半抗原偶联

七、通过酚基与载体蛋白偶联 • 一氯醋酸钠：本法适于带有酚基半抗原的改造。 将带有酚基的药物与一氯醋酸钠反应即可得到 带有羧基的半抗原衍生物
将酚基与对氨基苯甲酸反应 • 将酚基与对氨基苯甲酸反应导入羧基，再进一 步通过EDC等方法，实现半抗原与载体蛋白质 的偶联
八、通过糖基的过碘酸氧化法
• 过碘酸氧化法：过碘酸将糖环氧化成双醛基， 再与蛋白质上的氨基偶联。本法常用于配糖体 类药物与蛋白质的偶联。
• 对氨基苯胺的衍生物的半抗原与抗体反应
• 抗苯胺、邻氨基苯甲酸、间氨基苯甲酸、 对氨基苯甲酸的抗血清。
• 旋光异构体（右旋酒石酸、左旋酒石酸、 内消旋酒石酸）
半抗原与载体偶联时，思考问题 •
1）半抗原的溶解度和稳定性：在结合反应中应不导致半抗原活性 的改变，同时也不能使载体变性至不溶解的程度。 2）偶联的位置：抗体对远离蛋白质联接点的半抗原部分有最好的 特异性，故联接时应使联接键远离半抗原的决定簇。 3）选择适合的偶联试 剂：不同的半抗原在偶联时，应根据半抗 原的化学结构，以及反应方式选择适当的偶联试剂。如小分子肽 类有一定的三级结构，在溶液中依靠氨基酸残基来维持其结 构的 稳定。因此，用双功能的亚氨酸酯不但对氨基酸有选择，而且能 代替被取代的每一个ε-氨基的正电荷。蛋白质与偶联剂接触后， 使不同蛋白质分子的功能基团 交联并凝聚。广泛交联的蛋白质， 其溶解度常降低，而这种溶解度差的蛋白质却是有效的免疫源。 • 4)载体蛋白的选择,异源性以及不干扰未来的检测对象 .
一、 有游离氨基半抗原与载体的连接方法
• （1）碳化二亚胺法：碳化二亚胺是一种化学 性质非常活跃的双功能试剂，它们既可与半抗 原上的羧基又可与半抗原上的氨基缩合。此法 非常简便，只要将半抗原与 载体蛋白质按一 定分子比混合在适当的溶液中，然后加入碳二 亚胺，搅拌l～2h，置室温反应24h，最后透析 除去未反应的半抗原，即可得到人工免疫原。
• 不完全抗原 只具有反应原性而缺乏免疫原性的物质称 为不完全抗原(incomplete antigen),亦称为半抗原 (hapten)。半抗原又分为简单半抗原和复合半抗原。 • 1.简单半抗原(simple hapten) 分子量较小,只有一个抗 原决定簇,不能与相应的抗体发生可见的反应,但能中和 相应的抗体阻止其出现可见的反应(用沉淀抑制反应可 证实)。如抗菌素、酒石酸、苯甲酸等都属于这类抗原。 • 2.复合半抗原(complex hapten) 分子量较大,有多个抗 原决定簇。一般的半抗原都属于此类,能与相应的抗体 发生沉淀反应 二硝基氯苯(DNCB)、多糖、类脂质、脂 多糖等半抗原都为复合半抗原。
EDC介导的载体蛋白与含COOH-的半抗原的交联
2、混和酸酐法
• （2）混合酸酐法又称为氯甲基异丁酯法，主 要用以甾体激素与蛋白质的偶连。以烷基氯甲 基为偶连剂，最常用的是氯甲基异丁酯。含有 羧基的半抗原与氯甲基异丁酯反应形成混合酸 酐，然后在与蛋白质载体上的氨基反应形成肽 键。
三、羟基化合物的偶联
• （1） 琥珀酸酐法：本法用于带有羟基的半抗 原的改造。琥珀酸酐加水转变成琥珀酸。如将 带有羟基的半抗原和琥珀酸酐在无水吡啶中反 应，即可得到带有羧基的半抗原琥珀酸的衍生 物。
四、通过巯基偶联
• 将半抗原中的巯基，通过交联剂马来酰亚胺活 化的载体蛋白与含SH-的半抗原的交联
含巯基半抗原偶联反应图
1、通过碳化二亚胺偶联过程示意图
2）戊二醛法
• （ 2）戊二醛法：戍二醛是带有两个活性基团 双功能的连结剂，它借助两端的醛基与载体和 半抗原的氨基以共价键连接
戊二醛的两个醛基分别与载体及半抗原-NH2结合
二、带羧基的半抗原与载体蛋白偶联
1、碳化二亚胺法 • （1）碳化二亚胺法：碳化二亚胺是一种化学 性质非常活跃的双功能试剂，它们既可与半抗 原上的羧基又可与半抗原上的氨基缩合。此法 非常简便，只要将半抗原与 载体蛋白质按一定 分子比混合在适当的溶液中，然后加入碳二亚 胺，搅拌l～2h，置室温反应24h，最后透析除 去未反应的半抗原，即可得到人工免疫原
五、带有酮基的半抗原 • （1） 羧甲基羟胺法：带有酮基的半抗原（如 孕酮、睾酮）与O-(羧甲基)羟胺反应，转变为 带有羧基的半抗原衍生物。
六、苯胺基与蛋白质偶联
• 重氮化的对氨基苯甲酸法：本法适于带有酚基 的半抗原（如某些药物）的改造。先将对氨基 苯甲酸和亚硝酸钠反应，反应产物再作用于带 有酚基的半抗原，从而制得带有羧基的半抗原 衍生物。
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