PH1602 植物核蛋白胞质蛋白提取试剂盒实验方法手册
植物膜蛋白提取方法
植物膜蛋白提取方法说实话植物膜蛋白提取这事，我一开始也是瞎摸索。
我试过超声破碎法来提取。
就像敲鸡蛋，想把里头的东西弄出来那种感觉。
把植物组织放在缓冲液里，然后用超声仪来破碎细胞。
可是我发现这种法子很容易把膜也给弄破喽，得到的膜蛋白纯度不咋高，好多其他乱七八糟的东西都混进去了。
这就好比炒菜的时候把不该放的调料都倒进去了，最后味道全乱套了。
后来呢，我又尝试了差速离心法。
这就像挑豆子，把大的小的分开那样。
先把植物组织破碎后，通过不同的离心速度把细胞器啊什么的和膜蛋白分离开。
开始的时候我老是掌握不好离心速度和时间，要么离心速度不够，那些东西分不开，要么就是离心太久了，把想要的膜蛋白都给弄丢了一部分。
经过好多次的尝试，我才慢慢摸准了一点规律。
比如说，先低速度短时间离心去掉那些大的残渣，然后再逐步提高离心速度和延长时间来纯化膜蛋白。
我有段时间还听别人说密度梯度离心法好使。
这方法有点像从水里分层捞东西。
就是用不同浓度的溶液形成一个密度梯度，然后离心，让膜蛋白在适合它密度的那个层面停下来，这样和其他物质分离开。
但是这个方法操作起来比较麻烦，各种溶液的配制就要很精确，我就老在这上面出错，溶液配不对后续根本得不到像样的结果。
还有就是用化学试剂来提取。
比如说表面活性剂。
这就跟用清洁剂去油污有点像，表面活性剂能把膜蛋白从细胞膜上给“扒拉”下来。
不过这化学试剂的种类和浓度可得选好了，选错了就像洗衣粉放太多把衣服都洗坏了似的，膜蛋白的活性啥的就全没了。
我就在选择表面活性剂的种类和浓度上栽过跟头，试了好多种，结果都不理想，不是蛋白没有提取出来就是提取出来的蛋白变性了失去活性了。
如果是新手上路的话，我觉得差速离心法可以先试试，毕竟相对来说比较直白一点，虽然可能会碰到不少问题，但是在调整离心速度和时间的过程中可以慢慢学习。
可千万别像我刚开始的时候，只知道按照书上的数值来，实际情况和书上可能有差别，要多做尝试才行。
在操作的全过程里，实验设备的清洁也很重要。
植物核蛋白提取(蛋白组实验,质谱适用)
-1-
邮箱：bestbio@ 电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
使用安全： 使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如 果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。
产品说明书
植物核蛋白提取试剂盒
（蛋白质组学实验适用）
货号：BB-319906
V1.7.0
试剂盒储存条件： 2-8℃保存。
开盖后组份按要求条件保存。
试剂盒组成：
产品组成
BB-319906-1
BB-319906-2
组份编号
规格
50 assays
100 assays
试剂 A：植物核蛋白提取液 A
100ml
-2-
邮箱：bestbio@ 电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
本试剂盒采用非酶法提取，提取过程简单方便，速度快，可在 1 小时内完成，而且绝少 交叉污染，但是蛋白回收率相比酶法较低。酶法提取制备的蛋白，回收率稍有提高，蛋白纯 度高，保持天然活性，但是耗时较长。如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法的 提取试剂盒，对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒（相关产品 BB-319910）。 请根据实际需要选择试剂盒。
产品号 BB-3101 BB-3102 BB-3104 BB-3411 BB-3501 BB-3121 BB-3122 BB-3123 BB-3125 BB-3126 BB-3105 BB-3702 BB-3181 BB-3183 BB-3187
英文特生物技术（北京）有限公司-植物质膜蛋白提取试剂盒说明书
Minute TM 植物质膜蛋白提取试剂盒目录号：SM-005-P描述：植物膜蛋白占植物细胞总蛋白的很小一部分，但是在植物生理学中起着非常重要的作用。
传统的植物膜组分分离纯化方法是蔗糖密度梯度离心法和双液相法。
这些方法虽然比较有效，但是需要超高速离心和大量的起始原材料，操作过十分繁琐和费时。
为了克服植物膜组分提取中的缺点，我们特别开发了此款植物膜组分提取试剂盒。
植物组织首先通过缓冲液A中致敏，匀浆，然后通过一个特殊的离心管柱，在此过程中匀浆的组织通过柱子特有的Z字形通路后细胞膜被切割成大小相等的碎片，后续无需超高速离心，通过差速离心法和密度梯度离心法将天然的质膜组分从未破裂的细胞，细胞核，细胞浆和细胞器的混合物中分离出来。
在每次实验中仅需使用相同量的起始材料，离心力和离心时间，即可高度富集膜组分，并保证一致性良好。
整个操作过程大约1小时可以完成。
应用：试剂盒用于快速从植物组织中分离天然膜组分，可应用于SDS-PAGE，immunoblottings，ELISA，IP，膜蛋白质结构分析，2-D，酶活性测定及其他应用。
试剂盒组份（50次）：1. 25ml Buffer A2. 10ml Buffer B3. 50个离心管柱4. 50个收集管5. 2根塑料研磨棒6. 组织分离粉储存：Buffer A和Buffer B 需在-20℃储存所需附加材料1XPBS涡旋震荡仪台式离心机重要产品信息1.仔细阅读整个操作说明。
将缓冲液A和缓冲液B完全解冻后摇匀，放置于冰上。
将离心管柱和接收管套管放置于冰上预冷。
2.离心机请调整成RCF/Xg模式，按照离心力设置离心机，所有离心步骤都需要在4℃室温下或者低温离心机中进行。
3.研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制剂应在使用前加入缓冲液A中。
蛋白酶抑制剂可以选择添加或不添加，如添加在使用前加入缓冲液A中（请按照蛋白酶或磷酸酶抑制剂母液比例，例如母液是100x，添加时按照1：100添加，1ml缓冲液A添加10ul抑制剂）。
细胞核膜蛋白提取方法
细胞核膜蛋白提取试剂盒
产ห้องสมุดไป่ตู้组成：
产品组成 BB-3174-1 BB-3174-2 规格 50T 100T 细胞核提取液A 20ml 40ml 细胞核提取液B 25ml 50ml 膜蛋白溶解液 10ml 20ml 蛋白酶抑制剂混合物 250ul 500ul
储存条件： 蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。
核与胞质蛋白提取方法
细胞质与细胞核蛋白提取方法
注意：红色斜体字成分可用蛋白酶抑制剂混合物代替，使用前加入
方法如下：
1.将细胞收集到EP管中，离心（4000r/min，5min，4度)。
2.用PBS洗三次，离心同上，弃上清。
3.加入100微升缓冲液A，冰上孵育10min，离心（14000r/min，1min），弃上清。
4.将沉淀重悬于60微升缓冲液B中，混匀，冰上30min，离心（14000r/min，15min，0度),收集上清，弃沉淀。
（核蛋白提取后可用裂解液A透析2h，合并用于IP；或用其他溶液稀释后用浓缩离心管替换溶液后用于IP或其他实验）
裂解液A的作用主要用于释放胞浆蛋白和膜蛋白，裂解液B用于释放核蛋白，NP-40既是一种表面活性剂又是一种去垢剂，它的作用是既可破坏细胞膜（较温和），又可结合释出的蛋白防止沉淀，所以通过第一步离心去上清后大部分胞浆蛋白和膜蛋白可去掉。
细胞核蛋白提取技巧
细胞核蛋白提取技巧1. 选择合适的细胞裂解液：细胞裂解液的选择对于细胞核蛋白的提取至关重要。
通常使用含有低浓度盐、洗涤剂和蛋白酶抑制剂的缓冲液。
一些常用的细胞裂解液包括 RIPA 缓冲液、NP-40 缓冲液等。
根据不同的细胞类型和实验需求，可以尝试不同的细胞裂解液。
2. 控制裂解条件：在细胞裂解过程中，需要控制适当的条件，以确保细胞核的完整性。
避免过度裂解，以免破坏细胞核结构。
可以通过调整裂解液的组成、裂解时间和温度等参数来优化裂解条件。
3. 使用适当的离心方法：离心是分离细胞核和细胞质的常用方法。
在细胞核蛋白提取过程中，可以使用低速离心去除细胞碎片和细胞质，然后使用高速离心沉淀细胞核。
选择合适的离心速度和时间，以确保细胞核的沉淀和细胞质的去除。
4. 添加核蛋白提取试剂：为了提高细胞核蛋白的提取效率，可以添加一些核蛋白提取试剂。
这些试剂可以帮助溶解细胞核膜和核内蛋白质，从而提高提取产量和质量。
常用的核蛋白提取试剂包括 SDS、NaCl 等。
5. 注意蛋白酶抑制剂的使用：在细胞核蛋白提取过程中，蛋白酶的活性可能会导致蛋白质的降解。
为了保护细胞核蛋白的完整性，需要添加适当的蛋白酶抑制剂。
常用的蛋白酶抑制剂包括 PMSF、AEBSF 等。
6. 控制温度和时间：在细胞核蛋白提取过程中，温度和时间的控制也很重要。
避免高温和长时间处理，以免引起蛋白质的变性和降解。
通常，细胞核蛋白提取可以在 4°C 下进行，以保持蛋白质的稳定性。
7. 离心清洗：在细胞核蛋白提取后，为了去除残留的杂质和洗涤剂，可以进行离心清洗步骤。
使用适当的缓冲液进行离心清洗，以确保细胞核蛋白的纯度。
8. 储存和保存：提取的细胞核蛋白应尽快进行下游分析。
如果需要储存，应将细胞核蛋白保存在适当的缓冲液中，并在-80°C 或更低温度下保存。
避免反复冻融，以免影响蛋白质的稳定性。
以上是一些细胞核蛋白提取的技巧。
在实际操作中，需要根据具体的实验需求和细胞类型进行适当的调整和优化。
植物蛋白质提取方法总汇
植物蛋白质提取方法总汇一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清液，样品制备完成。
蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8）45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！二、植物组织蛋白质提取方法氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。
4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。
药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。
裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml 灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！三、组织：肠黏膜目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min离心：12000 g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）振荡，置室温20min离心：7500g，5 min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20 min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。
胞浆蛋白—核蛋白抽提试剂盒
胞浆蛋白—核蛋白抽提试剂盒产品编号产品名称包装SINP001 胞浆－核蛋白抽提试剂盒50×产品简介：细胞核和细胞浆目前成为研究细胞组分的两个热点，获得高浓度的细胞核蛋白和细胞浆蛋白成为得到好的研究结果的重要实验过程。
本试剂盒主要原理是在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，离心得到细胞核沉淀。
最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。
本试剂盒是本公司非放射性EMSA试剂盒（cat; SIDET001, SIDET003, SIDET004, SIDET006, SIDET007）实验成功的重要部分，经BCA测定24cm2贴壁细胞（或50ml规格培养瓶养的悬浮细胞）抽提物，核蛋白浓度约为1.6－3.0ug/ul.。
抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
本试剂盒可足够您进行50次抽提操作！包装清单：试剂包装总量5×Buffer A 1瓶35ml/瓶2×Buffer B1支 1.5ml/支Solution I（溶液I）1支 1.75ml/支Solution II（溶液II）1支 1.75ml/支Solution III（溶液III）1支 1.5ml/支PMSF Solution 1支 1.1ml/支1份1份/KitUser Manual (说明书)保存温度：4℃保存。
Ⅰ. 准备抽提试剂：按照下列方法制备胞浆－核蛋白抽提液：1.制备3ml胞浆蛋白裂解液I ：试剂体积5×Buffer A0.6mlSolution I（溶液I）30ulSolution II（溶液II）30ulPMSF Solution 15uldd-H2O 2.325ml总体积 3.0ml注：PMSF Solution须在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入。
2.制备1.02ml胞浆蛋白裂解液II：试剂体积Solution III（溶液III）20ul胞浆蛋白裂解液I 1.0ml总体积 1.02ml3.制备50ul核裂解液：试剂体积2×Buffer B25ulSolution I（溶液I）0.5ulSolution II（溶液II）0.5ulPMSF Solution0.25uldd-H2O23.75ul总体积 50ul注：PMSF Solution须在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入。
EASYspin 植物RNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://EASYspin Plant RNA KitEASYspin植物RNA快速提取试剂盒目录号：RN09试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次(RN0902)裂解液RLT 室温50 ml去蛋白液RW1 室温40 ml漂洗液RW 室温10 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-free H2O 室温10 mlPLANTaid 室温 5 mlRNase-free吸附柱RA和收集管室温50套本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项：1.不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机。
2.需要自备乙醇，研钵(可选)。
3.裂解液RLT和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。
若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.关于DNA 的微量残留：一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留，本公司的EASYspin系列RNA提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和选择了特殊吸附能力的吸附膜已经清除了绝大部分的DNA残留，在大多数RT-PCR 扩增过程中极其微量的DNA残留影响不是很大，如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：1)选用跨内含子的引物，以穿过mRNA中的连接区，这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2)选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3)将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。
本试剂盒还可以用于DNase I处理后的RNA清洁(cleanup)，请联系我们索取具体操作说明书。
胞质蛋白或核蛋白提取方法
胞质蛋白或核蛋白提取方法实验目的从细胞和动物组织制备核蛋白和胞浆蛋白。
实验试剂核蛋白/胞质蛋白提取试剂盒。
实验步骤（一）细胞蛋白提取（1）取5-10×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3 min，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
（2）用冷PBS洗涤细胞2次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
（3）每20 μL冷的Buffer A，2 μL蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15 s，置冰上10 min。
（4）再次高速涡旋振荡5 s，然后在4℃，16000×g条件下离心5 min。
（5）快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
（6）在沉淀中加入200 μL冷的Buffer B，2 μL蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15 s。
（7）置冰上40 min，每隔10 min高速涡旋振荡15 s。
（8）在4℃，16000×g条件下离心10 min。
（9）快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
（二）组织蛋白提取（1）取适量组织样本剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），置冰上5 min，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
（2）在4℃，500×g条件下离心2-3 min，弃上清。
（3）按照细胞蛋白的提取方法的第三步骤往下操作即可。
（4）上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。
注意事项（1）实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。
（2）整个过程须保持样品处于低温状态。
植物组织蛋白质提取方法
植物组织蛋白质提取方法•相关推荐植物组织蛋白质提取方法用200毫摩每升的tris-cl 和62.5毫摩每升的tris-cl,我们研究室一般用１００毫摩每升的tris-cl，pH 8.0 ．另外，最好加１５０毫摩每升的ＮaCl，用来分离以弱电荷结合到多糖上的蛋白。
2我提的蛋白难溶，请问怎么解决？1、请问这是为什么呢？怎么解决？2、溶解时是先在100℃沸水浴后在涡旋吗？3、涡旋时产生大量泡沫，对蛋白有影响吗？4、是在常温溶解还是在4℃？或-20℃？5、一般溶解需要多长时间？怎样才算溶解充分了？我也是做植物叶片的.，建议你可以用TCA-丙酮沉淀，方法如下：1、在液氮中研磨叶片30min，加PVP，和石英砂2、加入样品体积3倍的提取液(丙酮溶液1)在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃10000rpm以上1小时）弃上清。
3. 每份加入9ml丙酮溶液II，捣碎沉淀，常温振动混匀，-20℃沉淀1h；10000rpm，4℃离心15min，弃上清.4. 每份加入9ml丙酮溶液II，常温振动混匀，-20℃沉淀1h；10000rpm，4℃离心15min，弃上清.5. 每份加入9ml 80%丙酮溶液III, 常温振动混匀，-20℃沉淀1h, 10000rpm，4℃离心15min，弃上清6．干燥成硬块，磨成粉磨-20℃保存待用。
第二个问题：37度水浴第三个问题：涡旋时产生大量泡沫，没有影响第四个问题：37度溶解第五个问题1个小时，中间混匀数次出现这种情况是很正常的，要是全部都溶了倒是不太正常。
用沉淀法浓缩蛋白都存在一个变性的问题，在具体的操作过程中，有一部分蛋白变性了，所以会不溶解。
操作的时候尽量保持低温！溶解的时候可以在常温下，蛋白变成粉末后，立即加1*SDS上样缓冲液，用加样器吹打，大约5分钟就好，可以用来进行下一步的实验了。
也可以在4度溶解过夜。
涡旋时产生大量泡沫，个人认为影响不大一般溶解半个小时就很充分了，但仍会有很多不溶物！可以离心弃掉！丙酮沉淀之后要干燥，这个过程一定不要时间太长，不然样品干燥得过了，就很难溶了。
PH0220 PCR产物纯化试剂盒实验操作手册与实验常见问题
PH0220|PCR产物纯化试剂盒PCR Purification KitCatalog No：PH0220Size：☐100T|☐200T Store at RT本试剂盒采用离心吸附柱结合独特的缓冲液系统，从酶切、PCR等反应溶液中纯化DNA片段，同时除去蛋白质、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。
使用本试剂盒可回收100bp–10kb的DNA片段，回收率大于80%（<100bp>和10kb的DNA片段回收率为30－50%）。
每个吸附柱每次最多可吸附的DNA量约为10μg。
使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、测序、文库筛选、连接和转化等实验。
特点：1、结合液PB为亮黄色，便于观察体系的pH是否合适。
；2、操作快捷，单个样品操作少于10分钟。
保存本试剂盒在室温（15–25℃）干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2–8℃。
（注意：当低温贮存时，使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10-20分钟，以平衡溶液温度。
）试剂组分Components100T200T Storage结合液PB100ml200ml RT3M NaAc pH5.2500μl500μl RT漂洗液PW25ml2×25ml RT洗脱缓冲液EB15ml15ml RT吸附柱CA2100个2×100个RT收集管（2ml）100个2×100个RT说明书1份1份——操作步骤：如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1在PCR反应液中直接加入5倍体积的PB液，颠倒混匀后，全部加入到吸附柱CA2中，10,000g离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，注意：1、如果PCR反应体系使用了石蜡油，无需去除，但要使用10倍体积的PB液。
2、如果反应体系小于50μl，用水补至50μl体系，再加入PB液。
3、加入PB后，如果体系体积大于700μl，请分次上柱，保证全部溶液均加入到吸附柱中。
植物核蛋白提取方法
植物核蛋白提取方法植物核蛋白提取方法植物核蛋白提取试剂盒产品组成：产品组成规格植物核提取液A 植物核提取液B 蛋白酶抑制剂混合物说明书BB-3154-1 50 assays 25ml 10ml 250ul 一份BB-3154-2 100 assays50ml 20ml 500ul 一份储存条件：蛋白提取液，磷酸酶抑制剂2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期：一年。
产品简介：贝博植物核蛋白提取试剂盒提供配套试剂，适用于从各种植物细胞和各种实体植物组织，如叶片、根、种子等植物组织中提取核蛋白。
提取过程简单方便，可在1小时内完成。
制备的核蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。
提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
使用方法：1. 提取液制备：每500ul预冷的.核蛋白提取液A和200ul提取液B中分别加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200mg植物组织样本剪碎，采用以下一种方法处理：i. 加入500ul提取液A后用匀浆机/匀浆器匀浆。
ii. 置于研钵中用液氮研磨，研磨后加入500μl冷的提取液 A。
iii. 加入500ul提取液A直接置冰上研磨。
3. 高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，100×g力条件下离心1分钟。
4. 收集上清，弃沉淀。
5. 将上清在4℃，800×g力条件下离心1分钟。
6. 弃上清，收集沉淀。
7. 在沉淀中加入200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡15秒。
8. 置冰上40分钟，每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。
9. 在4℃，16000×g条件下离心10分钟。
10. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
①②11. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
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核蛋白提取以及凝胶阻滞
提取核蛋白方法:1 称取适量材料(约10克)于25毫升研磨缓冲液A中研磨至匀浆, 六层纱布过滤,2300g离心10分钟,弃上清.注意: 过滤得时候不要用手挤压.让它自然流出即可.2用重旋缓冲液B (1.5毫升)重旋,加入260微升饱和硫酸铵,于4度轻摇30分钟,(可以将离心管放在冰盒里,然后把冰盒放在摇床里摇,转速设置为100转每分钟即可)312000g离心10分钟,取上清至一新管,加入3倍体积的饱和硫酸铵,冰上放置1小时,每隔20分钟颠倒混匀一次, 这时可以看见一些絮状的蛋白漂浮在管中.412000g 离心,去上清,沉淀用1ml重旋缓冲液C重旋.取20微升蛋白电泳观察.考染后可以看到一片蛋白带,各种大小都有.5将蛋白过夜透析,透析液为蛋白-DNA结合缓冲液D6将透析后的蛋白分装,液氮速冻后零下70度保存.研磨缓冲液ATris-Cl(pH7.8) 50mMMgCl2 5mMKCl 15mM蔗糖0.3MEDTA 0.1mMDTT 1mMPMSF 0.5mM重旋缓冲液BHEPES-KOH (PH 8.0) 20mM甘油25%(体积比)EDTA 0.4mMPMSF 0.5mMDTT 1mM重旋缓冲液CHEPES-KOH (PH 8.0) 20mM甘油25%(体积比)EDTA 0.4mMPMSF 0.5mMDTT 1mMNaCl 0.1MDNA-蛋白结合缓冲液DTris-Cl ph7.8 10mMNaCl 50mMDTT 0.5mMEDTA 1mM甘油5%体积比注意:上述缓冲液后面的浓度均为工作浓度,可以配置合适浓度的母液,在配置的时候加入母液即可.EMSA1 片段的标记在感兴趣的片段两端设计含有合适酶切位点的引物,用高保真酶进行扩增,将PCR产物沉淀后酶切,然后回收.利用末端补平酶进行补平.进行标记.反应体系如下10* BUFFER 1DNA Fragment 210mMdA/T/GTP 1P32-dCTP 4Klenow Fragment o.5水 1.5其他物质先加好,然后加同位素,最后加酶.37度标记一个小时.2 做蛋白和DNA结合结合体系为20微升标记的启动子片段5微升蛋白5微升Poly dI-dC 2微升xxxxxxxx 8微升25度反应1小时根据不同的实验需要,可以设置不同的XXXXXXX1 全部加水只检测二者之间的结合2 加未标记的启动子片断,可以检测结合的特异性3 如果你标记的片断比较长,比如是500bp,那么可以把这500分成5个100,然后分别加入不同反应体系,根据结合的抑制情况,可以分析结合的具体位点.跑胶制作非变性聚丙烯酰胺凝胶,根据片断大小设置合适的浓度,跑胶.跑完之后铺一层滤纸,小心揭下,晾干,压片.(这个飞哥肯定比我熟练,呵呵).第二天洗片子,观察结果.此外,张老师没有给我订购Poly dI-Dc,我用的鳜精DNA替代,效果不好,非特异性结合很多,你们最好订购.我的实验结果没有扫描,就和你们说一下,就是下面有一条比较淡的DNA条带,上面有一条很粗大的结合滞后带,其他的没有了.。
植物蛋白质的提取和测定实验
植物蛋白质含量的测定一、原理查询资料，得知玉米蛋白质含量较高。
再经Tris-HCl缓冲液研磨、离心后，得可溶性蛋白质于上清液中，将沉淀用碱水解则得到非可溶性蛋白质的提取液，将提取液与卡马斯亮蓝溶液反应呈蓝色，在595nm处有最大吸收峰。
在一定范围内，蛋白质含量与反应液在595nm 波光的吸收度呈正比，由此可求出蛋白质的含量二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：玉米粒（二）仪器设备：分光光度计；离心机；恒温水浴；研钵；离心管；刻度移液管；微量滴定管；试管等（三）试剂：100μg／ml牛血清标准蛋白质溶液；0.15mol/L NaCl; 1mol/LNaOH;50mmol/L Tris-HCl提取液、卡马斯亮蓝溶液三、实验步骤（一）标准曲线的绘制编号 0 1 2 3 4 5标准蛋白（ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1Tris-HCl提取液(ml) 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0卡马斯亮蓝溶液(ml) 5 5 5 5 5 5每管牛血清蛋白含量(ml) 0 20 40 60 80 100加入表中的试剂，摇匀，室温放置4分钟，以不加标准蛋白的0号管为空白，在595nm波长处测定吸光度。
以标准蛋白浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
（二）样品的测定称取鲜样0.5g，加提取液6ml，研磨成匀浆后，在10000r/min,4℃条件下离心20min，上清液即为可溶性蛋白质提取液。
沉淀加3ml1mol/L NaOH溶液，在90℃恒温水浴锅中加热20min，在4000r/min，4℃条件下离心10min，上清液为非可溶性蛋白质提取液。
取上清液各0.1ml，分别加入Tris-HCl提取液0.9ml，然后再分别加入卡马斯亮蓝溶液5ml，摇匀，于595nm 波长处测定吸光值。
根据吸光度查标准曲线，求出样品中的蛋白质含量。
四、结果计算：样品中蛋白的含量（μg/g）＝查标准曲线值（μg）×提取液总体积（ml）/(样品鲜重（g）×测定时加样量（ml）)粗蛋白量（％）＝蛋白氮含量×6.2。
细胞和动物组织核蛋白的提取方法
细胞和动物组织核蛋白的提取方法产品组成 310001 310002规格 50 assays 100 assaysBuffer A (Cytoplasmic Extraction Reagent) 10ml 20mlBuffer B (Nuclear Extraction Reagent) 10ml 20ml蛋白酶抑制剂混合物 250ul 500ul使用方法：A．细胞蛋白提取1. 取5-10×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 每20ul细胞压积中加入200μl冷的Buffer A，2ul蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15秒，置冰上10分钟。
4. 再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，16000×g条件下离心5分钟。
5. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
6. 在沉淀中加入200μl冷的Buffer B，2ul蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15秒。
7. 置冰上40分钟，每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。
8. 在4℃，16000×g条件下离心10分钟。
9. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
B．组织蛋白提取1. 取适量组织样本剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上静置5分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
2. 在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，弃上清。
3. 按照细胞蛋白的提取方法的第3步骤往下操作即可。
上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。
注意事项：1. 实验过程中的所有BestBio-贝博生物试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。
2. 整个过程须保持样品处于低温状态。
储存条件：-20℃保存。
有效期：一年。
胞浆蛋白核蛋白膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞)
胞浆蛋白/核蛋白/膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞) (Catalog #DBI-1021 ; DBI-1022; Store kit at 4℃)描述:本试剂盒提供了蛋白抽提试剂A，蛋白抽提抽提试剂B，蛋白抽提试剂C三种具有独特组分的缓冲液。
所有试剂采用PIPES缓冲系统。
通过实验，可以得到：细胞胞浆蛋白（其中含有含有可溶性的骨架蛋白）；细胞膜蛋白（其中包含细胞质膜蛋白和细胞器膜蛋白）；细胞核蛋白；其最后剩余的沉淀为难溶性的胞质骨架和纤维蛋白。
提取方法简单，可靠，快速。
获得的各种部分蛋白纯度高，可用于PAGE 电泳、Western Blot、免疫共沉淀、EMSA等后续研究。
该试剂盒所得到的蛋白溶液适合用Bradeford法（DBI生物产品：DBI-1045,1046）蛋白定量和BCA方法（DBI生物产品：DBI-1047,1048）进行定量。
II 试剂盒组分:III.蛋白质抽提步骤:A. 注意事项和试剂准备:•打开试剂盒后，于4度保存蛋白抽提液；于-20度保存蛋白酶抑制剂，样品缓冲液（6×）。
•使用前, 加10ul的蛋白酶抑制剂于1ml蛋白抽提试剂A中，使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix ——A)；加2ul的蛋白酶抑制剂于200ul蛋白抽提试剂B中，使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix ——B)；加2ul的蛋白酶抑制剂于200ul蛋白抽提试剂C中，使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix ——C)；试剂盒组分DBI-1021 DBI-1022 包装50 次100 次颜色蛋白抽提试剂A蛋白抽提试剂A-1蛋白抽提试剂B蛋白抽提试剂C混合型蛋白酶抑制剂(100×)SDS-PAGE 样品缓冲液(6×)50ml500ul50ml25ml1支5支100ml1000ul100ml50ml1支10支棕色棕色棕色棕色棕色绿色•在试验过程中确保抽提混合物始终保存在在碎冰中。
细胞中蛋白提取及含量测定
蛋白提取及含量测定试剂准备1.74mg/ml (10mmol/L)PMSFPMSF 0.174g异丙醇100ml溶解后，分装于1.5ml离心管中，－20℃保存单去污剂裂解液（50mmol/L Tris·HCl pH8.0，150mmol/L NaCl，1％TritonX－100，100μg/ml PMSF）：1mol/L Tris·HCl（pH8.0） 2.5mlNaCl 0.438gTritonX－100 0.5ml蒸馏水至50ml混匀后，4℃保存。
使用时，加入PMSF至终浓度为100μg/ml（0.87ml裂解液加入1.74mg/ml PMSF50μl）。
G250考马斯亮蓝溶液（测蛋白含量专用）考马斯亮蓝G250：100mg95％乙醇：50ml磷酸：100ml蒸馏水至1000ml配制时，先用乙醇溶解考马斯亮蓝染料，再加入磷酸和水，混匀后，用滤纸过滤，4℃保存。
0.15 mol/L NaClNaCl（MW58.44）0.877g蒸馏水至100 ml高温灭菌后，室温保存。
100mg/ml 牛血清白蛋白（BSA）BSA 0.1g0.15 mol/L NaCl 1ml溶解后，－20℃保存。
制作蛋白标准曲线时，用0.15 mol/L NaCl进行100倍稀释成1mg/ml，－20℃保存。
操作步骤：（一）蛋白样品制备（1）单层贴壁细胞总蛋白的提取：1、倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液（或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。
2、每瓶细胞加3ml 4℃预冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。
平放轻轻摇动1min 洗涤细胞，然后弃去洗液。
重复以上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液。
将PBS弃净后把培养瓶置于冰上。
3、按1ml裂解液加10 μl PMSF（100mM），摇匀置于冰上。
（PMSF要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合。
）4、每瓶细胞加400 μl含PMSF的裂解液，于冰上裂解30min，为使细胞充分裂解培养瓶要经常来回摇动。
细胞中蛋白提取及含量测定
蛋白提取及含量测定试剂准备1.74mg/ml (10mmol/L)PMSFPMSF 0.174g异丙醇100ml溶解后，分装于1.5ml离心管中，－20℃保存单去污剂裂解液（50mmol/L Tris·HCl pH8.0，150mmol/L NaCl，1％TritonX－100，100μg/ml PMSF）：1mol/L Tris·HCl（pH8.0） 2.5mlNaCl 0.438gTritonX－100 0.5ml蒸馏水至50ml混匀后，4℃保存。
使用时，加入PMSF至终浓度为100μg/ml（0.87ml裂解液加入1.74mg/ml PMSF50μl）。
G250考马斯亮蓝溶液（测蛋白含量专用）考马斯亮蓝G250：100mg95％乙醇：50ml磷酸：100ml蒸馏水至1000ml配制时，先用乙醇溶解考马斯亮蓝染料，再加入磷酸和水，混匀后，用滤纸过滤，4℃保存。
0.15 mol/L NaClNaCl（MW58.44）0.877g蒸馏水至100 ml高温灭菌后，室温保存。
100mg/ml 牛血清白蛋白（BSA）BSA 0.1g0.15 mol/L NaCl 1ml溶解后，－20℃保存。
制作蛋白标准曲线时，用0.15 mol/L NaCl进行100倍稀释成1mg/ml，－20℃保存。
操作步骤：（一）蛋白样品制备（1）单层贴壁细胞总蛋白的提取：1、倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液（或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。
2、每瓶细胞加3ml 4℃预冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。
平放轻轻摇动1min 洗涤细胞，然后弃去洗液。
重复以上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液。
将PBS弃净后把培养瓶置于冰上。
3、按1ml裂解液加10 μl PMSF（100mM），摇匀置于冰上。
（PMSF要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合。
）4、每瓶细胞加400 μl含PMSF的裂解液，于冰上裂解30min，为使细胞充分裂解培养瓶要经常来回摇动。
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Plant Nuclear Protein and Cytoplasmic Protein Extraction Kit
Catalog No：PH1602 Size： 50T | 100T Store at 2~8℃
简介
植物核蛋白和细胞质蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种植物细胞和各种实体植物组织，如叶片、根、种子等植物组织中提取核 蛋白和其它细胞质蛋白。提取过程简单方便，可在 1 小时内完成。制备的核蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取 的蛋白可用于 Western Blotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。 特点： 1、 使用方便。 2、 将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。 3、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。 4、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。 5、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含 6 种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异 性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。
注意事项
1. 本试剂盒仅供科学研究使用。 2. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。 3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。 4. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。 5. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。 6. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。 7. 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
使用参考
1. 提取液制备：每 500ul 预冷的蛋白提取液 A 中加入 2ul 蛋白酶抑制剂；每 200ul 蛋白提取液 B 中分别加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合 物，混匀后置冰上备用。 2. 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的 200mg 植物组织样本剪碎，采用以下一种方法处理：
A、 加入 500ul 提取液 A 后用匀浆机/匀浆器匀浆。 B、 置于研钵中用液氮研磨，研磨后加入 500μl 冷的提取液 A。 C、 加入 500ul 提取液 A 直接置冰上研磨。
组分
Component Extraction Reagent A（提取液 A） Plant Nuclear Protein Extraction Reagent B （植物细胞核蛋白提取液 B） Plant Cytoplasmic Protein Extraction Reagent C （植物胞质蛋白提取液 C） Phosphatase Inhibitor Cocktail （蛋白酶抑制剂混合物） 50 assay 25ML 10ML 100 assay 50ML 20ML
3. 高速涡旋振荡 5 秒，然后在 4℃，100×g 力条件下离心 1 分钟。 4. 收集上清，弃沉淀。 5. 将上清在 4℃，600×g 力条件下离心 1 分钟。 6. 收集沉淀，将上清移入另一干净的离心管。 7. 在沉淀中加入 100-200μl 冷的提取液 B，高速涡旋振荡 15 秒。 8. 置冰上 40 分钟，每隔 10 分钟高速涡旋振荡 15 秒。 9. 在 4℃，16000×g 条件下离心 10 分钟。 10. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到核蛋白。 11. 在步骤 6 中的上清中加入 50ul 胞质提取液 C，高速涡旋振荡 15 秒，充分混匀。 12. 置冰上 40 分钟，每隔 10 分钟高速涡旋振荡 15 秒。 13. 在 4℃，16000×g 条件下离心 10 分钟。 14. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到细胞质蛋白。 15. 将上述蛋白提取物定量（建议用 BCA 法进行蛋白定量）后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验（蛋白样品－80℃存放一 年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染）。
2.5ML5ML来自250ul500ul注意事项 蛋白提取液： 含多种有效成分，可以充分释放蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。 蛋白酶抑制剂混合物：包含 6 种独立的蛋白酶抑制剂。 1、蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。 2、如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。 自备试剂和仪器：1)移液器、吸头；2)离心机及离心管；3)涡旋振荡器 ；4)冰箱，冰盒