蛋白质组学主要技术简介

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蛋白质组学三大基本技术

蛋白质组学三大基本技术

蛋白质组学三大基本技术
1、质谱技术:质谱技术是蛋白质组学中最常用的和最基本的技术,它可以检测和识
别各种生物样品中的蛋白质和其他大分子有机物,从而可以提高研究的准确性,特别是在
研究动态蛋白信号转导及表观遗传因子的时候,质谱技术的应用更加广泛。

质谱技术包括
两种:基于气相法的高级数据库技术,和基于液相法的maldi技术。

质谱技术主要是利用
质谱仪来获取受体上蛋白质结构的数据,然后利用数据库搜索,来识别出蛋白质结构特征
及在受体上的结合状态。

2、SDS-PAGE技术:SDS-PAGE技术是一种蛋白电泳分析技术,它可以分离组成复合蛋
白的每个蛋白质组分,并对蛋白质的组成成分及其特有的分子量进行测定,是一种蛋白质
分类及检测的基础性技术。

SDS-PAGE技术利用聚丙烯酰胺亚胺(SDS)作为为分子内部量均
分剂,可将蛋白链折叠、聚集形成单个分子,然后进行电泳分离操作,在膜隔开一定距离,然后再对所获取到的蛋白分子特征进行识别,以得出它的结构和分子量的信息,进而得出
受体上分子的特征及其功能。

3、免疫淋巴细胞技术:免疫淋巴细胞技术是实验可能性较好、分离效果更好。

它以
电泳分离技术作为分离介质,从新鲜样品中分离出完整的肽盐化药物,可有效地检测及克
隆受体上的蛋白片段及肩膀,进而得出蛋白质组学上受体特征及其功能。

蛋白质组学及技术介绍PPT通用课件.ppt

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拖尾"point streaking") 。
3.二相SDS-PAGE
丙烯酰胺/甲叉双丙烯 酰胺溶液
分离胶缓冲液
10%(w/v)过硫酸铵 溶液
(30.8%T,2.6%C):30%(W/V)丙烯酰胺和 0.8%甲叉双丙烯酰胺的水溶 液。将 300g 丙烯酰胺和 8g 甲叉双丙烯酰胺溶解于去离子水中,最后用去离
研究 内容
蛋白质的研究内容主要有两方面:
1、结构蛋白质组学:主要是蛋白质表达模型的研究,包括蛋白质氨基酸序列 分析及空间结构的解析种类分析及数量确定; 2、功能蛋白质组学:主要是蛋白质功能模式的研究,包括蛋白质功能及蛋白 质间的相互作用。
研究 内容
蛋白质组学可分为三个主要领域: 1、蛋白质的微特性以供蛋白质的规模化鉴定和他们的后翻译饰; 2、“差异显示”蛋白质组学供蛋白质水平与疾病在广泛范围的有力应用比 较; 3、应用特定的分析技术如质谱法(包括串联质谱法、生物质谱法)或酵母 双杂交系统以及其他蛋白质组学研究新技术研究蛋白质-蛋白质相互作用。
该方法所研究的蛋白均是在体内经过翻译后修饰的,并且是可 分离的天然状态的相互作用蛋白复合物,能够反映正常生理条件下的 蛋白质间相互作用
蛋白质相互作用
2、酵母双杂交系统:
该系统利用真核细胞调控转录起始过程中,DN A结合结构域(binding domain,BD)识别DNA上的特异序列并使转录激活结构域(activation domain, AD)启动所调节的基因的转录这一原理,将己知蛋白X和待研究蛋白Y的基 因分别与编码AD和BD的序列结合,通过载体质粒转入同一酵母细胞中表 达,生成两个融合蛋白。若蛋白X和Y可以相互作用,则AD和BD在空间上 接近就能形成完整的有活性的转录因子,进而启动转录,表达相应的报告 基因;反之,如果X和Y之间不存在相互作用,报告基因就不会表达。这样, 通过报告基因的表达与否,便可确定是否发生了蛋白质的相互作用。

蛋白质组学的研究技术

蛋白质组学的研究技术

蛋白质组学的研究技术
1. 蛋白质组分离技术
在蛋白质组学研究中,最先要做的就是将蛋白质分离出来,从而得到纯度较高的蛋白质。

目前常用的蛋白质分离技术包括凝胶电泳、液相色谱和质谱等方法。

其中,凝胶电泳是最常用的蛋白质组分离技术之一,包括聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和二维凝胶电泳(2-DE)等。

蛋白质组学的目的在于研究蛋白质的种类和结构,因此鉴定蛋白质是非常重要的一个环节。

目前比较流行的蛋白质组鉴定技术主要包括质谱和基因组学方法。

其中,基因组学方法包括通过对已知的基因组序列进行比对,来鉴定和预测蛋白质序列。

而质谱则主要是通过对蛋白质的分子量和氨基酸序列等特征进行分析和鉴定。

蛋白质的表达和生物学功能密不可分,因此研究蛋白质的表达非常重要。

目前可供选择的蛋白质组表达技术包括基因工程技术和化学合成技术等。

其中,基因工程技术是最常用的表达技术之一,可以通过将外源DNA序列转化到宿主细胞或者器官中来表达蛋白质。

蛋白质组学研究产生的数据量非常大,因此需要利用计算机和大数据分析技术来对数据进行处理和分析。

这其中涵盖了数据清洗、数据预处理、特征提取和建模等多个方面。

此外,还需要采取一些数据可视化的方法,以让研究人员更直观的观察和理解数据。

蛋白质组学的应用范围非常广泛,包括药物研发、疾病诊断和治疗等领域。

例如,蛋白质组学在癌症诊断、药物靶点鉴定和药物作用机制等方面都有着重要的应用,这些应用也推动了蛋白质组学的迅速发展。

总之,蛋白质组学技术不断创新和发展,可以解决大量生物学和生物医学领域中的重要问题,对于深入探究蛋白质生物学领域的各种问题具有不可替代的作用。

蛋白质组学技术

蛋白质组学技术

蛋白质组学技术
蛋白质组学技术指在蛋白质组学研究中所用到的各种技术。

质谱技术是蛋白质组学技术中可实现高通量分析的技术之一,可用于蛋白质组的定性和定量分析。

百泰派克生物科技提供基于质谱的蛋白质组学分析服务。

蛋白质组学技术
蛋白质组学技术指在蛋白质组学研究中所用到的各种技术,包括蛋白质分离纯化技术、鉴定和测序技术、定量技术以及生物信息学分析技术等等。

纯化蛋白质的常规技术一般基于色谱,如离子交换色谱(IEC)、尺寸排阻色谱(SEC)和亲和色谱。

分析选择性蛋白质则可以使用ELISA和western blot技术,但是这些技术一般仅限于分析少数单个蛋白质,且无法确定蛋白质的表达水平。

质谱技术可用于确定蛋白质的氨基酸序列。

利用ICAT、iTRAQ等标记技术可对蛋白质组进行定量分析。

X 光散射技术和核磁共振(NMR)则可提供蛋白质的三维结构信息,这可能有助于理解蛋白质的生物学功能。

蛋白质组学技术。

蛋白质组学技术应用
蛋白质组学研究通过利用不同的技术来鉴定和量化细胞、组织或生物体中存在的总蛋白质,通过使用一种或多种蛋白质组学技术可完整描述细胞的结构和功能信息,以及细胞对各种类型的压力和药物的响应机制。

蛋白质组学技术可被用于多种不同
的研究环境,如用于检测各种诊断标志物、疫苗生产候选物,开发新药物,了解致病机制、应对不同信号改变的表达模式,以及解释不同疾病中的功能蛋白途径等。

蛋白质组学技术及其在疾病研究中的应用

蛋白质组学技术及其在疾病研究中的应用

蛋白质组学技术及其在疾病研究中的应用蛋白质是生命现象中最为重要的一类分子,它们承担着细胞的各种生理活动,构建着生物体内的结构与功能。

对于疾病的研究而言,蛋白质的作用至关重要,理解各种蛋白质的功能和相互作用关系,对于治疗各种疾病具有重要的参考价值。

而蛋白质组学技术正是探索蛋白质这一领域的重要手段之一。

一、蛋白质组学技术简介蛋白质组学技术是指通过一系列的实验手段,尝试从全局的角度解析细胞和组织中的所有蛋白质及其功能。

主要包括蛋白质质谱和蛋白质芯片两个方面。

1. 蛋白质质谱蛋白质质谱是指利用质谱技术对蛋白质进行分析鉴定。

它的工作流程主要包括蛋白质的提取、分离、消化、质谱检测等步骤。

其中最关键的环节是质谱检测,通过对蛋白质的质谱图谱进行解析,可以得到蛋白质的序列信息、结构信息以及定量信息等。

2. 蛋白质芯片蛋白质芯片是一种将具有致病性的蛋白质以及与之相关的蛋白质进行组合,构建成芯片的技术。

它可以通过与样品中的蛋白质结合,快速检测肿瘤标记物、生物标志物等。

在蛋白质芯片上,可以将不同样品的蛋白质进行定量比较,了解不同样品的蛋白质差异。

二、蛋白质组学技术在疾病研究中的应用1. 肿瘤研究蛋白质组学技术在肿瘤研究中扮演着重要的角色。

它可以通过对肿瘤细胞和正常细胞中的蛋白质组成进行比较,找到在肿瘤病理生理过程中发生变化的蛋白质。

利用这些蛋白质可以筛选潜在的生物标志物和靶向治疗药物。

例如,HER2在人类乳腺癌中的异常表达,可以通过蛋白质质谱技术进行检测,并导入临床治疗。

2. 器官移植研究同种异体移植是治疗某些疾病的有效手段。

但是,历经多次移植后,移植物无法被宿主体所接纳,这成为了制约移植效果的关键因素。

在器官移植领域,蛋白质组学技术能够帮助研究人员了解移植物和宿主体之间发生的相互作用。

例如,通过分析术前和术后的血浆样本,可以发现具有免疫调节功能的蛋白质在器官移植过程中发挥了重要作用。

3. 神经退行性疾病研究神经退行性疾病是一类严重的疾病,目前并没有有效的治疗手段。

蛋白质组学三大基本技术

蛋白质组学三大基本技术

蛋白质组学三大基本技术
蛋白质组学是一种研究蛋白质结构和功能的科学,它为研究蛋白质及其相互作用提供了一种有效的手段。

蛋白质组学的基本技术主要有质谱分析、电泳分析和免疫分析三种。

质谱分析是蛋白质组学中最重要的技术,它可以确定蛋白质的结构和物质组成,以及蛋白质之间的相互作用。

质谱分析主要通过电喷雾电离和高能质谱来确定蛋白质的结构和物质组成,从而可以研究蛋白质的自由基反应和结合反应。

电泳分析是蛋白质组学中另一重要的技术,它可以用来检测蛋白质的结构和特性。

电泳分析主要通过静电层析、交叉层析、离子交换层析、聚焦层析等手段来研究蛋白质的结构和特性,从而可以研究蛋白质的分子量、组成以及与其他蛋白质之间的相互作用。

免疫分析是蛋白质组学中最后一项基本技术,它可以用来研究蛋白质的抗原性和抗体识别特性。

免疫分析通常通过免疫印迹、免疫沉淀、免疫荧光和免疫质谱等方法,来检测蛋白质的抗原性和抗体识别特性,从而研究蛋白质的结构和功能。

总之,蛋白质组学的基本技术包括质谱分析、电泳分析和免疫分析三种,它们可以帮助我们研究蛋白质的结构和功能,为蛋白质组学的研究提供了重要的技术支持。

蛋白质组学及技术介绍

蛋白质组学及技术介绍

蛋白质组学及技术介绍蛋白质组学是研究细胞、组织和生物体中蛋白质产生、结构、功能以及相互作用的一门科学。

蛋白质是生物体中最重要的有机物之一,扮演着许多生理和生化过程的关键角色。

蛋白质组学的目标是通过大规模研究蛋白质的组成、结构和功能,深入了解生物体的调控机制和疾病的发生发展规律。

蛋白质组学的研究内容包括蛋白质的鉴定、分类、结构分析、表达调控、功能研究等。

与基因组学类似,蛋白质组学也具有高通量、全面性、定量性等特点。

蛋白质组学研究可以帮助科学家在生物体水平上揭示生物的基本功能,并揭示蛋白质在各种生理和病理过程中的重要作用。

1.蛋白质分离技术:蛋白质组学研究需要从复杂样品中分离目标蛋白质。

常用的蛋白质分离方法有SDS-、二维电泳等。

其中,二维电泳是一种常用的高分离效果的方法,可以将蛋白质根据等电点和分子量进行分离,更好地了解蛋白质组成。

2.质谱法:质谱法是蛋白质组学研究中最重要的技术之一、质谱法可以用来鉴定蛋白质的氨基酸序列、确定修饰位点、测定蛋白质的分子量等。

常用的质谱方法包括MALDI-TOF、ESI-MS等。

3. 蛋白质组分析软件:蛋白质组学研究得到的大量数据需要通过蛋白质组分析软件进行处理和分析。

这些软件可以对质谱数据进行解析、蛋白质鉴定和定量分析等。

常用的分析软件包括Mascot、MaxQuant等。

4.蛋白质相互作用研究技术:蛋白质在生物体内通常与其他蛋白质相互作用,形成复杂的蛋白质网络。

蛋白质相互作用研究技术可以帮助科学家了解蛋白质在细胞内的功能调控机制。

常用的蛋白质相互作用研究技术有酵母双杂交、蛋白质亲和纯化、共免疫沉淀等。

5.大规模蛋白质组测定技术:蛋白质组学研究需要同时分析大量的蛋白质样品。

目前,已经发展出了很多高通量、全面性的蛋白质组测定技术,如蛋白质芯片技术、TMT标记质谱技术等。

这些技术可以同时分析大量样品,提高研究效率。

总之,蛋白质组学及其相关技术在生物学、生物医学研究中具有重要的地位和应用前景。

蛋白质组学主要研究技术

蛋白质组学主要研究技术

蛋白质组学主要研究技术目前蛋白质组学的研究手段主要依靠分离技术、质谱技术和生物信息学的发展。

分离技术要求达到高分辨率和高重复率,质谱技术主要包括MALDI-TOF、Q-TOF与MS/MS等质谱设备以及样品的预处理,生物信息学则利用算法的改进和数据库查询比对的完善提高数据结果的判断。

1. 蛋白质组学的分离技术目前蛋白质组学研究广泛采用的是双向电泳技术。

高通量性、对实验要求低、操作简便快速是双向电泳具有的最大优点,它特别适合大规模的蛋白质组学研究。

尽管当前蛋白质的分离技术多种多样,但目前仍然没有一种可以彻底地取代双向电泳技术。

从1975年,O’Farrells[8]等将IEF与SDS-PAGE结合创立了2D-PAGE电泳技术以来。

双向电泳技术在多个方面都得到了提高和改进:(1) IPG胶条的使用。

传统的载体两性电解质等电聚焦存在上样量小、长时间电泳过程中pH梯度不稳定、阴极漂移现象及其导致的碱性蛋白损失、不同批次间重复性差等问题。

IPG 胶条的使用使这些问题得到了极大的改善,这使蛋白质双向电泳数据库的建立成为现实;(2) 样品制备:蛋白质样品的质量好坏从根本上决定了电泳最终结果的好坏。

双向电泳的样品制备有两个关键点,即如何使样品中蛋白质充分溶解以及尽可能减少影响等电点聚焦的杂质,特别是带电杂质。

采用超声或核酸酶处理的方法可以去除核酸,超速离心可除去脂类和多糖,透析、凝胶过滤或沉淀/重悬法可以降低盐浓度。

近来的研究发现磺基甘氨酸三甲内盐(ASB14-16)的裂解效果最好,而2mol/l的硫脲和4%的表面活性剂CHAPS的混合液能促使疏水蛋白从IPG到第二相胶的转换。

以三丁基膦(TBP)取代β-巯基乙醇或DTT,可以完全溶解链间或链内的二硫键,增强了蛋白质的溶解度,并促进蛋白质向第二向的转移。

另外,双向电泳中对低丰度蛋白的分离识别比较困难,除了显色技术的局限外,还存在容易被高丰度蛋白掩盖的问题,这样得到的蛋白质图谱很不完整,经常会忽略那些在生命过程中发挥重要功能的微量活性分子。

蛋白质组学技术的原理和应用

蛋白质组学技术的原理和应用

蛋白质组学技术的原理和应用随着科技的不断发展,蛋白质组学作为现代生命科学领域的重要分支逐渐崭露头角,成为了研究人员分析蛋白质结构、功能和相互作用的重要方法之一。

那么,蛋白质组学技术到底是什么,它又如何应用呢?一、蛋白质组学技术的原理所谓蛋白质组学技术,就是通过基于质谱分析和生物信息学原理的高通量分析方法,快速、高效地检测、鉴定和定量蛋白质样品中的成分、数量和相互作用等基本信息,进而揭示蛋白质在生命体内的功能和代谢等生物学特性。

其基本原理可以概括为以下三个步骤:(1)样品前处理:包括样品提纯、酶解、标记和纯化等处理,以获得符合质谱检测要求的样品。

(2)质谱分析:选择适当的仪器和方法,进行样品分析和蛋白质结构、功能等特性的检测和定量。

(3)生物信息学分析:通过大数据处理、数据库搜索和功能注释等方法,对质谱分析数据进行解读和分析,进而获取蛋白质相互作用、信号传递、代谢途径等生理特性的信息。

二、蛋白质组学技术的应用蛋白质组学技术的应用涵盖了广泛的生命科学领域,例如:1. 疾病诊断和治疗蛋白质组学技术可以检测和鉴定体内的蛋白质变化,发现与疾病有关的标志物、生物学特性和药物靶点等。

可应用于疾病的诊断、预后预测和治疗。

2. 食品和环境安全蛋白质组学技术可以用于鉴别和检测不同来源的食品、环境污染物等材料中的特定蛋白质成分和污染物类型,实现快速准确的定性和定量分析。

3. 新药开发蛋白质组学技术可以帮助药物的筛选和开发,检测药物分子与蛋白质分子之间的相互作用,预测药物的毒副作用和有效性,优化药物的种类和剂量等。

4. 基础研究蛋白质组学技术应用于蛋白质结构、功能和代谢等方面的基础研究,有助于揭示蛋白质在细胞、组织和器官等不同层次上的生理活动及其调控机制,为进一步研究人类疾病、生物进化和生物多样性等提供重要支持。

三、蛋白质组学技术面临的挑战尽管蛋白质组学技术具有广泛的应用和发展前景,但其面临的挑战也很多,包括:1. 样品前处理的复杂性和标准化难度。

蛋白质组学三大基本技术

蛋白质组学三大基本技术

蛋白质组学三大基本技术
蛋白质组学是一种新兴的生物学研究领域,它结合了生物信息学、分子生物学和代谢学,以研究蛋白质组学为中心,从而进行全面的分子细胞研究。

蛋白质组学的研究主要集中在蛋白质的结构、功能和相互作用等方面。

蛋白质组学的研究是以蛋白质组学的三大基本技术为基础的,即质谱、二级结构和互作分析。

质谱技术是蛋白质组学的基础技术,它可以用来鉴定和定性分析蛋白质。

质谱技术通过把蛋白质分解成各种不同的肽段,然后用高速质谱仪来鉴定和定量分析肽段,从而得出蛋白质的结构和定量。

二级结构分析是蛋白质组学的重要技术,它可以帮助我们了解蛋白质结构的细微差别,从而更好地了解蛋白质的功能和相互作用。

这种技术通过X射线衍射、核磁共振成像、电子显微镜等手段,可以揭示蛋白质的二级结构,进而揭示蛋白质的活性及其功能。

互作分析是蛋白质组学的一种关键技术,它可以帮助我们了解蛋白质组成细胞,以及蛋白质之间的相互作用。

互作分析可以用来检测蛋白质之间的相互作用,例如蛋白质的配体结合、蛋白质的激酶作用和蛋白质的信号转导等。

总之,蛋白质组学是一个非常有趣的领域,它以蛋白质组学的三大
基本技术为基础,可以帮助我们更好地理解蛋白质的结构、功能和相互作用。

展望未来,蛋白质组学在各个生物学领域都将发挥重要作用,并在基础生物学研究中发挥重要作用。

蛋白质组学的基本技术

蛋白质组学的基本技术

蛋白质组学的基本技术蛋白质组学是指对一个细胞、组织、机体所表达的全部蛋白或系统中包含的全部蛋白进行检测,包括蛋白质种类、表达水平、氨基酸序列、翻译后修饰情况以及蛋白质相互作用等,旨在从蛋白质层面揭示细胞的生理生化以及病理过程,诠释其执行各种生物学功能的分子机理。

蛋白质组学的研究内容决定了其基本技术主要涉及蛋白质样品制备、混合蛋白质组分分离以及蛋白质鉴定三个部分,每个独立的部分又包含多种不同的技术,下表列举了部分基本的蛋白质组学技术:蛋白质样品制备技术。

一步提取法。

采用单一裂解液和裂解步骤,提取细胞或组织中的全体蛋白。

分步提取法。

根据蛋白质的溶解性和蛋白质在细胞中不同的细胞器定位对蛋白样品进行预分级,将细胞或组织中的全体蛋白分成不同的部分。

蛋白质分离技术。

一维电泳分离技术。

根据蛋白质分子量的差异对其进行分离。

双向电泳分离技术。

根据蛋白质等电点和分子量的差异,连续进行成垂直方向的两次电泳将其分离。

毛细管电泳技术。

在高电场强度作用下,对毛细管中的待测样品按分子质量、电荷、电泳迁移率等差异进行有效分离。

色谱技术。

根据蛋白质混合物中的各组分与固定相的亲和力不同而导致洗脱速度不同实现各组分的分离。

蛋白质鉴定技术。

测序技术。

通过各种测序技术如Edman降解法、Sanger测序法等测定蛋白质的氨基酸序列从而实现蛋白质的定性鉴定。

质谱技术。

通过检测肽段离子的质荷比以及信号峰强度等信息结合生物信息学分析实现蛋白质的定性、定量、翻译后加工以及相互作用的蛋白质等。

百泰派克生物科技采用先进的凝胶电泳系统以及Thermo公司最新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪结合Nano-LC纳升色谱技术,提供高效精准的蛋白质组学分析服务技术包裹,可对各种复杂混合蛋白样品进行分离提纯以及定性定量等鉴定,还可根据需求提供定制化检测方案,欢迎免费咨询。

蛋白质组学的技术及工具

蛋白质组学的技术及工具

蛋白质组学的技术及工具随着科技的不断进步,人们对生命科学的认识也在不断深入。

作为生命体内最基本的组成成分之一,蛋白质在生命科学领域中有着极其重要的地位,而蛋白质组学则是对蛋白质进行系统研究的一个分支。

本文将简要介绍蛋白质组学的技术及工具。

一、基础技术1. SDS-PAGESDS-PAGE是一种基础的分离技术,它是以SDS(十二烷基硫酸钠)为主要成分的分离胶进行电泳分离的方法。

在这种胶中,SDS在电泳过程中能够使蛋白质分子电荷均匀分布,并将其线化,使得蛋白质分子按照分子量在胶中分离。

SDS-PAGE可以用于分离蛋白质混合物,并定量估计各个蛋白质的含量。

2. 二维凝胶电泳二维凝胶电泳是一种比SDS-PAGE更加复杂的技术。

它将样品先进行等电点电泳分离(通过电荷分离),再进行SDS-PAGE分离。

这种分离方法可以将蛋白质按照等电点电荷和分子量进行双向分离,从而获得更细致的分离结果。

3. 质谱技术质谱技术也是蛋白质组学研究中常用的一种技术。

MALDI-TOF、ESI-MS等技术均可用于对蛋白质进行检测和鉴定。

质谱技术可以通过检测蛋白质分子的质量和氨基酸序列等信息,了解蛋白质在分子水平上的结构和功能。

二、分析工具1. 普通、反向、多酸种、多芯片、多定量和差异分析工具这些工具包含了蛋白质质谱分析工具的基本分析步骤。

通过这些工具,研究者可以对蛋白质样本进行标记、分离、纯化、消旋,以及使用像人工神经网络和支持向量机等工具进行数据分析等。

2. 蛋白质互作网络分析工具蛋白质互作网络分析工具比较复杂,它主要是将蛋白质互作数据自动转换为互作网络模型,然后对网络模型进行自动聚类和网络优化,获得蛋白质间的结构、功能等信息,从而揭示更广泛的蛋白质功能和相互作用关系。

三、发展趋势蛋白质组学研究一直在不断发展中,随着技术的不断进步和计算机科学的快速发展,蛋白质组学研究领域也逐渐开始借鉴深度学习等方法。

预计未来,蛋白质组学研究将会深入到更多的领域,如药物设计和医学诊断等。

蛋白质组学的技术与应用

蛋白质组学的技术与应用

蛋白质组学的技术与应用随着生物技术的飞速发展,蛋白质组学逐渐成为了生物学研究的重要领域。

蛋白质组学研究的是在某种特定条件下生物体内所有蛋白质的表达和功能。

这个领域的研究意义非常重大,可以帮助我们深入了解生命的本质,同时也可以为新药的研发提供有力的支持。

本文将介绍一些常见的蛋白质组学技术和应用。

一、二维凝胶电泳技术二维凝胶电泳技术是蛋白质组学领域中最常见的技术之一。

这个技术可以将不同种类的蛋白质从复杂的混合物中分离出来,并用染色剂或放射性同位素等方法进行检测。

这个技术的实施分为两个步骤:首先,通过离子交换和分子筛分离出不同电荷和大小的蛋白质;其次,蛋白质样本按照电荷和分子量在两个不同的方向上进行电泳。

这种技术可以帮助我们了解不同蛋白质的表达和功能。

二、质谱技术质谱技术是一种高效、高灵敏度的蛋白质分析技术。

这个技术可以将蛋白质样本进行分离,并通过质谱仪来检测并鉴定蛋白质成分。

这个技术可以有效地鉴定不同的蛋白质,特别是小分子量的蛋白质,因此在药物研发和疾病诊断方面发挥了重要作用。

三、蛋白质芯片技术蛋白质芯片技术是一种高通量的蛋白质分析技术。

这个技术可以在一张芯片上检测成千上万种不同的蛋白质。

这种技术利用光滑玻璃芯片的光学特性,在上面附着不同的蛋白质分子,并通过荧光或化学计量法来检测芯片上的蛋白质。

这种技术可以极大地提高蛋白质检测的速度和灵敏度,因此在药物研发和疾病诊断方面也发挥了重要作用。

四、蛋白质组学在临床中的应用蛋白质组学技术在疾病诊断和治疗中有着广泛的应用。

比如,在癌症的诊断和治疗中,蛋白质组学技术可以被用来检测人体血液中的蛋白质水平,以此来判断患者的疾病状况和疗效。

在药物研发方面,蛋白质组学技术可以用来快速鉴定潜在药物的作用机制和靶点,并进一步优化药物分子结构和性质。

总之,蛋白质组学技术为我们深入了解生命的本质,帮助我们发现新的治疗方法和药物,并有着广泛的应用前景。

随着技术的不断发展和更新,相信蛋白质组学技术将会在更多的领域发挥重要作用,为我们创造更多的价值。

蛋白质组学方法概括

蛋白质组学方法概括

蛋白质组学方法概括大家好呀!今天咱就来聊聊蛋白质组学方法这个事儿。

蛋白质组学可是一门挺复杂又挺有意思的学科,它主要是研究细胞、组织或生物体在特定时间和空间下表达的所有蛋白质。

下面咱就详细说一说常用的一些蛋白质组学方法哈。

一、蛋白质分离技术。

这可是蛋白质组学研究的基础呢。

咱得先把复杂的蛋白质混合物给分开,才能更好地去研究它们。

1. 双向凝胶电泳。

这个方法就像是给蛋白质们排排队。

它先根据蛋白质的等电点在一个方向上进行电泳分离,然后再根据蛋白质的分子量在垂直方向上进行第二次电泳。

这样一来,不同的蛋白质就会在凝胶上分布在不同的位置,就像每个人都有自己的专属座位一样。

通过染色或者其他检测方法,我们就能看到这些蛋白质的斑点啦,还能比较不同样品中蛋白质的表达差异呢。

2. 液相色谱法。

液相色谱法就像是一个超级筛选器。

它利用蛋白质在固定相和流动相之间的分配差异来进行分离。

根据不同的分离机制,又可以分为反相液相色谱、离子交换色谱、亲和色谱等。

比如说反相液相色谱,它主要是根据蛋白质的疏水性来分离的,疏水性强的蛋白质在固定相上保留的时间就会长一些。

这种方法分离效率高,还能和质谱联用,很实用哟。

二、蛋白质鉴定技术。

分离完了,咱得知道这些蛋白质到底是谁呀,这就需要鉴定技术啦。

1. 质谱技术。

质谱技术那可是蛋白质鉴定的大明星。

它的原理就是把蛋白质离子化,然后根据离子的质荷比来进行分析。

比如说基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI TOF MS)和电喷雾电离质谱(ESI MS),这两种是比较常用的。

MALDI TOF MS就像是给蛋白质拍个“身份证照片”,能快速准确地测定蛋白质的分子量;ESI MS呢,它不仅能测定分子量,还能得到蛋白质的序列信息,就像是知道了蛋白质的“家庭住址”一样,很厉害吧。

2. 蛋白质芯片技术。

蛋白质芯片就像是一个蛋白质的“大超市”。

它把大量的蛋白质或者抗体固定在芯片表面,然后让样品中的蛋白质和芯片上的物质相互作用,通过检测信号来鉴定蛋白质。

蛋白质组学主要技术简介

蛋白质组学主要技术简介


有机荧光团染料
包括共价结合和非共价结合的荧光团染料两类。后者 最为常用,其典型代表是已经商品化的SYPRO Red、 Orange、 Ruby等荧光染料。

这三种染料可对SDS-PAGE胶内蛋白质进行一步染色,
约30~60min完成,灵敏度为2~10ng。染色后的凝胶用
标准的实验室300nm紫外透射仪进行照像保存,其线 性范围为3个数量级。

聚焦时间太短,会导致水平和垂直条纹的出现。 过度聚焦会造成蛋白图谱变性,在胶条碱性端产生水平条纹以及蛋 白丢失。

最佳时间的确定需要根据不同蛋白样品、上样量、pH范围和胶条长
度通过经验来确定。
4. IEF后胶条的平衡

一维结束后可马上进行二维电泳,也可保存在
两片塑料膜间于-80°保存数月。

德国Carl Zeiss公司PALM激光显微切割系统
第三代技术特点:
全自动系统,速度快 适应蛋白分析的需求
荧光激发模块
无接触的样品收集方式
•样品收集器可快速更换收集管 •多样品收集,可以通过软件控制自动选择样 品收集器的收集管
适用的组织样品
LCM优点和特性

快速简单、有效减少交叉污染 样品的切割与分离由激光一步完成,并可以保 持被分离的样品的完整性。 对制样的要求灵活多样,使用范围较广
但在二维电泳前一定要进行胶条的平衡,以
便于被分离的蛋白质与SDS完整结合,从而
在SDS-PAGE时电泳能顺利进行。
5. 胶条向第二向转移

将IEF后的胶条转移到垂直板聚丙烯酰胺上,
用1%的琼脂糖封闭,从而使胶条上的蛋白转
移到第二向分离胶中,根据分子量大小将pI接
近的蛋白进行进一步分离。

4d蛋白质组学研究的内容

4d蛋白质组学研究的内容

4d蛋白质组学研究的内容4D蛋白质组学是一种综合应用多维技术的研究方法,通过结合多种技术手段,对蛋白质在时间和空间上的变化进行全面研究。

它不仅可以揭示蛋白质的组成和结构,还可以研究蛋白质的功能、相互作用以及在疾病发生发展过程中的变化。

下面将从蛋白质组学技术、4D蛋白质组学的研究内容以及应用前景几个方面来详细介绍4D蛋白质组学的研究内容。

一、蛋白质组学技术蛋白质组学技术是研究蛋白质组成、结构和功能的一系列方法和手段的总称,主要包括质谱、蛋白质芯片、蛋白质亲和纯化和蛋白质结构分析等。

其中,质谱是蛋白质组学研究中最常用的技术之一,通过质谱仪对蛋白质样品进行分析,可以得到蛋白质的分子量、序列和修饰等信息。

蛋白质芯片则是一种高通量的蛋白质分析技术,可以同时检测上千种蛋白质的表达水平。

蛋白质亲和纯化技术可以通过特定的亲和剂选择性地富集目标蛋白质,从而实现对蛋白质的纯化和分离。

蛋白质结构分析则是通过X射线晶体学、核磁共振等技术对蛋白质的结构进行解析。

二、4D蛋白质组学的研究内容1. 时间维度:4D蛋白质组学关注蛋白质在时间上的变化。

通过对不同时间点或时间段的样品进行蛋白质组学分析,可以研究蛋白质的表达水平、修饰和功能等的动态变化。

例如,在细菌的感染过程中,可以通过4D蛋白质组学研究分析感染前后蛋白质表达的变化,从而揭示病原体与宿主相互作用的机制。

2. 空间维度:4D蛋白质组学关注蛋白质在空间上的分布和相互作用。

通过对细胞、组织或器官中蛋白质的定位和相互作用进行研究,可以揭示蛋白质在细胞功能和信号通路中的作用机制。

例如,通过4D蛋白质组学的研究,可以发现不同组织中的蛋白质表达差异,进而深入了解组织特异性功能的基础。

3. 多样性维度:4D蛋白质组学关注蛋白质的多样性,包括蛋白质的异构体、修饰和亚细胞定位等。

通过对不同形式的蛋白质进行综合研究,可以揭示蛋白质的功能和调控机制。

例如,通过4D蛋白质组学的研究,可以发现同一基因编码的蛋白质在不同细胞类型中的异构体表达差异,从而了解这些异构体在不同细胞类型中的功能差异。

单细胞蛋白质组学技术及应用

单细胞蛋白质组学技术及应用

单细胞蛋白质组学技术及应用随着科技的不断发展,我们对生命科学的研究越来越深入,也越来越关注细胞层面的探索。

单细胞蛋白质组学技术的出现为我们提供了研究单个细胞中蛋白质组的新手段,有着广泛的应用价值。

一、单细胞蛋白质组学技术简介单细胞蛋白质组学技术通过分离单个细胞中的蛋白质,并将其大规模提取、分离和鉴定,可有效研究这个单细胞的蛋白质组成。

该技术有别于传统方法,定量方式以及对样本数量的严格要求等问题得到了有效解决。

目前主要的单细胞蛋白质组学技术包括两种,即要求样本前处理的bottom-up技术和所使用样品不需要前处理的top-down技术。

其中,bottom-up 方法通过将蛋白质进行胰蛋白泥消化然后进行大规模质谱检测,可获得单细胞表达的大量肽质信息;top-down 方法则不需要样本前处理,但技术难度较大。

在这两种技术中,任一种都有各自的优缺点,取决于不同的研究目的及对象。

二、单细胞蛋白质组学技术的应用单细胞蛋白质组学技术已经被应用于诸多领域,其广泛的应用价值在于其具有的高通量、高灵敏、高准确度、高空间分辨率等优点,以下是几个应用案例:1.肿瘤细胞研究:单细胞蛋白质组学技术可以对肿瘤细胞或恶性肿瘤的物质组成信息进行有针的分析和研究,不仅帮助人们深入了解肿瘤细胞内蛋白质的表达动态以及对其进行精准治疗。

2.神经科学研究:单细胞蛋白质组学技术可用于定量鉴定不同类型神经元中的蛋白质,并有助于深入了解神经元的分类、连接以及命运决定机制等问题的解决。

3.干细胞研究:通过单细胞蛋白质组学技术,科学家们能够对干细胞中特定蛋白的表达进行鉴定和比较,这有助于了解干细胞中的功能,提高干细胞的应用效率。

4.微生物学研究:单细胞蛋白质组学技术还有助于了解微生物种群在不同条件下的变化和表达,用以深入了解微生物学中不同菌株及菌群的差异性,从而研究和应用微生物菌株。

三、单细胞蛋白质组学技术的展望单细胞蛋白质组学技术的发展是不可逆的趋势,其将对未来科技及医学产生深远的影响。

植物蛋白质组学的研究及其应用

植物蛋白质组学的研究及其应用

植物蛋白质组学的研究及其应用植物蛋白质组学是研究植物的全部蛋白质组成和其功能的科学。

植物蛋白质组学技术主要包括蛋白质分离、蛋白质定量、蛋白质鉴定、蛋白质组数据分析等过程。

植物蛋白质组学的研究广泛涉及植物的生长发育、代谢调控、逆境响应、蛋白质互作、基因调控等方面。

植物蛋白质组学的应用可为育种改良、疾病诊断、药物开发等提供基础数据。

一、植物蛋白质组学的技术1.蛋白质分离技术蛋白质分离是植物蛋白质组学研究的第一步,其目的是将复杂的样品中的混合蛋白质分离出来,以便进行后续工作。

常见的蛋白质分离技术包括电泳、柱层析、离子交换、凝胶过滤等。

2.蛋白质定量技术蛋白质定量是植物蛋白质组学研究的重要步骤,目的是根据样品中蛋白质的质量或浓度估算其含量。

常用的蛋白质定量技术包括BCA法、Lowry法、Bradford法、Biuret法等。

3.蛋白质鉴定技术蛋白质鉴定是植物蛋白质组学研究的核心步骤。

它不仅可通过序列分析确认蛋白质的身份,还可确定其翻译后的修饰、亚细胞定位和表达量。

常用的蛋白质鉴定技术包括质谱技术、Western blot等。

4.蛋白质组数据分析蛋白质组数据分析是植物蛋白质组学的重要环节之一,它的主要任务是从复杂的蛋白质组数据中提取有关生物学问题的信息。

常用的数据分析方法包括聚类分析、差异表示分析、KEGG生物通路分析等。

二、植物蛋白质组学的应用1.育种改良植物蛋白质组学可为育种改良提供重要数据。

通过对不同品种植物的蛋白质组进行研究,可以筛选出与重要农艺性状相关的蛋白质,进而鉴定基因组位置和功能,为育种改良提供新思路。

2.疾病诊断植物蛋白质组学也可应用于疾病诊断。

通过分析同一病种或不同病种植物体内蛋白质组的差异,可以筛选出特异性标志蛋白质,进而研究其生物学功能,推断致病机理,探求有效控制手段。

3.药物开发植物蛋白质组学在药物开发领域也有广泛应用。

通过分析病原体与宿主植物交互作用过程中的蛋白质表达变化,可发现免疫反应中关键的蛋白质,进而采用药物靶向机理受靶蛋白质的措施,研制新型抗菌、抗病毒药物。

蛋白质组学技术原理

蛋白质组学技术原理

蛋白质组学是一门综合性的学科,它涉及到生物学、化学、生物信息学、统计学等多个领域。

蛋白质组学技术原理主要是通过对蛋白质进行大规模的分析,从而全面了解生物体蛋白质的表达情况,进而为疾病诊断、药物设计和生物进化等领域提供重要的数据支持。

蛋白质组学技术主要包括样品处理、质谱分析、数据库搜索和功能注释等步骤。

样品处理主要是对蛋白质样品进行提取和分离,包括蛋白的提取、净化、酶解和裂解等步骤,其中酶解和裂解可以产生大量肽段,为后续分析提供更多信息。

质谱分析是将肽段电离并送入质谱仪中,通过检测分子离子质量进行肽段鉴定和丰度排序,并结合数据库进行比对,从而得到完整的蛋白质信息。

数据库搜索则是通过比对得到的肽段信息,与数据库中的标准蛋白质进行比对,从而确定蛋白质种类和序列。

功能注释则是对蛋白质进行生物学功能预测和相互作用分析,从而全面了解蛋白质的表达情况和生物体的生理状态。

具体来说,蛋白质组学技术主要包括以下几种原理:1. 双向凝胶电泳技术:这是一种常用的蛋白质组学技术,用于分离和鉴定蛋白质样品中的所有蛋白质。

它包括两步:首先是将蛋白质从组织或细胞中提取出来;其次是使用凝胶分离和电泳技术对蛋白质进行分离和迁移。

这种技术的优点是简单、快速且高灵敏度,能够检测到微量的蛋白质变化。

2. 同位素标记相对定量技术:这是一种常用的定量蛋白质组学技术,用于比较不同样本之间的蛋白质表达差异。

它使用同位素标记样本中的氨基酸,然后通过质谱分析对标记后的肽段进行鉴定和分析。

这种方法可以比较不同样本之间的蛋白质表达差异,并确定哪些蛋白质在样本之间发生了变化。

3. 蛋白质芯片技术:这是一种用于大规模检测和分析蛋白质的技术,用于检测组织或细胞中的蛋白质表达情况。

它包括将蛋白质点在芯片上,然后使用特异性抗体进行检测和分析。

这种方法可以同时检测大量蛋白质的表达情况,并能够快速、敏感地检测到蛋白质的变化。

总之,蛋白质组学技术原理主要包括样品处理、质谱分析、数据库搜索和功能注释等步骤,其中涉及到的技术包括双向凝胶电泳技术、同位素标记相对定量技术和蛋白质芯片技术等。

化学蛋白质组学

化学蛋白质组学

化学蛋白质组学
化学蛋白质组学是一种基于化学技术的蛋白质组学研究方法,主要通过化学分析和质谱技术研究蛋白质的性质和组成。

化学蛋白质组学研究主要包括以下内容:
1. 蛋白质分离:以电泳、色谱等方式对复杂的蛋白质混合物进行分离,降低蛋白质样品的复杂度,提高质谱分析的精度。

2. 蛋白质酶解:蛋白质酶解是将蛋白质分解成小的肽段的过程,通常使用肽酶或内切酶进行酶解,以利于质谱分析和蛋白质序列确定。

3. 蛋白质修饰分析:蛋白质在生物体内可以发生多种修饰,如磷酸化、乙酰化等,这些修饰对蛋白质功能发挥具有重要影响。

化学蛋白质组学研究可以通过质谱分析和光谱分析等技术手段来研究蛋白质修饰。

4. 蛋白质定量:蛋白质的定量分析是化学蛋白质组学研究中的一个重要环节,通常使用TMT、iTRAQ等多重标记技术或定量质谱技术进行蛋白质的相对定量与绝对定量。

化学蛋白质组学研究方法已成为蛋白质组学研究的重要手段之一,加速了蛋白质组学研究的发展。

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自发辐射
原子在没有外界干预的情况下,电子 会由处于激发态的高能级E2 自动跃迁至低 能级E1,这种跃迁称为自发跃迁。 自发辐射光子频率
E2 E1 h
E2 E1
h
受激辐射 当原子中的电子处 E2 E1 于高能级时,若外来 h 光子的频率恰好满足 时,电子会在外来光子的诱发下向低能 级跃,并发出与外来光子一样特征的光 子----受激辐射。 E2 E1
蛋白质组学主要技术简介
杨学习 生物技术学院
蛋白质组(proteome)

Proteome=PROTEins + genOME,意思是
Proteins expressed by a genome(基因组表达的所
有蛋白质)。

一个基因组、一种生物或一种细胞/ 组织所表达的
全套蛋白质
人蛋白质清单的估计

同普通SDS-PAGE类似。

无需浓缩胶?

在IPG胶条中蛋白质区域已得到浓缩,可以认为非 限制性IEF胶(低浓度丙烯酰胺胶)充当了浓缩胶。
Hale Waihona Puke 注意:进行第二向SDS-PAGE时,要求恒温, 但温度不要低于15℃,否则会引起凝胶收缩, 影响蛋白从胶条向第二向凝胶的转移。
7. 2D胶的染色


理想显色剂的7S
安全(safety):


灵敏(sensitivity):
简单(simplicity): 特异性(specificity): 快速(speed): 稳定(stability): 兼容性(synergy):


有机染料和银染:会减少胶内蛋白质产量。
胶体考马斯亮蓝染色灵敏度为30~100ng,线性范围是20倍



形态上(普通染色)
表型或功能上(荧光染色) (同质性)
二、二维凝胶电泳技术

二维电泳(two-dimensional gel electrophoresis, 2DE),又称双向电泳
第一向:等电聚焦分离,第二向:SDS-PAGE 两种不同性质


等电点


分子量
分辨率远高于其他任何一种单一的电泳方法,是目 前分析混合蛋白质样品最有效的手段。
三、生物质谱技术

原理:将样品离子化,根据不同的质量和电荷差 异确定分子量的技术

应用:蛋白质序列分析 蛋白质修饰分析

最重要的鉴定技术(支柱)
1.概述

化合物分子受到电子流冲击后,形成的带正电荷分子离子及碎片离子, 按照其质量m和电荷z的比值m/z(质荷比)大小依次排列而被记录下 来的图谱,称为质谱。

一个细胞的蛋白质组
5000条多肽


一个人瞬时的蛋白质组 100 000条多肽
一个人整个生命周期的蛋白质组 1 000 000 条多肽
蛋白质组研究整体技术的特点
规模化 通量化 自动化
技术目标(要求)
有效分离
准确鉴定
合理分析

预分离 同质 均一
激光捕获显微切割(LCM)技术
双向电泳实验流程
1. 2. 3. 4.
样品制备(Sample preparation) 固相预制胶条的水化(IPG strip rehydration) 第一向等电聚焦(IEF) 胶条的平衡(IPG strip equilibration)
5.
6. 7. 8.
胶条转移
第二向SDS-PAGE电泳(SDS-PAGE electrophresis) 凝胶的染色及检测(Detection/Staining) 图像分析(Software analysis)
银染:线性范围是40倍,灵敏度是考染的100倍。缺点是:对某些种类 的蛋白质染色效果差,对其后的蛋白质测序和质谱分析造成影响。


负染:
能专门提高PAGE胶上蛋白质的回收率,但不能用于膜上染色。 结果
表现为胶面着色而蛋白质点透明。

速度快(5~15min),蛋白质的生物活性能保持。 它主要适用于蛋白质显色、完整蛋白质的胶上被动提取以及质谱分析。


第三步:含复合表面活性剂的蛋白溶解液
膜蛋白约占整个样品的11%(W/W)。
1、样品制备

样品中核酸的去除
对电泳的影响:增加样品粘度、与蛋白质形
成复合物后会出现假象迁移和条纹。



解决方法:
不含蛋白酶的核酸内切酶进行降解

合成载体两性电解质(SCA)同核酸结合形成复合
物,通过超速离心来去除复合物

质谱分析法(Mass Spectrometry, MS)是在高真空系统中测定样
品的分子离子及碎片离子质量,以确定样品相对分子质量及分子结构
的方法。

同位素质谱、无机质谱、有机质谱、生物质谱
发展概况:

第一台质谱仪是英国科学家阿斯顿(F.W.Aston,1877—1945)于 1919年制成的。


下室温12h,使IPG干胶条边水化膨胀边上样。

IPG IEF 中pH梯度的选择

常用方法:先宽后窄,先线性后非线性,预
试验确定。
3. 第一向 等电聚焦 (isoelectric focusing, IEF)


聚焦时间的优化
理论上讲,要获得最好的图谱质量和重复性所需最佳时间是IEF分离 达到稳定态所需的时间。

Laser Capture Micro-dissection,是直接在光 学显微观察的基础上,利用激光能量对特定 的组织或细胞类型进行切割,从而获得均一 性的样品。
– 提到激光时脑海中的第一印象?
激光应用
• 军事
– 激光测距 – 直接摧毁 – 激光制导
激光应用
– 医疗:
• 最早的激光医疗应用:1961年12月在哥伦比亚长老会医院用红 宝石激光器进行了视网膜肿瘤治疗; • 肿瘤治疗; • 眼科手术:视网膜焊接、近视治疗; • 美容; • 外科手术等。
8. 图像分析

在用双向电泳进行差别表达蛋白质组分析时, 需要利用软件对产生的2D胶进行差别分析,
以寻找差别表达蛋白。

常用的软件如安玛西亚公司的Image Master
2D Elite或Image Master 2D Planium分析软件。
Image analysis with ImageMaster Platinum
德国Carl Zeiss公司PALM激光显微切割系统
第三代技术特点:
全自动系统,速度快 适应蛋白分析的需求
荧光激发模块
无接触的样品收集方式
•样品收集器可快速更换收集管 •多样品收集,可以通过软件控制自动选择样 品收集器的收集管
适用的组织样品
LCM优点和特性

快速简单、有效减少交叉污染 样品的切割与分离由激光一步完成,并可以保 持被分离的样品的完整性。 对制样的要求灵活多样,使用范围较广
发现了多种元素同位素 研究了53个非放射性元素 发现了天然存在的287种核素中的212种 第一次证明原子质量亏损。 他为此荣获1922年诺贝尔化学奖。
Present in (a) and (c) not (b)
/blog/introduction-to-2d-gel-electrophoresis/
视频



/html/video/2009/0807/1968.ht ml /html/video/2009/0807/1967.ht ml /html/video/2009/0807/1966.ht ml
第一代激光微切割技术

laser capture microdissection (LCM)

1995年Liotta教授等进一步发展的非接触性激光显微切割技 术(non-contact laser microdissection of membranemounted native tissue)使得显微切割实现了高度精确、
h
全同光子
实验表明,受激辐射产生的光子与外 来光子具有相同的频率、相位和偏振 方向。
光放大 在受激辐射中通过一个光的作用,得 到两个特征完全相同的光子,如果这两个 光子再引起其它原子产生受激辐射,就能 得到更多的特征完全相同的光子----光放 大,激光。
粒子数正常分布和粒子数反转
E2
E1
N2 N1
Laser Microbeam Microdissection LMM Laser Pressure Catapulting LPC
基于第一代的缺点,开创性地采用紫外激光沿样品外缘切割的工 作方式,利用激光离焦面的冲击力,将分离后的样品向上弹射 收集
-
系统特性: 无接触方式捕捉样本,避免污染 无热传送,无损DNA、RNA和蛋白结构或 或细胞的存活能力 激光切割精度小于1微米 可将不同种类的细胞,自动分类切割到不 同的离心管内
1、样品制备


防止化学修饰、聚集和沉淀
添加酶抑制剂

防蛋白质水解,目前多用PMSF、
EDTA/EGTA或甲苯磺酰赖氨酸氯甲酮(TLCK)
/甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲酮(TPCK)等


低温
防聚集、沉淀
2. IPG 胶条重泡胀(rehydration)和 上样(loading)

一般采用预制的IPG干胶条(商品化),需要用重泡胀 液(rehydration solution)使其重性水化膨胀成凝胶,使 样品能够充分进入凝胶内,完成上样。 可用重泡胀液在室温浸泡12h后上样,或在低电压(30v)
差别分析(Differential analysis)
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