谷草转氨酶(AST)_IFCC速率法
生化项目详情
1-丙氨酸氨基转移酶测定程序（速率法）一、原理：ALT 催化L-丙氨酸的氨基转移至α-酮戊二酸，生成丙酮酸和L-谷氨酸。
LDH 催化丙氨酸还原的同时将NADH 氧化成NAD+。
NADH 吸光度的下降速率和ALT 的活力成正比。
IFCC 推荐法含磷酸吡哆醛（P-5-P ），是为了稳定ALT 活性，避免样品中因内源性磷酸吡哆醛不足造成测定结果假性偏低。
健康人血清中磷酸吡哆醛含量适中，国内试剂一般不含磷酸吡哆醛。
化学反应式＋LDH ＋ALT乳酸＋NAD丙酮酸＋NADH＋H −−→−+−−→−-+丙酮酸谷氨酸酮戊二酸丙氨酸α二、临床意义1 ALT 存在于各种组织细胞内，以肝细胞中含量最多，正常时血清中ALT 活性很低。
2 肝细胞因感染病毒而受损伤，尤其是处于急性期时，ALT 从细胞内逸出至血液中，血清中ALT 活性可明显升高，因此是各种肝炎患者检查的一个重要指标。
3 某些药物对肝细胞有毒性副作用，过量或长期使用可至肝脏受损，亦可以ALT 活性升高反映4 实质性脏器有非感染性炎症或损伤时，如脂肪肝、梗阻性黄疸、肝内胆汁瘀滞、胆管炎、胆囊炎、肝癌、急性心肌梗死、心肌炎、心力衰竭时的肝脏淤血等，均可成为血清ALT 升高的原因。
4 ALT 与AST 联合测定并计算其比值有助于对某些疾病的鉴别，正常情况下ALT ／AST 比值小于1，但在传染性肝炎及其它原因引起的肝脏炎症时，ALT ／AST 比值升高；肝硬化、肝癌、进行性肌营养不良、皮肌炎时，AST 升高的幅度高于ALT 。
三、结果计算：ALT (U/L) ＝ 3)410340(10min min--⨯⨯⨯⨯∆=⨯∆εl V V A K A sTnm四、医学决定水平1 20U/L 此为排除值，低于此值可排除许多与ALT 升高有关的病种，而考虑其他诊断。
此值可以作为病人自身的ALT 的对照，与过去和（或）将来的值进行比较。
2 60U/L 高于此值时，对可引起ALT 增高的各种疾病均应考虑，并应进行其他检查以求确诊。
谷草转氨酶（AST）IFCC速率法
目录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂与校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理谷草转氨酶催化L-天冬氨酸的氨基转移与苹果酸脱氢酶（MDH）催化的反应偶联，使NADH氧化成N AD+。
NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中的A ST的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出AST活性。
ASTL-天冬氨酸+α-酮戊二酸----------- 草酰乙酸+ L-谷氨酸MDHNADH + 草酰乙酸+ H+-------------- L-苹果酸+ NAD+2．标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
GOT
单独检验项目申请：测定天门冬氨酸氨基转移酶试剂盒（缩写AST/GOT ）；组合项目申请肝功：。
临床医生根据需要提出检验申请。
2标本采集与处理2.1标本采集2.1.1 使用血清或血浆，应避免溶血。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在置1-2h后将标本离心分离出血清，避免溶血。
离心必须达到4000rpm 15min，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。
2.2.2标本保存时间：ALT在室温中稳定性差，采血后应尽快置于冰箱储存。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4-8℃冰箱内保存7d。
2.3标本采集的注意事项采血前使受检者保持平静、松弛，避免剧烈活动。
3．实验原理：AST催化下述反应：ASTL-天门东氨酸+ a-酮戊二酸---------------草酰乙酸+L-谷氨酸MDHNADH+草酰乙酸+H+---------------L-苹果酸+NAD+NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中的AST的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出AST的活性。
4．试剂及其他用品R1：（反应液终浓度）L-天门冬氨酸 200mmol/LLDH ≥1200U/LMDH ≥ 800U/LTris缓冲液PH=7.8 80mmol/LNADH 0.18mmol/LR2：起动试剂α-酮戊二酸 12mmol/L生化仪：日立7175．室内质控与室内质控规则5.1质控品：采用罗氏公司的罗氏质控品（定值详见定值表）5.2质控品重建方法：采购来的质控品按每周用量分装-20℃冻存，复融后充分颠倒混匀。
谷草转氨酶(AST)_IFCC速率法
目录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂与校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理谷草转氨酶催化L-天冬氨酸的氨基转移与苹果酸脱氢酶（MDH）催化的反应偶联，使NADH氧化成N AD+。
NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中的AST的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出AST活性。
ASTL-天冬氨酸+α-酮戊二酸----------- 草酰乙酸+ L-谷氨酸MDHNADH + 草酰乙酸+ H+-------------- L-苹果酸+ NAD+2．标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3．试剂3.1 试剂：本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司AST试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：3.2：校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。
生物学生化试剂产品及临床意义介绍
白蛋白的检测
溴甲酚绿终点法
血清中白蛋白与溴甲酚绿（BCG）在 pH4.15环境中结合生成绿色复合物，溶 液由黄色变为绿色，在600nm有吸收峰， 其颜色深浅与白蛋白浓度成正比，从而 测出白蛋白含量。
白蛋白+溴甲酚绿→白蛋白-BCG复合物
与溴甲酚紫法的比较
溴甲酚绿法操作简单、快速，既可手工 操作，也能自动化分析，是目前国内最 常用方法。
2.排泄功能：对胆红素和某些染料的排泄 3.解毒功能：生物转化功能（同化、异化） 4.物质合成功能：凝血和纤溶因子、纤溶抑制因
子的生成及对活性凝血因子的灭活清除
2.肝功能实验的内容
▪ 蛋白质代谢功能检查 (TP、ALB、PA、 AFP)
▪ 胆红素代谢检查（TBIL、DBIL） ▪ 胆汁酸代谢检查（TBA） ▪ 摄取、排泄功能检查 ▪ 血清肝酶谱的检查（ALT、AST、ALP、
酶循环法测定反应式
Thio-NAD+
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
Thio-NADH + H+
胆汁酸
3α-羟基类固醇脱氢酶
3-酮类固醇
NAD+
NADH + H+
临床意义
▪ 总胆汁酸升高
• 肝损害：肝炎、肝硬化、肝癌 • 胆道阻塞：胆管梗阻引起的胆汁淤积 • 小肠污浊综合症
与第一代胆汁酸测定试剂相比
成倍提高了测定灵敏度，克服了第一代酶 比色法试剂在测定低值标本时的重复性差的问 题。
Zn
Fe
5’-NT GPDA AFP NAG CSF CYS-C MALB HbA1c D3-H ACE
LDH1 C3
C4
IgA IgG
IgM TRF
生化试剂分类：
高三学生体检转氨酶结果分析
高三学生体检转氨酶结果分析摘要】目的分析参加高考的高三学生转氨酶增高情况，以利做好高考学生体检表结论。
方法通过全自动生化分析仪，使用速率法对遂宁5693 例参加高考的高三学生在招生体检时转氨酶进行检测。
结果 5693 例遂宁市高三学生转氨酶增高442 例，增高率7.76%。
遂宁实验中学高考的学生转氨酶为10.29%， P<0.01，实验中学高考的学生转氨酶增高率与其他中学有差异，且高于其他中学。
遂宁一中高考的学生转氨酶增高率为5.26%， P<0.05，遂宁一中高考的学生转氨酶增高率与其他中学有差异，且低于其他中学。
结论对参加体检的高三学生转氨酶测定进行分析，了解高三学生转氨酶各增高阶段的比例，对于给参加高考的高三学生作出体检结论非常重要。
由于引起转氨酶增高的因素很多，为了避免给临近高考的学生带来思想上的包袱和压力，以更好的状态学习迎接高考，我们认为对于参加高考体检的学生，ALT 测定结果在40 ～ 160 U/L 以内的，内科肝脏检查正常，可以不复查，下合格结论，体检表涂正常框。
内科肝脏检查异常和ALT ≥ 160 U/L 的10 天再复查ALT 和作B 超检查，再根据检查结果下体检表上的转氨酶结论。
【关键词】高考体检转氨酶结果【中图分类号】R194.3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）09-0039-02根据人力资源和社会保障部、教育部、卫生部联合下发的《关于进一步规范入学和就业体检项目，维护乙肝表面抗原携带者入学和就业的权力》的通知和教育部、卫生部联合下发的《关于普通高等学校招生学生入学身体检查取消乙肝项目检测有关问题的通知要求，从去年高考体检开始，取消了之前《普通高等学校招生体检工作指导意见》中，乙肝表面抗原携带者不能录取到学前教育、航海技术、飞行技术、面点工艺、西餐工艺、食品科学与工程专业的限制，不再检查乙肝表面抗原，开始检查转氨酶。
现对遂宁高考招生体检中学生的转氨酶结果分析如下。
天门冬氨酸氨基转移酶测定
7.正常参考值：
男11～49U/L女11～40U/L（37℃）
建议各实验室建立自己的正常参考值范围
注意事项：
1.如果试剂变混浊或试剂空白吸光度值（340nm）小于1.0，试剂已失效。
2.如果标本中AST活力＞700U/L（30℃）或＞1000U/L（37℃），需用生理盐水稀释后测定，结果乘以稀释倍数。
测定管（T）
工作液
300μl
300μl
蒸馏水
15μl
-
标本
-
15μl
混合，置37℃孵育90秒，在主波长340 nm/辅助波长410nm下连续监测1～3分钟各管吸光度变化，计算ΔA/min。
6.结果计算：
AST活性（U/L）=（D A测定/min－D A空白/min）×3376（340nm/410nm，1cm光径）
3.精密度：批内CV：1.8～3.5%批间CV：2.2～3.8%
NADH
0.18mmol/L
LDH
≥0.8KU/L
MDH
≥0.6KU/L
-
-
R2
L－门冬氨酸
200mmol/L
α－酮戊二酸
12mmol/L
使用方法：
1.仪器要求：适用于各类自动生化分析仪或半自动生化分析仪。
2.标本要求：样品为空腹新鲜血清、EDTA或肝素抗凝血浆，溶血会产生干扰。
3.稳定性与保存：试剂在2～8℃避光保存可稳定一年。单试剂工作液2～8℃避光保存可稳定一周。
R1
200μl
200μl
蒸馏水
15μl
-
标本
谷氨酰转肽酶IFCC速率法作业指导书
谷氨酰转肽酶IFCC速率法作业指导书1、前言试验名称：γ-谷氨酰转肽酶测定，英文名称：γ-GT，方法：IFCC速率法。
本文件适用于安阳鼎城糖尿病医院检验科生化实验室，目的是指导工作人员正确的在科华KHB450全自动生化分析仪上测定血清、血浆样本中的γ-GT活力，以保证测定结果的准确可靠。
本试验用体外定量测定人血清或血浆样本中γ-GT的活力。
γ-GT存在于人体不同组织中，血清中γ-GT主要来源于肝胆系统，因此肝脏疾病或肝脏受损时，均可引起γ-GT升高，临床上常用于阻塞性黄疸、胆管炎和胆囊炎等疾病的诊断，某些药物如酒精、镇静药、抗癫痫药等亦可引起γ-GT水平升高。
2、测定原理本试验测定原理基于IFCC推荐的方法，反应原理如下：L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺＋甘氨酰甘氨酸γ-GTL-γ-谷氨酰甘氨酰甘氨酸＋5-氨基-2-硝基苯甲酸盐在上述反应中，5-氨基-2-硝基苯甲酸盐的生成速率与样本中γ-GT的活力成正比，通过在405nm处监测吸光度的上升速率，即可测得样本中γ-GT的活力。
3、试剂试剂生产商：长海科华公司。
剂型：液体双试剂。
包装量：R1：4*40ml R2：2*20ml注册号：沪食药监械（准）字2010第2401168号。
生产许可证号：沪药管械生产许20030916号。
基本成份：试剂1：Trist缓冲液100mmol/l甘氨酰甘氨酸125mmol/l试剂2Trist缓冲液100mmol/lL-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺14.5mmol/l储存条件和有效期：试剂避光储存于2―8℃可稳定12个月。
启用后2―10℃可稳定30天，18－25℃可稳定5天，若试剂混浊，或空白在405nm下吸光度值大于0.8A时，则不能使用。
4、标准品：生产商：上海科华公司生产的多项标准。
剂型：干粉试剂，用5ml去离子水复溶。
保存条件：2――8℃稳定至有效期。
5、质控品：生产商：英国Randox公司。
剂型：干粉试剂，用5ml去离子水复溶，完全溶解30分钟后使用。
血清丙氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定
血清丙氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定1.实验原理国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。
ALTL-丙氨酸+ -酮戊二酸丙酮酸+ L-LDH（乳酸脱氢酶）谷氨酸丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸+ NAD+ + H2O 加入磷酸吡哆醛（P-5-P）是为了稳定ALT活性，避免样品中因内源性磷酸吡哆醛不足造成测定结果假性偏低。
(如心肌梗死、肝病和特别监护病人的结果)[1]2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。
3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂奥林巴斯ALT测定试剂盒试剂1 + 试剂26.1.1 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.3变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.4 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
酶的免疫化学测定
(3)肝酶谱： 主要是用来判断有无肝实质细胞损伤、 肝内外胆汁淤积等肝胆疾病。 (4)肿瘤酶谱： 具有器官特异性的有ACP及其同工酶、 ALP及其同工酶、γ-GT及其同工酶、AFU、 AMY及其同工酶、LPS等；非器官特异性的 有ALT、CK同工酶、ALD同工酶、LD同工酶 等。
(5)胰酶谱：
主要用于急性胰腺炎的诊断和鉴别
2．显色染料
常用显色染料有偶氮染料和四唑盐等。它们易 溶于水，难溶于一般的有机溶剂。 酶学中只是利用所进行的偶合反应，由所生成 不同颜色的偶氮色素进行同工酶谱检测，四唑盐起 着受氢体的作用，如将四唑盐及双四唑盐分别还原 成紫红色的甲躜(formazan)和紫蓝色的双甲躜。 常用的四唑盐有：硝基四唑蓝盐(NBT)，碘化硝 基四唑盐(INT)、甲基噻唑四唑盐(MTT)等。其中NBT 生成的色素难以溶解，在局部区域染色良好，使用 最多。
(三)临床意义
ALT是反映肝损伤的一个很灵敏的指标，临 床上主要用于肝脏疾病的诊断。 各种急性病毒性肝炎、药物或酒精中毒引起 的急性肝损害时，血清ALT水平可在临床症状(如 黄疸)出现之前就急剧升高且ALT>AST。
急性肝炎时血清ALT高低与临床病情轻重相 平行，且往往是肝炎恢复期最后降至正常的酶， 是判断急性肝炎是否恢复的一个很好指标。假如 能同时测定AST，并计算AST／ALT之比，则对于 急、慢性肝炎的诊断、鉴别诊断以及判断转归也 特别有价值。急性肝炎时比值<1，肝硬化时比值 ≥2，肝癌时比值≥30． 重症肝炎时由于大量肝细胞坏死，血中ALT 逐渐下降，而胆红素却进行性升高，出现所谓 “酶胆分离”现象，常是肝坏死的前兆。
三、分析方法
临床同工酶的分析大致可分为两步，即 首先精确地分离出某酶的各同工酶组分，然 后测定酶的总活性和各同工酶或亚型组分的 活性。
谷丙转氨酶检测试剂盒（IFCC法）说明书
【产品名称】通用名称：谷丙转氨酶检测试剂盒(IFCC法) 英文名称：Alanine aminotransferase acc. toIFCC (ALTL)【包装规格】500 tests, 4×100 tests, 1100 tests;【预期用途】应用于罗氏cobas c 701/702，cobas c501/502，cobas c 311，cobas c 111，cobas Integra 400/400plus全自动生化分析仪，体外定量测定人体内血清和血浆中的谷丙转氨酶(ALT)。
概要1,2在人体的很多组织中均能发现谷丙转氨酶(ALT)。
其中，ALT最主要的来源是肝脏,因此,可以通过检测谷丙转氨酶来诊断肝脏疾病。
在肝炎、肝硬化、阻塞性黄疸、肝癌以及慢性酒精中毒等疾病时，谷丙转氨酶的活性增加。
当病人患有非复杂型心肌梗死时，其谷丙转氨酶的活性仅会有轻微增加。
无论何种疾病当其进程影响到肝脏细胞完整性时,谷丙转氨酶(ALT)以及天冬氨酸转氨酶(AST)的活性均会升高，但谷丙转氨酶(ALT)具有更好的肝脏特异性。
此外，谷丙转氨酶(ALT)的活性升高持续时间更长。
患有维生素B6缺乏症的病人，其血清中的转氨酶活性会降低。
转氨酶活性的明显降低可能与磷酸吡哆醛浓度降低和转氨酶的辅基类型有关，并会导致主酶/全酶比值升高。
【检测原理】本方法遵循IFCC的推荐方法,并在性能和稳定性方面进行了优化。
3,4L-丙氨酸和2-酮戊二酸在谷丙转氨酶的催化作用下生成丙酮酸，丙酮酸与NADH在乳酸脱氢酶的催化作用下生成L-乳酸以及NAD＋。
L-丙氨酸＋2-酮戊二酸谷丙转氨酶丙酮酸＋L－谷氨酸丙酮酸＋NADH＋H＋乳酸脱氢酶 L-乳酸＋NAD＋NADH氧化的速率与催化剂谷丙转氨酶的活性成正比。
通过测定吸光度的降低测得。
【主要组成成份】R1 TRIS缓冲液:224mmol/L, pH7.3(37 °C)；L-丙氨酸:1120mmol/L;白蛋白(牛):0.25%;乳酸脱氢酶(微生物):≥45μkat/L;稳定剂;防腐剂R2/SR 2-酮戊二酸:94mmol/L;NADH:≥1.7mmol/L;添加剂;防腐剂【储存条件及有效期】2-8℃储存18个月。
肝病患者血清谷氨酸脱氢酶的检测及其预后变化规律
肝病患者血清谷氨酸脱氢酶的检测及其预后变化规律目的通过观察患者血清中谷氨酸脱氢酶（GLDH）的变化情况，以及该酶在肝细胞损害性疾病中的活性，结合谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）等指标鉴别诊断肝病的基本类型和预后的判断。
方法采用德意志临床化学协会（DGKC法）检测GLDH，同时检测AST、ALT、TB及GGT等常规生化项目，并作相关性分析，统计有关指标。
结果对于肝细胞损伤性疾病患者，血清中GLDH的活性明显高于健康者和其他疾病患者（P＜0.05）。
其中急性肝病患者GLDH阳性率可达76.0%，慢性乙型肝炎为57.5%，原发性肝癌为46.2%，肝硬化为25.6%，急性脂肪肝为71.4%。
结论谷氨酸脱氢酶作为肝细胞病变，特别是急性乙型肝炎和急性脂肪肝的诊断指标具有重要临床价值，并对指导临床治疗和预后判定具有重要意义。
标签：谷氨酸脱氢酶；肝损伤；临床应用谷氨酸脱氢酶（GLDH）为一种含锌线粒体酶，主要分布于肝脏、心肌和肾细胞线粒体的基质及内膜中，而以肝组织活性最高。
GLDH为肝线粒体特异性酶，健康人正常情况下血中含量很低，但在肝细胞损伤或坏死时可进入血流，使血清中GLDH活性明显增高。
它催化谷氨酸脱氢、脱氨最终生成α-酮戊二酸之间的可逆反应[1]。
此反应是体内大多数氨基酸经脱氢联脱氨基的关键步骤，也是体内非必需氨基酸由联合脱氨逆向反应生成的重要反应，还是连接氨基酸代谢，三羧酸循环的中心环节，故主要分布于肝细胞线粒体内的GLDH只有在肝细胞受损害时才明显升高[2]。
本文利用全自动生化分析仪AU5800系列测定各种肝病患者的血清GLDH水平，并与常规肝功能指标对比，以分析评价其临床应用意义。
1 资料与方法1.1一般资料分肝病组和正常对照值，肝病组近一年来本院就诊患者共236例，男120例，女116例，年龄12～68岁。
其中慢性肝炎80例，急性肝炎25例，原发性肝癌26例，肝硬化82例，其他肝炎23例，其中慢性肝炎的诊断及国家肝病临床分型按标准划分。
AST
检验原理试剂以国际临床化学联合会（IFCC）推荐方法为基础1样本中的AST催化L-天冬氨酸和a-氧化戌二酸氨基转换，生成草酰乙酸和L-谷氨酸2在NADH和苹果酸脱氢酶（MDH）存在下，草酰乙酸被还原为L-苹果酸，NADH被氧化为NAD+，从而使340nm处的光吸收值下降。
通过监测340nm处光吸收值下降的速率，可以测定AST活力3样本中内源性丙酮酸的干扰可由试剂中LDH快速、完全地消除，不会对测定产生干扰。
临床意义AST广泛分布于人体各组织。
为细胞内酶，主要分布于细胞质及线粒体体机基质中。
在心、肝、骨骼肌、肾和红细胞内有较高的浓度。
血清中酶活力最低。
红细胞中酶活力约为血清中得10倍，故轻度溶血对血清酶活性测定有一定影响。
这些组织的损伤或疾病，如心肌梗塞、病毒性肝炎、肝坏死、肝硬化和肌营养不良等症时，酶即从细胞内释放进入血液而引起血清或血浆中AST水平的升高。
储存条件及有效期在2-8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为26个月。
样本要求1血清或血浆样本均不应溶血。
血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。
2样本在2~8℃可稳定7天。
检验方法1试剂配制：在室温中，按照瓶签上标定的体积定量加入新鲜去离子水或蒸馏水，轻轻混匀至试剂完全溶解。
2测定条件：温度37°C 波长340nm 测定模式：速率法反应方向：吸光度下降的反应校准模式：两点定标注：两点定标：其中一点为实验用水，另一点为校准品3校准程序①校准品：复星长征临床化学校准血清为本试剂配套使用的校准品。
复星长征临床化学校准血清是以人与人源性物质为基础的含有26个不同组分、29个不同方法学定标值（校准浓度）的冻干校准血清。
临床化学校准血清中AST活性的计量学溯源性与校准浓度见相应批号临床化学校准血清的说明书。
②校准及校准频次的要求：正常情况下，应每周至少对测定进行一次校准。
当发生下列情况（试剂批号改变时、配套使用的仪器进行维修、保养或关键部件进行更换后、质控品的测定结果发生偏移或超出规定的范围等）应重新对测定进行校准后，再对患者样本进行检测。
干化学法测定谷丙转氨酶的方法学研究
干化学法测定谷丙转氨酶的方法学研究马心林(聊城市血液中心,聊城252000)【摘要】 目的 建立干化学分析法在非固定采血点检测献血者血液丙氨酸氨基转移酶(A LT)活性技术。
方法 对干化学法的准确性(包括线性)和精密度进行方法学研究并与国际临床化学联合会(IFCC)推荐的速率法进行比较。
结果 干化学法测定A LT线性范围上限可达1000U/L,对速率法测定出来的高值、临界值和低值标本进行批内检测,不精密度分别为4. 59%、3.24%和3.25%。
结论 干化学法与IFCC推荐速率法的测定结果近似,可以用于街头无偿献血的初步筛查。
【关键词】 干化学法 速率法 谷丙转氨酶Methodological study on detection of A LT with dry-chemical analysis Ma Xinlin Liaocheng B lood Center, Liaocheng252000,China【Abstract】Objective T o establish a method for blood A LT assay using dry-chemical analysis.Methods The accuracy including linearity and precision of the dry-chemical analysis com pared with those of kinetic method recommended by IFCC.R esults The maximal limit of linear range for measuring A LT by dry-chemical analysis could reach1000U/L.The within-run im precision was4.59%,3.24%and3.25%for high,critical and normal A LT values,respectively.Conclusions Dry-chemical analysis can be used for preliminary screening of blood donors.【K ey w ords】K inetic method M icrotiter plate method A LT 干化学法测定谷丙转氨酶(丙氨酸氨基转移酶,A LT)是根据丙酮酸氧化酶反应原理制备的试纸条方式,使用专用机器自动检测全血、血清、血浆中A LT活性浓度。
临床生化检验：丙氨酸氨基转移酶测定 (速率法 )
丙氨酸氨基转移酶
丙氨酸氨基转移酶（ALT）又称为谷丙转氨酶（GPT ）。是转移酶类的一种，能催化双底物分子之间基团 的转移，将供体分子基团或辅酶转移给受体分子。 主要存在于各种组织细胞中，以肝细胞中含量最多。 正常时只有极少量释放入血液中，故血清ALT活性很 低。各种肝炎的急性期，药物中毒性肝细胞性坏死等 疾病时，肝细胞酶大量释放入血中，使血清ALT活性 显著增高，因此它是诊断病毒性肝炎，中毒性肝炎等 肝病的重要指标。
反应式
试剂与器材
R1试剂： Tris缓冲液 100mmol/L L-丙氨酸 500mmol/L 乳酸脱氢酶(LDH) ≥ 2000U/L NADH
R2试剂： α-酮戊二酸 15mmol/L 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH) 0.18mmol/L
标准液：79U／L 病人血清 紫外分光光度计
样品要求
丙酮酸 NADH H LDH L 乳酸 NAD
上述偶联反应中， NADH被氧化为NAD+ ， NADH 的氧化速率与标本中酶活性呈正比，在340nm波长处， NADH呈现特征性吸收峰，而NAD则没有。因此，可在 340nm处连续监测到NADH的消耗量（即吸光度的下降 速率-△A/min ），从而计算出ALT活性浓度。
性能指标
1、线性范围：0-400U/L范围内，剂量-反应曲线线 性相关系数应不低于0.9900
2、准确度：误差≤±10% 3、精密度：批内变异系数＜6%，批间相对极差＜
8% 4、空白吸光度：以蒸馏水为空白对照（340nm；
1cm；37℃）应不小于0.9
注意事项
1．操作中必须准确加入标准液及标本量，并严格控制反应 时间，准确读数。
2．血清不宜反复冰冻保存，以免影响酶活性。血清置 4℃冰箱1周，酶活性无显著变化，不推荐冰冻保存ALT测 定标本，而宜用新鲜血清标本。草酸盐、肝素、枸橼酸盐 虽不抑制酶活性，但可引起反应液轻度混浊。血液混浊时 可影响测定结果或无法测定（如血脂过高、血清蛋白变质 等）。红细胞内ALT含量为血清中3～5倍，应避免使用溶 血标本。
恩替卡韦联合甘草酸二铵对慢性乙型病毒性肝炎患者肝纤维化及肝功能的影响
恩替卡韦联合甘草酸二铵对慢性乙型病毒性肝炎患者肝纤维化及肝功能的影响作者：张嵩李钦徐文君熊英来源：《中国医学创新》2020年第24期【摘要】目的：觀察恩替卡韦联合甘草酸二铵对慢性乙型病毒性肝炎患者肝纤维化及肝功能的影响。
方法：选择2017年8月-2019年7月于本院治疗的84例慢性乙型病毒性肝炎患者。
按随机数字表法分为观察组和对照组，每组42例。
对照组接受恩替卡韦治疗，观察组于对照组基础上加用甘草酸二铵治疗。
比较两组肝纤维化指标[层黏连蛋白（LN）、透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）]、肝功能指标[谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）]、HBV-DNA转阴率及不良反应发生情况。
结果：治疗前，两组LN、HA、PCⅢ、AST、ALT水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。
治疗6个月后，两组LN、HA、PCⅢ、AST、ALT 水平均降低，且观察组上述指标水平均低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。
观察组HBV-DNA转阴率为85.71%，高于对照组的64.29%，差异有统计学意义（P<0.05）。
观察组不良反应发生率为14.29%，与对照组的11.90%比较，差异无统计学意义（P>0.05）。
结论：恩替卡韦联合甘草酸二铵治疗慢性乙型病毒性肝炎可有效改善患者肝功能，逆转肝纤维化，有利于提高HBV-DNA转阴率，且不会增加不良反应。
【关键词】慢性乙型病毒性肝炎恩替卡韦甘草酸二铵肝纤维化肝功能[Abstract] Objective： To observe the effect of Entecavir combined with Diammonium Glycyrrhizinate on liver fibrosis and liver function in patients with chronic viral hepatitis B. Method：Eighty-four patients with chronic viral hepatitis B who treated in our hospital from August 2017 to July 2019 were selected. According to the random number table method， the patients were divided into observation group and control group， 42 cases in each group. The control group received Entecavir， the observation group was treated with Diammonium Glycyrrhizinate on the basis of the control group. Liver fibrosis indexes [laminin （LN）， hyaluronic acid （HA）， procollagen Ⅲ（PC Ⅲ）， liver function indexes [aspartate aminotransferase （AST）， alanine aminotransferase （ALT）]， HBV-DNA negative conversion rate and adverse reactions were compared between two groups. Result： Before treatment， there were no significant differences in the levels of LN， HA，PCⅢ， AST and ALT between two groups （P>0.05）. At 6 months after treatment， the levels of LN， HA， PCⅢ， AST and ALT in two groups were decreased， and the above indexes in the observation group were lower than those in control group， differences were statistically significant （P<0.05）. The negative rate of HBV-DNA in the observation group was 85.71%， which was higher than 64.29% in the control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. The incidence of adverse reactions in the observation group was 14.29%， compared with 11.90% in the control group， the difference was not statistically significant （P>0.05）. Conclusion： Entecavir combined with Diammonium Glycyrrhizinate in the treatment of chronic viral hepatitis B can effectively improve liver function， reverse liver fibrosis， improve the negative rate of HBV-DNA， and will not increase adverse reactions.[Key words] Chronic viral hepatitis B Entecavir Diammonium Glycyrrhizinate Liver fibrosis Liver functionFirst-author’s address：People’s Hospital of Shan grao City， Shangrao 334000， Chinadoi：10.3969/j.issn.1674-4985.2020.24.033慢性乙型病毒性肝炎作为常见肝脏疾病，由乙肝病毒（Hepatitis B virus， HBV）感染所致，可导致患者多器官损伤，诱发肝硬化或肝癌，危及患者生命安全[1-2]。
常规化学室内质控品参考值
正常值
货号：UN1557效期：2018-10-31
分析物
单位
参考值
方法学
α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)
U/l
206
氧络丁酸 < 10mmol/l，37℃
白蛋白(ALB)
g/l
41.7
溴甲酚绿法
碱性磷酸酶(ALP)
U/l
301
对硝基苯酚磷酸盐，DEA缓冲液，37℃
谷丙转氨酶(ALT)
肌酐(CREA)
μmol/l
127
苦味酸法，去蛋白
Γ-谷氨酰基转移酶（γ-GT）
U/l
49
γ-谷氨酰基-3-羧基-4-硝基苯胺底物，37℃
血糖(GLU)
mmol/l
6.15
葡萄糖氧化酶法
血清铁(Iron)
μmol/l
19.3
比色法（不含ppt）
乳酸脱氢酶(LDH)
U/l
402
DGKC推荐磷酸缓冲液法37℃(P→L)
U/l
754
DGKC推荐磷酸缓冲液法37℃(P→L)
脂肪酶(lip)
U/l
74
Randox比色法37℃
锂(Li)
mmol/l
1.85
比色法
镁（Mg）
mmol/l
1.70
二甲苯胺蓝
无机磷（P）
mmol/l
2.20
磷钼酸盐，UV法
钾（K）
mmol/l
5.82
直接离子选择电极（ISE）
总蛋白（TP）
g/l
μmol/l
43.2
第五代比色法
直接胆红素(DB)
μmol/l
32.2
两点法、终点法、速率法
什么叫两点法、终点法、速率法?两点法：测定酶反应开始后某一时间内(t1到t2)产物或底物浓度的总变化量以求取酶反应初速度的方法。
终点法：通过测定酶反应开始到反应达到平衡时产物或底物浓度总变化量，以求出酶活力的方法，亦称平衡法。
速率法：是指连续测定(每15秒~1分钟监测一次)酶反应过程中某一反应产物或底物的浓度随时间的变化来求出酶反应的初速度的方法，即连续监测法。
一、常用生化检测项目分析方法举例1．终点法检测常用的有总胆红素（氧化法或重氮法）、结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、总胆固醇（胆固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白胆固醇（直接测定法）、钙（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、镁（二甲苯胺蓝法）等。
以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法，包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。
2．固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
（两点法）3．连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等，也可用连续监测法。
4．透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗"O"、类风湿因子，以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。
二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等，其程序均已经固化在存储器里，用户不能修改。
各种测定项目的分析参数（analysis paramete）大部分也已设计好，存于磁盘中，供用户使用；目前大多数生化分析仪为开放式，用户可以更改这些参数。
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目录
1. 检测原理
2. 标本采集与处理
2.1 受检者的准备
2.2 静脉采血
2.3 抗凝剂
2.4 标本处理
3. 试剂
3.1 试剂
3.2 校准血清
3.3 试剂与校准血清的稳定性
4. 仪器
5. 操作
6. 计算
7. 操作性能
7.1 精密度
7.2 准确度
7.3 灵敏度
7.4 可报告范围
7.5 特异性
7.6 干扰
8. 参考值
9. 临床意义
附录A: 参数
1. 检测原理
谷草转氨酶催化L-天冬氨酸的氨基转移与苹果酸脱氢酶（MDH）催化的反应偶联，使NADH氧化成N AD+。
NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中的AST的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出AST活性。
AST
L-天冬氨酸+α-酮戊二酸----------- 草酰乙酸+ L-谷氨酸
MDH
NADH + 草酰乙酸+ H+-------------- L-苹果酸+ NAD+
2．标本采集与处理
2.1 受检者的准备：
病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：
除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：
血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：
血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3．试剂
3.1 试剂：
本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司AST试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：
3.2：校准血清
使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。
校准频次：
空白定标：每日需做试剂空白定标。
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。
3.3 试剂的稳定性：
原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。
18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。
当试剂空白吸光度低于0.8时，试剂按照失效处理。
多项校准血清在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。
参见校准血清说明书。
4．仪器
KONELAB 30型号仪器。
性能：波长340nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。
5．操作
样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。
本法为IFCC法。
参数见后附，附录A。
试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。
6．计算
ΔA/min×Vt×1000
AST(U/L) = ----------------------------- = ΔA/min×F
e×Vs×d
式中：ΔA/min——每分钟吸光度变化率； e ——18.5 摩尔吸光系数；
Vt——反应液总体积（ml）；d ——1 比色杯光径（cm）；
1000——变化因数；Vs——标本体积（ml）；
7．操作性能
7.1 精密度：
批内CV<0.34%，批间CV<3.81%。
7.2 准确度：
检测结果的相对不准确度≤±10%。
7.3 灵敏度：
谷草转氨酶浓度为：300U/L时，吸光度变化率ΔA340nm/min为0.126～0.154。
7.4 可报告范围：
血清与试剂用量之比为1:12时，测定上限为600U/L。
7.5 特异性：
测量值在给定值的90%-110％范围内。
7.6 干扰：
内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。
8．参考值
0～38U/L
9．临床意义
天冬氨酸氨基转氨酶又称谷草转氨酶，它催化L—天门冬氨酸氨基的转移。
病毒性肝炎、急性风湿性心肌炎、中毒性肝炎等此酶活性显著增高，AST/ALT比值对鉴别肝脏损害程度和病情变化有重大意义。
附录A: 参数。