大肠杆菌不同感受态特点
大肠杆菌感受态
大肠杆菌感受态细胞的制备和转化概述在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的mob基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。
如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。
转化(Transformation)是将外源DNA分子引入受体细胞,使之获得新的遗传性状的一种手段,它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。
转化过程所用的受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体(Rˉ,Mˉ),它可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。
受体细胞经过一些特殊方法(如电击法,CaCl2 ,RbCl(KCl)等化学试剂法)的处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞(Compenent cells)。
进入受体细胞的DNA分子通过复制,表达实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。
将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养，即可筛选出转化子(Transformant,即带有异源DNA分子的受体细胞)。
目前常用的感受态细胞制备方法有CaCl2和RbCl(KCl)法，RbCl(KCl)法制备的感受态细胞转化效率较高,但CaCl2 法简便易行,且其转化效率完全可以满足一般实验的要求,制备出的感受态细胞暂时不用时,可加入占总体积15％的无菌甘油于-70℃保存(半年),因此CaCl2法为使用更广泛。
本实验室一般用TSS 法制备感受态。
为了提高转化效率, 实验中要考虑以下几个重要因素：1. 细胞生长状态和密度: 不要用经过多次转接或储于4℃的培养菌，最好从－70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。
细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好，可通过监测培养液的OD600 来控制。
DH5α菌株的OD600为0.5时,细胞密度在5×107 个/ml左右(不同的菌株情况有所不同),这时比较合适。
大肠杆菌的菌落形态特征(一)
大肠杆菌的菌落形态特征(一)大肠杆菌的菌落形态特征大肠杆菌是人类体内常见的一种肠道细菌，有着特殊的菌落形态特征。
本文将就大肠杆菌的菌落形态特征展开阐述。
大肠杆菌的基本特点大肠杆菌属于革兰氏阴性菌，是一种不动杆菌。
它能在多种载体上存活生长，是一种厌氧菌。
它具有好氧和厌氧代谢通路，能够利用各种有机物作为能源和碳源。
大肠杆菌的菌落特征大肠杆菌的菌落通常呈灰白色或者淡黄色，表面光滑，边缘清晰，呈大圆形或不规则形，有较强的透明度和光泽。
在培养基表面，大肠杆菌的菌落通常较小，在厚度和高度上都不如肉眼观察可见的其他菌落。
大肠杆菌的菌落能够在培养皿上形成独立的圆形菌落，平均直径在1mm 至2mm之间，每个菌落内含有大约10-100万个菌体。
大肠杆菌的菌落在不同培养基上具有不同的特征，可分为3大类。
1.形态类大肠杆菌在三硝基作用培养基上的菌落形态典型，呈白色粗糙菌落。
在常规营养琼脂培养基上的表现较为均匀。
2.颜色类在嗜酸性琼脂培养基上，大肠杆菌的菌落通常为蓝绿色，周围有透明带。
这是由于其产生了不同于其他革兰氏阴性菌的产色物。
3.透明类在普通营养琼脂培养基上的大肠杆菌菌落，由于其表面菌体分泌缝隙气体，因此菌落表面呈现透明状，即所谓水样菌落。
总结大肠杆菌的菌落形态特征非常显著，菌落大小较小，表面光滑，边缘清晰，颜色通常为灰白色或淡黄色。
在培养基上，其菌落可分为形态类、颜色类和透明类。
下次在实验室里遇到大肠杆菌，相信你已经能更好地理解它的特点了。
大肠杆菌的应用价值虽然大肠杆菌在医学上通常被视作致病菌，但是由于其易于培养和操作，以及其基因组的完整性和稳定性，大肠杆菌也被广泛应用于基因工程和分子生物学领域。
大肠杆菌被作为实验室中常用的表达宿主，即利用其对哺乳动物嗜血杆菌素等重要蛋白的产生能力来制备对各种蛋白进行纯化、鉴定、创制新药等方面提供了很大的帮助。
此外，大肠杆菌在生物技术、食品和环境污染监测等方面也具有广泛应用。
结语大肠杆菌是一种生活在人体肠道内的细菌，也是一种十分特殊的菌种。
大肠杆菌知识点总结
大肠杆菌知识点总结一、基本特征1、形态特征大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，细胞形态为短杆状，长度约2微米，直径约0.5微米，单株细胞通常呈革兰氏阴性，即没有颜色的结晶紫。
在革兰氏染色中，细胞壁由内向外依次为细胞膜、纤维素层、网状层和唇多糖层。
2、代谢特点大肠杆菌是一种严格厌氧生物，能够在缺氧环境下进行葡萄糖发酵产生能量。
此外，大肠杆菌还具有多种代谢途径，如异源代谢、乳酸发酵、融合发酵等，在不同环境下能够灵活应对。
3、遗传特征大肠杆菌具有较高的遗传变异能力，其遗传物质以DNA分子形式存在，主要位于细胞质内。
大肠杆菌拥有近似5000-6000个基因，其中约一半的基因编码蛋白质。
二、生长特性1、生长条件大肠杆菌是一种嗜温性菌种，适宜生长的温度范围为20-42°C。
除此之外，大肠杆菌还对酸碱度、氧气浓度、营养物质等生长条件有一定的要求。
2、生长曲线大肠杆菌的生长曲线呈现出在适宜环境条件下的指数增长。
在培养基中，大肠杆菌的生长曲线可分为潜伏期、对数期和平稳期三个阶段。
三、代谢特点1、氧气代谢大肠杆菌可以在缺氧环境中进行乳酸发酵或醛酸发酵，产生能量。
在氧气充足的情况下，大肠杆菌则采用氧化磷酸化途径来产生ATP，同时释放二氧化碳和水。
2、营养代谢大肠杆菌具有多种代谢途径，能够利用多种碳源、氮源和能量源进行生长。
此外，大肠杆菌还可以合成营养物质、产生酶类等，以适应不同环境条件。
3、产气代谢大肠杆菌在肠道中的代谢产物主要为氢气、二氧化碳和甲烷等气体，这些气体对人体健康起到一定的作用。
四、致病机制1、肠毒力大肠杆菌具有一定的毒力，其中一些菌株可以产生肠毒素（enterotoxin），引起胃肠道炎症。
这些肠毒素主要通过损伤肠黏膜上皮细胞或刺激免疫系统而导致病理反应，表现为腹泻、呕吐等症状。
2、毒素分泌大肠杆菌还可以分泌多种毒素，如细胞外蛋白毒素、外毒素、细胞内毒素等，这些毒素可以引起细胞毒性、神经毒性、肠毒性等病理反应。
大肠杆菌感受态
实验概要大肠杆菌感受态细胞的CaCl2法制备及质粒转化实验原理处于对数生长期的细菌经CaCl2 处理后接受外源DNA的能力显著增加。
细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态。
在自然条件下，很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内，但在人工构建的质粒载体中，一般缺乏此种转移所必需的mob基因，因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。
如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态，以摄取外源DNA。
转化（Transformation）是将外源DNA分子引入受体细胞，使之获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。
转化过程所用的受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体（R-,M-），它可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。
受体细胞经过一些特殊方法（如电击法，CaCl2 ，RbCl(KCl)等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞（Compenent cells）。
进入受体细胞的DNA分子通过复制、表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。
将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养，即可筛选出转化子（Transformant，即带有异源DNA 分子的受体细胞）。
目前常用的感受态细胞制备方法有CaCl2和RbCl(KCl)法，RbCl(KCl)法制备的感受态细胞转化效率较高，但CaCl2法简便易行，且其转化效率完全可以满足一般实验的要求，制备出的感受态细胞暂时不用时，可加入占总体积15%的无菌甘油于-70℃保存（半年），因此CaCl2法使用更广泛。
主要试剂(1)0.1mol/L CaCl2溶液(2)LB液体培养基(3)30%甘油：30mL甘油溶于100mL蒸馏水，高压灭菌。
主要设备(1)超净工作台(2)冷冻离心机(3)恒温摇床(4)－70℃冰箱(5)10mL移液管(6)吸耳球(7)1mL、200μL移液枪（配套枪头）(8)50mL 离心管(9)1.5mL离心管实验材料(1)大肠杆菌DH5α（R-，M-，Amp-）实验步骤（一）受体菌的培养(1)从LB平板上挑取新活化的E. coli DH5α单菌落，接种于3～5mL LB液体培养基中，37℃下振荡培养过夜（12h左右）。
感受态细胞制备及各种感受态的特点
感受态细胞制备制备感受态常用得方法就是电击法与CaCl2制备法,以下介绍CaCｌ2制备法:1、可以从－８0℃冰柜中,取出一支冻存菌株,于事先照过紫外得超净台中,用无菌得接种环轻轻蘸取菌种后,在无抗平板(由于Rocetta含有氯霉素抗性,需要涂布在氯霉素抗性得平板,后面得都就是如此)上划线,并将菌种迅速放回－80℃保存,在划线板上做好相应标记,于３7℃培养过夜。
2、从37℃培养过夜得新鲜平板上挑取一个单克隆,接种于2mlEP管中,3７℃,２20ｒｐm震荡培养约6个小时至对数生长中后期;将该菌悬液以1:1０0得比例接种于5０ml LB液体培养基(２瓶)中,3７℃振荡培养2、5小时至ＯD600＝0。
5。
注意:接种比例不得大于1:１0。
3、在无菌条件下将细菌转移到一个无菌、预冷得离心管(50ml)中,在冰上放置5~1０ｍin; 注意:划板、接种为了防止意外发生最好多划一块平板与多接一根试管,划板、接种、转接均要严格按照无菌操作。
4、4℃５000g离心５分钟。
用预冷得去离子水洗涤沉淀,4℃ 500０ｇ离心５分钟;Nｏte:此步主要就是为了洗去培养基中得盐等5、沉淀加入2ｍl预冷得0、05mol/L CaＣｌ2—１5％甘油混合溶液,轻吹散,冰浴5分钟,4℃5００0ｇ离心5分钟;6、沉淀加入2ｍl预冷得0.05ｍol/L CａCl２—15％甘油混合溶液,轻吹散,即成为感受态细胞悬液。
分装成50～1００μl得小份,贮存于－70℃可保存半年。
含15％甘油得0.０5mol/L CaCｌ2制备方法:称取0。
28g CaCl２(无水,分析纯),溶于５０ml重蒸水中,加入１5ｍl甘油,定容至100ｍl,高压灭菌。
感受态细胞得特征感受态:通过特殊处理使细胞处于能够吸收外源ＤＮA得状态。
感受态细胞得特征:(1)细胞表面暴露出一些可接受外来ＤNA得位点(以溶菌酶处理,可促使受体细胞得接受位点充分暴露)。
(2)细胞膜通透性增加(用钙离子处理,可使膜通透性增加,使DNＡ直接穿过质膜进入细胞)。
大肠杆菌菌落形态特征
大肠杆菌菌落形态特征大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，属于革兰氏阴性菌，可以在自然环境中生存繁殖，也可以在动植物肠道中生长。
大肠杆菌对于人体的生理功能有着重要的作用，同时，也是一种常见的病原体，其中某些菌株可以引起各种不同疾病，如腹泻、肠炎等。
在这些病原菌中，一些菌株可以形成不同的菌落，不同的形态特征提供了我们对于菌株的区分和诊断手段。
一、菌落形态特征不同的大肠杆菌菌株，其在固体培养基上形成的菌落颜色、形态和大小都不相同，通过这些特征可以很好的区分不同的菌株。
通常，菌落的形态特征可以通过肉眼观察和显微镜观察两种方法进行判断。
1. 肉眼观察在固体培养基上，不同菌株形成的菌落在肉眼观察时有不同的大小、形状和颜色。
大肠杆菌的菌落形态特征主要包括以下方面：（1）直径大小：不同的菌株在相同的培养条件下，其生长速度和繁殖能力都不相同，因此，其形成的菌落大小也有所不同。
通常菌落的直径大小在1-2mm之间。
（2）菌落形状：大肠杆菌的菌落形状可以是圆形、不规则形和菊花形等。
在肉眼观察时，通常可以通过观察菌落的边缘形状和颜色来区分不同菌株。
（3）菌落颜色：菌落的颜色是由菌落中不同物质的吸收反射引起的。
不同的菌株形成的菌落颜色有所不同，可以是白色、黄色、橙色、红色和黑色等。
2. 显微镜观察大肠杆菌菌落形态特征可以通过显微镜观察来进一步判断和识别。
显微镜观察通常包括两种方法：高倍显微镜和扫描电镜。
（1）高倍显微镜观察：菌落制备后可以在载玻片上进行染色和固定，然后使用高倍显微镜进行观察。
在高倍显微镜下，可以观察到菌落的特征，如表面形态、细胞形态和染色情况等。
（2）扫描电镜观察：扫描电镜是一种高分辨率的电子显微镜，可以观察到个体的分子甚至原子。
使用扫描电镜观察大肠杆菌菌落，可以观察到菌落表面的结构特征，如菌落顶部的形状、突起和凹陷等。
二、菌落形态特征在菌株鉴定中的作用大肠杆菌菌落形态特征在菌株鉴定和分类上具有重要作用，不同的形态特征可用于区分不同的大肠杆菌菌株，对于临床诊断和治疗有着积极意义。
大肠杆菌有哪些主要特点
大肠杆菌有哪些主要特点大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌,周身鞭毛,能运动,无芽孢。
大肠杆菌的主要特点有哪些呢？本文是店铺整理的大肠杆菌的主要特点，欢迎阅读。
大肠杆菌的主要特点1、大肠杆菌是细菌,属于原核生物;具有由肽聚糖组成的细胞壁,只含有核糖体简单的细胞器,没有细胞核有拟核;细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。
2、大肠杆菌的代谢类型是异养兼性厌氧型。
3、人体与大肠杆菌的关系:在不致病的情况下(正常状况下),可认为是互利共生(一般高中阶段认为是这种关系);在致病的情况下,可认为是寄生。
4、在培养基培养时无需添加生长因子,向培养基中加入伊红美蓝遇大肠杆菌,菌落呈深紫色,并有金属光泽,可鉴别大肠杆菌是否存在。
5、大肠杆菌在生物技术中的应用:大肠杆菌作为外源基因表达的宿主,遗传背景清楚,技术操作简单,培养条件简单,大规模发酵经济,倍受遗传工程专家的重视。
目前大肠杆菌是应用最广泛,最成功的表达体系,常做高效表达的首选体系。
预防大肠杆菌感染怎么做1、煮熟食物要避免感染肠出血性大肠杆菌,最保险的方法就是不要生食食物,以一种肠出血性大肠杆菌O157:H7为例,加热至75℃后,它就会被完全消灭,蔬菜、肉类、水都应经高温消毒后食用,处理熟食是也要保持双手和厨具的清洁,吃剩的熟食再次食用前也要彻底翻热,如果变质就要坚决丢弃。
脆弱人群(如幼儿、老年人)应避免食用生的或未煮熟的肉制品、生鲜奶和使用生鲜奶制成的产品。
2、仔细清洗果蔬确保仔细清洗水果和蔬菜,尤其是在生吃的时候。
如果可能,蔬菜和水果应去皮食用。
3、经常洗手强烈推荐经常洗手,特别是在制备或食用食物之前和入厕之后,尤其是面向幼儿、老年人或免疫系统有缺陷者的照护者,这是因为,细菌能够通过人与人传播,也可通过食品、水和与动物的直接接触传播。
4、保护水源由于很多肠出血性大肠杆菌感染因接触游憩用水所致,重要的是要保护这类水域和饮用水源,使其不受到动物粪便的污染。
常用大肠杆菌感受态的区别
常用大肠杆菌感受态JM109，DH5a，BL21等的区别1：DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dla cZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体R NA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于B L21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT，hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）3：BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLys S，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS，Camr4：JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DN A产生的L acZa多肽和JM09编码的L acZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]5：TOP10菌株该菌株适用于高效的DN A克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
大肠杆菌 死菌 形态
大肠杆菌死菌形态
大肠杆菌（Escherichia coli，简称E. coli）是一种革兰阴性杆菌，通常是肠道的正常微生物之一，但某些菌株可能引起食物中毒或其他感染。
在描述大肠杆菌的形态时，主要涉及以下几个方面：
1. 形状：大肠杆菌的形状通常是杆状（rod-shaped），属于杆菌科。
这种形状使得它呈现出细长的杆状结构。
2. 大小：典型的大肠杆菌细胞大小约为0.5至2微米的宽度和2至6微米的长度。
3. 革兰阴性：大肠杆菌是一种革兰阴性菌，这意味着其细胞壁相对较薄，且在革兰染色中不保留静电紫色的染料，而会被洗去，细胞会显现为粉红色。
4. 运动性：大肠杆菌是运动的，通常具有鞭毛（Flagella）使其能够在液体环境中游动。
5. 胶囊：有些大肠杆菌菌株可能产生胶囊，这是一种外层结构，有助于菌体在宿主组织中的附着和生存。
6. 生长条件：大肠杆菌是一种耐寒性细菌，通常在温度为37摄氏度左右的温暖环境中生长最适宜。
值得注意的是，描述大肠杆菌的形态通常是在活跃状态下进行的。
在死亡或被杀死的情况下，细胞的形态可能会发生变化，而在实验室中处理大肠杆菌样本时，通常会采取适当的操作来保持其形态特征。
1/ 1。
大肠杆菌的转化及转化子的筛选
4、PCR方法检测重组质粒
PCR方法检测重组质粒的要点
• 利用载体上的引物T3, T7, M13/R, M13/F, SP6)分析插入子。
• 利用插入子特异引物分析重组质 粒。
5、定向克隆和筛选
PstI
EcoR I
定向克隆策略（即双酶切连接）
平 头 随 机 连 接
粘头随机连接
思考题
• 具备互补的克隆可以产生-半乳糖苷酶全酶，可 以降解X-gal (5-bromo-4-chloro-indigo,5- 溴-4-氯靛蓝)
• 在IPTG的诱导下，重组克隆呈现蓝色。
3、电泳检测质粒插入子
质粒的电泳图谱
电泳方法检测质粒的要点
1、酶切方法检测质粒是否含有插 入子。
2、电泳检测质粒的大小变化，推 测是否包含插入子。
2、大肠杆菌感受态的准备共同特点是，试剂纯 度要求比较高 （微量的杂质都会影响大肠杆菌 的活性）。 3、感受态制备过程中，要求严格的低温，任何 升温过程都影响感受态的大肠杆菌活性。 4、感受态大肠杆菌十分的脆弱，操作过程中必 须十分的轻缓，防止搅动和震动。
各种转化方法的比较
• CaCl法比较经典，方法简便易掌握，适 合多数实验的要求，目前很多尖端实验 室仍然使用。
第五章
大肠杆菌的转化及转 化子的筛选
一、大肠杆菌的转化
转化和转染
• 转化(transformation)：感受态 的大肠杆菌捕获和表达质粒 DNA的过程。
• 转染(transfection)：大肠杆菌 捕获和表达噬菌体DNA的过 程。
大肠杆菌转化的要点
1、大肠杆菌感受态的准备方法很多，例如： CaCl法，CsCl法，超级感受态制备方法，电击 法。
常用几种感受态区别
常用大肠杆菌感受态JM109，DH5a，BL21的区别1：DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3）3：BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr4：JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]5：TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)，φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697， galU ，galK ，rps， (Strr) endA1， nupG6：HB101菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-17：M110或 SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶 C-5位置上引入甲基。
大肠杆菌——总结
一、大肠杆菌
1.形态及染色特性
寄生于大多数人和温血动物肠道内正常菌群成员之一；革兰氏染色为阴性，呈长直杆状。
2.培养及生化特性
本菌为兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好，最适生长温度为37℃, pH为7.2—7.4。
麦康凯琼脂上形成红色菌落；在伊红美蓝琼脂上产生黑色带金属闪光的菌落，在SS 琼脂上一般不生长或生长较差，生长者呈红色。
一些致病性菌株在绵羊血平板上呈β溶血。
在营养琼脂上生长24h后，形成圆形凸起、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落.直径2—3mm。
S型菌株在肉汤中培养18〜24h，呈均匀浑浊，管底有黏性沉淀,液面管壁有菌环。
3.菌落形态及细菌形态
（1）大肠杆菌在麦康凯上的菌落形态
（2）大肠杆菌在伊红美兰上菌落形态
4.细菌革兰氏染色镜下形态
5.大肠杆菌。
大肠杆菌在水中的菌落形态特征
大肠杆菌在水中的菌落形态特征
大肠杆菌（Escherichia coli）是一种广泛存在于自然界中的
细菌，它在水中的菌落形态特征对于水质监测和环境卫生具有重要
意义。
大肠杆菌是一种革兰氏阴性杆菌，其在水中的菌落形态特征
通常表现为以下几个方面：
1. 形态，大肠杆菌的菌落通常呈现圆形或不规则形状，表面光滑，边缘整齐。
菌落的大小一般在1-3mm左右。
2. 色泽，大肠杆菌的菌落颜色通常为乳白色或淡粉红色，有时
也可能呈现淡黄色。
3. 透明度，大肠杆菌的菌落透明度较高，通常呈半透明状态。
4. 质地，大肠杆菌的菌落质地较为湿润，具有一定的粘稠度。
5. 气味，在培养基上生长的大肠杆菌菌落通常具有一定的气味，有时可能会散发出一种特殊的臭鸡蛋味。
对于水质监测来说，通过观察大肠杆菌在水样中的菌落形态特
征，可以初步判断水质是否受到了污染。
如果水样中存在大肠杆菌，那么在培养基上将会观察到符合上述特征的菌落。
因此，对大肠杆
菌的菌落形态特征进行观察和分析，有助于及时发现水质问题，保
障人们的饮用水安全。
总之，大肠杆菌在水中的菌落形态特征是水质监测中的重要指
标之一，通过对其形态特征的观察和分析，可以及时发现水质问题，保障环境卫生和公共健康。
高一生物大肠杆菌知识点
高一生物大肠杆菌知识点大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的革兰氏阴性菌，属于杆菌科（Enterobacteriaceae）。
它存在于人和动物的肠道中，同时也是一种重要的病原菌。
下面将为你介绍大肠杆菌的特点、分类、代谢能力和感染途径。
一、特点大肠杆菌的非致病菌株一般具有以下特点：1. 形态特征：大肠杆菌的形态为革兰阴性的杆状细菌，细胞长0.5-4.0微米，直径约为0.3-0.8微米。
2. 嗜氧性：大肠杆菌是一种嗜氧菌，即只能在氧气充足的环境中生长。
3. 产生胃酸耐受素：大肠杆菌的一种耐受素称为胃酸耐受素，使其能够适应胃酸的环境，从而引起胃肠道感染。
4. 发酵产酸气：大肠杆菌代谢糖类时产生酸气，常导致酸性环境，抑制其他细菌的生长。
二、分类根据不同的表型特征和致病性，大肠杆菌可分为多个菌株。
其中，以下三个菌株是常见的：1. 大肠埃希菌（EPEC）：大肠埃希菌是一种通过人与人之间的口-粪传播途径传播的肠道致病菌，主要引起婴儿和幼儿的肠病。
2. 致病性大肠杆菌（EHEC）：致病性大肠杆菌主要通过摄入受污染的食物或饮水引起感染，可引发出血性腹泻、溶血性尿毒症综合征等严重疾病。
3. 胶原纤维素（EIEC）：胶原纤维素大肠杆菌主要通过食物或水污染引起感染，可引起类似细菌性痢疾的疾病。
三、代谢能力大肠杆菌具有丰富的代谢能力，能够分解、吸收和利用多种碳源和氮源。
以下是一些典型的代谢能力：1. 糖代谢：大肠杆菌能够分解和利用多种糖类，如葡萄糖、乳糖、蔗糖等。
2. 氨基酸代谢：大肠杆菌能够利用多种氨基酸作为氮源进行生长和代谢。
3. 脂肪酸代谢：大肠杆菌能够分解脂肪酸，从中获取能量。
4. 产气代谢：大肠杆菌产生气体，其中包括二氧化碳、氢气和甲烷等。
四、感染途径大肠杆菌感染主要通过消化道传播，包括以下几种途径：1. 食物和饮水传播：摄入受污染的食物或饮水，常导致胃肠道感染。
2. 接触传播：直接接触受感染的人或动物的粪便，或触摸受污染的表面，可引起细菌的传播。
常见大肠杆菌感受态的特点和用途解析
1:DH5a 菌株DH5a 是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用 pUC 系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:F-, φ80dlacZΔM15, Δ(lacZYA-argFU169, deoR , recA1, endA1,hsdR17(rk-, mk+, phoA , supE44, λ-, thi-1, gyrA96, relA12:BL21(DE3 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体 T7启动子的表达载体(如 pET 系列的基因。
T7噬菌体 RNA 聚合酶位于λ 噬菌体 DE3区,该区整合于 BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:F-, ompT , hsdS (rBB-mB -, gal , dcm (DE33:BL21(DE3 pLysS菌株该菌株含有质粒 pLysS ,因此具有氯霉素抗性。
PLysS 含有表达 T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:F-, ompThsdS (rBB-mB -, gal , dcm (DE3, pLysS , Camr4:JM109菌株该菌株在使用 pUC 系列质粒载体进行 DNA 转化或用 M13 phage载体进行转染时,由于载体 DNA 产生的 LacZa 多肽和 JM09编码的LacZΔM15进行α-互补 ,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株基因型 :recA1, endA1, gyrA96, thi -1, hsdR17, supE44, relA1, Δ(lac -proAB/F’[traD36, proAB+, lacIq , lacZΔM15]5:TOP10菌株该菌株适用于高效的 DNA 克隆和质粒扩增 ,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
大肠杆菌形态特征
大肠杆菌形态特征大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的革兰氏阴性杆菌，是人体和动物肠道中最主要的有益菌之一、它具有以下的形态特征：1.形态特征大肠杆菌呈杆状，通常为直杆状或稍微弯曲。
它的长度约为1.5至6微米，直径约为0.5微米。
细菌细胞之间通常呈单独分离的独立状态。
2.色素特征大肠杆菌没有颜色，通常呈无色透明状态。
然而，一些毒力菌株可能会产生特定的荧光色素，并具有特定的荧光染色。
3.附着结构大肠杆菌具有许多附着结构，包括鞭毛、菌毛和纤毛。
这些结构通过细菌细胞表面的附着蛋白质发挥作用。
鞭毛是长丝状的结构，在细菌移动和感受环境刺激方面起着重要作用。
菌毛比鞭毛短，呈柱状，用于细菌之间的附着和交流。
纤毛也是附着细菌的结构，通常细菌细胞表面具有几百到几千个纤毛。
4.胞外多聚物（胞外多糖）大肠杆菌的表面覆盖有多种胞外多聚物，包括多糖。
这些多糖在保护菌体免受环境的侵害以及与其他细菌或宿主细胞进行交互方面起着重要作用。
5.壁结构大肠杆菌有复杂的细胞壁结构，包括内层质膜、纤维素外层膜和外层膜。
内层质膜起到维持细菌细胞形状和膜蛋白质定位的作用。
纤维素外层膜是由纤维素组成的蛋白质复合物，具有保护细菌免受宿主免疫系统攻击的作用。
外层膜是含脂质的双层结构，与环境中的物质交换起重要作用。
总之，大肠杆菌是一种常见的革兰氏阴性杆菌，它具有直杆状的形态、无色透明的外观和多种附着结构。
它的表面覆盖有胞外多聚物，并具有复杂的细胞壁结构。
这些形态特征是大肠杆菌在生物学功能和与环境相互作用中的重要基础。
大肠杆菌的基本形态 -回复
大肠杆菌的基本形态-回复大肠杆菌(Escherichia coli)是一种非常常见的细菌，也是人类和许多其他物种中最常见的微生物之一。
它存在于人体的肠道内，起着维持肠道生态平衡和协助食物消化的作用。
大肠杆菌也是科学研究中最重要的模型生物之一，因为它具有许多研究所需的特性和优势。
在本文章中，我们将一步一步介绍大肠杆菌的基本形态，从细胞结构到菌落特征的描述。
1. 细胞结构大肠杆菌是一种革兰氏阴性菌，细胞外包裹着一个双层的细胞壁，即细胞外膜和细胞内膜。
细胞外膜由脂多糖构成，具有保护和过滤功能，有助于阻止有害物质进入细胞。
细胞内膜则包含了许多蛋白质，参与了诸如代谢和物质运输等生物学过程。
2. 形态特征大肠杆菌具有的形态特征是杆状，通常呈细长的棒状结构。
在显微镜下观察，大肠杆菌的细胞呈现出弯曲和不规则的形状，通常约为2-6微米长，直径约为0.25微米。
这种杆状形态使得大肠杆菌在液体培养基中以及在固体培养基上形成典型的菌落。
3. 生长环境大肠杆菌是一种好氧菌，需要氧气来进行新陈代谢。
它在许多不同类型的环境中都可以生存和繁殖，包括土壤、水体和生物体内。
在人体肠道内，大肠杆菌是正常肠道菌群的重要成分之一，可以帮助消化食物，合成维生素和抵抗有害菌群。
4. 菌落特征大肠杆菌在固体培养基上形成的菌落呈圆形或不规则形状，通常为白色或乳白色。
菌落的表面较为光滑，有一定的粘附性。
菌落直径通常在2-5毫米之间，表面呈现出平坦或微微隆起的状态。
大肠杆菌在充足营养和合适环境条件下，菌落会迅速增长，并在培养基上形成完整的菌落形态。
总结起来，大肠杆菌是一种杆状的革兰氏阴性菌，在细胞结构上具有细胞外膜和细胞内膜的特点。
它在肠道中是正常菌群的一部分，并且在科学研究中扮演着重要的角色。
了解大肠杆菌的基本形态特征对于进一步研究其生物学行为和应用具有重要意义。
大肠杆菌感受态细胞的原理
大肠杆菌感受态细胞的原理今天来聊聊大肠杆菌感受态细胞的原理。
你看啊，在我们的生活中，有这么个现象就有点类似大肠杆菌感受态细胞。
想象一下一个非常封闭保守的小村庄，平时基本不接纳外人，但是在某个特殊的时期，就比如说可能遭遇了自然灾害之后，这个村庄突然就变得很容易接纳外村的救援人员啊、物资啊之类的。
大肠杆菌感受态细胞其实就是类似这样的一个情况。
大肠杆菌正常情况下是相对比较稳定的，它对于外界的一些DNA分子是有抵制情绪的，不会轻易让它们进入自己的细胞质。
但是呢，当它处于感受态的时候，就像村庄打开了大门一样，它的细胞壁和细胞膜会发生一些变化，在这个时候，就非常欢迎外界的DNA分子进入自己的细胞内部。
那为什么会这样呢？老实说，我一开始也不明白。
后来学习才知道，细菌在感受态的时候，细胞膜的通透性会增加。
这就好比原本紧密的铁栅栏出现了很多缝隙，外面的东西就容易钻进来了。
打个比方吧，大肠杆菌的细胞膜就像是一堵墙，平常这堵墙特别厚实、牢固，什么东西都透不过去。
可是呢，在感受态的时候啊，就好像这堵墙上突然出现了好多特殊的小通道，这些通道就给外界的DNA提供了方便之门。
这些通道是怎么形成的呢？一般来说，通过一些物理、化学的方法诱导，例如使用氯化钙处理。
可以想象成这个氯化钙就像是一把特殊的钥匙，它对大肠杆菌这堵墙做了一些手脚，让墙有了通道。
说到这里，你可能会问，大肠杆菌为什么要有这样一种感受态的形式呢？这就要说到生物进化和基因传递了。
在细菌的世界里，基因的交流也是很重要的。
就像我们人类社会中一些好的技术和文化会传播一样，大肠杆菌通过接纳外界的DNA，可能会获得一些新的基因，这些新基因也许能让它们获得一些新的能力，比如说对抗生素的耐药性。
在实际应用中啊，这一点就非常有用了。
生物实验室里经常会做一些基因克隆实验，利用大肠杆菌感受态细胞，我们把我们想要研究的基因片段转入大肠杆菌，这样大肠杆菌就成为了一个小小的“基因工厂”。
比如说，我们想要生产人类胰岛素用于治疗糖尿病，就可以把合成胰岛素的基因通过感受态细胞导入大肠杆菌里，让大肠杆菌为我们生产胰岛素。
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JM109，DH5a，BL21感受态有何区别
1、DH5a菌株
DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1。
2、BL21(DE3) 菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT，hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）
3、BL21(DE3) pLysS菌株
该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS ，Camr。
4：JM109菌株
该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补，从而显示β-半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株。
基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]
5：TOP10菌株
该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)，φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1 ，ara Δ139Δ(ara-leu)7697，galU ，galK ，rps，(Strr) endA1，nupG
6、TOP10F'菌株
带lacIq，需加IPTG诱导表达克隆于lac启动子后的外源基因，用于蓝白斑筛选时，需加入IPTG和X-Gal。
基因型：F'{lacIq,Tn10(TetR)}mcrA△(mrr-hsdRMS-mcrBC), ψ80 ，lacZ△M15, △lacX74, deoR, recA1, araD139, △(ara-leu), 7679, gal, λ- rpsL(strR)endA1, nupG
7、HB101菌株
该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验。
基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-1。