一种复合固定脱钙液在临床病理制片中的应用
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1 材料与方法
1． 1 标本 选取 2012 年 1 月 ～ 2012 年 3 月南京军区福州 总医院病理科存档的 40 例标本，标本经 10% 中性福尔马林 固定，石蜡包埋。其中 20 例大肠癌组织行 VEGF 免疫组化 检测，20 例乳腺癌组织行 CKH 免疫组化检测。每例标本均 连续 4 μm 厚切片，各切 4 张，各分为实验 1 组、实验 2 组、对 照 1 组和对照 2 组。 1． 2 实验材料 抗体 VEGF（ clone： VG1） 、CKH（ clone： 34β
1 材料与方法
①
②
图 1 复合固定脱钙液处理后制片，切片结构清晰，染色均匀，细胞 形态保持良好 图 2 硝酸常规脱钙处理制片，细胞不着色或着 色很浅、结构不清
1． 1 材料 （ 1） 选取 2006 年 8 月 ～ 2011 年 12 月，分别来自 澳洋医院、涿州市医院、南京同仁医院临床各科需要脱钙处 理的骨及 钙 化 组 织 标 本。（ 2 ） 复 合 固 定 脱 钙 液： 甲 酸 330 ml，10% 中性福尔马林 660 ml，盐酸 10 ml。（ 3） 常规病理制 片所需的试剂及仪器。 1． 2 方法 （ 1） 固定脱钙法： 按常规标本固定法用复合固 定脱钙液处理，无需将骨组织周围的软组织全部剥去，一般 大的骨肿瘤标本可锯下不超过 0． 5 mm 厚的含骨组织，固定 脱钙液应为标本 5 ～ 10 倍。（ 2） 取材： ①复合固定脱钙液处 理 24 h，第 2 日取材前检查脱钙情况，一般含有小骨组织的 标本，可直接用流水冲 2 ～ 3 min 后用清水浸泡，取材结束后 再适当冲洗即随当日取材组织直接进入脱水程序。②对大 块的骨肿瘤、病变骨、钙化组织脱钙的标本，即使不能达到脱 钙要求，但其也已变软，一般处理成 1. 5 cm × 1. 0 cm × 0. 3 cm 大小组织块，并更换新的复合固定脱钙液。③第 3 日取 材时重复①步骤即可直接进入脱水程序。（ 3） 脱钙终点的 判断： 大头针能轻易刺入骨组织既为脱钙完成。 1． 3 固定脱钙后组织制片 与其他不需脱钙的组织一同进 行常规技术处理。
细胞核假阳性着色是免疫组化染色中较常出现的问题， 其表现为正常情况下免疫组化染色时应为胞质或胞膜着色 的抗体，却显示为细胞核着色。对于出现这种现象的原因， 一 些 试 剂 公 司 和 国 内 学 者 有 不 同 认 识 ，如 修 复 过 度［1，2］ 、组 织前期处理不当［3］等原因。近期笔者发现一种国内学者极 少报道的导致细胞核假阳性着色的原因，即使用电磁炉快速 加热进行免疫组化高温高压修复时，大功率加热比小功率加 热易出现细胞核假阳性着色的现象。为证实这一现象，特进 行实验研究，现报道如下。
3 讨论
3． 1 常规脱钙处理 （ 1） 将含骨及钙化组织及时、充分固 定后才可进行脱钙处理，脱去钙盐后才能制成切片，从标本 送到病理科到完成病理诊断需要较长时间； （ 2） 将大的骨肿 瘤、病变骨、钙化组织标本脱钙前处理成适宜大小，但在还未 脱钙处理的标本中取材时很难取成符合要求的规格组织块； （ 3） 为了脱钙和制片，应将骨组织周围的软组织全部剥去。 但制片后往往不能充分显示病变大小、浸润深度及与周围组 织的关系等。 3． 2 常规脱钙液 在实践工作中以硝酸、盐酸为主配置的 常规脱钙液，其存在以下缺点［1］： （ 1） 脱钙时间和浓度不易 掌握，时间过长可使组织形态结构侵蚀较大，破坏组织的形 态结构和细胞成分的性质，染色欠佳、结构不清； 时间过短， 脱钙不彻底，不 易 制 成 切 片 且 损 坏 刀 片，染 色 时 极 易 脱 片； （ 2） 脱钙后可使骨与周围结缔组织分离，造成组织不完整； （ 3） 脱钙液易变色，产生颜色后迅速影响脱钙速度，且会妨 碍随后的染色反应，影响组织的观察判断； （ 4） 脱钙的同时 也对组织酸化，HE 染色时造成细胞核不着色或着色很浅，往 往造成染色效果不理想，影响病理诊断（ 图 2） 。 3． 3 甲酸脱钙液 在病理技术实践中，甲酸是一种使用范 围较广的脱钙剂，性质温和，虽然在脱钙速度上较硝酸等强 酸类脱钙液缓慢，但能减少对细胞核的破坏，HE 染色骨组织 结构保持完整，细胞核染色清晰，色泽鲜艳，对比明显，能获 得良好的组织学形态特征。使用 Plank Rycho 脱钙液是以盐 酸为主要成分的盐酸甲酸混合脱钙液，脱钙后标本无需中和 及流水冲洗处理，可直接进入脱水程序［2］，其制片、染色等均 获得满意效果，但在脱钙前必须对含骨标本进行及时、充分
临床与实验病理学杂志 J Clin Exp Pathol 2012 Oct; 28( 10)
·1171·
大功率电磁炉高压抗原修复中细胞核假阳性着 色研究
齐兴峰，余英豪
关键词： 高压修复； 抗原修复； 免疫组织化学 中图分类号： R 392-33 文献标志码： B 文章编号： 1001 － 7399（ 2012） 10 － 1171 － 02
wk.baidu.com·1170·
临床与实验病理学杂志 J Clin Exp Pathol 2012 Oct; 28( 10)
一种复合固定脱钙液在临床病理制片中的应用
司明远
关键词： 骨； 钙化组织； HE 切片； 复合固定脱钙液 中图分类号： R 329-33 文献标志码： B 文章编号： 1001 － 7399（ 2012） 10 － 1170 － 02
好、结构层次保持清楚，组织和细胞形态清晰，着色鲜艳（ 图 1） 。
临床病理检查经常遇到骨及钙化组织标本，常规处理方 法是先固定，待充分固定后进行脱钙处理，然后进入常规制 片程序，到完成病理诊断需要较长的时间。如何在较短时间 内完成固定、脱钙处理，其速度快、效果好，同时制成的切片 又和常规处理的不含骨组织的切片一样，不影响对病变组织 的诊断？ 一直是病理同行探讨的问题。我们从复合固定脱 水 A-F 液的配制中得到启示，该操作方法简单、省时、固定脱 钙效果好，现介绍如下。
2 结果
复合固定脱钙液制成的组织切片厚薄均匀，平坦完整， 因不需去除骨周围的组织，可按规范取材，其制片可充分显 示病变大小、浸润深度及与周围组织的关系等，组织完整性
收稿日期： 2012 － 03 － 19 作者单位： 南京同仁医院病理科，南京 211102 作者简介： 司明远，男，副主任医师。E-mail： 775793523@ qq． com
1． 1 标本 选取 2012 年 1 月 ～ 2012 年 3 月南京军区福州 总医院病理科存档的 40 例标本，标本经 10% 中性福尔马林 固定，石蜡包埋。其中 20 例大肠癌组织行 VEGF 免疫组化 检测，20 例乳腺癌组织行 CKH 免疫组化检测。每例标本均 连续 4 μm 厚切片，各切 4 张，各分为实验 1 组、实验 2 组、对 照 1 组和对照 2 组。 1． 2 实验材料 抗体 VEGF（ clone： VG1） 、CKH（ clone： 34β
1 材料与方法
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图 1 复合固定脱钙液处理后制片，切片结构清晰，染色均匀，细胞 形态保持良好 图 2 硝酸常规脱钙处理制片，细胞不着色或着 色很浅、结构不清
1． 1 材料 （ 1） 选取 2006 年 8 月 ～ 2011 年 12 月，分别来自 澳洋医院、涿州市医院、南京同仁医院临床各科需要脱钙处 理的骨及 钙 化 组 织 标 本。（ 2 ） 复 合 固 定 脱 钙 液： 甲 酸 330 ml，10% 中性福尔马林 660 ml，盐酸 10 ml。（ 3） 常规病理制 片所需的试剂及仪器。 1． 2 方法 （ 1） 固定脱钙法： 按常规标本固定法用复合固 定脱钙液处理，无需将骨组织周围的软组织全部剥去，一般 大的骨肿瘤标本可锯下不超过 0． 5 mm 厚的含骨组织，固定 脱钙液应为标本 5 ～ 10 倍。（ 2） 取材： ①复合固定脱钙液处 理 24 h，第 2 日取材前检查脱钙情况，一般含有小骨组织的 标本，可直接用流水冲 2 ～ 3 min 后用清水浸泡，取材结束后 再适当冲洗即随当日取材组织直接进入脱水程序。②对大 块的骨肿瘤、病变骨、钙化组织脱钙的标本，即使不能达到脱 钙要求，但其也已变软，一般处理成 1. 5 cm × 1. 0 cm × 0. 3 cm 大小组织块，并更换新的复合固定脱钙液。③第 3 日取 材时重复①步骤即可直接进入脱水程序。（ 3） 脱钙终点的 判断： 大头针能轻易刺入骨组织既为脱钙完成。 1． 3 固定脱钙后组织制片 与其他不需脱钙的组织一同进 行常规技术处理。
细胞核假阳性着色是免疫组化染色中较常出现的问题， 其表现为正常情况下免疫组化染色时应为胞质或胞膜着色 的抗体，却显示为细胞核着色。对于出现这种现象的原因， 一 些 试 剂 公 司 和 国 内 学 者 有 不 同 认 识 ，如 修 复 过 度［1，2］ 、组 织前期处理不当［3］等原因。近期笔者发现一种国内学者极 少报道的导致细胞核假阳性着色的原因，即使用电磁炉快速 加热进行免疫组化高温高压修复时，大功率加热比小功率加 热易出现细胞核假阳性着色的现象。为证实这一现象，特进 行实验研究，现报道如下。
3 讨论
3． 1 常规脱钙处理 （ 1） 将含骨及钙化组织及时、充分固 定后才可进行脱钙处理，脱去钙盐后才能制成切片，从标本 送到病理科到完成病理诊断需要较长时间； （ 2） 将大的骨肿 瘤、病变骨、钙化组织标本脱钙前处理成适宜大小，但在还未 脱钙处理的标本中取材时很难取成符合要求的规格组织块； （ 3） 为了脱钙和制片，应将骨组织周围的软组织全部剥去。 但制片后往往不能充分显示病变大小、浸润深度及与周围组 织的关系等。 3． 2 常规脱钙液 在实践工作中以硝酸、盐酸为主配置的 常规脱钙液，其存在以下缺点［1］： （ 1） 脱钙时间和浓度不易 掌握，时间过长可使组织形态结构侵蚀较大，破坏组织的形 态结构和细胞成分的性质，染色欠佳、结构不清； 时间过短， 脱钙不彻底，不 易 制 成 切 片 且 损 坏 刀 片，染 色 时 极 易 脱 片； （ 2） 脱钙后可使骨与周围结缔组织分离，造成组织不完整； （ 3） 脱钙液易变色，产生颜色后迅速影响脱钙速度，且会妨 碍随后的染色反应，影响组织的观察判断； （ 4） 脱钙的同时 也对组织酸化，HE 染色时造成细胞核不着色或着色很浅，往 往造成染色效果不理想，影响病理诊断（ 图 2） 。 3． 3 甲酸脱钙液 在病理技术实践中，甲酸是一种使用范 围较广的脱钙剂，性质温和，虽然在脱钙速度上较硝酸等强 酸类脱钙液缓慢，但能减少对细胞核的破坏，HE 染色骨组织 结构保持完整，细胞核染色清晰，色泽鲜艳，对比明显，能获 得良好的组织学形态特征。使用 Plank Rycho 脱钙液是以盐 酸为主要成分的盐酸甲酸混合脱钙液，脱钙后标本无需中和 及流水冲洗处理，可直接进入脱水程序［2］，其制片、染色等均 获得满意效果，但在脱钙前必须对含骨标本进行及时、充分
临床与实验病理学杂志 J Clin Exp Pathol 2012 Oct; 28( 10)
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大功率电磁炉高压抗原修复中细胞核假阳性着 色研究
齐兴峰，余英豪
关键词： 高压修复； 抗原修复； 免疫组织化学 中图分类号： R 392-33 文献标志码： B 文章编号： 1001 － 7399（ 2012） 10 － 1171 － 02
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临床与实验病理学杂志 J Clin Exp Pathol 2012 Oct; 28( 10)
一种复合固定脱钙液在临床病理制片中的应用
司明远
关键词： 骨； 钙化组织； HE 切片； 复合固定脱钙液 中图分类号： R 329-33 文献标志码： B 文章编号： 1001 － 7399（ 2012） 10 － 1170 － 02
好、结构层次保持清楚，组织和细胞形态清晰，着色鲜艳（ 图 1） 。
临床病理检查经常遇到骨及钙化组织标本，常规处理方 法是先固定，待充分固定后进行脱钙处理，然后进入常规制 片程序，到完成病理诊断需要较长的时间。如何在较短时间 内完成固定、脱钙处理，其速度快、效果好，同时制成的切片 又和常规处理的不含骨组织的切片一样，不影响对病变组织 的诊断？ 一直是病理同行探讨的问题。我们从复合固定脱 水 A-F 液的配制中得到启示，该操作方法简单、省时、固定脱 钙效果好，现介绍如下。
2 结果
复合固定脱钙液制成的组织切片厚薄均匀，平坦完整， 因不需去除骨周围的组织，可按规范取材，其制片可充分显 示病变大小、浸润深度及与周围组织的关系等，组织完整性
收稿日期： 2012 － 03 － 19 作者单位： 南京同仁医院病理科，南京 211102 作者简介： 司明远，男，副主任医师。E-mail： 775793523@ qq． com