PH0324 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒实验操作手册

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细胞提取蛋白步骤

细胞提取蛋白步骤细胞提取蛋白是生物学研究中常用的实验方法之一，通过提取细胞内的蛋白质，可以进一步进行蛋白质分析、鉴定和功能研究。

下面将详细介绍细胞提取蛋白的步骤。

一、细胞培养和采集在进行细胞提取蛋白实验之前，首先需要进行细胞培养。

常用的细胞培养基有DMEM、RPMI-1640等，根据实验需要选择合适的培养基。

将细胞培养在含有适宜浓度的培养基中，放置在恒温培养箱中，保持适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度。

当细胞生长到适当密度时，可以进行下一步的细胞采集。

二、细胞裂解将培养好的细胞放入离心管中，用PBS或生理盐水进行洗涤，去除细胞外的干扰物。

然后加入裂解缓冲液，常用的裂解缓冲液有RIPA 缓冲液、NP-40缓冲液等。

裂解缓冲液中含有蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂等，可以保护蛋白质不被降解。

将细胞裂解液置于冰上，用超声波仪或搅拌器进行充分裂解，直至细胞完全破碎。

三、离心分离将裂解后的细胞溶液离心，以去除细胞碎片、细胞核和细胞膜等残渣。

离心分离的条件根据实验需要进行调整，一般在12000×g的条件下离心10-15分钟。

离心后，上清液即为含有目标蛋白质的提取液。

四、蛋白质浓度测定使用BCA法、Lowry法或Bradford法等方法，测定蛋白质的浓度。

根据实验需要，可以使用不同的测定方法。

五、蛋白质保存和分析将提取的蛋白质分装到离心管中，并存储在-80摄氏度的冰箱中。

根据实验需要，可以进行蛋白质的分析和鉴定。

常用的方法有SDS-PAGE电泳、Western blotting、质谱分析等。

这些方法可以用来确定蛋白质的分子量、表达量以及与其他蛋白质的相互作用等。

细胞提取蛋白是一项复杂的实验技术，需要注意以下几点：1. 实验前要准备好所需的试剂和设备，确保实验过程的顺利进行。

2. 在细胞裂解过程中，要注意避免蛋白质的降解和氧化，可以添加蛋白酶抑制剂和抗氧化剂等。

3. 细胞裂解后的提取液要尽量避免冻融，以免对蛋白质的活性造成影响。

核与胞质蛋白提取方法

细胞质与细胞核蛋白提取方法
注意：红色斜体字成分可用蛋白酶抑制剂混合物代替，使用前加入
方法如下：
1.将细胞收集到EP管中，离心（4000r/min，5min，4度)。

2.用PBS洗三次，离心同上，弃上清。

3.加入100微升缓冲液A，冰上孵育10min，离心（14000r/min，1min），弃上清。

4.将沉淀重悬于60微升缓冲液B中，混匀，冰上30min，离心（14000r/min，15min，0度),收集上清，弃沉淀。

（核蛋白提取后可用裂解液A透析2h，合并用于IP；或用其他溶液稀释后用浓缩离心管替换溶液后用于IP或其他实验）
裂解液A的作用主要用于释放胞浆蛋白和膜蛋白，裂解液B用于释放核蛋白，NP-40既是一种表面活性剂又是一种去垢剂，它的作用是既可破坏细胞膜（较温和），又可结合释出的蛋白防止沉淀，所以通过第一步离心去上清后大部分胞浆蛋白和膜蛋白可去掉。

核蛋白提取试剂盒说明书

核蛋白提取试剂盒说明书货号：R0050规格：50T/100T 产品内容：保存：核/浆蛋白抽提试剂2-8℃保存，PMSF 于-20℃保存。

产品简介：本试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。

整个过程只需约60分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。

得到的蛋白可以用于Western blot 等实验。

本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。

然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。

本试剂盒可以抽提50/100个样品（每个样品约2×106个Hela 细胞或40mg 组织）。

操作方法（仅供参考）：*裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

一、对于体外培养细胞：1．根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF ，使PMSF 的最终浓度为1mM 。

PMSF 需现用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸，可以在两种蛋白抽提液中加入DTT 至终浓度0.5mM 。

2．对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS 洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用EDTA 消化后吹打下细胞（最好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白）。

500g 离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。

3．对于悬浮细胞：用PBS 洗一遍，500g 离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。

4．每20μL 细胞沉淀加入200μL 浆蛋白抽提试剂（2×106个细胞沉淀的体积约20μL 或40mg ）。

5．用移液器吹打或高速涡旋15秒（可适当延长），必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。

细胞沉淀分散不完全会导致蛋白产量降低。

6．冰浴10分钟。

7．最高转速剧烈涡旋10秒，4℃12000～16000g 离心10分钟。

8．上清即为抽提得到的细胞浆蛋白，立即吸取上清至预冷的样品管中备用，进行后续的PAGE 、Western 等实验，但蛋白浓度较低，可根据需要进行相应浓缩。

凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒

凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒Cat Number：For Research Use OnlyStore at -20℃for one yearExpire date：一、试剂盒说明本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和/或胞浆蛋白，提取制备过程简便。

制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性，并且纯度较高。

提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、酶活性测定等后续蛋白质研究。

二、试剂盒组份组份KGP150 （50 test）KGP1100 （100储存温度test）Buffer A 25 mL 25 mL ×24℃Buffer B 1.5 mL 3．0 mL 4℃Buffer C 12.5 mL 25 mL 4℃DTT 50μL100μL-20℃蛋白酶抑制剂250μL500μL-20℃PMSF（100mM）400μL800μL-20℃三、操作步骤Ⅰ 实体组织蛋白的提取1、组织样本，将组织剪切成小块，加入适量的冰冷PBS均浆后，静置5 min ，弃沉淀，小心吸取上清转移至另一离心管中；2、上清4℃离心500×g，3 min，弃上清，估计细胞压积PCV（离心后的紧实细胞体积）；3、每20μL细胞压积中，加入200μL预冷的Buffer A【使用前每mL BufferA加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂】，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上10～15min；4、加入11μL冷Buffer B，最大转速涡旋剧烈振荡5s，放置冰上1min；5、再次最大转速涡旋剧烈振荡5s后，4℃离心，16000×g,5min；6、尽快将上清转入另一预冷的洁净微量离心管，置于冰上，即得胞浆蛋白；7、在离心沉淀物（细胞核）中加入100μL预冷的Buffer C (使用前每mLBuffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂)，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上40min，每间隔10 min涡旋剧烈振荡15 seconds；8、4℃离心，16000×g,,10min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管，即得核蛋白；9、上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量（Braford法或BCA法），分装并保存于-80℃，避免反复冻融。

P0033 细胞膜蛋白与细胞浆蛋白提取试剂盒

细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒产品简介：碧云天的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便地从培养细胞或组织中抽提细胞膜蛋白和细胞浆蛋白的方法。

抽提的膜蛋白不仅包括质膜上的膜蛋白，也包括线粒体膜、内质网膜和高尔基体膜等上的膜蛋白。

本试剂盒通过匀浆适度破碎细胞，经低速离心去除细胞核和少数未破碎的细胞产生的沉淀，随后取上清高速离心获得细胞膜沉淀和含有细胞浆蛋白的上清，然后通过优化的膜蛋白抽提试剂从沉淀中抽提获取膜蛋白。

约90分钟即可完成培养细胞或组织的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白的分离和抽提。

抽提得到的蛋白可以用于SDS-PAGE，Western、酶活性测定等后续实验。

膜蛋白抽提试剂中含有蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂和EDTA等，后续不适合用于蛋白酶、磷酸酯酶等受这些抑制剂影响的酶的活性测定，但抽提获得的膜蛋白或细胞浆蛋白适合用于检测蛋白的磷酸化水平。

本试剂盒按照本说明书的操作步骤可以抽提100个细胞或组织样品。

保存条件：-20℃保存，一年有效。

注意事项：需自备PMSF。

PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。

PMSF(ST506)可以向碧云天订购。

使用本试剂盒抽提到的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白均可直接用碧云天生产的BCA法蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)测定蛋白浓度。

抽提获得的细胞膜蛋白不适合用Bradford法测定蛋白浓度。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：1.准备试剂：室温融解并混匀膜蛋白抽提试剂A和B，融解后立即置于冰浴上。

取适量的膜蛋白抽提试剂A和B备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

2.准备细胞或组织样品：a. 对于细胞(1) 收集细胞对于贴壁细胞：培养约2000-5000万细胞，用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞或用含有EDTA但不含胰酶的细胞消化液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。

蛋白组分抽提试剂盒说明书

Overview∙Description∙References∙Product Information∙Applications∙Biological Information∙Safety Information∙Product Usage Statements∙Storage and Shipping Information∙Supplemental Information∙Prix & DisponibilitéPrix & DisponibilitéRéférence DisponibilitéConditionnement QtéPrix Quantité539790-1KIT En stockContacterle ServiceClients 1kitÀ la validationde lacommandePlusd'informations—AjouterauxfavorisAjouter au panier DescriptionOverviewFast and reproducible extraction of subcellular proteomes from mammalian cellsProteoExtract® Subcellular Proteome Extraction Kit (S-PEK) is designed for fast andreproducible extraction of subcellular proteomes from adherent and suspension-grownmammalian cells. The S-PEK takes advantage of the different solubilities of certain subcecompartments in the four selected reagents. In the case of adherent cells, the procedure isperformed directly in the tissue culture dish without the need for cell removal. Cells or theparts of the cells remain attached to the plate during sequential extraction of subcellularcompartments, until the appropriate extraction reagent is used. Thus, the early destructionthe cellular structure by enzymatic or mechanical detachment of cells from the tissue cultuplate and any mixing of different subcellular compartments is prevented. Forsuspension-grown cells, extraction starts with gentle sedimentation and washing of the celThe stepwise extraction delivers four distinct protein fractions from one sample:∙Cytosolic fraction (F1)∙Membrane/organelle protein fraction (F2)∙Nucleic protein fraction (F3)∙Cytoskeletal fraction (F4)Proteins are obtained in the native state making the S-PEK suitable for many downstreamapplications such as 1D and 2D gel electrophoresis, immunoblotting, enzyme activity assaand protein microarrays.Sample size: 3-5x106or 25-50 mg tissue.CatalogueNumber539790BrandFamilyCalbiochem®Synonyms S-PEK KitFeatures and benefits ∙Stepwise extraction resulting in four distinct subcellular proteomes from one sample ∙Highly reproducible∙No ultracentrifugation steps∙Fast—needs just 2 hours with 45 minutes hands-on time∙Produces proteins suitable for functional studiesApplicationDataA:Adherent SAOS cells were extracted according to the Detailed ProtocolSubcellular Extraction of Proteins From Adherent Cells as outlined above. Imi-iv show the morphology of the cells before and after each extraction s(200-fold enlarged). The SAOS cells remained attached throughout the extracprocedure. B:An aliquot of each fraction from A were subjected to SDS-analysis (F1-F4 = fractions 1-4). The data demonstrate clear differences inprotein banding patterns among the 4 fractions. C:Aliquots of each fracfrom A were separated by SDS-PAGE and transferred to PVD membrane for blotwith the indicated antibodies. For c-Fos, the fractions were subjected timmunoprecipitation, prior to Western blotting, to enrich for any c-Fos prein each fraction. The data demonstrate that each marker protein is specificenriched within the appropriate fraction.A431 cel ls were stimulated with 0.2 µg/ml TNF-αfor the indicated times. At end of each induction period the cells were extracted as outlined in the Deta Protocol for Subcellular Extraction of Proteins from Adherent Cells. The prot from an aliquot of each fraction were separated by SDS-PAGE and transferre PVD membrane for Western blot analysis using an antibody specific for NF-The data indicate that there is measurable translocation of NF-κ B from cytoplasm to the nucleas as early as 5 min after TNF-α stimulation.*Tested on rat liver and bovine liver tissue.。

胞浆蛋白—核蛋白抽提试剂盒说明书

胞浆蛋白—核蛋白抽提试剂盒产品编号产品名称包装SINP001 胞浆－核蛋白抽提试剂盒50×产品简介：细胞核和细胞浆目前成为研究细胞组分的两个热点，获得高浓度的细胞核蛋白和细胞浆蛋白成为得到好的研究结果的重要实验过程。

本试剂盒主要原理是在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，离心得到细胞核沉淀。

最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。

本试剂盒是本公司非放射性EMSA试剂盒（cat; SIDET001, SIDET003, SIDET004,）实验成功的重要部分，经BCA测定24cm2贴壁细胞(或50ml规格培养瓶养的悬浮细胞)抽提物，核蛋白浓度约为 2.5ug/ul或更高。

抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。

本试剂盒可足够您进行50次抽提操作！包装清单：试剂包装总量5X Buffer A 1瓶35ml/瓶2X Buffer B1支 1.5ml/支Solution I（溶液I）1支 1.75ml/支Solution II（溶液II）1支 1.75ml/支Solution III（溶液III）1支 1.5ml/支PMSF Solution 1支0.85ml/支User Manual (说明书)1份1份/Kit保存温度： 4℃保存。

Ⅰ.准备抽提试剂：按照下列方法制备胞浆－核蛋白抽提液：1.制备3ml胞浆蛋白裂解液I ：试剂体积5X Buffer A0.6mlSolution I（溶液I）30ulSolution II（溶液II）30ulPMSF Solution 15uldd-H2O 2.325ml总体积 3.0ml注：PMSF Solution须在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入。

2.制备1.02ml胞浆蛋白裂解液II：试剂体积Solution III（溶液III）20ul胞浆蛋白裂解液I 1.0ml总体积 1.02ml3.制备1ml核裂解液：试剂体积2X Buffer B25ulSolution I（溶液I）0.5ulSolution II（溶液II）0.5ulPMSF Solution0.25uldd-H2O23.75ul总体积 50ul注：PMSF Solution须在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入。

胞浆蛋白核蛋白膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞)

胞浆蛋白/核蛋白/膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞) (Catalog #DBI-1021 ; DBI-1022; Store kit at 4℃)描述:本试剂盒提供了蛋白抽提试剂A，蛋白抽提抽提试剂B，蛋白抽提试剂C三种具有独特组分的缓冲液。

所有试剂采用PIPES缓冲系统。

通过实验，可以得到：细胞胞浆蛋白（其中含有含有可溶性的骨架蛋白）；细胞膜蛋白（其中包含细胞质膜蛋白和细胞器膜蛋白）；细胞核蛋白；其最后剩余的沉淀为难溶性的胞质骨架和纤维蛋白。

提取方法简单，可靠，快速。

获得的各种部分蛋白纯度高，可用于PAGE 电泳、Western Blot、免疫共沉淀、EMSA等后续研究。

该试剂盒所得到的蛋白溶液适合用Bradeford法（DBI生物产品：DBI-1045,1046）蛋白定量和BCA方法（DBI生物产品：DBI-1047,1048）进行定量。

II 试剂盒组分:III.蛋白质抽提步骤:A. 注意事项和试剂准备:•打开试剂盒后，于4度保存蛋白抽提液；于-20度保存蛋白酶抑制剂，样品缓冲液（6×）。

•使用前, 加10ul的蛋白酶抑制剂于1ml蛋白抽提试剂A中，使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix ——A)；加2ul的蛋白酶抑制剂于200ul蛋白抽提试剂B中，使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix ——B)；加2ul的蛋白酶抑制剂于200ul蛋白抽提试剂C中，使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix ——C)；试剂盒组分DBI-1021 DBI-1022 包装50 次100 次颜色蛋白抽提试剂A蛋白抽提试剂A-1蛋白抽提试剂B蛋白抽提试剂C混合型蛋白酶抑制剂(100×)SDS-PAGE 样品缓冲液(6×)50ml500ul50ml25ml1支5支100ml1000ul100ml50ml1支10支棕色棕色棕色棕色棕色绿色•在试验过程中确保抽提混合物始终保存在在碎冰中。

蛋白提取实验步骤

蛋白提取实验步骤：1、细胞总蛋白提取A、对于悬浮细胞: 离心收集细胞，每106细胞加250 ul RIPA （在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂），振荡。

如果需要提高蛋白浓度，可以适当减少细胞总蛋白提取试剂体积。

B、对于贴壁细胞:a、用TBS冲洗细胞2-3次。

最后一次彻底吸干残留液。

b、加入适当体积的 RIPA（使用前数分内加入蛋白酶抑制剂）于培养板、瓶内3-5分钟。

期间反复晃动培养板、瓶，使试剂与细胞充分接触。

c、用细胞刮刀将细胞及试剂刮下，收集到1.5ml离心管中。

C、冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。

D、12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。

2、组织蛋白提取：A、组织块用冷TBS洗涤2-3次，去除血污，剪成小块置于匀浆器。

加入10倍组织体积本试剂（使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂）冰上彻底匀浆。

如果需要提高蛋白浓度，可以适量减少该试剂体积。

B、将匀浆液转移至1.5ml离心管中，振荡。

冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。

C、12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。

1、组织尽可能新鲜，若不能及时提蛋白，组织标本应保存在-80℃冰箱，并避免反复冻融。

2、全程必须在冰上进行，避免蛋白降解。

3、蛋白酶抑制剂在水溶液中不稳定，需在RIPA使用前数分钟加入蛋白酶抑制剂。

1 / 24、裂解过程中如有溶液粘稠现象可用移液器（200μl）反复吹打，或再加入适量裂解液以保证充分裂解。

5、总蛋白溶液不稳定（蛋白酶依旧有活性）可在-80℃短时间保存，建议立即加入蛋白上样缓冲液变性后与-20℃保存，避免反复冻融。

-----精心整理，希望对您有所帮助!。

胞质和线粒体蛋白质提取试剂盒使用说明

胞质和线粒体蛋白质提取试剂盒使用说明产品编号：C7610包装规格：50Assays产品组成:胞质提取Buffer55mL线粒体溶解Buffer5mL蛋白酶抑制剂60μL磷酸酶抑制剂300μLDTT60μL产品简介胞质和线粒体蛋白质提取试剂盒提供独特的组份可以提取动物细胞及组织中的胞质蛋白和线粒体蛋白。

该方法先将完整的有活性的线粒体和胞质蛋白分离，再处理后获得高纯度的有活性胞质蛋白和变性的线粒体蛋白，不需要超速度离心，方法简单，可靠，快速。

可用于1D，2D电泳，Western Blot，Elisa等蛋白质实验。

提取的完整线粒体也可以经过活性溶解液处理，再用于免疫共沉淀，凋亡，细胞信号传导，能量代谢等生理学研究，或进行线粒体DNA提取，用于基因组学后续研究。

本试剂盒可以每次从1×107个培养细胞或200mg组织中提取所需要的蛋白质，可以使用50次。

产品特点1.整个实验过程大约只需要1小时左右。

2.可以从50×107个培养细胞或50×200mg组织中提取所需要的蛋白质或活性线粒体。

3.活性线粒体的提取量高，高效线粒体溶解Buffer提取的蛋白质，可以用于线粒体蛋白质组学研究。

4.不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。

运输和保存条件常温下运输，收到后将线粒体溶解Buffer、DTT和蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂于-20℃保存，胞质提取Buffer于2-8℃保存，保质期1年。

操作步骤1.收集不少于1×107细胞，用冷PBS（pH7.4）洗涤细胞两次，每次3000rpm（800g）离心5min；组织样本（200mg）尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，于冰上剪碎，再用冷PBS（pH7.4）洗涤三次。

2.在上述细胞或组织样本中加入1mL胞质提取Buffer（使用前每mL胞质提取Buffer加入1μL蛋白酶抑制剂，5μL磷酸酶抑制剂和1μL DTT），置玻璃匀浆器冰上均质30～50次，置于冰上冷却。

细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒

使用说明：
1. 准备溶液：室温融解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上，混匀。取适当量的细胞浆蛋白抽提试剂A备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。取适当量的细胞核蛋白抽提试剂备用，在使用前数分钟内加入 PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。
6. Chen G, Shen X, Yao J, Chen F, Lin X, Qiao Y, You T, Lin F, Fang X, Zou X, Lin L. Ablation of NF-kappaB expression by small interference RNA prevents the dysfunction of human umbilical vein endothelial cells induced by high glucose. Endocrine. 2009 Feb;35(1):63-74. Epub 2008 Nov 8.
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产品名称细胞浆蛋白抽提试剂A 细胞浆蛋白抽提试剂B 细胞核蛋白抽提试剂
说明书
包装 10ml 0.5ml 2.5ml 1份
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。PMSF(ST506) 可以向碧云天订购。
5. Lu J, Yue BH, Wang CM, Bai ST, Sheng GY. Efficacy of RNAi-induced down-regulation of wild-type FLT3 on NF-kB pathway in THP-1 cell line. Life Science Journal. 2008;Vol.5,No.2.

细胞核蛋白提取技巧

细胞核蛋白提取技巧
细胞核蛋白提取是一项重要的实验技术，用于研究细胞内的核蛋白结构和功能。

以下是一种常用的细胞核蛋白提取技巧：
1.细胞培养和收获：首先，将所需细胞培养至适当的密度，
并在培养基中加入适当的培养条件。

接下来，使用适当的
方法（例如离心或胶原酶消化）将细胞收获。

2.细胞裂解：将收获的细胞用适当的细胞裂解缓冲液（例如
低盐缓冲液）裂解。

可以通过机械方法（如均质器或声波
处理器）或化学方法（如洗涤剂或酶）来裂解细胞。

3.细胞核分离：通过离心，将裂解的细胞分为上清液和沉淀。

上清液中含有细胞质蛋白，而沉淀中主要包含细胞核。

4.细胞核裂解：将细胞核沉淀用适当的细胞核裂解缓冲液
（例如高盐缓冲液）进行裂解。

同样，可以使用机械或化
学方法来裂解细胞核。

5.清除细胞核残渣：通过离心等方法，去除裂解细胞核残渣，
以获得纯净的细胞核蛋白上清液。

6.蛋白浓缩：将获得的细胞核蛋白上清液进行浓缩，以获得
足够的蛋白量。

常用的方法包括酒精沉淀、有机溶剂沉淀、离心滤膜等。

7.蛋白质定量：使用合适的蛋白质定量方法（如Lowry法、
Bradford法或BCA法）对细胞核蛋白进行定量。

8.蛋白存储：将浓缩的细胞核蛋白分装并冻存于-80°C的冰
箱中，以备后续实验使用。

以上是一种常用的细胞核蛋白提取技巧，具体的实验流程和步骤会因实验目的和细胞类型的不同而略有差异。

5.提蛋白(胞浆蛋白)步骤

1、准备工作：照台子、预冷台面、预冷离心机，准备好PBS、细胞裂解液、PMSF，
准备好1.5EP管、离心管、离心管盖。

2、换好实验服，喷酒精，从培养箱中取出培养瓶（细胞量为1200万，共10ml），
观察长势，放入台子中。

3、轻轻晃动培养瓶（不要碰到其他壁面，因淋巴细胞培养的时候可能会还有其
他杂细胞，其他细胞可能会贴壁生长），用1000的枪吸取培养瓶内液体至离心管中。

4、离心（1500r/min，10min）分离细胞与培养液
5、弃上清，用1000ul的PBS洗沉淀，转移至1.5EP中
6、高速低温离心机，离心（600g，5min，4℃）洗净细胞
同时：将PMSF按终浓度为1mM加入到细胞裂解液中（1000ul的裂解液加10ul 的PMSF）
7、慢弃上清，按照比例加入含有PMSF的细胞裂解液（本次实验为1200万细胞
加500ul液体），轻弹使细胞充分裂解（无明显沉淀）
8、高速低温离心机离心分离，离心（12000g，5min，4℃）
9、吸取上清，即为所提取的蛋白，备用。

保存条件：-80℃。

胞质蛋白或核蛋白提取方法

胞质蛋白或核蛋白提取方法实验目的从细胞和动物组织制备核蛋白和胞浆蛋白。

实验试剂核蛋白/胞质蛋白提取试剂盒。

实验步骤（一）细胞蛋白提取（1）取5-10×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3 min，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

（2）用冷PBS洗涤细胞2次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

（3）每20 μL冷的Buffer A，2 μL蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15 s，置冰上10 min。

（4）再次高速涡旋振荡5 s，然后在4℃，16000×g条件下离心5 min。

（5）快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。

（6）在沉淀中加入200 μL冷的Buffer B，2 μL蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15 s。

（7）置冰上40 min，每隔10 min高速涡旋振荡15 s。

（8）在4℃，16000×g条件下离心10 min。

（9）快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。

（二）组织蛋白提取（1）取适量组织样本剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），置冰上5 min，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。

（2）在4℃，500×g条件下离心2-3 min，弃上清。

（3）按照细胞蛋白的提取方法的第三步骤往下操作即可。

（4）上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。

注意事项（1）实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。

（2）整个过程须保持样品处于低温状态。

细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒说明书

¾ 本试剂盒通过匀浆适度破碎细胞，经低速离心去除细胞核和少数未破碎的细胞产生的沉淀，随后取上清高速离心获得细胞膜沉淀和含有细胞浆蛋白的上清，然后通过优化的膜蛋白抽提试剂从沉淀中抽提获取膜蛋白。
¾ 约90分钟即可完成培养细胞或组织的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白的分离和抽提。抽提得到的蛋白可以用于SDS-PAGE， Western、酶活性测定等后续实验。
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产品名称膜蛋白抽试剂A 膜蛋白抽提试剂B
说明书
包装 100ml 30ml
1份
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项： ¾ 需自备 PMSF 。 PMSF 一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。
PMSF(ST506)可以向碧云天订购。 ¾ 使用本试剂盒抽提到的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白均可直接用碧云天生产的 BCA 法蛋白浓度测定试剂盒
2. 准备细胞或组织样品： a. 对于细胞 (1) 收集细胞对于贴壁细胞：培养约2000-5000万细胞，用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞或用含有EDTA但不含胰酶的细胞消化液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的膜蛋白。对于悬浮细胞：培养约2000-5000万细胞，直接离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。 (2) 洗涤细胞：用适量冰浴预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀，取少量细胞用于计数，剩余细胞4℃，600g离心5分钟沉淀细胞。弃上清，随后4℃，600g离心1分钟，以沉淀离心管管壁上的残留液体并进一步沉淀细胞，尽最大努力吸尽残留液体。 (3) 细胞预处理：把1毫升临用前添加了PMSF的膜蛋白抽提试剂A加入至2000-5000万细胞中，轻轻并充分悬浮细胞，冰浴放置10-15分钟。 b. 对于组织：取约100毫克组织，用剪刀尽量小心剪切成细小的组织碎片。加入1毫升临用前添加了PMSF的膜蛋白抽提试剂A，轻轻悬浮组织碎片，冰浴放置10-15分钟。注：如果组织样品比较少，也可以使用更少的组织量，例如30-50mg，后续试剂的用量及操作步骤不变；组织用量较少时，最后获得的膜蛋白也较少。

核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒

凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒Cat Number：For Research Use OnlyStore at -20℃ for one yearExpire date：一、试剂盒说明本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和/或胞浆蛋白，提取制备过程简便。

制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性，并且纯度较高。

提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、酶活性测定等后续蛋白质研究。

二、试剂盒组份组份 KGP150 （50 test） KGP1100 （100 test）储存温度Buffer A 25 mL 25 mL ×2 4℃Buffer B 1.5 mL 3．0 mL 4℃Buffer C 12.5 mL 25 mL 4℃DTT 50μL 100μL -20℃蛋白酶抑制剂 250μL 500μL -20℃PMSF（100mM）400μL 800μL -20℃三、操作步骤Ⅰ 实体组织蛋白的提取1、组织样本，将组织剪切成小块，加入适量的冰冷PBS均浆后，静置5 min ，弃沉淀，小心吸取上清转移至另一离心管中；2、上清4℃离心500×g，3 min，弃上清，估计细胞压积PCV（离心后的紧实细胞体积）；3、每20μL细胞压积中，加入200μL预冷的Buffer A【使用前每mL Buffer A加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂】，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上10～15min；4、加入11μL冷Buffer B，最大转速涡旋剧烈振荡5s，放置冰上1min；5、再次最大转速涡旋剧烈振荡5s后， 4℃离心，16000×g,5min；6、尽快将上清转入另一预冷的洁净微量离心管，置于冰上，即得胞浆蛋白；7、在离心沉淀物（细胞核）中加入100μL预冷的Buffer C (使用前每mL Buffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂)，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上40min，每间隔10 min涡旋剧烈振荡15 seconds；8、4℃离心，16000×g,,10min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管，即得核蛋白；9、上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量（Braford法或BCA法），分装并保存于-80℃，避免反复冻融。

细胞核提取试剂盒使用说明

细胞核提取试剂盒使用说明货号：SN0020规格：50T/100T保存：短期使用可4℃储存，长期保存请置于-20℃或-70℃。

产品内容：组份SN0020-50SN0020-100Lysis Buffer0mL200mLReagent A 2.5mL5mLMedium Buffer25mL50mLStore Buffer5mL10mL产品简介：细胞核提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的细胞核。

适合于动物软组织（肝或脑组织）和硬组织（肌肉）以及培养细胞的细胞核的制备。

其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。

产品不含污染性蛋白酶和核酶，性能稳定。

操作步骤：1.样本处理a.组织匀浆：称取100~200mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。

加入 1.0mL预冷的Lysis Buffer，再加入50ulLReagent A，0℃冰浴中上下研磨组织20次；有未研磨开的组织，可用双层纱布过滤。

b.培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800g离心5~10min收集细胞，计数。

每次提取需要5×107个细胞，加入 1.0mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞，再加入50ul Reagent A，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨细胞20~30次。

2.将组织或细胞匀浆物转移到 1.5ml离心管中，4℃，700g离心5min。

细胞核沉淀在收集管底部，弃上清。

加入0.5mL冰预冷的Lysis Buffer重悬沉淀。

3.取另一新离心管内加入0.5mL Medium Buffer，吸取上一步的重悬液，沿管壁小心地加入到此离心管中，置于Medium Buffer之上，4℃，700g离心5min。

细胞核沉淀在管底。

4.弃上清，在细胞核沉淀中加入0.5mL Lysis Buffer重悬细胞核沉淀，1000g离心10min，弃上清，得到较纯的细胞核沉淀。

全蛋白抽提试剂盒

凯基全蛋白提取试剂盒Cat Number：For Research Use OnlyStore at 4℃ for one yearExpire date：一、试剂盒说明本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白，用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效。

获得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂。

二、试剂盒组份组份 KGP250 （50 tests） KGP2100（100 tests）储存温度 Lysis Buffer 50 mL 100 mL 4℃磷酸酶抑制剂 250 μL 500μL -20℃蛋白酶抑制剂 50 μL 100 μL -20℃PMSF（100mM）500 μL 1000 μL -20℃L三、操作步骤Ⅰ 实体组织蛋白的提取1．在每1mL 冷Lysis Buffer加入5 μL磷酸酶抑制剂， 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。

冰上保存数分钟待用。

2．每100mg固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；3．取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；4．取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；5．分装保存于-70℃,避免反复冻融。

Ⅱ 培养细胞蛋白提取1．贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；2．悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培养板的冷PBS，1000转/分离心5 min洗两次；3．在每 1mL冷 Lysis Buffer加入5μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF，混匀。

BIOG核酸提取试剂盒操作步骤说明

BIOG核酸提取试剂盒操作步骤说明步骤一：准备工作1.1核酸提取试剂盒应存放在4℃下，在使用前将其置于室温下恢复至常温。

1.2检查试剂盒包装是否完好，如有损坏应立即更换，避免试剂受污染。

1.3在操作前，准备好所需的所有材料和试剂，确保严格遵守实验室操作规范。

步骤二：准备样品2.1根据需要提取核酸的样品类型，选择适当的样品收集和保存方法。

2.2样品应储存在干燥、暗处，并确保避免与其他试剂的污染。

如果需要保存较长时间的样品，应将其置于冷冻设备中。

步骤三：样品处理3.1取出待处理的样品，根据所需的核酸类型，选择适当的处理方法，如细胞培养、脱落细胞、血液等。

3.2 样品处理过程中，应注意避免任何可能导致核酸降解和污染的步骤，如使用RNase-free试剂、避免RNA酶等。

步骤四：核酸提取4.1取出BIOG核酸提取试剂盒，按照使用说明书上的方法，使用适量的核酸提取试剂。

4.2依据样品的类型和体积，将所需的样品转移到离心管中，加入适量的核酸提取试剂。

4.3使用离心机将混合物离心至样品沉淀到离心管的底部。

4.4轻轻倾倒剩余溶液，丢弃上清液。

4.5加入适量的洗涤缓冲液，混匀后离心，将上清液倒掉。

4.6重复上述洗涤步骤2-3次，确保核酸质量的纯净度。

4.7加入适量的洗涤缓冲液，离心并将上清液倒掉。

4.8脱水：将离心管处于开盖状态，放置在70℃烘箱中，使其脱水。

4.9添加适量的稳定剂，溶解核酸。

步骤五：核酸质量检测5.1 取少量核酸样品，使用NanoDrop光谱仪或PCR检测仪等设备测量核酸浓度和纯度。

5.2检测核酸是否完整且无外源性污染，如DNA断裂、RNA酶污染、DNA降解等。

步骤六：存储和使用6.1核酸提取完成后，可以根据需求将其保存在干燥、暗处，并确保避免与其他试剂的污染。

6.2存储期限根据试剂盒的规格和要求来决定，应严格遵守试剂盒的说明书中的存储和使用方法。

这些即是关于BIOG核酸提取试剂盒的操作步骤的详细说明，使用者可根据实际需求和试剂盒的说明书进行操作。