血涂片评价及白细胞分类技术质控流程
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3.染色过深、过浅的处理
3.1染色过深、过浅与血涂片中细胞数量、血膜厚度、染色时间、染液浓度、pH值密切相关。对于重要的标本可采用先试染的方法，根据试染效果调节第二次染色方式。
3.2纠正染Hale Waihona Puke Baidu过深可缩短染色时间或稀释染液。
3.3纠正染色过浅可延长染色时间。
3.4如果标本片有限出现了染色过深、过浅的情况，可用如下办法挽救：染色过深可加少量缓冲液覆盖血膜部分褪色，在显微镜下观察褪色情况及时终止。染色过浅可重加染色液和缓冲液复染，也要在显微镜下观察及时终止。
1、要求所用玻片清洁、干燥、无尘，大小为25mm×75mm，厚度为0.8～1.2mm。使用载玻片时， 不要用手触及玻片表面。
2、做好明确标记。
4、每份样本制作3张血涂片。
5、如果样本中白细胞数量少时，需要制备更多血涂片（如6张）。
6、用楔形技术制备血涂片。在玻片近一端1/3处，加一滴（约0.05ml）充分混匀的血液，握住另一张较狭窄的、边缘光滑的推片，从血滴前沿方向接触血液，以30º～45º角使血滴沿推片迅速散开，快速、平稳地推动推片至玻片的另一端。
1.染料的选择
Romanowsky类染料的质量直接影响染色效果。在pH6.4～7.0条件下，染料与细胞中特定成分（细胞核和细胞浆特殊颗粒）相互作用，产生典型的颜色，如细胞核染深紫色，红细胞染鲜亮的橙红色。粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和其他细胞必须能显示清晰的核浆分界，能识别核染色质成分和细胞浆的颜色差异。本实验室采用BASO公司的商品化试剂瑞-姬染色液，保证了染料的质量。
检验人员的工作态度、动机和专心程度是关键因素。因为白细胞分类计数是一项主观性很强的工作，影响分类计数的因素很多，有检验人员的态度、实验室环境条件和工作量等。对于以每张血涂片计数200个白细胞的参考方法工作量来说，每天每个检验人员血涂片检验数量约为15～25张。
3.2.1.1保留一套考核血涂片作为标准片，用于检验人员的培训和考核。样本必须包含7种类型白细胞（中性分叶核粒细胞、中性杆状核粒细胞、淋巴细胞、异型淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞）。其中，至少有一份样本含有少量有核红细胞，一份含有少量未成熟白细胞。
XX医院检验科
文件编号：LJ001
第1版第1次修改
生效日期：
一、血涂片评价质量控制流程
（一）样本采集
将静脉血采集于EDTA－K2抗凝剂中（浓度为每毫升血液含1.5～2.2mg EDTA－K2·H2O）。采血后立即混匀，应拒绝分析有肉眼可见凝块的样本。
（二）血涂片制备
血涂片制备是否合格、染色的好坏直接关系到检验结果的质量。
二、分类计数的质量控制：
1.需分类的外周血有核细胞
外周血可见多种有核细胞。常见的有：中性分叶核粒细胞、中性杆状核粒细胞、淋巴细胞、异型淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。异常情况下，可有各种幼稚细胞和异常细胞。
2.血涂片检查步骤
检验人员必须能对所有常见白细胞进行分类，并了解大多数白细胞的形态异常，包括先天性和获得性。参与细胞形态学检查的检验人员必须进行专业培训，并具备实际工作经验。
3.2.1.2血细胞形态考核：
选取任意年份形态学室间质评图片资料进行考核评分。
分发给参加检验的人员考核血涂片，要求每张血涂片做200个白细胞的分类计数，并根据血涂片编号，报告结果，交给监考人。监考人计算每份样本每种细胞的均值，进行结果解释。
编写人
质量负责人
批准人
7、血细胞比容与涂片关系。血细胞比容高于正常时，红细胞较多，血液粘度较高，用较小的角度涂片，可获得满意的血膜。相反，血细胞比容低于正常时，血液粘度较低，需用较大角度涂片。
8、良好血涂片的要求
9、血膜必须充分干燥，否则在染色过程中容易脱落。
（三）血涂片染色
染色的目的是使细胞的主要结构，如细胞膜、细胞质、细胞核等染上不同的颜色，以便于镜下观察识别。良好的染色能准确鉴别成熟和未成熟白细胞或异常细胞。
2.染色效果分析：
2.1可接受的染色情况：血膜外观呈淡粉红色或琥珀色。显微镜下，成熟红细胞呈粉红色。白细胞胞质中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。
2.2染色偏酸：红细胞和嗜酸粒细胞颗粒偏红，白细胞核呈淡蓝色或不着色。
2.3染色偏碱：所有细胞呈灰蓝色，颗粒深暗；嗜酸粒细胞可染成暗褐色，甚至紫黑色或蓝色；中性颗粒偏粗，染成紫黑色。
3.1染色过深、过浅与血涂片中细胞数量、血膜厚度、染色时间、染液浓度、pH值密切相关。对于重要的标本可采用先试染的方法，根据试染效果调节第二次染色方式。
3.2纠正染Hale Waihona Puke Baidu过深可缩短染色时间或稀释染液。
3.3纠正染色过浅可延长染色时间。
3.4如果标本片有限出现了染色过深、过浅的情况，可用如下办法挽救：染色过深可加少量缓冲液覆盖血膜部分褪色，在显微镜下观察褪色情况及时终止。染色过浅可重加染色液和缓冲液复染，也要在显微镜下观察及时终止。
1、要求所用玻片清洁、干燥、无尘，大小为25mm×75mm，厚度为0.8～1.2mm。使用载玻片时， 不要用手触及玻片表面。
2、做好明确标记。
4、每份样本制作3张血涂片。
5、如果样本中白细胞数量少时，需要制备更多血涂片（如6张）。
6、用楔形技术制备血涂片。在玻片近一端1/3处，加一滴（约0.05ml）充分混匀的血液，握住另一张较狭窄的、边缘光滑的推片，从血滴前沿方向接触血液，以30º～45º角使血滴沿推片迅速散开，快速、平稳地推动推片至玻片的另一端。
1.染料的选择
Romanowsky类染料的质量直接影响染色效果。在pH6.4～7.0条件下，染料与细胞中特定成分（细胞核和细胞浆特殊颗粒）相互作用，产生典型的颜色，如细胞核染深紫色，红细胞染鲜亮的橙红色。粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和其他细胞必须能显示清晰的核浆分界，能识别核染色质成分和细胞浆的颜色差异。本实验室采用BASO公司的商品化试剂瑞-姬染色液，保证了染料的质量。
检验人员的工作态度、动机和专心程度是关键因素。因为白细胞分类计数是一项主观性很强的工作，影响分类计数的因素很多，有检验人员的态度、实验室环境条件和工作量等。对于以每张血涂片计数200个白细胞的参考方法工作量来说，每天每个检验人员血涂片检验数量约为15～25张。
3.2.1.1保留一套考核血涂片作为标准片，用于检验人员的培训和考核。样本必须包含7种类型白细胞（中性分叶核粒细胞、中性杆状核粒细胞、淋巴细胞、异型淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞）。其中，至少有一份样本含有少量有核红细胞，一份含有少量未成熟白细胞。
XX医院检验科
文件编号：LJ001
第1版第1次修改
生效日期：
一、血涂片评价质量控制流程
（一）样本采集
将静脉血采集于EDTA－K2抗凝剂中（浓度为每毫升血液含1.5～2.2mg EDTA－K2·H2O）。采血后立即混匀，应拒绝分析有肉眼可见凝块的样本。
（二）血涂片制备
血涂片制备是否合格、染色的好坏直接关系到检验结果的质量。
二、分类计数的质量控制：
1.需分类的外周血有核细胞
外周血可见多种有核细胞。常见的有：中性分叶核粒细胞、中性杆状核粒细胞、淋巴细胞、异型淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。异常情况下，可有各种幼稚细胞和异常细胞。
2.血涂片检查步骤
检验人员必须能对所有常见白细胞进行分类，并了解大多数白细胞的形态异常，包括先天性和获得性。参与细胞形态学检查的检验人员必须进行专业培训，并具备实际工作经验。
3.2.1.2血细胞形态考核：
选取任意年份形态学室间质评图片资料进行考核评分。
分发给参加检验的人员考核血涂片，要求每张血涂片做200个白细胞的分类计数，并根据血涂片编号，报告结果，交给监考人。监考人计算每份样本每种细胞的均值，进行结果解释。
编写人
质量负责人
批准人
7、血细胞比容与涂片关系。血细胞比容高于正常时，红细胞较多，血液粘度较高，用较小的角度涂片，可获得满意的血膜。相反，血细胞比容低于正常时，血液粘度较低，需用较大角度涂片。
8、良好血涂片的要求
9、血膜必须充分干燥，否则在染色过程中容易脱落。
（三）血涂片染色
染色的目的是使细胞的主要结构，如细胞膜、细胞质、细胞核等染上不同的颜色，以便于镜下观察识别。良好的染色能准确鉴别成熟和未成熟白细胞或异常细胞。
2.染色效果分析：
2.1可接受的染色情况：血膜外观呈淡粉红色或琥珀色。显微镜下，成熟红细胞呈粉红色。白细胞胞质中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。
2.2染色偏酸：红细胞和嗜酸粒细胞颗粒偏红，白细胞核呈淡蓝色或不着色。
2.3染色偏碱：所有细胞呈灰蓝色，颗粒深暗；嗜酸粒细胞可染成暗褐色，甚至紫黑色或蓝色；中性颗粒偏粗，染成紫黑色。