J2 Scientific GPC凝胶渗透色谱操作指导

J2 Scientific GPC凝胶渗透色谱操作指南

应用部分

在您阅读本指南之前，最好先熟悉仪器的操作，并已经掌握<软件中文操作手册>中的内容。本指南旨在帮助新用户掌握仪器的维护，方法建立及简单的故障排除，北京绿绵巨贸科贸有限公司对此指南保留全部权力，任何未经允许的复制、转载及其他以赢利为目的的商业行为均构成对本公司的侵权。

凝胶渗透色谱原理简介

Accuprep系统结构及工作框图

注意事项

如何建立适合我的应用的方法

GPC柱的维护和重新装填

如何备份数据

常见故障分析

凝胶渗透色谱原理简介

凝胶渗透色谱，简称GPC，是一项比较传统的分离技术，GPC的柱子由化学惰性的中空小球组成，利用空间排阻的原理对样品进行分离，详见下图：

小分子通过填料“球”中的孔大分子不能从孔中通过

由于小分子化合物会从填料的孔中穿过，而大分子从填料周围的空间穿过，会造成小分子与大分子之间的行程差距，这样大分子与小分子会先后从柱中馏出，起到分离的作用。由于这一分离技术不受样品极性的影响，所以对于色谱用户来说，是一种非常有效解决色谱柱不能分开的样品的手段，尤其是对于脂肪类，蛋白及色素类大分子干扰物，这些物质对于色谱柱，进样口来说非常危险，而在生物源样品当中的含量一般又比较高，那么在进行样品分析之前进行一步GPC净化就显得非常必要了。

Accuprep 系统结构及工作框图

Accuprerp TM 是由美国J2 Scientific 公司生产的凝胶渗透样品净化系统，早在上世纪80年代就引入中国，目前其产品型号主要有手动AccuPrepJr 和自动AccuPrep 两种，在2005年该公司又推出了新型的Accuprerp TM MPS 系统，体积进一步小型化，并能整合计算机及在线浓缩，SPE 等多种技术，更加趋于成熟。由于目前大家采购这一仪器主要是为了提高效率，本指南将重点放在对自动仪器的介绍方面。

一台完整的GPC 系统包括几个部分：触摸屏，控制模块，输送泵，检测器，自动进样器和软件部分。

让我们先来认识一下仪器各部分：

AccuPrep MPS 自动系统

Accuprerp TM 自动系统

Accuprerp TM 手动系统

AccuPrep MPS +AccuVap GPC 在线浓缩系统

工作框图：详见附录1。

收集架

样品架

柱子支架

触摸屏

输送泵

检测器

V1/V2阀

柱切换阀

进样环与进样阀

注射泵 自动进样器

注意事项：

1.样品在进样前必须经0.45u的微孔膜过滤。

2.含水量大的样品在进样前须脱水。

3.对于快速柱来说，脂肪耐受力为0.5克；传统柱为1克，那么在进样前请以

此为根据来计算取样量。例如某种样品的脂肪含量为20%，那么称样量请不要大于2.5克。

4.在完成前面的样品处理后，如液液萃取，要将样品体系转换成GPC所用的

流动相，一般来说除石油醚外，其它基质如丙酮，必须进行这样的转换。而如果采用乙酸乙酯这类与水互溶的溶剂进行萃取，最好过无水硫酸钠脱水。

如果样品溶剂无法进行转换，那么不同的溶剂总量不得大于进样量的10%。

5.GPC柱要求流动相与柱子规格一致，请不要随意变更流动相的比例及组成。

6.系统主要采用尼龙接头，在连接时适当拧紧即可，过度用力会造成螺纹损坏。

7.PTFE的连接管比较脆，不可折成死弯，并在移动仪器时小心。

8.严禁使用酸，碱性流动相，严禁使用水做为流动相，严禁使用缓冲盐。

9.流动相最好每次配制的量够用，如果放臵时间过长，最好重新配制。对于乙

酸乙酯来说长时间放臵会吸收水分，二氯甲烷见光分解后会产生盐酸，这些都非常不利于GPC分析。

10.如果有其它不明事项，请咨询我公司工程师，请勿自行尝试。

如何建立适用于自己的分析方法

针对一般的农药/兽药残留分析来说，样品基质中的大分子干扰物主要为色素，脂肪及蛋白，多糖等生物源的干扰物。这类物质对于后面的色谱分析来说，是非常令人讨厌的，不但会带来噪音高，杂峰多，而且会污染色谱的进样口，离子源，并对色谱柱的寿命也会有很大影响。虽然还有其它方法进行净化，例如氧化铝柱，酸性硅胶柱等，但这类方法多数会对待测样品有不同程度对的吸咐，会引起回收率的问题。

根据凝胶渗透色谱的原理，大分子干扰物会率先从柱子中流出，随后是小分子的目标化合物，那么对于一个GPC的方法来说，关键在于找出什么时间收集，什么时间停止收集。为了说明如何找到准确的收集时间，我们以50%乙酸乙酯/50%环已烷的GCP色谱柱对溴氢菊酯净化为例：

1．移取2ml，100ppm的溴氢菊酯标准品（请用1：1乙酸乙酯：环已烷配制）到样品瓶，并加入1ml色拉油最后定容至10ml,做为我们的待分析样品。2．在软件中，编辑方法default.met,对于快速柱来说，

第一个馏分设定30分钟

不选择收集

流速设定为4.7ml/min,

2到5馏分都不进行设定

选择记录检测器数据

选择合适的柱子

保存方法即可。

3．编辑样品序列，待序列运行完毕后进入accuchrome,导入数据，根据标样的峰来设定收集时间，为了保证回收率，一般来说会让收集时间段略宽于峰宽。4．随后我们再回到Accuprep软件，新建一个方法，注意这里的时间不是保留时间，而是一个时间段，比如我们刚才运行的谱图中溴氢菊酯的出峰时间为10分钟到12.5分钟，则在这里我们设定馏份1的时间为10分钟并不收集，馏份2的收集时间为2.5分钟并收集，并修改为不记录检测器数据，最后保存方法,那么这个方法建立就完成了。

5．但是通常来说，我们的分析不会这样简单，我们通常在一个分析中要应付多达20，乃至40到50种农药，那么我们如何建立一个方法来进行这样的净化