Waters 性能稳定性凝胶渗透色谱
凝胶渗透色谱在聚合物分析中的应用
©2012 Waters Corporation
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Content
聚合物基本概念 凝胶渗透色谱技术介绍
凝胶渗透色谱应用
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Polymer Science Basic
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数均分子量: Mn
niMi
ni niMi2 niMi
1/α
分子量分布指数
重均分子量: Mw
Mw PD Mn
α+1 粘均分子量: Mŋ niMi
Z均分子量: Mz
niMi3 niMi2 niMi4
n---摩尔数（丰度） M---分子量
Z+1均分子量: Mz+1 niMi3
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流动相制备
流动相过滤和脱气
– 超纯水或用KMnO4处理过的二次蒸馏水 色谱纯
缓冲盐体系，浓度尽可能低
– 用0.45um滤膜过滤流动相,以去掉灰尘、不溶解的盐份等不纯物，以保护 凝胶柱。溶剂中的气泡会影响RI检测器的基线漂移，因此需要脱气。
流动相添加组分
水相凝胶色谱
溶剂：水，缓冲盐调节PH
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有机相凝胶色谱溶剂条件
THF
易被氧化，过氧化物含量要少于100 ppm，否则会降低柱寿命、影响重现性 （ 可加5 滴THF 到2 ml 10% 的KI溶液中测试，若溶液呈深黄色则说明过氧化 物可能超标） 现购现用、重蒸或加入抗氧化剂BHT（2,6一二叔丁基对甲酚）
凝胶渗透色谱法测试标准
凝胶渗透色谱法测试标准凝胶渗透色谱法是一种常用的生物分析技术，可以用于分离和测定分子的大小、形状和分子量。
目前，凝胶渗透色谱法已经成为生物医药、食品科学、环境监测等领域中不可或缺的分析手段之一。
为了保证测定结果的准确性和可比性，有必要制定相应的测试标准。
凝胶渗透色谱法测试标准主要包括以下几个方面：1.样品准备：样品准备是凝胶渗透色谱法测试的首要步骤。
样品的准备是否得当，直接影响到测试结果的准确性。
测试标准应包括样品采集、保存和处理的方法，以及样品的浓度、pH值和溶解剂的选择等。
2.凝胶选择：凝胶是凝胶渗透色谱法分析的载体，不同的凝胶具有不同的渗透特性。
测试标准应包括凝胶的选择原则、规格要求和质量控制方法。
同时，还应指明凝胶的维护和保养方法，以保证凝胶的稳定性和再现性。
3.仪器操作：凝胶渗透色谱法需要一系列的仪器和设备来进行操作，包括色谱柱、检测器、泵浦和数据处理软件等。
测试标准应包括这些仪器的选型和校准要求，以及操作人员的培训和资质要求。
此外，还应指明每个仪器的使用方法和维护保养要求。
4.方法验证：为了保证凝胶渗透色谱法测试结果的可靠性，需要进行方法验证。
测试标准应包括方法验证的原则、步骤和指标。
常见的方法验证指标包括线性范围、灵敏度、准确度、重复性和稳定性等。
5.数据分析和结果表达：凝胶渗透色谱法测试结果的准确性和可靠性，不仅取决于仪器和方法的选择，还取决于数据的分析和结果的表达。
测试标准应包括数据处理和分析的方法，以及结果的正确解读和报告要求。
总之，凝胶渗透色谱法测试标准是确保该技术准确、可靠和可比的重要保障。
只有制定和遵守科学合理的测试标准，才能保证凝胶渗透色谱法在实践中的正确应用和推广。
沃特世 凝胶渗透色谱产品说明书
[ GPC性能 ]凝胶渗透色谱(GPC)凝胶渗透色谱目录脂溶性聚合物非水相校正标准品 (4)非水相样品GPC色谱柱 (6)水溶性聚合物与小分子水相校正标准品 (14)水相样品SEC色谱柱 (16)蛋白质分析和鉴定用SEC色谱柱....... .. (18)自动进样器样品瓶LC/GC认证样品瓶 (20)TruView LCMS 认证样品瓶 (20)为您的应用选择正确的样品瓶和隔垫 (21)样品瓶瓶盖指南 (21)小技巧与常见问题溶剂因素 (24)常见问题 (26)1964年，工作于陶氏化学公司(Dow Chemical Company)的John C. Moore出版了关于凝胶渗透色谱(GPC)的著作，由此改变了科学家们研究合成聚合物和大分子的方式。
此后不久，沃特世公司从陶氏化学公司获得该项技术的授权，并生产出第一台商业化的凝胶渗透色谱仪-GPC-100。
结合具有特定用途的专门仪器与陶氏化学公司的创新技术，GPC就能够向科学们提供通过其它方法很难获得的重要信息。
四十多年来，沃特世持续精制仪器、柱装填材料和技术，用以提高GPC分析能力。
这些创新成果让GPC技术由最初的聚合物分析向外扩展到包含了从干扰基质中分离小分子和大分子的应用，比如在食物、医药制剂和天然产物中发现的那些目标分析物。
作为GPC市场的领导者，沃特世为您提供最优质的GPC产品和专家应用支持。
作为色谱仪器和耗材的主要生产厂商，我们所有的生产设施都严格遵循ISO、FDA和cGMP指导规范。
沃特世向您保证我们将不断为您提供处于分离科学前沿地位的解决方案。
[ 脂溶性聚合物 ]聚合物专用校正标准品专为不同类型的聚合物分析量身定制，这些便于使用的校正标准品为分析人员就已知分子量范围提供快速、可靠的标准品。
聚合物类型和分子量范围在以下产品指南中列出。
产品描述部件号聚丁二烯(Polybutadiene)标准品套装WAT035709 0.5 g/瓶装聚丁二烯，每瓶标准品分子量依次为：1000, 3000, 7000, 10,000, 30,000, 70,000, 100,000, 300,000, 700,000, 1,000,000聚异戊二烯(Polyisoprene)标准品套装WAT035708 0.5 g/瓶装聚异戊二烯，每瓶标准品分子量依次为：1000, 3000, 10,000, 30,000, 70,000, 100,000, 300,000, 500,000, 1,000,000, 3,000,000聚甲基丙烯酸甲酯(Polymethylmethacrylate)低分子量标准品套装WAT035707 0.5 g/瓶装聚甲基丙烯酸甲酯，每瓶标准品分子量依次为：1000, 1700, 2500, 3500, 5000, 7000, 10,000, 13,000, 20,000, 30,000聚甲基丙烯酸甲酯(Polymethylmethacrylate)中等分子量标准品套装WAT035706 0.5 g/瓶装聚甲基丙烯酸甲酯，每瓶标准品分子量依次为：2400, 9500, 31,000, 52,000, 100,000, 170,000, 270,000, 490,000, 730,000, 1,000,000单分子量标准物质在许多情况下，使用单个的校正标准品来确认样品混合物中的某一分子量组分或扩展现有校正方案的范围。
凝胶渗透色谱
凝胶渗透色谱目录一、基本原理 (2)1.1 凝胶的特性 (2)1.2 色谱的分离原理 (3)1.3 凝胶渗透色谱在分离技术中的应用 (5)二、仪器设备 (6)2.1 凝胶渗透色谱仪的主要组成部分 (7)2.2 主要性能指标及选择 (9)2.3 仪器设备的清洁与维护 (9)三、样品前处理 (11)3.1 样品的选择与制备 (11)3.2 样品浓缩与净化 (12)3.3 样品检测方法的建立 (13)四、实验操作流程 (14)4.1 样品进样 (16)4.2 柱塞泵的设置与调节 (17)4.3 检测器的选择与校准 (18)4.4 数据处理与结果分析 (19)五、理论基础与数学模型 (20)5.1 凝胶渗透色谱的理论基础 (22)5.2 数学模型在凝胶渗透色谱中的应用 (23)5.3 实验数据的解释与处理 (24)六、应用领域 (26)6.1 在化学领域中的应用 (28)6.2 在生物医学领域中的应用 (29)6.3 在环境科学领域中的应用 (30)七、常见问题与解决方案 (31)7.1 常见问题及原因分析 (32)7.2 预防措施与解决策略 (33)八、实验安全与防护 (34)8.1 实验室安全规程 (36)8.2 个人防护装备的使用 (37)8.3 应急处理措施 (38)九、最新研究进展 (39)9.1 新型凝胶材料的研究与应用 (40)9.2 色谱技术的创新与发展 (41)9.3 聚合物凝胶渗透色谱法的探索 (43)一、基本原理它的基本原理是利用具有不同孔径大小的多孔凝胶颗粒作为固定相，将待分离的混合物通过凝胶柱进行分离。
在色谱过程中，待分离的混合物会与凝胶颗粒发生相互作用，从而导致不同成分在凝胶颗粒之间的分配系数和扩散速率的差异。
根据这些差异，混合物中的各个成分可以通过不同的时间顺序依次通过凝胶柱，从而实现对混合物中各组分的高效分离。
GPC的关键参数包括：凝胶颗粒的大小和形状；溶液流速；压力；洗脱剂的选择和浓度。
GPC-1：凝胶渗透色谱操作手册
凝胶渗透色谱操作手册一． 高聚物的分子量及分子量分布对于小分子化合物，无论有机的或无机的，都有固定的分子量，并且可以通过分子式直接计算出来。
但对于高聚物来说，除了少数几种蛋白质之外，分子大小都是不一样的，它是由许多具有相同链节结构，但不同链长即不同分子量的各种大小分子所组成的混合物。
所以，高聚物的分子量实际上是各种大小不同高分子的分子量的统计平均值。
高聚物的分子量具有多分散性，每一个高聚物都有它的分子量分布。
常用的高聚物的平均分子量有四种表示方法：数均分子量，重均分子量，Z 均分子量和粘均分子量。
1． 数均分子量M n数均分子量被定义为在一个高聚物体系中，高聚物的总重量（以克为单位）除以高聚物中所含各种大小分子的总摩尔数，即数均分子量是高聚物体系中各种分子量的摩尔分数与其相应的分子量的乘积所得的总和。
它是按分子数的统计平均。
n---摩尔数 w---重量 N---摩尔分数 M---分子量∑∑∑∑∑===−−iii ii i i n M N n M n n wM 2． 重均分子量M w在一个高聚物体系中，各种大小分子的重量分数与其相应的分子量相乘，所得的各个乘积的总和，定义为重均分子量。
它是按重量统计平均的。
W---重量分数∑∑∑∑∑===iii ii i i 2i i w __M W w M w M n M n M 3． Z 均分子量M zZ 均分子量是按Z 量的统计平均。
Z 的定义为Z=w i M i 。
Z 均分子量的定义为：一个高聚物试样中，各分子量的Z 值的分数及其相当的分子量的乘积的总和。
∑∑∑∑∑∑===2i i 3i i i i 2i i i i i z __M n M n M w M w Z M Z M 由于Z=w i M i 没有具体的物理意义，因此Z 均分子量也没有具体的物理意义。
4． 粘均分子量M η用溶液粘度法测得的平均分子量为粘均分子量。
定义为：∑=α1αi i η__)M W (Mα为[η]=kM α公式中的指数。
凝胶渗透色谱gpc 型号
凝胶渗透色谱gpc型号
凝胶渗透色谱（Gel Permeation Chromatography，GPC）是一种常见的分离技术，用于分离和测定大分子化合物，如聚合物、蛋白质等。
不同型号的GPC仪器具有不同的性能和特点，以下是一些常见的GPC型号：
1.Agilent 1260 Infinity GPC/SEC系统：该系统采用高效的色谱柱和压力泵，可实现高分辨率和高精度的分离和测定。
2.Waters Alliance e2695 GPC/SEC系统：该系统采用全数字化的控制和检测系统，具有高灵敏度和高精度的分离和测定能力。
3.Shimadzu Prominence GPC/SEC系统：该系统采用高灵敏度的紫外检测器和稳定的柱温控制系统，可实现高精度的分离和测定。
4.Tosoh Bioscience GPC/SEC系统：该系统采用高精度的色谱柱和检测器，可实现高分辨率和高精度的分离和测定。
需要注意的是，不同型号的GPC仪器具有不同的性能和特点，选择适合自己实验需求的GPC仪器非常重要。
凝胶渗透色谱柱
凝胶渗透色谱柱凝胶渗透色谱柱是一种优质的分析仪器，它使用高效液相色谱技术，在连续梯度条件下，可以分离和分析固体、液体、气体和悬浮液，以及表观不溶物和超微粒等样品。
凝胶渗透色谱柱在活性材料、营养和抗生素的分析以及生物分子的精细结构解析方面应用十分普遍。
凝胶渗透色谱柱的结构基本上包括容器、色谱柱、稀释溶液和流动液。
容器用于容纳色谱柱，其中包括支架、柱支承和密封器等组件，用于定位色谱柱。
色谱柱是用于样品分离分析的主要部件，其内部空芯由一种可分离各种物质的渗透凝胶组成，填充在离心色谱柱的中心轴上，支撑色谱柱，使样品向前流动，实现分离和分析。
稀释溶液是溶质被迫从样品中分离出来的重要介质，它以水或汽油等溶剂为基础，并加入不同的添加剂以增加溶剂的特性，如电解质离子、螯合剂、增溶剂等，使系统具有良好的分离能力。
流动液是稀释溶液、色谱柱和样品之间的媒介，它以水或汽油为基础，可以用各种离子添加剂，使样品流动平稳。
凝胶渗透色谱柱的操作主要由充放液步骤、排液步骤、洗脱步骤和分离分析步骤组成。
首先加入样品，然后以一定流速加入含有抑制剂的洗脱液，使物质分为两部分，有机物和无机物，使有机物沿着稀释溶液的后流方向运行，而无机物沿着前流方向运行，实现对有机物、无机物和抗生素等物质的分离分析。
通过凝胶渗透色谱柱，可以迅速而准确地分离分析样品中的物质，特别是活性材料和抗生素，其准确性和灵敏度均得到明显提高，因此被广泛应用于各种科学研究。
凝胶渗透色谱柱的精确性好，操作简便，耗材价格低廉，而且可以用于小型研究实验室的分析仪器，这使它在分析科学中得到了广泛的应用。
在使用凝胶渗透色谱柱的过程中，需要注意以下几点：一是色谱柱的正确使用，不要折断或拉伸；二是色谱柱安装的要求，防止色谱柱滑动；三是积极排除干扰，防止杂质进入样品；四是洗脱液的使用，必须按照产品说明书操作；五是样品的操作，必须在特定温度范围内操作；六是色谱柱的存储，应采取恰当的保存措施，防止湿度的影响。
凝胶渗透色谱法测定共聚酰胺热熔胶分子质量及其分布
凝胶渗透色谱法测定共聚酰胺热熔胶分子质量及其分布以相对分子质量为7 500～122 500的聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）为标准物质，六氟异丙醇（HFIP）为溶剂，分别配制质量分数为0.1%的标准样品，采用凝胶渗透色谱仪，示差检测器，硅胶色谱柱，六氟异丙醇为流动相，流速 1.0 mL/min，柱温25℃的色谱条件对上述标准样品进行逐一分析，获得分子质量-洗脱体积标准工作曲线（LogM-V）；称取适量的共聚酰胺热熔胶样品，用六氟异丙醇溶解至质量分数0.1%的溶液，根据上述色谱条件分析，测定共聚酰胺热熔胶分子质量及其分布，并用光散射法对所得结果进行验证，结果表明该方法可用来测定相对分子质量为10 000～100 000的共聚酰胺热熔胶，所得重均分子质量Mw与光散射法测定值之间的平均误差为1.61%。
标签：凝胶渗透色谱；共聚酰胺；热熔胶；分子质量；分布共聚酰胺热熔胶是一种具有较高综合性能的热熔胶产品，已广泛应用于服装衬布、汽车工业、家具和制鞋等各个领域。
聚合物的分子质量分布与高分子材料的加工特性及材料性能紧密相关，但由于共聚酰胺热熔胶一般不溶解于四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺、氯仿等溶剂，故很难分析其分子质量及其分布，往往采用黏数[1]去代替，不利于人们对聚合机理的认识，从而影响新产品的研发。
为此，有必要建立一种凝胶渗透色谱法（GPC）测定共聚酰胺热熔胶分子质量及其分布的方法，而其关键在于选择一种合适的物质作为流动相和试样的溶剂。
间甲酚等酚类物质虽能溶解共聚酰胺热熔胶，但由于其气味特殊，黏度高等缺陷，分析时往往要通过升高温度来降低色谱柱的背压，不易操作。
而六氟异丙醇能在室温下溶解共聚酰胺热熔胶，且黏度明显小于酚类物质，在室温条件下即可进行分析。
本文以聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）为标准物质，六氟异丙醇（HFIP）为溶剂，采用凝胶渗透色谱仪，获得分子质量-洗脱体积标准工作曲线（LogM-V），在此基础上建立一种凝胶渗透色谱仪测定共聚酰胺热熔胶分子质量及其分布的方法，并用光散射法对测试结果进行验证。
Waters-1515-2414-凝胶渗透色谱(GPC)操作规程
Waters 1515-2414 凝胶渗透色谱（GPC）操作规程一、溶剂和样品准备1. 选择溶剂：尝试和选择对聚合物具有良好溶解性的THF或者DMF 作为溶剂；2. 溶剂处理：采用溶剂过滤系统（真空抽滤）对色谱纯溶剂进行过滤和脱气处理；3. 样品配制：选用处理后的溶剂配置待测样品溶液，样品体积≥4mL；样品浓度根据估算的分子量确定（Mw＝103～104，浓度为1.5～2mg/mL；Mw＝104～105，浓度为1～1.5mg/mL；Mw＝105～5 x 105，浓度为0.5～1mg/mL；Mw ＝5 x 105～106，浓度为0.1～0.5mg/mL；Mw＞106，浓度为0.05～0.1mg/mL）；4. 样品溶解：提供足够时间使聚合物完全溶解（一般在室温下静止过夜）；注：可轻微摇动样品以促进溶解但不可剧烈摇动；5. 样品过滤：样品溶解后，采用一次性微孔滤膜（孔径0.22μm）对样品溶液进行过滤，保存滤液待用；注意：每个样品需要准备两个样品瓶（分别用于溶解样品和放置过滤后的溶液）和两个注射器（分别用于过滤和进样）二、仪器启动1. 将经过真空抽滤的溶剂倒入溶剂存贮瓶中；2. 依次打开稳压电源－计算机－泵－柱温箱－示差折光检测器开关；3. 启动Breeze软件，输入用户名Breeze；选择1515-2414系统，确定；4. 在Breeze软件系统中点击运行样品－点击流量图标设置泵流速0.2mL/min，注意：设置变化时间为2min，即以0.1mL/min缓慢增加流速，使色谱柱所受压力缓慢变化；5. 在示差折光检测器面板上，点击Temp ºC设置温度40 ºC（set/control）；再点击Home－Shift 1－显示Purge图标；此时示差检测器为Purge流路，冲洗示差检测器的样品池及参比池；点击平衡系统/监视基线图标－调用PS-purge方法－点击平衡/监视器，监控基线；Purge时间为10h；6. 10h后（此时基线已稳定），在运行样品界面点击设置泵流速1mL/min（设置变化时间8min，以0.1mL/min缓慢增加流速），平衡0.5h；7. 在示差折光检测器面板上，点击Shift 1，取消Purge（回到正常测样流路），平衡3～5min；再依次点击Diag－Optimize LED(16~17正常) －Enter－Home；三、样品测试1. 点击Breeze软件系统中的单进样图标－输入待测样品名－选择功能（宽分布进样）－选择方法组PS－输入进样体积（20μL）及样品测试时间（45min）－点击单进样，准备进样；此时窗口显示等待进样；2. 选用1mL注射器，安装色谱专用平头针头，采用过滤后样品溶液润洗进样注射器后，再抽取过滤后的样品溶液；将针口朝上排出气泡（注意针头不要有液珠，否则会污染进样口，必要时用镜头纸擦拭）；将进样阀门拨到Inject位置（即垂直状态），将进样注射器插入进样器内并插到底（不用过于用劲），进样；进样结束后迅速将进样阀门拨到Load位置；此时窗口显示进样正在运行；注意：进样结束后，使用抽滤后的溶剂及时清洗针头；3. 到设定的运行时间后，仪器自动停止数据采集，此时窗口显示单进样结束；20min后，按步骤1和2进下一个样品；注意：实验过程中及时观察溶剂存贮瓶中溶剂量；如需补加，必须在仪器停止数据采集时（最好在泵流速为0时）添加溶剂，且砂滤头必须在液面下。
最新Waters-1515-2414-凝胶渗透色谱(GPC)操作规程
W a t e r s-1515-2414-凝胶渗透色谱(G P C)操作规程Waters 1515-2414 凝胶渗透色谱（GPC）操作规程一、溶剂和样品准备1. 选择溶剂：尝试和选择对聚合物具有良好溶解性的THF或者DMF 作为溶剂；2. 溶剂处理：采用溶剂过滤系统（真空抽滤）对色谱纯溶剂进行过滤和脱气处理；3. 样品配制：选用处理后的溶剂配置待测样品溶液，样品体积≥4mL；样品浓度根据估算的分子量确定（Mw＝103～104，浓度为1.5～2mg/mL；Mw＝104～105，浓度为1～1.5mg/mL；Mw＝105～5 x 105，浓度为0.5～1mg/mL；Mw＝5 x 105～106，浓度为0.1～0.5mg/mL；Mw＞106，浓度为0.05～0.1mg/mL）；4. 样品溶解：提供足够时间使聚合物完全溶解（一般在室温下静止过夜）；注：可轻微摇动样品以促进溶解但不可剧烈摇动；5. 样品过滤：样品溶解后，采用一次性微孔滤膜（孔径0.22μm）对样品溶液进行过滤，保存滤液待用；注意：每个样品需要准备两个样品瓶（分别用于溶解样品和放置过滤后的溶液）和两个注射器（分别用于过滤和进样）二、仪器启动1. 将经过真空抽滤的溶剂倒入溶剂存贮瓶中；2. 依次打开稳压电源－计算机－泵－柱温箱－示差折光检测器开关；3. 启动Breeze软件，输入用户名Breeze；选择1515-2414系统，确定；4. 在Breeze软件系统中点击运行样品－点击流量图标设置泵流速0.2mL/min，注意：设置变化时间为2min，即以0.1mL/min缓慢增加流速，使色谱柱所受压力缓慢变化；5. 在示差折光检测器面板上，点击Temp ºC设置温度40 ºC（set/control）；再点击Home－Shift 1－显示Purge图标；此时示差检测器为Purge流路，冲洗示差检测器的样品池及参比池；点击平衡系统/监视基线图标－调用PS-purge方法－点击平衡/监视器，监控基线；Purge时间为10h；6. 10h后（此时基线已稳定），在运行样品界面点击设置泵流速1mL/min（设置变化时间8min，以0.1mL/min缓慢增加流速），平衡0.5h；7. 在示差折光检测器面板上，点击Shift 1，取消Purge（回到正常测样流路），平衡3～5min；再依次点击Diag－Optimize LED(16~17正常) －Enter－Home；三、样品测试1. 点击Breeze软件系统中的单进样图标－输入待测样品名－选择功能（宽分布进样）－选择方法组PS－输入进样体积（20μL）及样品测试时间（45min）－点击单进样，准备进样；此时窗口显示等待进样；2. 选用1mL注射器，安装色谱专用平头针头，采用过滤后样品溶液润洗进样注射器后，再抽取过滤后的样品溶液；将针口朝上排出气泡（注意针头不要有液珠，否则会污染进样口，必要时用镜头纸擦拭）；将进样阀门拨到Inject 位置（即垂直状态），将进样注射器插入进样器内并插到底（不用过于用劲），进样；进样结束后迅速将进样阀门拨到Load位置；此时窗口显示进样正在运行；注意：进样结束后，使用抽滤后的溶剂及时清洗针头；3. 到设定的运行时间后，仪器自动停止数据采集，此时窗口显示单进样结束；20min后，按步骤1和2进下一个样品；注意：实验过程中及时观察溶剂存贮瓶中溶剂量；如需补加，必须在仪器停止数据采集时（最好在泵流速为0时）添加溶剂，且砂滤头必须在液面下。
Waters,TSK, SHODEX,PL色谱柱的情况和优缺点
我们是色谱柱代理公司，这几个品牌（Waters，TSK, SHODEX,PL）都是一级代理商，所以我可以说一下这几种色谱柱的情况和优缺点，方便大家选择。
凝胶柱普遍都很贵，大概都要1万多，当然要买一根最合适你的，而不是最贵的。
蛋白柱：（水溶性GFC,硅胶基质）Waters 的Protein-pak 10um ￥16000，Biosuite 5u ￥19000，一般还可打8折，性能稳定，价格太高TSK SW 10u，一般售价9000左右，SWXL 5um售价不超过￥10000，销量大，性能稳定，价格适当SHODEX Protein KW系列，价位与TSK相当，知名度不高，性能稳定，价格适当PL 没有相对来说，TSK在蛋白柱上性价比更高，知名度更高，shodex可考虑，Waters 除非你太有钱或之前用开了，否则基本我不推荐，多糖柱：（水溶性GFC,聚合物基质）Waters Ultrahydrogel 10u 售价￥11000左右，性能稳定，价格适当TSK PW 10u，一般售价9000多，PWXL 5um售价10000多，性能稳定，价格适当SHODEX SB系列，售价11000多，性能稳定，价格适当PL aquagel-OH系列，售价10000多，性能稳定，价格适当多糖柱，主要的品牌价格都差不多，没有太强势的品牌，几个品牌做得都差不多单糖柱：（PSDVB基质的阳离子交换树脂的色谱柱）Waters Sugar-pak 1 只有一个Ca型，售价11000左右，性能稳定，价格适当，知名度高TSK 没有SHODEX Sugar系列，售价1万多，性能稳定，价格适当，客户使用广泛PL Hi-Plex系列，售价8000左右，性能稳定，价格适当，知名度低Bio-rad 糖分析知名品牌，性能稳定，价格15000以上，知名度高，太贵单糖分析，shodex做得最专业，且价格适当，推荐，PL性价比高，也推荐油溶性GPC色谱柱（PSDVB基质）Waters Styragel系列，售价1万多，性能稳定，价格适当，知名度高TSK Hxl系列，售价1万多，知名度不高SHODEX GPC系列，售价1万1左右，知名度高，性能稳定PL-gel系列，售价1万1左右，知名度高，性能稳定，多见于台资企业GPC分析上，SHODEX和PL做得更多一些，销量大一些。
凝胶渗透色谱仪
凝胶渗透色谱仪
凝胶渗透色谱仪是高聚物表征的重要方法之一，不仅可用于小分子物质的分离和鉴定，而且可以用来分析化学性质相同分子体积不同的高分子同系物。
1、性能参数
型号：J08W1
泵：Waters 515 HPLC Pump
柱温箱：Waters Column Heater Module
检测器：Waters 2414示差折光检测器
光源：发光二极管；
折光指数范围：1.00-1.75 RIU；
测量范围：5x10-4 RIU~7x10-9 RIU
流速：0.1-10ml/min；
噪声：±1.5x10-9 RIU（RIU模式，1ml/min水，23-25℃，±2℃/h）
漂移：2x10-7 RIU/h；
灵敏度设定范围：RIU模式1.0x10-6~5.0x10-4 RIU
温度控制：内部温箱30-55℃
流通池：10ul，最大压力小于1MPa（标准）。
Wyatt Technology Corporation DAWN HELEOS II 十八角光散射检测器
分子量测量范围：103～109Dalton；
分子尺寸范围：10～500nm；
光源：50mW，658nm 砷化镓线型偏振光源；
角度：18 角度，10度～160度；
池体积：散射体积 70nL
2、应用范围
用于测定高聚物的平均分子量，分子量分布，分子量分布宽度，分析共聚物中均聚物及杂质，测定共聚物的组成分布及分子量分布，还是分析小分子物质及作为分离分析的有力工具。
3、图片。
Waters-1515-2414-凝胶渗透色谱(GPC)操作规程讲解学习
Waters 1515-2414 凝胶渗透色谱（GPC）操作规程一、溶剂和样品准备1. 选择溶剂：尝试和选择对聚合物具有良好溶解性的THF或者DMF 作为溶剂；2. 溶剂处理：采用溶剂过滤系统（真空抽滤）对色谱纯溶剂进行过滤和脱气处理；3. 样品配制：选用处理后的溶剂配置待测样品溶液，样品体积≥4mL；样品浓度根据估算的分子量确定（Mw＝103～104，浓度为1.5～2mg/mL；Mw ＝104～105，浓度为1～1.5mg/mL；Mw＝105～5 x 105，浓度为0.5～1mg/mL；Mw＝5 x 105～106，浓度为0.1～0.5mg/mL；Mw＞106，浓度为0.05～0.1mg/mL）；4. 样品溶解：提供足够时间使聚合物完全溶解（一般在室温下静止过夜）；注：可轻微摇动样品以促进溶解但不可剧烈摇动；5. 样品过滤：样品溶解后，采用一次性微孔滤膜（孔径0.22μm）对样品溶液进行过滤，保存滤液待用；注意：每个样品需要准备两个样品瓶（分别用于溶解样品和放置过滤后的溶液）和两个注射器（分别用于过滤和进样）二、仪器启动1. 将经过真空抽滤的溶剂倒入溶剂存贮瓶中；2. 依次打开稳压电源－计算机－泵－柱温箱－示差折光检测器开关；3. 启动Breeze软件，输入用户名Breeze；选择1515-2414系统，确定；4. 在Breeze软件系统中点击运行样品－点击流量图标设置泵流速0.2mL/min，注意：设置变化时间为2min，即以0.1mL/min缓慢增加流速，使色谱柱所受压力缓慢变化；5. 在示差折光检测器面板上，点击Temp ºC设置温度40 ºC（set/control）；再点击Home－Shift 1－显示Purge图标；此时示差检测器为Purge流路，冲洗示差检测器的样品池及参比池；点击平衡系统/监视基线图标－调用PS-purge方法－点击平衡/监视器，监控基线；Purge时间为10h；6. 10h后（此时基线已稳定），在运行样品界面点击设置泵流速1mL/min（设置变化时间8min，以0.1mL/min缓慢增加流速），平衡0.5h；7. 在示差折光检测器面板上，点击Shift 1，取消Purge（回到正常测样流路），平衡3～5min；再依次点击Diag－Optimize LED(16~17正常) －Enter －Home；三、样品测试1. 点击Breeze软件系统中的单进样图标－输入待测样品名－选择功能（宽分布进样）－选择方法组PS－输入进样体积（20μL）及样品测试时间（45min）－点击单进样，准备进样；此时窗口显示等待进样；2. 选用1mL注射器，安装色谱专用平头针头，采用过滤后样品溶液润洗进样注射器后，再抽取过滤后的样品溶液；将针口朝上排出气泡（注意针头不要有液珠，否则会污染进样口，必要时用镜头纸擦拭）；将进样阀门拨到Inject位置（即垂直状态），将进样注射器插入进样器内并插到底（不用过于用劲），进样；进样结束后迅速将进样阀门拨到Load位置；此时窗口显示进样正在运行；注意：进样结束后，使用抽滤后的溶剂及时清洗针头；3. 到设定的运行时间后，仪器自动停止数据采集，此时窗口显示单进样结束；20min后，按步骤1和2进下一个样品；注意：实验过程中及时观察溶剂存贮瓶中溶剂量；如需补加，必须在仪器停止数据采集时（最好在泵流速为0时）添加溶剂，且砂滤头必须在液面下。
凝胶色谱实验讲义
凝胶渗透色谱在聚合物研究中的应用一、目的要求1. 掌握凝胶渗透色谱（GPC，gel permeation chromatography）的工作原理并了解其构造。
2. 掌握凝胶渗透色谱仪的基本操作及数据处理方法。
3. 利用凝胶渗透色谱仪测定聚合物的分子量及其分布。
二、原理及仪器构造1.凝胶渗透色谱的工作原理。
GPC是一种特殊的液相色谱，所用仪器与高效液相色谱仪类似，但是其色谱柱中的填充相与液相色谱不同，其填充相是具有不同比表面积，孔径分布和孔容的凝胶填料（如葡萄糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、聚苯乙烯凝胶、琼脂糖凝胶等）。
GPC的分离过程是基于分子筛效应而进行的。
聚合物中分子量小的分子在溶液中的流体力学体积较小因而能够在凝胶颗粒内的孔隙中自由地扩散，但随着分子量的增加其在溶液中的流体力学体积也逐渐增大，当增大到与凝胶中孔隙的尺寸大小相当时，便不能顺利进入到凝胶的内部，分子量更大时便完全不能扩散到凝胶颗粒的内部。
如图1所示：根据这一分子筛效应，可以按照分子尺寸大小的差别来进行分离，而有机聚合物的分子尺寸大小又与分子量成图1正相关，也就是说根据这一效应可以将聚合物分子按照分子量大小的差别来进行分离。
当一个聚合物样品被注入色谱柱时，试样溶液流经凝胶固定相颗粒，其中分子尺寸较大的不能进入凝胶孔隙，既被固定相排斥。
因此这些分子便直接流出色谱柱，而他们的色谱峰便最先在色谱图上出现。
另外，样品中尺寸最小的分子则能够进入固定相中所有的孔隙并浸入到整个颗粒内部，于是它们通过色谱柱最慢，保留时间最长，其色谱峰在谱图上出现最晚，而中等尺寸的分子只能够进入固定相中部分较大的孔隙，因而以中等流速流过色谱柱。
这样便按照分子尺寸的大小，按从大到小的顺序实现了样品中各组分的分离。
如图2所示：图2GPC 的实验方法是先利用同一组分已知分子量的窄分散性（w M /n M ≤1.1）聚合物标准试样，在与未知试样相同的条件下得到一系列GPC 谱图。
凝胶渗透色谱PPT课件
单分散性标样校正法
• 选用一系列与被测样品同类型的不同分子 量的窄分散性（）标样，先用其他方法精 确地测定其平均分子量，然后与被测样品 在同样条件下进行GPC分析。每个窄分布 标样的峰为淋洗体积与其平均分子量相对 应，这样就可做出lgM－V曲线如下图所示。
• 色谱原理 • 流动相:载气 • 固定相:固体吸附剂等
•
图 气相色谱对样品分离过程示意图
• 色谱谱图解析
• 一 谱图表示方法: 横坐标 时间
•
纵坐标 检测器响应信号的大小 色谱图
•
•
• 色谱图的解析: 色谱峰的位置
•
色谱峰的大小和形状
•
色谱峰的分离
• 保留值: 保留时间
•
死时间
•
调整保留时间 与固定液用量有
关
• 比保留体积 相对保留值 保留指数
• 色谱过程方程: VR=VM+VR’
•
VR=VM+KVS
•
色谱的保留值与热力学系数联系起来
• 色谱流出曲线方程：——研究色谱峰形
•
塔板理论：高斯分布曲线
•
c 标准偏差：
2nct0Rexp12n1ttR
2
tR / n
c
c0
2
exp
t tR
2 2
3.凝胶色谱分离机理
凝胶色谱的色谱过程方程
• 凝胶色谱柱是用多孔材料填充的，其分离 能力与填料孔径无关。
• GPC柱的总体积有3部分组成，即填料骨架 体积、填料孔体积及填料颗粒间体积。其 中填料骨架体积对分离不起作用，柱空间 体积主要由后两部分组成。
凝胶渗透色谱
Waters 515泵
流速范围：0.001-10mL/min 流速精度：0.1%
耐压：6000 i
色谱柱应用：分析柱、微柱
目前最耐用，性能最好的分析型高 压液相色谱泵
7725i手动进样器
• 六通阀式进样器 • 进样环精确控制进样量
Waters 2414 示差检测器
流速范围：0. 1-10mL/min 工作温度：30-55 oC
高分子GPC色谱图
600.00
Intensity (mV)
450.00 300.00 150.00 0.00 14.00 16.00
P800 P400 P200 (a) (b)
18.00
P100 P50
20.00
P20 P10
22.00
P5
24.00
Time (min)
14.00
16.00
18.00
20.00
22.00
24.00
26.00
28.00
普适校正原理
GPC对聚合物的分离是基于分子 流体力学体积。
两种柔性链的流体力学体积相同：
[η]1M1=[η]2M2 k1M1α1+1=k1M2α2+1 两边取对数： lgk1+(α1+1)lgM1=lgk2+(α2+1)lgM2
即如果已知标准样和被测高聚物 的k、α值，就可以由已知相对分子质 量的标准样品M1标定待测样品的相对 分子质量M2。
������
������ ������
G=[(Mw,GPC/Mn,GPC)/(Mw/Mn)true]1/2
校正后的Mn=Mn,GPC×G Mw=Mw,GPC/G
G值一般为1.1~1.8，经校正后的d值明显变小。
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2489 紫外/可见光(UV/Vis) 检测器 2489 UV/Vis 检测器是用于HPLC的通用型、双波长吸光度检测器。这是一款高灵 敏度检测器,适用于需要使用UV进行低含量杂质鉴别与定量的常规分析。 这种检测器的线性范围宽达2.5 AU，可以在一次运行当中方便地同时对主组分和微 量组分进行定量。用户还可以同时监测两个自身选定波长的吸光度，以便在每次运 行时获得更多信息。
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四十年来，沃特世公司作为GPC分析的市场领导者，一直提供最高品质的GPC产品与专业的应用支持。为了解决跨越整个色谱 应用领域的问题，我们制造了一系列GPC柱与配件。我们的Stryragel®色谱柱已经成为用于分离脂溶性样品的GPC色谱柱标准 产品。UltrahydrogelTM水溶性凝胶柱用于分离水溶性聚合物如，低聚糖，多糖，阴阳离子，两性聚合物等，同时还可用于淀粉，果 胶等食品中聚合物分子量分布的测定。
Styragel HWM——高分子量分析GPC柱（脂溶性）
· 用于对剪切效应敏感的，超大分子量的聚合物的分析 · 填充以耐用的20μm苯乙烯二乙烯苯颗粒，并特别配有大孔
筛板使剪切效应最小化 · 色谱柱可以在室温或较高温度下使用
Ultrahydrogel——水溶性凝胶柱
· 填料为羟基化的聚甲基丙烯酸甲酯， 专用于水溶性样品的分析
· 新的光路设计，比传统的示差折光检测器灵敏度高 · 流通池温度控制 · 简化用户操作和维护过程 · 自动优化诊断——通知用户冲洗参比池是否不正常或者由错误条件出现 · 前面板的冲洗，废液及再循环阀
2414 示差折光检测器具有更低的噪音水平
[ BREEZE 2 GPC 系统]
适应不同需要的凝胶色谱柱与标准品
自动进样器（2707型） 若需要较高精度，可选用即可用样品板也可用样品瓶的自动进样器。这种自动化的易 用仪器将可靠性，通用性和低成本集中于一个创新的进样系统中。对于多样品取样， 可进行编程控制，可提高系统的生产效率，使得自动化方法更便捷，效率更高。
[ BREEZE 2 GPC 系统]
最新中文色谱工作站（Breeze 2型） · 是在最新Windows操作系统下编写和测试，支持多窗口、多任务的操作模式。 · 内置ORACLE®图文数据库：保证数据的完整性和安全性。原始数据、仪器条件和处理参数等信息的关联由软件自动建立， 用户无需记忆就能找到相应的信息。在数据库中，用户可以采用各种检索方式从大量的数据中取出想要的数据。 · 支持多种定量曲线方式 · 系统适应性计算 · 可以对色谱峰建立各种积分方式和积分事件 · 原始数据和结果可通过多种方式输出到其它软件中（如Excel） · 自带GPC分析计算功能，无需添加软件模块
2414 示差折光（RI）检测器 2414示差折光（RI）检测器是为高性能液相色谱(HPLC)的应用而设计的，它为UV 吸收有限或无UV吸收的化合物提供灵敏度分析、稳定性分析、重现性分析。以解决 方案为中心的设计结合了Breeze™中的HPLC系统，适合以RI为基础的HPLC以及 GPC凝胶色谱的应用。
总部
香港九龙官塘鸿图道26号 威登中心2602- 05室 Tel: (852) 2759 2182 Fax: (852) 2758 3830
北区
北京办事处 北京市海淀区知春路9号 坤讯大厦603室 (100191) Tel: (010) 8232 7383 Fax: (010) 8232 9551
工作原理：尺寸排阻效应 溶质分子的体积越小，其淋出体积越大。这种解释不考虑溶质与载体之间的吸附效应以及在流动相和固定相之间的分配效应， 其淋出体积仅仅由溶质分子尺寸和载体的孔尺寸决定，分离完全时由于体积排除效应所至，故称为体积排除机理。 （1）比填料的最大的孔还要大的分子只能留在填料颗粒之间走的路径最短，先被溶剂冲出来，也就是开始的级分中含大分子 （2）较大的分子除了走颗粒间的路径，还可以进入到颗粒内较大的空中，路径要比最大分子走的多一些，所以，较后被冲出来 （3）较小的分子除了走颗粒间、还要进入颗粒内的大孔，而且还可以进入颗粒内的小孔，走的路径最多，所以最后被溶剂冲洗
[ BREEZE 2 GPC 系统]
德祥(Tegent)简介：
· 创办于1992年，总部位于香港 · 实验室及工业检测仪器设备和服务行业的领导供应商 · 20个销售点，及众多的分销商，覆盖中国内地、香港及越南 · 2个样机实验室 · 每年都为数以千计的客户提供产品 · 与众多世界知名科学仪器制造商达成良好的战略合作关系 · 服务于生命科学、工业、制药、政府、教育、石化、电子以及商业实验室等众多领域
沃特世(Waters®) 简介：
· 总部位于美国马萨诸塞洲，其全资子公司或办事处遍及世界各地； · 全球最专业的液相色谱仪，质谱仪及其相关化学品的研发生产基地； · 在中国设全资子公司：沃特世科技（上海）有限公司/ 沃特斯中国有限公司，
在北京、上海、广州、成都及香港设有分公司。
Waters — —凝胶渗透色谱技术的领导者
1953年 Wheaton和Bauman观察到分子尺寸排阻现象后，GPC技术应运而生。 在之后的50年间，Waters不断将这项技术推向完善…… 1958年 Waters生产出第一支Styragel凝胶色谱柱 1962年 Waters Associates公司创始人Jim Waters开发了世界上第一台RI检测器 1964年 Waters在当年匹斯堡会上展出第一台商业化GPC系统：GPC100 1979年 Waters公司开发出第一台高温GPC 150C 1997年 515色谱泵问世 2000年 Waters推出Breeze系列GPC 今天，中国有万余台Breeze GPC在化工，生物，制药，环境，食品等行业不断提供准确，可靠的实验数据。
杭州办事处 杭州市拱墅区登云路518号 西城时代2幢801室(310003) Tel: (0571) 8722 9873 Fax: (0571) 8722 9787
厦门办事处 厦门市后埭溪路28号 皇达大厦15楼A2BC (361004) Tel: (0592) 5185 885 Fax: (0592) 5185 886
–窄分布及宽分布标样校正 –普适校正 –宽分布未知样定量(每结果单一分布) –普适校正：K、alpha、特征粘度及Mv 操作向导模式和在线帮助功能：只需按照指南要求进行操作即可执行相应的功能。
[ BREEZE 2 GPC 系统] 2414 示差折光检测器
示差折光检测器对没有紫外吸收的物质，如高分子化合物、糖类、脂肪烷烃等都能够检测。在凝胶色谱中示差折光检测器是必 不可少的，尤其对聚合物，如聚乙烯、聚乙二醇、丁苯橡胶等的分子量分布的测定。还适用于流动相紫外吸收本地大，不适于紫 外吸收检测的体系。 示差折光检测器属于总体性能浓度型检测器，其响应值取决于柱后流出液折射率的变化，采用含有样品的流出液和不含样品的 流出液的同一物理量的示差测量。其响应信号与溶质的浓度成正比。
南京办事处 江苏省南京市玄武区珠江路67号 华利国际大厦1809室(210008) Tel: (025) 5871 5183 Fax: (025) 5871 5191
合肥办事处 安徽省合肥市官亭路140号 旺城大厦1220室(230031) Tel: (0551) 6512 1121 Fax: (0551) 6511 2520
出来，洗提体积最大。
[ BREEZE 2 GPC 系统]
Waters GPC系统主要部件组成
1500输液泵— —精确的流速控制，稳定的压力脉动 1500高压泵系列包含515型单泵，1515型单泵以及1525型双泵。可根据需要灵活选 用。该泵的工作模式为双柱塞并联补偿往复泵，采用非圆齿轮技术，自调芯柱塞，具 有自动润滑装置。 在GPC的分析过程中，保留时间是与分子量的对数值成比例的。因此，保留时间的微 小差别（1%）都可以造成分子量计算结果的巨大差别（10%）。 与众多国外厂家采用加缓冲器和采用可变冲程来弥补他们泵产生脉动的缺陷相比， 沃特世公司专利设计的特殊心型齿轮传动驱动的输液泵，系统噪音很小，信噪比很 好，能够长期保持很好的精密度，保证极好的重现性；此外，不会有柱塞杆和密封圈 的磨损，使用寿命很长，大大节约客户后续维护使用成本。