虹鳟PDCD6基因cDNA全长的克隆与功能预测
鲤鱼肿瘤坏死因子受体相关因子6全长cDNA克隆及序列分析
鲤鱼肿瘤坏死因子受体相关因子6全长cDNA克隆及序列分析贾生美;孙真;冯祥汝;陈义龙;沈雪飞;翟新新;张俊辉;杨振国;王文东【摘要】本试验以鲤鱼外周血白细胞肿瘤坏死因子受体相关因子6 (tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6) EST序列为基础,经地高辛标记后作为探针,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,从重组噬菌体中经过两轮筛选获得阳性克隆.序列分析结果显示,该序列包含有5'-非编码区(5'-UTR)25 bp;3'-非编码区(3'-UTR) 535 bp,存在2个mRNA不稳定基序ATTTA;开放阅读框ORF长1632 bp,编码543个氨基酸.预测蛋白质等电点为5.88,分子质量大小为61.773 ku.序列同源性比对结果表明,所获得的序列与GenBank上登录的鲤鱼TRAF6a基因同源性达99％.蛋白质序列分析结果发现,其具有TRAF家族的典型序列特征.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2013(040)010【总页数】5页(P42-46)【关键词】鲤鱼;肿瘤坏死因子受体相关因子6;克隆;序列分析【作者】贾生美;孙真;冯祥汝;陈义龙;沈雪飞;翟新新;张俊辉;杨振国;王文东【作者单位】吉林大学人兽共患病研究所,吉林长春130062;吉林大学人兽共患病研究所,吉林长春130062;吉林大学人兽共患病研究所,吉林长春130062;吉林大学人兽共患病研究所,吉林长春130062;吉林大学人兽共患病研究所,吉林长春130062;吉林大学人兽共患病研究所,吉林长春130062;吉林大学人兽共患病研究所,吉林长春130062;吉林大学人兽共患病研究所,吉林长春130062;吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春130062【正文语种】中文【中图分类】Q785肿瘤坏死因子受体相关因子家族（TNF receptor－associated factors，TRAF）是 TNFR 超家族和Toll样／白介素－1受体（toll／IL－1receptor，TIR）超家族的重要接头分子（Lomaga等，1999），且遗传结构保守。
三倍体虹鳟线粒体基因组结构与系统进化分析
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虹鳟spindlin基因克隆及不同倍性的表达分析
doi: 10.7541/2021.2019.193虹鳟spindlin 基因克隆及不同倍性的表达分析史秀兰1, 2黄天晴2徐革锋2邹作宇3谷 伟2程 琳2刘晨斌2王炳谦2(1. 上海海洋大学, 上海 201306; 2. 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所, 哈尔滨 150076;3. 哈尔滨市农业科学院, 哈尔滨 150028)摘要: spindlin 基因是减数分裂纺锤体相关因子, 为了研究spindlin 基因在二倍体和三倍体雌性虹鳟减数分裂过程中出现的差异, 通过cDNA 末端快速扩增(RACE)技术获得spindlin 基因cDNA 4529 bp(GenBank 登录号:MN378564), 其中3′非编码区(UTR)和5′非编码区(UTR)分别长3662 bp 和141 bp, 开放阅读框(ORF)长726 bp, 编码241个氨基酸, 该蛋白质序列的相对分子量为28.3 kD, 理论等电点值为5.94, 无跨膜结构。
同源性分析表明,虹鳟(Oncorhynchus mykiss )与银大马哈鱼(Oncorhynchus kisutch )同源最高, 高达99.59%。
系统发育进化树显示, 虹鳟与大鳞大马哈鱼(Oncorhynchus tshawytscha )和红点鲑(Salvelinus alpinus ), 聚为一支。
实时荧光定量(RT-PCR)结果显示, spindlin 基因在二倍体雌性虹鳟卵巢、肾、肝、脾、肌、鳃、心、眼、肠和鳍组织中均有表达, 其中, 在卵巢中的表达量极显著高于其他组织(P <0.01)。
对于二倍体雌性虹鳟, 在受精后240—300d (days post fertilization, dpf)发育阶段, spindlin 基因在卵巢组织中的相对表达量显著下降。
对于三倍体雌性虹鳟, 该基因在240—330 dpf 阶段的表达量显著上升。
在同一发育阶段中, spindlin 基因在二倍体雌性虹鳟卵巢中的表达量较三倍体雌性虹鳟相对较高, 且均存在极显著差异(P <0.01)。
虹鳟 Ndufb2基因全长 cDNA 序列的克隆与分析
虹鳟 Ndufb2基因全长 cDNA 序列的克隆与分析王家庆;边佳;李代宗;马爽;王亮;那广宁【期刊名称】《浙江大学学报（农业与生命科学版）》【年(卷),期】2013(000)006【摘要】从虹鳟鱼（Oncorhynchus mykiss）的脑组织中提取 RNA，经逆转录聚合酶链反应及 cDNA 末端快速扩增技术克隆出 Ndufb2基因全长 cDNA 序列（GenBank 登录号：FJ534641），并对其序列进行分析。
扩增结果表明：Ndufb2基因的 cDNA 序列全长899 bp，其中5'端非翻译区长152 bp，3'端非翻译区长441 bp，开放阅读框长306 bp，编码101个氨基酸；其 N 端前50个氨基酸为线粒体靶序列。
将翻译的虹鳟 Ndufb2蛋白序列与大西洋鲑（Salmo salar）的 Ndufb2蛋白序列比对发现，其同源性高达98%，且虹鳟 Ndufb2蛋白序列与已报道的哺乳动物的 Ndufb2蛋白序列同源性均在55%以上。
表明Ndufb2基因在进化过程中是高度保守的，推测其在线粒体呼吸链组成中发挥着重要作用。
【总页数】7页(P600-606)【作者】王家庆;边佳;李代宗;马爽;王亮;那广宁【作者单位】沈阳工学院生命工程学院，辽宁抚顺 113122;沈阳农业大学科学技术学院，辽宁抚顺 113122;河北农业大学海洋学院，河北秦皇岛 066003;沈阳工学院生命工程学院，辽宁抚顺 113122;沈阳工学院生命工程学院，辽宁抚顺113122;沈阳工学院生命工程学院，辽宁抚顺 113122【正文语种】中文【中图分类】Q785;S9【相关文献】1.虹鳟抗细胞凋亡因子(DAD1)基因全长cDNA克隆与进化分析 [J], 王家庆;李振刚;马爽;李代宗;王虹玲;王亮2.虹鳟鱼NDK-1 基因cDNA的克隆与序列特征分析 [J], 王家庆;刘晓慧;李代宗;韩进诚;郭冉;王岳鸿;王志平3.西伯利亚鲟β-actin基因cDNA全长克隆、序列分析及其作为内参基因的应用研究 [J], 施志仪;程千千;宋佳坤4.虹鳟脑型肌酸激酶基因cDNA全长的克隆与序列分析 [J], 王家庆;李代宗;郭冉;张辉;宋波澜;王志平;钟尉方5.虹鳟冷休克蛋白Y-box基因的cDNA全长克隆与序列分析 [J], 王家庆;张丽丽;马爽;李代宗;付玉洁;李绍明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
国际虹鳟育种产业简介及其对我国的借鉴意义
国际虹鳟育种产业简介及其对我国的借鉴意义户国;王炳谦【摘要】Rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) originated in North America,as a typical cold water fish,is a worldwide major economically important culture fish and an important research object for aquatic animal genetics and breeding.Rainbow trout is one of the earliest aquatic animals which uses quantitative genetics theory to guide selective breeding.BLUP breeding value estimation,combining ability analysis and other genetic evaluation methods,such as family based breeding,crossbreeding and supporting breeding technologies are widely used in rainbow trout breeding programs.It has been firstly established in the industry consensus that the eyed eggs for rainbow trout aquaculture that must be selective bred.At present,coverage of quality selective bred eggs have reached more than 90％ in Europe,North America,Chile and other major trout farming countries and regions.Rainbow trout is still the highest trout production in cold water fish culture in China,and its breeding in many non-original countries have made remarkable achievements.In this paper,the history of the global rainbow trout breeding,main technical and industrial pattern of the rainbow trout breeding industry,and organization and type characteristics of the international rainbow trout breeding are reviewed.%虹鳟Oncorhynchus mykiss原产于北美地区,为典型的冷水性鱼类,是世界性重要经济养殖鱼类之一和水产遗传育种领域的重要研究对象.虹鳟是最早采用数量遗传学理论指导遗传选育的水产动物之一,BLUP育种值估计和配合力分析等遗传评定方法以及家系选育、杂交和配套系育种等技术均在虹鳟育种实践中广泛应用.淡水鱼类养殖中,必须使用遗传选育的优良品种的行业共识,最早在虹鳟中确立.目前,在欧洲、北美以及智利等主要鲑鳟鱼养殖国家和地区,虹鳟良种覆盖率均已达到90％以上.鉴于虹鳟仍是我国养殖产量最高的鲑鳟鱼类,其育种工作在许多非原产国都取得了令人瞩目的成就,本文以全球化的视角,从虹鳟养殖与选育的历史概况、虹鳟种业的主要技术手段及产业格局、主要虹鳟育种机构的组织形式与类型特点等方面,简要介绍了国际虹鳟种业的发展及对我国虹鳟种业的借鉴意义.【期刊名称】《水产学杂志》【年(卷),期】2017(030)003【总页数】6页(P1-6)【关键词】虹鳟;种业;历史;技术;市场【作者】户国;王炳谦【作者单位】中国水产科学研究院黑龙江水产研究所淡水鱼类育种国家地方联合工程实验室,黑龙江哈尔滨150070;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所淡水鱼类育种国家地方联合工程实验室,黑龙江哈尔滨150070【正文语种】中文【中图分类】S965.232;S965.122鲑鳟鱼是一类经济价值较高的特色鱼类，符合我国“十三五”渔业规划中“生态优先、绿色发展”的理念，是在渔业“转方式、调结构”中重点提及的养殖对象。
鱼类谷胱甘肽转移酶基因cDNA克隆及其序列分析
鱼类谷胱甘肽转移酶基因cDNA克隆及其序列分析孙玉华;谢平;郭海涛;夏文伟【期刊名称】《遗传》【年(卷),期】2007(29)3【摘要】采用RT-PCR方法,从鲢、鲤、鲫3种鱼类肝脏总RNA中克隆出了谷胱甘肽转移酶Pi型(GST Pi)cDNA序列,推导了其编码的氨基酸序列.3种鱼类GST Pi 的ORF全长627 bp,编码208个氨基酸.翻译起始密码均为ATG,终止密码子均为TGA.鱼类与哺乳动物、两栖类爪蟾以及节肢动物丝虫之间GST Pi氨基酸序列相似度平均值分别为50%、33%、15%左右.5种鱼类之间的氨基酸序列相似度较大,其中鲤科鱼类之间平均为85%左右.我们以GST Pi为分子标记,用最大简约数法(MP)构建了13个物种的系统进化树,识别出两个大的单系类群:哺乳类组成类群一(bootstrap 100);鱼类组成类群二(bootstrap 93).通过比较鱼类与哺乳类GST Pi N末端和C末端功能域的氨基酸组成差异,探讨了淡水鱼类GSTs承担较强的微囊藻毒素去毒能力的可能分子机制.【总页数】6页(P349-354)【作者】孙玉华;谢平;郭海涛;夏文伟【作者单位】华中农业大学水产学院,农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室,武汉,430070;中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室,武汉,430072;华中农业大学水产学院,农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室,武汉,430070;华中农业大学水产学院,农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室,武汉,430070【正文语种】中文【中图分类】Q95【相关文献】1.粳稻品种‘云引’谷胱甘肽S-转移酶基因OsGST的克隆及序列分析 [J], 毛小辉;魏毅东;张建福;谢华安2.稻纵卷叶螟一个DELTA家族谷胱甘肽S-转移酶基因的克隆、序列分析与表达模式 [J], 刘苏;张胜利3.苦荞谷胱甘肽转移酶(FtGST)基因的克隆与序列分析 [J], 赵海霞;李双江;李成磊;陈惠;吴琦4.香蕉3个Tau类谷胱甘肽硫转移酶基因的克隆及序列分析 [J], 王卓;徐碧玉;贾彩红;张建斌;刘菊华;苗红霞;金志强5.大鼠肾硫酸基转移酶基因的cDNA克隆及序列分析 [J], 李向荣;GIES因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
虹鳟IL-17多克隆抗体的制备及初步鉴定
虹鳟IL-17多克隆抗体的制备及初步鉴定曹永生;徐黎明;赵景壮;刘淼;卢彤岩【摘要】本研究根据NCBI已发表序列设计引物,提取经植物血凝素刺激后的虹鳟Oncorhynchus mykiss头肾细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增IL-17成熟肽基因,测序结果表明所获得的序列与发表序列相一致.将该基因重组至原核表达载体pET32a中,并转化大肠杆菌Escherichia coli Rosetta,进行诱导表达.SDS-PAGE 电泳结果表明:目的蛋白以包涵体形式表达,大小约为32kDa,重组蛋白经Ni-NTA 系统纯化、复性后纯度达90％以上,以其免疫小鼠制备虹鳟IL-17多克隆抗体.ELISA结果显示其效价为1∶25600,而间接免疫荧光结果显示所制备的多克隆抗体能够特异性地识别真核细胞中瞬时表达的虹鳟IL-17.本研究成功制备虹鳟IL-17多克隆抗体,为下一步IL-17在虹鳟黏膜免疫中的作用及其佐剂效应研究奠定基础.【期刊名称】《水产学杂志》【年(卷),期】2016(029)006【总页数】5页(P1-5)【关键词】虹鳟;IL-17;多克隆抗体【作者】曹永生;徐黎明;赵景壮;刘淼;卢彤岩【作者单位】中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江哈尔滨150070;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江哈尔滨150070;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江哈尔滨150070;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江哈尔滨150070;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江哈尔滨150070【正文语种】中文【中图分类】S942.5虹鳟是典型的冷水鱼，生长较快，因富含蛋白、无肌间刺、富含EPA和DHA等不饱合脂肪酸而备受全世界消费者的青睐[1]。
近年来，随着养殖密度的加大和养殖环境的恶化，虹鳟病害时常发生，影响了我国虹鳟产业的发展[2]。
我国学者在虹鳟流行病学、疫苗制备和药物防治等方面已取得一定的成果[3-5]，但认知免疫机理对虹鳟病害致病机制的掌握及其防治体系的建立更具有积极的意义。
鳜三种生长抑素cDNA全长克隆、组织表达及其在脑中定位分析
鳜三种生长抑素cDNA全长克隆、组织表达及其在脑中定位分析代威;赵金良;刘俊;薛洋【期刊名称】《水产学报》【年(卷),期】2012(036)009【摘要】利用cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆了鳜脑中3种生长抑素前体(preprosomatostatin,PSS Ⅰ、PSSⅡ和PSSⅢ)cDNA全长序列.结果显示,鳜PSS Ⅰ cDNA全长647 bp,含开放阅读框369 bp,共编码122个氨基酸,前26个氨基酸为信号肽,C端SS-14在脊椎动物中非常保守；PSSⅡcDNA全长655 bp,开放阅读框387 bp,编码128个氨基酸,前25个氨基酸为信号肽,C端带有[ Tyr7,Gly10] SS-14；PSSⅢcDNA全长823 bp,开放阅读框333 bp,共编码110个氨基酸,前21个氨基酸为信号肽,C端带有[Pr02] SS-14.利用RT-PCR检测了鳜PSS mRNA 的组织表达特征,3种PSS mRNA均在脑中表达,PSS Ⅰ mRNA在其他组织中未检测到表达,PSSⅡmRNA在食道和胃中大量表达,PSSⅢmRNA在肾和性腺中大量表达.推测3种PSS除一致参与神经调控外,P SSⅡ还可参与消化作用调控,PSSⅢ参与调控生殖作用.脑组织原位杂交分析表明,PSS Ⅰ mRNA在下丘脑和延脑中表达,PSSⅡmRNA在下丘脑中表达,PSSⅢmRNA在下丘脑、视觉盖、延脑和脊髓中表达.3种PSS均在下丘脑中表达,表明它们可能参与腺垂体激素分泌的调节；在其他脑区存在表达差异,推测它们还可作为神经递质或调节因子,发挥不同的生物学效应.%Somatostatins ( SS ) play important physiological functions in vertebrate' s growth and development, which belong to a multiple gene family. In this study, the complete cDNA sequences of three distinctpreprosomatostatins(PSS Ⅰ ,PSS II and PSS Ⅲ ) were isolated from Siniperca chuatsi brain and cloned by means of rapid amplification of cDNA ends( RACE). The full length of PSS I cDNA was 647 bp, which contained 369 bp open reading frame and encoded 122 amino acids with a signal peptide of 26 amino acids. It contained the conservative SS-14 sequence at the C-terminal extremity, which is identical with that of other vertebrates. The full length of PSS II cDNA was 655 bp, which contained 387 bp open reading frame and encoded 128 amino acids with a signal peptide of 25 amino acids. It contained[ Tyr7 ,Gly10] SS-14 at the C-terminal extremity. The full length of PSS Ⅲ cDNA was 823 bp, which contained 333 bp open reading frame and encoded 110 amino acids with a signal peptide of 21 amino acids. It contained [ Pro2 ] SS-14 at its C-terminal extremity. PSS mRNA expressions in different adult tissues were analyzed by RT-PCR technique. All PSS mRNA were found in brain, while PSS I mRNA wasn' t detected in other peripheral tissues, high levels of PSS H mRNA were also present in esophagus and stomach, PSS M mRNA in kidney and gonad. These suggested that all PSSs participate in neurological regulation in brain, whereas PSS II may also regulate digestion activity, and PSS Ⅲ regulates reproduction activity. Cellular localization of PSS mRNAs in brain was determined by in situ hybridization, PSS I mRNA was expressed in hypothalamus and medulla oblongata, PSS Ⅱ mRNA was expressed in hypothalamus, PSS M mRNA was expressed in hypothalamus, optic tectun, medulla oblongata and spinal cord. All PSS mRNA were detected in the hypothalamus, which showed they could beinvolved in hypothalamic-pituitary regulation. Distinct expression in other brain sections suggested somatostatins may also act as neurotransmitters or hormones, and exhibit different biological effects.【总页数】12页(P1337-1348)【作者】代威;赵金良;刘俊;薛洋【作者单位】上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室,上海 201306;上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室,上海 201306;上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室,上海 201306;上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室,上海 201306【正文语种】中文【中图分类】Q785;S917.4【相关文献】1.鳜肌酸激酶M-CK cDNA的克隆与组织表达分析 [J], 张敏;赵金良;邓燕飞2.鳜胃蛋白酶原A、胃质子泵基因cDNA全长的克隆与细胞表达定位 [J], 薛洋;赵金良;邓燕飞;卞云斌;顾才弟3.鳜胃蛋白酶原基因cDNA全长的克隆与序列分析 [J], 吴雪峰;赵金良4.鳜胃泌素与胆囊收缩素基因cDNA全长的克隆与表达特征 [J], 苗伟;赵金良5.猪类无精症缺失基因DAZL的cDNA全长克隆、组织表达和亚细胞定位 [J], 王配;王丽娜;霍海龙;张霞;赵筱;王雪飞;霍金龙因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
西伯利亚鲟β-actin基因cDNA全长克隆、序列分析及其作为内参基因的应用研究
西伯利亚鲟β-actin基因cDNA全长克隆、序列分析及其作为内参基因的应用研究施志仪;程千千;宋佳坤【摘要】采用同源克隆和RACE技术获得西伯利亚鲟(Acipenser baerii)β-actin 基因cDNA全长,序列分析表明西伯利亚鲟β-actin基凶cDNA全长1322 bp,其包括的137 bp的5'端非翻译区,57 bp的3'端非翻译区和编码375个氨基酸残基的1128 bp开放阅读框.与其他物种比对,该基因具极高的保守性.同时也利用同源克隆技术获得了两伯利亚鲟Sox2基因的同源保守区,该序列长768 bp,编码256个氨基酸,也具较高的保守性,与其他物种的相似性在70%以上.以β-actin作为内参基因,对Sox2基因在西伯利哑鲟成鱼各组织及胚胎发育各时期进行实时荧光定量PCR检测,发现Sox2基因在不同组织中均有表达.其中,在肝、胰、肾、脑4个组织中表达量差距不大,均处于相对较低的水平,在肌肉组织中表达量最高,达到了肝脏的10.4倍.同时Sox2基因虽在西伯利亚鲟胚胎发育各时期均有表达,但表达也具明显的时间差异性.在受精卵期、囊胚期Sox2基因的相对表达量较低,在原肠期、神经胚期、视泡形成期和心脏形成期Sox2基因相对表达量较高,且在心脏形成期达到最高点.本研究为量化西伯利亚鲟发育分化过程中相关基因提供了坚实的参照工具,增加了后续试验的可信度,同时可为今后深入研究西伯利亚鲟Sox2在侧线神经节分化发育、细胞迁移过程中的作用提供基础参考依据.【期刊名称】《中国水产科学》【年(卷),期】2010(017)006【总页数】10页(P1173-1182)【关键词】西伯利亚鲟;β-actin;cDNA全长克隆;Sox2;内参基因【作者】施志仪;程千千;宋佳坤【作者单位】上海海洋大学,水产与生命科学学院,上海,201306;上海海洋大学,水产与生命科学学院,上海,201306;上海海洋大学,水产与生命科学学院,上海,201306【正文语种】中文【中图分类】Q786%S917西伯利亚鲟(Acipenser baerii)隶属鲟形目(Acipenseriformes)、鲟科(Acipenseridae)、鲟属(Acipense),为软骨硬鳞鱼,分布于西伯利亚河流和湖泊。
鲤耐低温候选基因CcSCD全长cDNA的克隆及功能预测
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赤眼鳟TRAF6基因的cDNA克隆及其应对GCRV的免疫表达特性
赤眼鳟TRAF6基因的cDNA克隆及其应对GCRV的免疫表达特性陈开健;王静安;刘巧林;王荣华;徐莹;赵鑫;肖调义【摘要】In order to investigate whether tumor necrosis factor-associated factor 6 gene involved inantiviral immune response, the full-length cDNA ofTRAF6inSqualiobarbus curriculus was cloned by using RACE–PCRs method. The full-length cDNA ofTRAF6 is 2 621 bp including a 5′–terminal untranslated region of 50 bp, a 3′–terminal untranslated region of 942 bp and an open reading frame of 1 629 bp encoding a polypeptide of 542 amino acid residues. The putative isoelectric point and molecular weight ofTRAF6 was 6.01 and 61 670, respectively. The protein encoded by this gene includes one ring domain, two zinc fingers, one coiled-coil region, and one MATH domain. Phylogenetic analysis showed that theTRAF6 was the most homogeneous toMegalobrama amblycephala. The expression ofTRAF6could be detected in all the 12 tested tissues by RT–PCR, which thehighest expressed in the liver andthe lowest expressed in midgut.After injection with grass carp reovirus (GCRV), theTRAF6expression level was up and down regulated in both spleen and head kidney, and reached the peak at 24 h, respectively. The results suggest thatTRAF6 gene might play important roles in the immune response ofSqualiobarbus curriculus against GCRV.%为研究赤眼鳟(Squaliobarbus curriculus)肿瘤坏死因子受体相关因子6基因的结构特性及其应对GCRV的免疫表达特性，采用RACE技术获得了赤眼鳟TRAF6基因的cDNA全长(共2621 bp)，其中包含5′端非编码区50 bp，开放阅读框1629 bp，3′端非编码区942 bp；该基因编码542个氨基酸，推导的蛋白质相对分子质量为61670，理论等电点为6.01。
重组虹鳟IFN-γ2的原核表达及抗IHNV活性分析
重组虹鳟IFN-γ2的原核表达及抗IHNV活性分析曹永生;徐黎明;赵景壮;刘淼;张奇亚;卢彤岩【摘要】为获得虹鳟IFN-γ2(rtIFN-γ2)抗传染性造血器官坏死病毒(IHNV)活性的相关数据,实验根据NCBI已发表序列设计引物,提取经植物血凝素刺激后的虹鳟头肾细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增471 bp的该基因完整开放阅读框.将该基因重组至原核表达载体pET32a中,并转化大肠杆菌Rosetta,进行诱导表达,SDS-PAGE结果显示,目的蛋白以包涵体形式表达,大小约为38.4ku.重组蛋白经复性、纯化后在CHSE-214细胞上进行抗IHNV活性分析,结果显示,rtIFN-γ2在CHSE-214细胞上抗IHNV活性为6.63×106U/mg.Real-time PCR结果显示,rtIFN-γ2免疫后,虹鳟头肾、脾、肝中IRF-1、IRF-2、IFN-I、IFN-γ和Mx表达水平均显著提高,总体而言免疫后2天机体抗病毒状态弱于免疫后1天.攻毒保护实验结果显示,免疫后1天进行IHNV攻击时,鱼死亡率为40％,而免疫后2天进行IHNV攻击时,鱼死亡率达到80％.研究表明,原核表达系统制备的重组虹鳟IFN-γ2不仅具有体外抗IHNV活性,更能激发虹鳟的抗病毒状态,从而为虹鳟抵抗IHNV感染提供一定的保护力.【期刊名称】《水产学报》【年(卷),期】2016(040)010【总页数】9页(P1586-1594)【关键词】虹鳟IFN-γ2;原核表达;抗IHNV活性;抗病毒状态;保护率【作者】曹永生;徐黎明;赵景壮;刘淼;张奇亚;卢彤岩【作者单位】中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江哈尔滨150070;中国科学院水生生物研究所,淡水生态与生物技术国家重点实验室,湖北武汉430072;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江哈尔滨150070;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江哈尔滨150070;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江哈尔滨150070;中国科学院水生生物研究所,淡水生态与生物技术国家重点实验室,湖北武汉430072;中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,黑龙江哈尔滨150070【正文语种】中文【中图分类】Q785;S917.4Ⅱ型干扰素即IFN-γ，在不同物种之间同源性较低，决定了IFN-γ生物学作用具有较高的种属特异性，同时显示出尽早开展鱼类IFN-γ相关工作的必要性［1］。
虹鳟Hepcidin cDNA的克隆及序列分析
虹鳟Hepcidin cDNA的克隆及序列分析姜娜;马志宏;侯莉;邢薇;李铁梁;罗琳【期刊名称】《中国农学通报》【年(卷),期】2012(28)20【摘要】为了从虹鳟肝脏中扩增出Hepcidinc全长DNA序列,预测出氨基酸序列,并进行序列分析。
通过RT-PCR和RACEPCR的方法,从虹鳟肝脏中克隆获得了Hepcidin全长cDNA序列,利用在线工具和软件包分析。
结果表明：虹鳟Hepcidin全长cDNA序列（GenBank登录号HQ711993）为883bp,5’端非翻译区211bp,3’端非翻译区为405bp,以及一段267bp的编码序列,编码88个氨基酸,由信号肽（24个氨基酸）、原肽（39个氨基酸）和成熟肽（25个氨基酸）组成,成熟肽C端含有Hepcidin类抗菌肽的8个半胱氨酸保守性结构,可形成4个分子内二硫键。
与已报道的鲑形目大西洋鲑Hepcidin氨基酸序列的一致性为93%,与其他鱼类Hepcidin氨基酸序列的一致性为44%~88%,是Hepcidin家族的新成员。
【总页数】6页(P148-153)【关键词】虹鳟;抗菌肽;Hepcidin;cDNA克隆;序列分析【作者】姜娜;马志宏;侯莉;邢薇;李铁梁;罗琳【作者单位】北京市农林科学院北京市水产科学研究所;北京科技大学【正文语种】中文【中图分类】S9【相关文献】1.虹鳟 Ndufb2基因全长 cDNA 序列的克隆与分析 [J], 王家庆;边佳;李代宗;马爽;王亮;那广宁2.黄鳝Ⅲ型Hepcidin基因cDNA克隆及序列分析 [J], 李伟;李长朋3.花鲈肝脏hepcidin相关cDNA Hepc2的克隆及序列分析 [J], 陈君慧;王克坚;周红玲;任洪林;杨明4.鳜hepcidin cDNA的分子克隆及序列分析 [J], 刘碧莲;白俊杰;劳海华;叶星;简清5.虹鳟冷休克蛋白Y-box基因的cDNA全长克隆与序列分析 [J], 王家庆;张丽丽;马爽;李代宗;付玉洁;李绍明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鲤Pdcd6ip蛋白真核表达载体的构建及抗病毒功能研究
鲤Pdcd6ip蛋白真核表达载体的构建及抗病毒功能研究邵玲;张明辉;彭军辉【期刊名称】《水生生物学报》【年(卷),期】2022(46)4【摘要】为进一步研究程序性细胞死亡6互作蛋白Pdcd6ip(Programmed cell death 6-interacting protein)分子功能,探讨其表达对鲤春病毒血症病毒(Spring viraemia of carp virus,SVCV)增殖的影响,研究通过逆转录-聚合酶链式反应扩增得到两端带有Nhe I和EcoR I酶切位点的pdcd6ip编码片段,并将其克隆至真核表达载体pCI-neo上,构建了真核表达质粒pCI-pdcd6ip。
获得的过表达质粒转染至EPC细胞后进行RT-qPCR和western blot检测Pdcd6ip的表达情况,并利用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响。
细胞转染后24h进行SVCV感染,检测Pdcd6ip过表达对SVCV增殖的影响。
结果显示,Pdcd6ip蛋白真核重组质粒能够在EPC细胞中大量表达,转染后72h细胞活性较对照组无显著差异。
同时,免疫荧光、RT-qPCR和western blot检测结果均显示,Pdcd6ip蛋白过表达后,SVCV M蛋白mRNA水平和蛋白表达水平较对照组显著下降,表明Pdcd6ip过表达显著抑制了SVCV的增殖。
研究为抗SVCV药物的研发提供了新的研究基础和设计思路。
【总页数】8页(P529-536)【作者】邵玲;张明辉;彭军辉【作者单位】上海市水产研究所【正文语种】中文【中图分类】S941.4【相关文献】1.猪IL－18成熟蛋白基因重组真核表达载体的构建及其抗病毒作用研究2.STAT3蛋白真核表达载体的构建及其泛素化功能研究3.含Ⅲ型纤连蛋白域蛋白5真核表达载体的构建及初步功能研究4.美洲商陆抗病毒蛋白真核表达载体的构建及在毕赤酵母中的表达5.鸡抗病毒Mx蛋白修饰及其真核表达载体的构建因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
虹鳟鱼染色体的多态现象
虹鳟鱼染色体的多态现象
赵守城
【期刊名称】《河北渔业》
【年(卷),期】1997(000)002
【摘要】虹鳟鱼(Salmo irideus)是鲑科鱼类中适应性很强的冷水性鱼类。
虹蹲鱼原产于美国加里福尼亚州西海岸夏思塔山的山涧溪流中,为陆封性的淡水鱼类。
自1874年经人工移殖驯化,现已在世界各地进行养殖。
【总页数】1页(P11)
【作者】赵守城
【作者单位】华北煤炭医学院细胞生物学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】S965.122
【相关文献】
1.一种新的花柱多态现象--白花丹科植物细裂补血草 [J], 翟雅芯;郭艳萍;张爱勤
2.NRAMP1基因D543N多态现象与世居藏族结核病易感性的研究 [J], 央拉;次仁卓玛;钟铧;李长山;杜宝中
3.昆虫自然种群中遗传多态现象的作用 [J], 吴志远;周斌;邱蕊;郭文霞
4.展向旋转平板Couette湍流中的多态现象 [J], 夏振华
5.国产伏碘防治虹鳟鱼传染病的应用研究——Ⅰ国产伏碘对虹鳟鱼卵的毒性试验[J], 牛鲁祺;李世波;贾忠贺
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口虾蛄proPO基因全长cDNA的克隆与组织表达
口虾蛄proPO基因全长cDNA的克隆与组织表达刘海映;刘连为;姜玉声;隋宥珍;陈雷【期刊名称】《生态学报》【年(卷),期】2013(33)6【摘要】口虾蛄是海湾底拖网渔业中具有重要经济价值的种类,分布广泛.其自然资源日渐衰退,人工育苗技术获得成功后,口虾蛄养殖过程中病害问题及其防治应引起足够的重视.为此,拟通过分子生物学手段研究口虾蛄免疫系统的核心酶——酚氧化酶(PO)的分子结构及该基因的组织表达,从而在分子水平上深入探究其免疫机理.采用反转录PCR(RT-PCR)与cDNA末端快速克隆(RACE)技术从口虾蛄血细胞中克隆了酚氧化酶原(O-proPO)基因,cDNA全长为2436bp,其中开放阅读框为2142bp,编码713个氨基酸.预测分子量为82446Da,等电点(pI)为8.78.该基因与Genbank 上登录的斑节对虾、凡纳滨对虾、罗氏沼虾、短沟对虾、日本对虾proPO基因序列具有较高的同源性,分别为82％、76％、76％、72％、70％.序列分析表明O-proPO为proPO家族中的一个成员,其氨基酸序列中含有多个免疫调节作用位点.系统进化分析显示O-proPO与十足目种类的proPO为同一分支的2个亚群,而后于丰年虫的proPO形成一分支.O-proPO基因表达具有组织特异性,在血淋巴和肠中表达,但在血淋巴中表达量明显高于肠.【总页数】8页(P1713-1720)【作者】刘海映;刘连为;姜玉声;隋宥珍;陈雷【作者单位】大连海洋大学辽宁省海洋牧场工程技术研究中心,大连116023;大连海洋大学辽宁省海洋牧场工程技术研究中心,大连116023;大连海洋大学农业部海洋水产增养殖学与生物技术重点开放实验室,大连116023;大连海洋大学农业部海洋水产增养殖学与生物技术重点开放实验室,大连116023;大连海洋大学辽宁省海洋牧场工程技术研究中心,大连116023【正文语种】中文【相关文献】1.口虾蛄高血糖激素基因全长 cDNA 的克隆及表达分析 [J], 刘海映;张秀芹;隋宥珍;李宏俊;邢坤;姜玉声;杨贵福;陈雷;张娜2.乌克兰鳞鲤丙酮酸激酶基因全长cDNA克隆及组织表达分析 [J], 方珍珍;段霁航;程镇燕;孙金辉;白东清;乔秀亭3.鹅脂滴包被蛋白PLIN基因的全长cDNA克隆及组织表达分析 [J], 吴少春;苏媛媛;吴玉婷;马丽晨;郁建锋;顾志良4.猪ADAR1基因cDNA全长克隆、序列信息及组织表达分析 [J], 张跃博;欧阳峰正;王立刚;侯欣华;刘欣;颜华;张龙超;王立贤5.猪类无精症缺失基因DAZL的cDNA全长克隆、组织表达和亚细胞定位 [J], 王配;王丽娜;霍海龙;张霞;赵筱;王雪飞;霍金龙因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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虹 鳟 ＰＤＣＤ６基 因 ｅ ＤＮＡ 全 长 的克 隆 与 功 能 预测
王 家 庆 ， 李振 刚 ， 边 佳 ， 李代 宗。 ， 马 爽 ， 那 广 宁
（ １ ． 沈 阳］ ： 学 院 生命 ｊ ＝ 程 学院 ， 辽宁 抚顺 １ １ ３ １ ２ ２ ； ２ ． 吉林 大学 生命科 学学 院 长春 １ ３ ０ ０ １ ２ ；
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｐｒ ｏ ｇ ｒ ａ ｍｍ ｅ ｄ ｃ ｅ ｌ ｌ ｄ ｅ ａ ｔ ｈ ６（ ＰＤ（ Ｄ６ ）ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｉ ｓ ａ ｎ ＥＦ — ｈ ａ ｎ ｄ ｔ ｙ ｐ ｅ Ｃａ 一 ｂ ｉ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｉ ｎ ｖ ｏ ｌ ｖ ｅ ｄ ｉ ｎ ａ ｐ ｏ ｐ ｔ ｏ ｓ ｉ ｓ ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｓ ｓ ． ＲＴ— Ｐ ＣＲ ａ ｎ ｄ ＲＡＣＥ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｕ ｓ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｌ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｗｈ ｏ ｌ ｅ ｃ ＤＮ Ａ ｏ ｆ ＰＤＣＤ６
３ ｌ 眷 ６ 期 ２ ０ １ 年 ｌ ２ Ｊ Ｊ
上 海 交通 大 学 学报 （ 农 业 科 学 版）
Ｊ （ ） ＵＲＮＡＩ （ ） Ｆ Ｓ ＨＡＮＧＨＡＩ Ｊ Ｉ ＡＯ ＴＯＮＧ ＵＮＩ ＶＥ ＲＳ Ｉ ＴＹ （ ＡＧＲ Ｉ Ｃ ＵＩ Ｔ ＵＲＡＩ Ｓ Ｃ Ｉ Ｅ ＮＣ Ｆ）
关键词 ：虹 鳟 ； ＰＤＣ Ｄ６基 因 ； Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ；Ｒ ＡＣ Ｅ
中图分 类号 ： Ｓ ９ １ ７
文 献标识 码 ：Ａ
Ｃｌ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ ｄ Ｆ ｕ ｎ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｐｒ ｅ ｄｉ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ＰＤＣＤ ６ Ｆ ｕ ｌ ｌ — Ｌ ｅ ｎ ｇ ｔ ｈ
，
３ ． 河北农业大学 海洋学 院 ， 河北 秦皇 岛 ０ ６ ６ ０ ０ ３ ）
摘
要： 程序 性死 亡 因子 ６ （ ＰＤＣ Ｄ６ ） 基 因编码 １个含 Ｅ Ｆ － ｈ ａ ｎ ｄ结构 域 的钙 离子 结合 蛋 白。应 用逆
转录 Ｐ Ｃ Ｒ及 ｃ ＤＮＡ 末 端 快 速 扩 增 （ ＲＡＣ Ｅ） 技术从虹鳟 （ Ｏｎ ｃ ｏ ｒ ｈ ｙ ｎ ｃ ｈ ｕ ｓ ｍｙ ｋ ｉ ｓ ｓ ） 脑 组 织 中克 隆 了 Ｐ ＤＣ Ｄ６基 因 ｃ Ｄ ＮＡ 的全序 列 （ Ｇｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ Ｎｏ ： Ｆ Ｊ ５ ９ １ １ ５ ４ ） 。序 列全 长 ｌ １ ７ ９ ｂ ｐ ， 其中５ ’ 端非 翻译 区
Ｖ（ ） １ ． ３ｌ ＮＯ ． ６
Ｄｅ ｃ ． ２ Ｏｌ ３
文 章 编 号 ：１ ６ ７ １ ９ ９ ６ ， ｔ （ ２ ０ ｌ ３ ） ０ ６ ０ ０ ３ ０ ～ ０ ７
６ ７ 卜９ ９ ６ ４ ． ２ ０ ｌ ３ ． ０ ６ ． ０ ０ ６
２ ． Ｃｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ １ ｉ ｆ ｅ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ， Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｃｈ ａ ｎ ｇ ｃ ｈ ｕ ｎ １ ３ ０ ０ １ ２， Ｃｈ ｉ ｎ ａ ；
３ ． Ｃｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｏｃ ｅ ａ ｎ， Ｈｅ ｂ ｅ ｉ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ， Ｑｉ ｎ ｈ ｕ ａ ｎ ｇ ｄ ａ ｏ ０ ６ ６ ０ ０ ３ ， Ｃｈ ｉ ｎ ａ ）
长４ ８ ｂ ｐ ， ３ ’ 端非翻 译 区长 ５ ６ ７ ｂ ｐ ， 开放性 阅读框 长 ５ ６ ４ ｂ ｐ ， 编码 １ ８ ７个氨 基 酸 。 电子 表 达谱 分析
结果 表 明该基 因在 ４种脊 椎动 物 的 多个部 位 或组 织 中均有表 达 。 同源模 建蛋 白三级 结构 显 示该蛋
ｇ ｅ ｎ ｅ（ （ ｉ ｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ ａ ｃ ｃ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｎ ｕ ｍｂ ｅ ｒ ： Ｆ Ｊ ５ ９ １ １ ５ ４） ｆ ｒ ｏ ｍ ｂ ｒ ａ ｉ ｎ ｏ ｆ ｒ ａ ｉ ｎ ｂ ｏ ｗ ｔ ｒ ｏ ｕ ｔ ． Ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｒ ｅ ｖ ｅ ａ ｌ ｅ ｄ ａ ｌ
（ １ ． Ｃ ＊ ） ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｉ ｉ ｆ ｅ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ ， Ｓ ｈ ｅ ｎ ｙ ａ ｎ ｇ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｏ ｆ Ｆ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｆｕ ｓ ｈ ｕ ｎ １ １ ３ １ ２ ２， Ｃｈ ｉ ｎ ａ ；
ｃ ＤＮＡ ｏ ｆ Ｏｎ ｃ ｏ ｒ ｈ ｙ ｎ ｃ ｈ ｕ ｓ ｍｙ ｋｉ ｓ ｓ
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白具 有 ８个主要 的 螺 旋 结构 。虹 鳟 Ｐ Ｄ Ｃ Ｄ ６蛋 白序 列 与斑 马鱼 、 非洲 爪蟾 、 人、 小 鼠和 鸡 的 同源性 均 高于 ８ ５ ， 表 明 ＰＤＣ Ｄ６基 因在 进 化过 程 中是 高度 保 守的 ， 在 细 胞 程序 性 死 亡过 程 中发挥 重 要
作用 。
１ ７ ９ Ｉ ） ｐ ｃ ＤＮＡ ｃ ｏ ｎ ｔ ａ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ ４ ８ ｂ ｐ ５’ｕ ｎ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｒ ｅ ｇ ｉ ｏ ｎ， ５ ６ ７ ｂ ｐ ３’ 一 ｕ ｎ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｒ ｅ ｇ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ５ ６ ４ ｈ ｐ ｏ ｐ ｅ ｎ ｒ ｅ ａ ｄ ｉ ｎ ｇ ｆ ｒ ａ ｍｅ ｅ ｎ ｃ ｏ ｄ ｉ ｎ ｇ １ ８ ７ ａ ｍｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｉ ｄ ｓ ． Ｅｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｎ ｉ ｃ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｐ ｒ ｏ ｆ ｉ ｌ ｅ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｇ ｅ ｎ ｅ ｗｅ ｒ ｅ ｆ ｏ ｕ ｎ ｄ ｉ ｎ ｓ ｅ ｖ ｅ ｒ ａ ｌ ｐ ａ ｒ ｔ ｓ ｏ ｒ ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ ｓ ｉ ｎ ｆ ｏ ｕ ｒ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｅ ｓ ｏ ｆ ｖ ｅ ｒ ｔ ｅ ｂ ｒ ａ ｔ ｅ ｓ ．Ｈｏ ｍｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｍｏ ｄ ｅ ｌ ｉ ｎ ｇ ｏ ｆ ｔ ｅ ｒ ｔ ｉ ａ ｒ ｙ Ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ ｔ ｕ ｒ ｅ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ＰＤＣＤ６ ｓ ｈ ｏ ｗｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ＰＤＣＤ６ ｃ ｏ ｎ ｔ ａ ｉ ｎ ｅ ｄ ８ ｍａ ｉ ｎ ａ ｌ ｐ ｈ ａ ｈ ｅ ｌ ｉ ｘ ．Ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｌ ｉ ｇ ｎ ｍｅ ｎ ｔ ｂ ｅ ｔ ｗｅ ｅ ｎ ｒ ａ ｉ ｎ ｂ ｏ ｗ ｔ ｒ ｏ ｕ ｔ ａ ｎ ｄ ｚ ｅ ｂ ｒ ａ ｆ ｉ ｓ ｈ， ｆ ｒ ｏ ｇ ， ｃ ｈ ｉ ｃ ｋ ｅ ｎ， ｍｏ ｕ ｓ ｅ ａ ｎ ｄ ｈ ｕ ｍａ ｎ ｅ ｘ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｅ ｄ ｍｏ ｒ ｅ ｔ ｈ ａ ｎ ８ ５ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｔ ｙ ｒ ａ ｔ ｅ ｏ ｆ ａ ｍｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｉ ｄ ． Ｔｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｉ ｎ ｄ ｉ ｃ ａ ｔ ｅ ｄ ｔ ｈ ｅ ＰＤＣ Ｄ６ ｇ ｅ ｎ ｅ ｉ ｓ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｌ ｙ ｃ ｏ ｎ ｓ ｅ ｒ ｖ ａ ｌ ｉ ｖ ｅ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｇ ｒ ｅ ｓ ｓ ｏ ｆ ｅ ｖ ｏ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｐ ｌ ａ ｙ ａ ｎ ｉ ｍｐ ｏ ｒ ｔ ａ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ｅ ｉ ｎ ｐ ｒ ｏ ｇ ｒ ａ ｍ ｍｅ ｄ ｃ ｅ ｌ ｌ ｄ ｅ ａ ｔ ｈ ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｓ ｓ ．