标板的微孔分 为测定孔和对照孔，在对照孔中加入已知浓度的系列标准品溶液 和酶标记物（酶标抗原）；在测定孔中同时加入酶标抗原和待检 样本（抗原），酶标抗原和样品互相竞争包被抗体的结合点，形 成酶标记的抗原-抗体复合物固定在微孔内，没有吸附的酶标抗 原通过洗涤去除，加入底物后，复合物上的酶催化底物生成有色 产物。当测定孔内的样本不含抗原时，固相上的抗体将和酶标抗 原结合，加入底物后显色较深；当样本含有抗原时，样本中的抗 原和酶标抗原共同竞争抗体的结合位点。酶标抗原结合的比例越 高，说明结合在固相抗体上的待测抗原就越少，反之亦然；在一 定的条件下，复合物上酶的量和酶产物呈现的色泽成正比，用分 光光度计进行测定，从而计算出参与反应的抗原和抗体的量，从 而进一步得知样本中抗原的多少。
37℃, 30min
洗涤3次, 拍干 加底物溶液 (空孔除外) 避光 37℃, 10-30min 加终止液 (空孔除外)
上机检测、绘制标准曲线 (空孔调零)
从标准曲线上 读取样品含量
ELISA试验中的注意事项
必须设立阳性、阴性和空孔对照孔，控制试验条件并检验 试剂盒的质量； 待测样品应设立双复孔或三复孔； 酶标板洗涤时确保洗涤干净，避免假阳性过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)
DH2+ H2O2
D + H2O
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01.04.2021
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11
双抗原夹心法ELISA
1.加样
2.孵育
4.加入酶标 抗原
5.孵育
3.洗涤 6.显色
01.04.2021
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12
间接法
间接法 ELISA（Indirect ELISA）—— 将特异性抗原包被于固相载体表面，与标本 中相应特异性抗体结合，洗涤后再加入酶标 的抗人IgG或IgM抗体与之结合，洗涤后加 入底物显色。
检测测抗原要有至少具有2个抗原决定簇
01.04.2021
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9
检测抗原
双抗体夹心法ELISA
1.加样
2.孵育
3.洗涤
4.加入二抗
5.孵育
6.显色
包被特异性抗体
酶标特异性抗体
01.04.2021
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双抗原夹心法
双抗原夹心法ELISA——检测标本中的总 抗体（包括IgM和IgG型抗体） 。将特异 性抗原包被于固相载体表面，与标本中特异 性IgM和IgG型抗体结合，洗涤后加入酶标 的特异性抗原与相应的抗体结合，洗涤后加 入底物显色
测定方法及表示方法：灵敏度标准品、质控 血清、阳性标本稀释终点、血清盘 （pannel）及临床标本阳性率。
01.04.2021
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特异性： 真阴性标本的检出能力。
相对特异性=真阴性/（真阴性+假阳性） ×100%
测定及表示方法：质控血清、血清盘、临床 标本阴性率。
01.04.2021
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01.04.2021
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5
ELISA的分类
测抗原：竞争法（也可用于测抗体）、双抗 体夹心法。
测抗体：间接法、捕获法、双抗原夹心法
01.04.2021
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6
竞争法elisa
竞争法ELISA原理——标本中的抗原和一 定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合，标本 中的抗原含量越多，结合在固相上的酶标抗 原越少，显色越浅。
由于酶具有很高的催化效率，因此可放大抗 原抗体反应效果，从而使测定方法达到很高 的敏感性。
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3
ELISA的基本原理
➢ 抗原或抗体在体外结 合到某种固相载体表 面后，仍然能保持其 免疫学活性而能相互 特异性结合。
01.04.2021
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4
抗原抗体复合物与酶标的二抗结合，加入合适的底物在酶的作用下 显色，颜色的深浅与特异性抗体水平成比例关系，可进行定性和定 量分析。
Elisa结果的影响因素
ห้องสมุดไป่ตู้
试剂盒的选择 标本 加样与稀释 温育 洗版 显色 质控
01.04.2021
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试剂盒的选择
同行的试剂使用情况
上级部门对试剂实际使用的综合评价
使用临界值质控血清进行实际检测比较,选 择林敏度和准确度高、特异性强试剂盒
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标本
应注意避免溶血
要用于小分子抗原或半抗原的定量测定，也 可对抗体进行测定。
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7
竞争法ELISA
1.加样
3.孵育
3.显色
A
B
检测抗原 包被特异性抗体
酶标抗原
加样
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孵育
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洗涤后显色
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双抗体夹心法
双抗体夹心法ELISA ——将特异性抗体包 被于固相载体表面，与标本中相应抗原相结 合，洗涤后再加入酶标的第二特异性抗体与 抗原结合，加入底物后显色。
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间接法的假阳性
抗人酶标 IgM抗体
麻疹IgG
01.04.2021
麻疹IgM
麻疹 抗原
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类风湿因子
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间接法的假阴性
麻疹IgG
酶标抗人 IgM抗体
麻疹IgM
麻疹 抗原
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ELISA的有关名词概念
质控血清：质控血清是为了对实验结果进行控制而 配制的血清。质控血清可以是定值也可以是不定值， 可以购置也可以自配。自己配制时要注意选用无脂 血的血清或血浆，不能用试剂盒内的阳性对照。若 用稀释的血清作为质控血清，应考虑稀释基质成分 对结果的影响。因质控血清与临床标本不一致，应 该注意对结果的分析，应该注意质控血清只能用于 质控活动，不可用于标定仪器或评价方法。用于室 内质控的质控血清一般选取CUTOFF值2-3倍的 质控品。
酶标二抗是针对一类免疫球蛋白分子 只需要变换包被抗原，就可用一种酶标二抗
检测各种与抗原结合的抗体
01.04.2021
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间接法ELISA
1.加样
2.孵育
3.洗涤
4.加入二抗
5.孵育
6.显色
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14
捕获法
ELISA（Capture ELISA）——专门用 来检测IgM型抗体的方法。将抗人IgM抗 体包被于固相载体表面，与标本中所有人 IgM抗体结合，洗涤后加入特异性抗原与相 应的特异性IgM抗体结合，洗涤后再加入酶 标的抗原特异性抗体与之结合，洗涤后加入 底物显色。
01.04.2021
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15
捕获法ELISA
1.加样
2.孵育
4.加入抗原 孵育
5.加入二抗 孵育
3.洗涤 6.显色
01.04.2021
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区别理解
检测抗原？抗体？ 包被什么？ 标记什么？
01.04.2021
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间接法和捕获法比较
间接法：假阴性，假阳性
捕获法：酶标抗体的要求较高
01.04.2021
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室内质控：实验室内部使用控制实验结果可 靠性的一种质量控制。
室间质评：用于考核各个实验室结果可靠性 的一种考核，可分为国家级和地方级的室间 质评。可以理解为 “各个实验室的质量评 比”。
01.04.2021
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临界值（CUTOFF值）：临界值是判断阴阳 性或有临床意义水平的数值，临界值的确定 是测定大量数据后应用统计学方法确定的。 许多试剂都会给出临界值或临界值的计算方 法。
ELISA基础知识和注意事项
01.04.2021
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类容
ELISA的基本原理和相关概念 特别说说捕获法 ELISA结果的影响因素 ELISA结果的处理
01.04.2021
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ELISA的基本原理和相关概念
将抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或 抗体后，这种酶标抗原或抗体既能保留与相 应抗体或抗原结合的免疫活性，又同时保留 酶的活性。
本底：就是底色。如ELISA HBsAg，阳性 显色，阴性不显色，本底就是整个阴性显色 的情况。ELISA 抗–HBcAb，阳性不显色， 阴性显色，本底就是整个阳性显色的情况。
01.04.2021
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灵敏度：能检测到的分析物的最小量，表示 检测下限的能力。
相对灵敏度=真阳性/（真阳性+假阴性） ×100%