鱼腥草的抗补体活性成分及其药理作用

鱼腥草的抗补体活性成分及其药理作用

补体系统是人体重要的免疫防御系统之一。补体系统的正常激活在消灭外来微生物、清除机体内损伤或死亡的细胞和组织、维持机体的平衡中起着重要作用,然而该系统过度激活会造成人体自身正常组织的损伤,导致炎症性疾病,引起血

管扩张,增加血管通透性,使局部或全身发生水肿,严重威胁人们的健康。

清热解毒药的抗炎特点恰恰就是抑制炎症早期的毛细血管通透性亢进、渗出、水肿等。清热解毒类药物在防治重症非典型肺炎(SARS)方面发挥了重要作用；据报道,补体系统激活的超敏反应也参与了SARS的发病机制。

因此,可以推论,清热解毒药的作用之一很可能就是通过抑制补体的过度激

活来缓解急性感染性疾病的炎症和发热症状。本文从具有体外抗补体活性的传统清热解毒中药鱼腥草入手,确定了鱼腥草的抗补体活性部位,明确了鱼腥草的小

分子抗补体活性成分及部分活性化合物的作用靶点,并以体内模型验证了活性部位鱼腥草总多糖和另一清热解毒中药新疆紫草总多糖对补体相关疾病的防治作用,同时对抗补体活性测定方法应用于中药质量评价进行了探讨。

主要研究结果如下：1.鱼腥草抗补体活性部位的确定通过评价各批次补体的效价,确定临界补体浓度,采用体外细胞溶血法考察了中药鱼腥草不同部位的抗

补体活性。结果发现鱼腥草总多糖(CH50=0.092±0.020 mg/ml, AP50=0.221±0.017 mg/ml)和乙酸乙酯萃取物(CH50=0.378±0.029 mg/ml, AP50=0.571±

0.061 mg/ml)抗补体活性较好(n=3)；强于石油醚萃取物(经典途径和旁路途径高浓度促进溶血),和正丁醇部位(CH50=1.324±0.102 mg/ml, AP50=2.084±0.147 mg/ml) (n= 3)。

2.鱼腥草乙酸乙酯部位抗补体活性成分从鱼腥草乙酸乙酯萃取部位进行化

学成分分离,共计分离到26个化合物,鉴定了其中23个化合物,包括7个黄酮：槲皮苷(quercitrin,1),槲皮素(quercetin,2),阿福豆苷(ifzelin,3),异槲皮苷(isoquercitrin,4),洋芹素(apigenin,5),金丝桃苷(hyperosdie,6),野黄芩素(scutellarein,7); 6个生物碱：马兜铃酸内酰胺B(aristolactam B,8),头花千金藤二酮B(cepharadione B,9),胡椒内酰胺A(piperolactam A,10),去甲基头花千金藤二酮(norcepharadione,11),马兜铃酸内酰胺A Ⅱ (aristolactam A Ⅱ,12),4,5-dioxodehydroasmilobine (13);1个单萜：vomifoliol (14);1个木脂素：表恩施新甲醚(epishicine methyl ether,15);1个香豆素：七叶内酯(esculetin,16); 7个苯酚类衍生物：3,4-二羟基苯甲酸

(3,4-dihydro-xybenzoic acid,17),香草醛(vanillin,18),对苯酚

(1,4-benzendiol,19),对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid,20),3,4-二羟基苯甲醛(3,4-dihydroxy benzaldehyde,21),对二甲氧基苯

(1,4-dimethoxybenzene,22),2,5-二甲氧基间苯二酚

(2,5-dimethoxyresorcinol,23) 。化合物7,12,13,15,16,19-23为首次从该植物中分离得到。

从经典途径和旁路途径考察23个化合物的抗补体活性,结果显示黄酮类化合物和部分生物碱是其发挥抗补体活性的主要成分。其中,阿福豆苷(3)在经典途径和旁路途径对补体都有很好的抑制作用(CH50值和AP50分别为0.125±0.242 mg/ml和0.242±0.004mg/ml)。

另一些黄酮类化合物也具有较好的抗补体活性：槲皮苷(1, CH50=0.246±0.013 mg/ml和AP50=0.439±0.031 mg/ml),槲皮素(2, CH50=0.157±0.006 mg/ml和AP50=0.323±0.015 mg/ml),以及异槲皮苷(4,CH50=0.260±0.242

mg/ml和AP50=0.511±0.004 mg/ml) 。初步的作用机制研究表明,槲皮苷、阿福豆苷和异槲皮苷作用于所有检测组分(C1q,C2,C3,C4, C5和C9),槲皮素选择性作用于C1q,C2,C5和C9,另一具有较好抗补体活性的化合物木犀草素选择性作用于C2,C5和C9。

选取槲皮素和槲皮苷作为代表性黄酮,进行了抗凝血作用研究,发现槲皮素、槲皮苷对于凝血系统没有副作用。对鱼腥草中部分化合物也进行了抗病原微生物的研究。

洋芹素、头花千金藤二酮、1,4-二甲氧基苯等具有较强的抗HBV活性；抗菌活性化合物主要包括马兜铃酸内酰胺、头花千金藤二酮、香草醛和催吐萝芙木醇等。3.鱼腥草总多糖抗补体药理作用研究鱼腥草总多糖为深棕色粉末,蛋白质含量：6.17±1.93%；糖醛酸含量：37.36±5.83%；糖含量：77.21±2.84%。

完全酸水解得到糖组成主要有Glu:Gal:Ara:Rha=3.40:2.14:1.17:1.00,及少量Man和Xy1。初步的作用机制研究表明,鱼腥草总多糖主要作用于补体系统的C3和C4组分。

以SD大鼠为实验动物,考察鱼腥草总多糖在体内对于急性肺损伤的综合防治作用,以及体内的抗补体作用。结果表明,鱼腥草总多糖可以减少体内补体水平的消耗,显著改善4h血清中补体成分C3、C4的下降,减少肺水肿的程度,改善肺部的过氧化程度(即,升高肺灌洗液中SOD活力,降低其MDA水平)和炎症症状,减少肺部白细胞和中性粒细胞的聚集。

选用Wistar大鼠,以腹腔注射LPS制备大鼠发热模型。鱼腥草总多糖灌胃给药,连续6h监测大鼠体温变化。

结果证实口服鱼腥草总多糖后,对LPS诱导的大鼠发热均有较好的解热作用,