核酸类药物及其生产工艺
核酸类药物的生产
DNA的作用
Page 11
➢ 利用补救合成途径为人体提 供脱氧核苷酸，参与人体核 酸代谢，从而具有促进细胞 生长、修复受损细胞及改变 机体代谢的作用。
用于急﹑慢性肝炎白细胞减 少症，血小板减少症及再生 障碍性贫血等的辅助治疗。
Page 12
DNA的粗提取 1、准备材料
将新鲜菜花和体积分数为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室,至少24 h。
NaCl
C、种子罐培养 ➢ (32 ±1)℃，培养12-15h ➢ 种子罐培养基：同摇瓶种子培养基
Page 29
(3) 发酵
50L发酵罐， (32 ±1)℃, 93h 500L发酵罐, (32 ±1)℃, 75h 20000L发酵罐，(35 ±1)℃, 83h ➢ 发酵培养基：淀粉水解糖、干酵母水解液、豆饼水解液、尿素、 硫酸铵、硫酸镁、氯化钾、磷酸氢二钠、有机硅油
Page 20
肌苷的背景知识
【质量标准】：收载于《中华人民 共和国药典》2005年版二部205页
Page 21
肌苷的背景知识
【药理作用】 本品能使处于低能缺氧状态
下的细胞继续顺利进行代谢，并 参与人体能量代谢与蛋白质的合 成。 【适应症】
临床用于白细胞或血小板减 少症，各种急慢性肝脏疾病、心 脏疾病、洋地黄中毒症等疾病。
Page 22
肌苷的背景知识
洋 地 黄
Page 23
肌苷的背景知识 肌苷是由次黄嘌呤与核糖结合而成。 次黄嘌呤可由腺嘌呤(A)脱氨形成，是嘌呤衍生物。
Page 24
1、肌苷生产的工艺流程
Page 25
2、肌苷生产的控制要点
控制要点
精制
提取 吸附 洗脱
菌种
肌苷
发酵
核酸药工艺的技术方法
核酸药工艺的技术方法
核酸药物是一类以核酸为主要成分的药物，主要包括DNA和RNA。
核酸药物的制备工艺主要包括以下几个步骤：
1. 核酸的设计和合成：首先，需要根据药物的作用机制和目标，设计出具有特定功能的核酸序列。
然后，通过化学合成的方法，将这些核酸序列逐一合成出来。
2. 核酸的纯化：合成出来的核酸需要进行纯化处理，去除可能存在的杂质和副产品，以保证药物的安全性和有效性。
3. 核酸的修饰：为了提高核酸的稳定性和生物利用度，通常需要对核酸进行修饰。
修饰的方法包括磷酸化、甲基化、糖基化等。
4. 核酸的封装：为了保护核酸不被体内的酶分解，通常需要将核酸封装在纳米颗粒、脂质体、聚合物等载体中。
5. 核酸的质量控制：在整个制备过程中，都需要对核酸的质量进行严格的控制，包括纯度、浓度、结构等方面。
6. 核酸的体内输送：最后，需要研究如何将核酸药物有效地输送到体内的目标部位。
这可能需要借助一些特殊的输送系统，如病毒载体、纳米粒子等。
以上就是核酸药物制备的主要工艺步骤。
需要注意的是，由于核酸药物的特殊性，其制备过程需要高度的精细化和自动化，同时也需要严格的质量控制和安全性评估。
此外，核酸药物的研发还面临着许多挑战，如如何提高药物的稳定性、如何提高药物的生物利用度、如何解决药物的免疫反应等问题。
生物制药：第十二章 核酸类药物
临床：病毒、肿瘤、艾滋病、产生干扰素、免疫抑制剂 代表药物：三氟代胸苷、叠氮胸苷、无环鸟苷、恩替卡韦等 制备方法：由自然结构核酸类物质通过半类药物
恩替卡韦
二、核酸类药物的生产方法
（一）核酸类药物的原材料 除病毒外，所有的动植
物组织中都含有核酸类物 质，包括大分子DNA和RNA、 小分子的核苷酸、核苷、碱 基等成分，但不同的组织中 含量有所不同。
酶液
混合，调pH 保温
鱼精
绞肉机粉碎
鱼精匀浆
热变性 冷却，过滤
DNA溶液
酶解液
加热使酶失活，调pH9.0置冷过夜，过滤
DNA降解液
吸附于氯型阴离子交换树脂分步洗脱
脱氧胞苷酸 dCMP
脱氧腺苷 dAMP
脱氧胸苷酸 dTMP
脱氧鸟苷酸 dGMP
三、主要核酸类药物的生产
1、RNA的提取——等电沉淀法
酵母菌体
稀NaOH，提取
提取液
中和，分离
抽提清液
pH2.5
RNA精品
洗涤、干燥
RNA粗品
工艺过程：
（1）预处理：压榨、除水；（2）提取：0.13%NaOH，使细胞壁变 性，使核酸从细胞内释放出来；（3）中和、除菌体；（4）分离：等 电点法，调pH2.5，使RNA沉淀下来；（5）洗涤、干燥
2、DNA的提取
猪脾脏
[预处理] 冷冻，绞碎
组织浆液
[预处理]
0.1M NaCl-0.5M 柠檬酸混合液，
离心
沉淀
[抽提] 1M NaCl
上清液
0.14M NaCl
沉淀物
95%乙醇
上清液 氯仿-异戊醇 （DNA）
溶解液
10% NaCl
核酸类药物生产工艺
核酸类药物生产工艺
接下来是核酸的纯化。
纯化步骤通常包括离心、柱层析和溶液浓缩等
过程。
离心能够分离出核酸与其他细胞组分。
柱层析则利用离子交换、凝
胶过滤或亲和层析等方法，从样品中分离出纯净的核酸。
最后，溶液浓缩
可以将核酸在适当的缓冲液中浓缩，以便进行下一步的处理。
第三个步骤是核酸的合成。
核酸合成可以采用化学合成或重组DNA技术。
化学合成是指通过有机合成方法合成核酸。
这要求高纯度和高效的合
成试剂，以确保合成的核酸具有良好的纯度和活性。
重组DNA技术则是通
过克隆技术，将目标基因插入表达载体中，并经过细胞培养和表达，生产
目标核酸。
接下来是核酸的包装。
核酸类药物通常通过载体或纳米粒子进行包装，以保护核酸并提高其递送效率。
载体可以是合成的脂质体、聚合物或病毒
颗粒。
这些载体通常具有良好的稳定性和低毒性，并能够在体内稳定地释
放核酸。
最后一个步骤是质控。
质控是核酸类药物生产过程中至关重要的一步，它确保了生产的药物符合安全和有效的要求。
质控包括对原材料、生产过
程和最终产品的检验和测试。
常见的质控检测方法包括高效液相色谱法、
质谱法、凝胶电泳以及分子生物学技术。
总之，核酸类药物的生产工艺涉及核酸提取、纯化、合成、包装和质
控等多个步骤。
每个步骤都非常关键，需要严格的控制和检测，以确保生
产的核酸类药物具有良好的质量和效果。
这些步骤的不断改进和优化将有
助于提高核酸类药物的生产效率和质量，进一步推动其在临床上的应用。
核酸类药物的生产
三、核酸类药物的生产实例
（四）辅酶A的生产
新鲜猪肝 【绞碎】
【水，提取】
TCA，除蛋白
2. 生 产 工 艺
肝浆
提取液
滤液
GAM 树 脂
LD-601，再吸附
HCl，酸化
HCl-NaCl CoA浓集液
LD-601-CoA 浓 缩
酸化
CoA酸化液
GAM-CoA
丙酮沉淀
脱水干燥
浓缩液
上清液
沉淀物
CoA粉
三、核酸类药物的生产实例
四、核酸类药物的检测
•2、RNA含量测定 （1）定磷法——660nm； （2）定糖法——地衣二酚（苔黑酚）法。 盐酸水解 RNA ，使核糖游离出来，并生成糠醛 ，与地衣二酚反应呈蓝绿色，在 670nm 处有最大吸 收峰。 •3、核苷酸、核苷含量的测定——紫外分光光度法
它们都有特殊的紫外吸收曲线，选取合适的波 长，可以根据其吸收值测定核苷、核苷酸的含量。
三、核酸类药物的生产实例
（三）ATP制备
腺嘌呤前体
枯草杆菌160 （Smr +Try－+Pur－）
枯草杆菌 160 （ Sm ｒ+tyr － +pur － ）菌株，在添加腺嘌呤 （由丙二氰化学合成）的培养 基上培养，可以大量累积腺苷。
腺苷
微生物或化学转化
也可使用发酵法直接生产 ATP ，所用菌种是产氨短杆菌 ATCC6872。
珍奥集团
• 珍奥集团与国内外十几家科研院所及上百位科学家建立了 长期稳定的科研合作关系。包括国际免疫联合会前主席青 克纳格尔博士在内的12位诺贝尔奖得主曾走进珍奥生命园 ，并对珍奥科研项目和科研实验活动进行了评价和指导。 截至目前，珍奥集团拥有专利近百件，被评为“国家知识 产权试点单位”。 珍奥集团贯彻“宁失一万，不失万一”的质量方针， 严格执行健康食品和药品生产的国际安全准则，先后通过 了ISO9001国际质量管理体系认证、HACCP国际食品安全预 防控制体系认证、ISO22000国际食品安全管理体系认证、 ISO14001国际环境管理体系认证、药品和保健食品GMP等 认证。此外，珍奥还获得了美国FDA企业注册资格和产品 通关检验，以及日本厚生省健康产品准入认证。
多肽和蛋白质药物及核酸类药物的生产
化学合成
利用化学合成方法，合成多肽 或蛋白质。
分离纯化
通过各种分离纯化技术，如色 谱、电泳等，将目的多肽或蛋 白质从其他杂质中分离出来。
核酸类药物的生产工艺流程
基因克隆
将目的基因克隆到载体上，构建重组DNA分子。
转录与翻译
将重组DNA分子导入细胞或微生物中，转录并翻 译成目的核酸。
提取与纯化
通过各种提取和纯化技术，如离心、沉淀、色谱 等，将目的核酸从其他杂质中分离出来。
液相合成
直接在液相中合成核酸类药物，但操作较为繁 琐。
修饰与改造
对合成的核酸进行修饰和改造，以提高其稳定性和生物活性。
03 生产工艺流程与质量控制
多肽和蛋白质药物的生产工艺流程
01
02
03
04
基因工程
利用基因工程技术，将目的基 因导入细胞或微生物中，表达
并产生多肽或蛋白质。
细胞培养
通过培养细胞，使细胞大量增 殖并产生多肽或蛋白质。
基因工程方法生产多肽和蛋白质药物通常用于生产具有高生物活性、低免疫原性 和低毒性的蛋白质或多肽药物。这些药物可用于治疗各种疾病，如糖尿病、肝炎 、癌症等。
化学合成法生产多肽和蛋白质药物
化学合成法生产多肽和蛋白质药物是 通过化学反应将氨基酸或其他有机分 子连接在一起形成多肽或蛋白质的过 程。这种方法通常需要多个化学反应 步骤，并且需要精确控制反应条件和 纯化过程。
质量控制成本
为了确保核酸类药物的质量和安全性，需要进行严格的质量控制和检 测，这些质量控制和检测的成本也是生产成本的一部分。
市场前景与竞争格局分析
市场前景
随着生物技术的不断发展，多肽和蛋白质药物及核酸类药物的应用领域不断扩大，市场需求也在不断增长。未来， 随着新药研发的加速和新治疗方法的出现，多肽和蛋白质药物及核酸类药物的市场前景将更加广阔。
拥有自主知识产权的核酸药物开发和生产方案(二)
拥有自主知识产权的核酸药物开发和生产方案1. 实施背景随着生物技术的飞速发展，核酸药物在医疗领域的应用逐渐得到广泛关注。
中国作为世界上人口最多的国家，公共卫生和医疗健康领域的需求与日俱增，核酸药物产业拥有巨大的市场潜力。
然而，当前中国在核酸药物开发和生产方面还存在一定程度的短板，亟需进行产业结构改革，提升自主知识产权实力，以满足日益增长的医疗需求。
2. 工作原理核酸药物，主要包括RNA和DNA两类，是利用基因组学和生物信息学技术，针对特定疾病靶点设计的药物。
其工作原理是利用核酸的特异性结合能力，实现对疾病靶点的精准干预和治疗。
核酸药物的优点包括高效性、特异性和低毒性。
3. 实施计划步骤3.1 研究开发首先，我们需要建立一支由生物学家、药学家、化学家等多学科背景组成的研发团队。
其次，对目标疾病进行深入的基因组学和生物信息学分析，找出关键的疾病靶点。
最后，设计和优化针对这些靶点的核酸药物。
3.2 临床试验在完成初步的实验室研究后，我们需要进行严格的临床试验。
这包括Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期临床试验，以评估药物的安全性和有效性。
在此过程中，我们还需要建立一套完善的药物质量控制系统，以确保药品的质量和稳定性。
3.3 产业转化在成功完成临床试验后，我们需要在GMP认证的工厂中开始大规模生产。
同时，我们需要建立一套完善的销售和售后服务体系，以确保药品的市场推广和患者的用药安全。
4. 适用范围核酸药物适用于多种疾病的治疗，包括但不限于遗传病、肿瘤、传染病等。
此外，核酸药物还可以用于预防性疫苗的制备，以及农业和畜牧业中病虫害的防治。
5. 创新要点我们的方案强调以下几点创新：5.1 技术突破：利用最新的基因组学和生物信息学技术，设计和优化针对特定疾病靶点的核酸药物。
5.2 知识产权保护：建立完善的专利保护体系，保护我们的技术成果和市场利益。
5.3 产业协同：建立与上下游企业的紧密合作关系，形成完整的核酸药物产业链。
5.4 公共卫生战略：通过推广核酸药物，提升中国在公共卫生领域的全球影响力。
13 4核酸类药物
枯草芽孢杆菌嘌呤核苷酸合成途径
（Ⅰ）
（II）
黄嘌呤缺陷型
鸟腺嘌呤缺陷型 （经诱变缺失46
号或号7酶号）酶）
SAMP
6
3
（一） IMP （一）
XMP
7
8
5
AMP
GMP
AICAR
当培养基中提供限量腺嘌呤时
2 SAICAR
Ⅰ 积累IMP 肌苷
Ⅰ＋Ⅱ 积累IMP 肌苷
PRA
Ⅲ 积累XMP 黄苷
（一） （一） 1
选育Mn2+不敏感的变异株
2．发酵法生产黄苷及酶法转化成GMP
直接发酵生产GMP必须满足以下条件： • 解除GMP的抑制（与GMP积累相矛盾） • 让GMP渗出胞外，并不被分解（可以做到） • 阻断GMP－GTP合成（与菌体生产抵触）
所以只能先合成XMP，后转化为GMP。
方法：选育丧失GMP合成酶的GMP缺陷型菌株就可能积累大
可以从自然界筛选到RNA含量高的酵母菌株，也可以 用诱变育种的方法提高酵母菌的RNA含量。
1、工业用RNA的提取
1％NaOH裂
稀
酵母等 解胞壁
HCL中和
加热破坏酶
溶液
碱
调pH2-2.5
法 冷却到10OC 离心 RNA溶液（接近RNApl） 离心 RNA沉淀
浓
10％NaCL
酵母等
离心
调pH2-2.5
苷酸的原理和方法.
素强化其活性） • 增加细胞通透性（在Mn2＋过量的培养基中需添加表面活
性剂改变通透性） • 供给NH4+维持培养基PH7.5－8.0
（三）半合成法制备核苷酸
发酵法生产核苷酸成本低，产率高，工业 生产的呈味核苷酸一半左右是由发酵法生产核苷 后经提取精制后，直接在5’－羟基上磷酸化
核酸药物及其生产技术
核酸药物及其生产技术随着生物科技的不断发展，核酸药物逐渐成为了一个备受瞩目的领域。
核酸药物是指以核酸分子作为药物的药物产品，包括DNA、RNA和核酸类似物等。
与传统药物相比，核酸药物具有精准疗效、高效性和低毒副作用等优势，因此受到了广泛的关注和研究。
本文将介绍核酸药物及其生产技术的相关信息。
一、核酸药物的种类核酸药物可分为DNA药物和RNA药物两大类。
其中，DNA药物主要指DNA疫苗、基因编辑药物、基因疗法等技术；RNA药物主要指RNA干扰技术、RNA编辑技术等。
1. DNA药物DNA药物有许多种类，包括：（1）DNA疫苗：以DNA为载体，将病毒、细菌等病原体的抗原编码进去，并通过注射等方式，使人体能够产生相应的抗体，从而起到预防疾病的作用。
（2）基因编辑药物：使用CRISPR/Cas9等技术对基因进行编辑，从而达到治疗遗传性疾病、癌症等疾病的效果。
（3）基因疗法：将正常的基因插入到有缺陷的基因中，以改变异常的表达，从而治疗遗传性疾病等。
2. RNA药物RNA药物主要包括：（1）RNA干扰技术：针对不同的疾病，设计特定的小分子干扰RNA(siRNA)或miRNA等，通过靶向特定的基因，抑制对应的蛋白质的合成，从而达到治疗疾病的效果。
（2）RNA编辑技术：通过CRISPR-Cas9或其他RNA编辑技术，实现对RNA序列的特定修改，从而改变某些基因的表达，从而达到治疗疾病的效果。
二、核酸药物的生产技术核酸药物的生产技术是核酸药物研究的重要组成部分。
生产技术的不断完善和提高，对于核酸药物的研究和开发具有重要的推动作用。
1. DNA药物生产技术DNA药物生产的核心部分是质粒的构建和提纯。
一般采用的是大肠杆菌作为质粒的宿主细胞，通过转染、电转化等技术将质粒导入到大肠杆菌中。
大肠杆菌在大规模生产DNA疫苗等药物时，需要进行上千升的发酵，然后将细胞破碎，提取DNA质粒，并加以纯化。
为了适应大规模生产，目前常用的提纯方法包括离子交换、透析、凝胶过滤、超滤、液相层析等技术。
核酸类药物的生产
主要内容
1、 核酸药物的分类 2、核酸类药物的生产方法 3、核酸类药物的生产实例 4、核酸类药物的检测
5、核酸药物的应用
核酸药物的分类
具有天然结构的核酸类物质
天然碱基、核苷、核苷酸 的类似物或聚合物
如：DNA、RNA、肌苷、ATP、 辅酶A、脱氧核苷酸、肌苷酸等。 获得：微生物发酵或从生物资源 中提取生产。 药理功能：有助于改善机体的物 质代谢和能量代谢平衡，加速受 损组织的修复，促使机体恢复 正常生理功能。
核酸类药物的生产实例
核酸类药物的生产实例
RNA的生产
1、来源：微生物——酵母 2、RNA的提取——等电沉淀法 3、工艺过程
（1）预处理：压榨、除水 （2）提取：0.13%NaOH，使细胞壁变性，使核酸从细胞内释放 出来 （3）中和、除菌体 （4）分离：等电点法，调pH2.5，使RNA沉淀下来 洗涤、干燥
核酸类药物的生产实例
4.发酵法生产 高含量RNA酵 母及其RNA提 取工艺流程
核酸类药物的生产实例
ATP制备
基本工艺路线：
核酸类药物的生产实例
辅酶A的生产
核酸类药物的检测
1、DNA含量测定
DNA是磷酸和戊糖通过磷酸二酯键形成的长链，所以磷酸或戊糖 的量正比例于DNA的量，可通过测定磷酸或戊糖的量来测定DNA 的量，前者称为定磷法，后者称为定糖法。 （1）定磷法 磷酸与钼酸反应生成磷钼酸，再转变为钼蓝，吸收峰在660nm。 （2）定糖法——二苯胺法 670nm
核酸类药物的生产方法
核苷酸、核苷及碱基类似物的生产方法
1、酶解法
核酸类药物的生产方法
核苷酸、核苷及碱基类似物的生产方法
2、半合成法
微生物发酵与化学合成并用。 由于发酵法生产核苷的产率很高，因此可由发酵法生产 核苷后经提取，精制再经磷酸化制取核苷酸。 方法：将核苷悬浮于磷酸三甲酯或磷酸三乙酯中，在冷 却条件下加入氯化氧磷，进行磷酸化。从核苷生成5‘核苷酸收率可达90%。
核酸类药物的生产
核酸类药物的生产核酸类药物的合成通常使用化学合成和酶法合成两种方法。
化学合成主要是利用有机合成方法，通过逐个添加和连接核苷酸碱基来合成目标核酸链。
这种方法的优势是合成效率高，适用于大规模合成。
酶法合成则是利用聚合酶反应，在酶的催化下逐个连接核苷酸碱基。
这种方法的优势是合成速度快，适用于小规模合成。
在核酸类药物的合成过程中，需要控制合成反应的温度、时间、底物浓度等参数，以确保产物的纯度和收率。
合成反应通常在惰性气体氛围中进行，以避免氧化和水解反应的发生。
此外，还需要对底物和副产物进行有效的分离和纯化，一般采用柱层析、溶剂萃取、浓缩等方法。
纯化核酸类药物的目标是将产物从反应物、副产物和杂质中分离出来，以获得高纯度的药物。
纯化通常包括固相萃取、高效液相层析、凝胶电泳等步骤。
其中，固相萃取是一种常用的分离技术，通过将样品通过固相萃取柱，利用样品中化合物与固相间的相互作用力来实现分离。
高效液相层析则是将样品通过液相流动相与固定相之间的相互作用进行分离。
核酸类药物的生产还需要进行质量控制，以确保产品的质量和稳定性。
常用的质量控制方法包括核酸鉴定、含量测定、纯度测定、杂质分析等。
核酸鉴定通常使用核酸测序技术，通过测定核酸序列来确定产物的真实性。
含量测定则是测定药物中目标核酸的含量，一般使用紫外吸收光度法。
纯度测定通常使用聚丙烯酰胺凝胶电泳，通过比较产物与标准品的迁移速度来确定纯度。
杂质分析主要是确定药物中的副产物和杂质的种类和含量，一般使用质谱或核磁共振等技术。
总之，核酸类药物的生产是一个复杂的过程，需要严格的生产工艺和质量控制。
通过合理选择合成方法、优化合成条件，并配合适当的纯化和质量控制方法，可以获得高纯度和高质量的核酸类药物。
随着基因工程和合成生物学的发展，核酸类药物的生产将越来越重要，同时也面临更多的挑战和机遇。
小核酸药物生产流程
小核酸药物生产流程
小核酸药物是一类基于核酸分子的治疗药物，具有针对性强、副作用小等优点，是现代生物医药领域的热门研究方向之一。
其生产流程包括以下几个主要步骤。
首先，需要进行基因合成。
基因合成是制备小核酸药物的关键步骤之一，是将设计好的基因序列通过化学合成的方式合成形成小核酸药物的前体。
这个步骤需要选择可靠的基因合成公司进行配合。
其次，需要进行纯化和结构分析。
通过高效液相色谱（HPLC）、单晶X射线衍射（XRD）等方法，对合成的前体进行纯化和结构分析，以确认其结构和纯度。
接着，进行灵敏性检测。
通过体外或体内实验，对小核酸药物的生物学效应和药效进行灵敏性检测，评估药物的治疗效果和安全性。
然后，进行临床试验。
药物进入临床试验后，需要进行多项安全性、耐受性和有效性等方面的评估，证明其临床治疗价值。
最后，进行大规模生产。
在药物通过临床试验并获得批准上市后，进入大规模生产阶段，需要确保生产线的稳定性和批次一致性，以保证药物品质和产量。
总之，小核酸药物生产流程需要经过基因合成、纯化和结构分析、灵敏性检测、临床试验和大规模生产等多个环节，才能最终制备出符合临床需求的高质量小核酸药物。
核酸类药物生产工艺
核酸类药物生产工艺
一、抗核酸药物基本情况
抗核酸药物是一类离子通道调节剂，它的功能主要是阻断细胞膜上的核酸的开放。
抗核酸药物可以有效地对抗各种病毒，抗菌革兰氏阳性菌，阿米巴病毒，抗类风湿疾病，抗癌疾病，及其他病症有显著的治疗作用。
1、复配混合：筛选适宜的原料，加入配料缸中，开始进行细致的混合，在混合过程中，可以通过不同的搅拌模式，搅拌速度，搅拌方向等参数的调节来使混合更加均匀，由此可以确保每一份制剂可以保持良好的品质和一致性。
2、过滤：针对此类制剂，需要通过微粒滤液过滤，以确保抗核酸药物可以完好地进入它的结构和形式，避免抗核酸药物的分散性和形式的改变。
3、萃取：主要利用萃取剂以及其它添加剂进行活性成分的萃取，包括水溶物的萃取和油溶物的萃取，以保证活性成分的高效率萃取。
4、折射：主要用于分离萃取液中的抗核酸药物，常用的折射液包括乙醇，乙醚，甲醇，丙酮等，采用不同的折射液可以调节抗核酸药物的浓度，确保制剂的品质。
核酸类药物的生产
核酸类药物的生产
摘要
核酸类药物具有抗多种重要疾病的良好疗效，其生产技术具有较高的复杂性和难度，目前常用的生产技术有双腺病毒感染法和细胞质表达法。
本文从技术准备平台建立、质粒的构建、蛋白质表达系统的设计、蛋白质纯化和纯化核酸类药物的分离纯化等方面对生产核酸类药物的技术进行详细介绍，分析了技术瓶颈和影响因素。
研究表明，为了确保生产效率，应采取有效的控制措施，提高蛋白质和核酸类药物的纯化度，满足药品质量标准。
关键词：核酸类药物；蛋白质表达；纯化；生产
1引言
随着药物研发技术的发展，核酸类药物的抗病性和稳定性越来越强，它们可用于治疗多种重要疾病。
核酸类药物具有高灵敏度、优异的耐受性和良好的生物学效应，且可以通过口服、皮下或肌肉注射等不同的给药途径进行给药，大幅提高服药便利性。
因此，核酸类药物已成为当今药物研发中的一大热点。
生产核酸类药物具有较高的技术含量和复杂性，生产技术通常有双腺病毒感染法和细胞质表达法等。
本文综述了这些技术在生产核酸类药物时的工艺要点，以期为药品生产提供参考。
2技术准备平台的建。
核酸与核苷类药物概述与合成工艺
例二：鸟苷2／L悬浮于5磷酸三甲酯中，温度控制 0℃，添加氯化氧磷6／L，水2，反应6h，5＇摩尔产
四、核苷的制备
核苷是多种核苷类药物的原料，在核酸类药物中占 主导地位。 （1）以核苷及其结构类似物、衍生物为主药物多达几 十种； （2）核苷类药物在抗病毒、抗肿瘤、增强免疫方面占 重要地位； （3）核苷的发酵水平大大高于核苷酸，所以常做后者 的前体物质。 1、化学水解法制备核苷：
发酵法生产核苷酸
1、发酵法生产肌苷酸（） 肌苷酸钠是一种高效增鲜剂，在谷氨酸钠（味精）中
加2%，鲜度可增加3倍。因此，在味精中添加肌苷酸钠（或 鸟苷酸钠）后成为第二代特鲜味精。
产氨短杆菌嘌呤核苷酸生物合成途径、代谢调控和肌 苷酸发酵机制:
积累的主要前提：
（1）阻断合成酶: 即选育缺该酶的菌株（嘌呤缺陷型），发
发酵法生产肌酐的工艺流程
• 发酵法生产鸟苷和黄苷
•
鸟苷产生菌的特征：
• （1）嘌呤核苷酸分解酶活力强；
• （2）合成酶，还原酶缺失；
• （3）解除、对转酰胺酶，肌苷酸脱氢酶和 合成酶的反馈抑制；
• 发酵法生产腺苷
•
以肌苷生产菌（枯草杆菌）为诱变基础菌
株。
•
诱变结果：
• （1）腺嘌呤回复，腺嘌呤酶缺失；
核酸类物质药物一般可分为两大类：
一类具天然结构的核酸类物质，
另一类是自然结构碱基、核苷、核苷酸的结 构类似物或聚合物。
前者是生物体合成原料或蛋白质、脂肪、糖生物合成
与降解以及能量代谢的辅酶，这一类药物有助于改善机体 的物质代谢和能量平衡，加速受损组织的修复，促使缺氧 组织恢复正常生理机能，临床上已广泛使用于放射病、血 小板减少症、白细胞减少症、急慢性肝炎、心血管疾病、 肌肉萎缩等病症的治疗，包括肌苷、辅酶A、、、、、腺 苷、辅酶I、辅酶Ⅱ等，多数是生物体自身能够合成的物 质，具有一定临床功能，毒副作用小，基本都可经微生物 发酵或从生物资源中提取。
第5章 核酸类--脂类药物
第五章 酶类药物
第一节 概述
一、酶类药物发展简史
酶类药物是直接用各种剂型的酶以改变体内酶活力，或 改变体内某些生物活性物质和代谢产物的数量等，从而达到 治疗某些疾病的目的。
基酸氧化酶的保护剂）
（二）脱盐和浓缩
1. 脱盐 （1）透析 （2）凝胶过滤 2. 浓缩 （1）蒸发 （2）超滤法 （3）凝胶吸水法 （4）冷冻干燥法
（三）酶的结晶
酶的结晶是指酶分子通过次级键力，按规则且周期性 排列的一种固体形式。 1. 盐析法 2. 有机溶剂法 3. 透析平衡法 4. 等电点法
Vit • C
H3P(Mo3O10) 4+12H2O Mo2O3 • MoO3（钼蓝）
钼蓝的最大吸光值在660nm处。
2. 定糖法
RNA中的戊核糖可在盐酸的水解作用下游离出来，进一 步形成糠醛，然后与地衣酚反应，反应物程鲜绿色，在 670nm有最大吸收峰。
二、DNA的制备
1. 材料的选择与处理 2. 提取与纯化 3. 含量测定 （1）定磷法 同RNA （2）定糖法
②另量取1mL待测样品液于37℃预温10min，精密加入三 氯乙酸溶液5mL，准确反应10min，加入酪蛋白溶液5mL， 摇匀，保温10min后过滤，滤液作为上述溶液的空白对照。 用分光光度计在275nm的波长处测吸光度A。
③以水做空白对照，在275nm的波长处测定50µg/mL酪氨 酸吸光度A。
（四）菠萝蛋白酶在医药、保健品业的应用
3. 表面活性剂法
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
3、培养基中加入特异抑制IMP脱氢酶的化学 物质（如8－氮杂鸟嘌呤）则IMP被切断， GMP不能生成，解除GMP的反馈抑制，使IMP 进一步被积累；
4、Mn 2+在限量的情况下培养后期产氨短杆 菌细胞膜容易透过细胞膜，并且嘌呤核苷 酸补救合成所需的酶和中间体核糖－5－磷 酸很容易透过，在细胞外重新合成大量的 肌苷酸；
叠 氮 胸 苷
A
Z
T 合 成 工 艺
2 、三氮唑核苷
（Vira301, RibacirinRTC)
商品名称病毒唑，主要应用于小儿呼 吸系统的疾病治疗。显著改善艾滋病 患者的症状，毒副作用小，价格便宜， 比AZT 相差50倍。
它对病毒 、氮唑核苷生产工艺
3、阿糖胞苷
抑制DNA聚合酶，干扰DNA病 毒繁殖和肿瘤细胞增殖，用于治 疗急性粒细胞白血病，口服无效， 只能注射。
阿糖胞苷生产工艺
一、核酸类药物的分离纯 化一般方法
核酸类药物生产方法主要有提取 法和发酵法。
提取法生产 DNA和RNA 的主要技 术是，先提取核酸和蛋白质复合 物，再解离核酸与蛋白质，然后 分离RNA 与DNA。
发酵法主要用于生产单核苷酸。
二、核酸类物质的分离
提取及其发酵生产
1、RNA 与DNA的提取与制备
2、核苷酸的制备
1、叠氮胸苷－
（Azidothymidine, AZT ）
是美国FAD批准的治疗艾滋病的新药；
68％的病人临床表现为减轻症状、延长寿命 的显著疗效；副作用为贫血、白细胞减少， 但有32％的患者服用后引起股骨头坏死、破 坏人的造血功能。
系核苷酸的类似物，取代正常腺嘧啶核苷酸 参与病毒的合成但不能继续复制，从而达到 阻止病毒增值的目的。
5、因工业原料和工业水都含较高的Mn 2＋， 通过诱变育种的方法选育了对Mn 2+不敏感 的变异株，使发酵液Mn 2＋ 含量高达 1000? g/ml时，肌苷酸的生物合成仍不受影 响。
3 、核苷生产工艺流程
二、核酸类药物生产
1 、叠氮胸苷 2 、阿糖腺苷 3 、三氮核苷 4 、阿糖胞苷 5 、聚肌胞苷酸 6 、胞二磷胆碱
5受GMP ATP 的反馈抑制
6受GTP 的反馈抑制
注：PRPP ——5－磷酸核糖焦磷酸
IMP
制机酵发 株菌型 陷缺呤嘌腺菌杆短氨产
肌 苷 酸 诱 变 图 谱
肌 苷 酸 产 生 诱 变 过 程 的 产 量 变 化
提高IMP 产量的因素
1、选用产氨短杆菌腺嘌呤缺陷型菌株以解 除腺嘌呤衍生物对的反馈抑制；
3、核苷的制备
1 发 酵 法 制 备 R N A
2 酶 法 制 备 脱 氧 核 苷 酸
酶 法 制 备
5' 单 核 苷 酸
双 酶 法 生 产 肌 苷 酸 和 鸟 苷 酸
产氨短杆菌嘌呤核苷 酸生物合成调节机制
3 被A 阻遏
4受ATP ADP AMP GMP 反馈抑制
1 被G 阻遏 2受GMP 反馈抑制