大肠杆菌计数
大肠杆菌 食品标准
大肠杆菌食品标准本标准旨在规定食品中大肠杆菌的限量标准、检测方法、卫生条件、记录与报告、处理措施、培训与教育以及监督与执法等方面的要求。
●限量标准在食品中，大肠杆菌的限量标准应根据不同的食品种类和不同的国家或地区标准而制定。
一般来说，以下限量标准可供参考：●熟肉制品：每100克食品中，大肠杆菌不得超过100个/克。
●鲜奶及奶制品：每100毫升食品中，大肠杆菌不得超过10个/毫升。
●新鲜蔬菜和水果：每100克食品中，大肠杆菌不得超过10个/克。
●饮用水：每100毫升食品中，大肠杆菌不得超过1个/毫升。
检测方法大肠杆菌的检测方法一般采用GB 4789.3-2016中的平板计数法或滤膜法。
具体操作步骤如下：●采样：随机选取样品进行检测。
●培养基制备：使用大肠杆菌选择性培养基，如结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）或麦康凯琼脂。
●样品处理：将样品进行适当稀释，以适合平板计数或滤膜法。
●接种：将稀释后的样品接种到培养基上，进行培养。
●观察与计数：在37℃下培养24-48小时，观察菌落形态，并进行计数。
卫生条件为控制食品中大肠杆菌的数量，应保持良好的卫生条件。
具体要求如下：●加工场所：加工场所应清洁卫生，定期进行清洁和消毒。
●个人卫生：工作人员应保持良好的个人卫生习惯，如勤洗手、穿戴清洁的工作服和口罩等。
●原料控制：对原料进行严格控制，避免污染和交叉感染。
●加工过程：在加工过程中，应严格按照食品安全标准操作程序进行操作，防止污染和交叉感染。
●贮存和运输：在贮存和运输过程中，应采取适当的措施，如低温贮存、避免与污染物质接触等，以保持食品的安全性和卫生质量。
记录与报告为确保食品安全和可追溯性，应做好大肠杆菌检测的记录和报告工作。
具体要求如下：●记录：对大肠杆菌检测的结果进行详细记录，包括采样时间、样品名称、生产厂家、检测结果等信息。
●报告：定期向上级主管部门报告大肠杆菌检测结果，以及采取的处理措施和效果等信息。
处理措施在大肠杆菌检测超标的情况下，应采取以下处理措施：●封存和隔离：立即封存超标批次的产品，并将其与其他产品隔离，以防止交叉感染。
大肠杆菌的检测MPN计数法
大肠杆菌的检测(MPN计数法) 大肠杆菌的检测在环境和食品微生物检测中至关重要，因为这些微生物的存在可能指示污染和潜在的健康风险。
MPN计数法是一种常用的检测大肠杆菌的方法，下面将详细介绍这种方法。
一、MPN计数法简介MPN计数法，全称Most Probable Number，即最可能数，是一种通过统计学方法估算微生物数量的方法。
它的基本原理是在一定的稀释度下，通过系列梯度稀释的样本中存在微生物的概率来推算样本中实际的微生物数量。
二、MPN计数法检测大肠杆菌的步骤1.样品采集：采集被检样品，如水、食品等，并按照无菌操作的要求进行处理，以避免污染和交叉感染。
2.制备稀释液：将样品进行一系列的稀释，如10-1、10-2、10-3等。
每个稀释度的样品需要进行三份平行试验，以增加结果的可靠性。
3.选择合适稀释度的样品：根据实验结果，选择适合的稀释度的样品进行MPN计数。
这个稀释度应该是使样品中大肠杆菌的数量落在10~100之间，以提高估算的准确性。
4.培养：将选择的稀释度的样品分别接种到含有特殊培养基的试管中，培养基是为了促进大肠杆菌的生长。
每个试管中接种的样品量为10ml。
5.结果分析：经过一定时间的培养后，观察每个试管中的菌落数并记录。
根据统计学原理，通过这些数据可以得出样本中大肠杆菌的最可能数。
6.结果报告：根据实验数据，计算并报告每100ml（或者每1g）样品中大肠杆菌的最可能数。
三、MPN计数法的优势和局限性优势：1.MPN计数法是一种广泛应用的方法，可用于估计微生物的数量，不仅适用于大肠杆菌，还适用于其他微生物。
2.该方法不需要昂贵的仪器设备，操作相对简单，可用于基层实验室。
3.MPN计数法可以提供微生物数量的范围，而非单一数值，对于初步估计和趋势分析具有一定的参考价值。
局限性：1.MPN计数法的主观性较强，结果会受到操作人员的影响。
因此，需要操作者接受专业培训并遵循严格的操作规程。
2.MPN计数法的准确性相对较低，尤其是在微生物数量较少的情况下，可能存在较大的误差。
对大肠杆菌采用的计数方法
对大肠杆菌采用的计数方法说实话对大肠杆菌采用的计数方法这事，我一开始也是瞎摸索。
我试过好多种方法呢。
最开始用的是显微镜直接计数法，我就想啊，这大肠杆菌在显微镜下应该能一个个数清楚吧。
我就把含有大肠杆菌的样本小心翼翼地制备成涂片，放在显微镜下看。
可这哪有想象得那么简单啊。
那些大肠杆菌在显微镜下，密密麻麻的，就像一堆乱麻里找线头似的。
而且要把它们准确地数出来特别费劲，稍微眼睛一花，就数错了。
我当时那叫一个头疼，这一不留神就重来一次，这个方法误差真的大得很呢。
后来我又尝试了平板菌落计数法。
这个就像是在一个大操场上把学生都分成一个个小组那样。
先把大肠杆菌的样品进行适当的稀释，然后把稀释后的菌液铺到培养平板上。
这一步可千万要均匀，就好比浇花要把水洒得均匀是一个道理。
不然的话啊，有的地方菌多，有的地方菌少，那最后数出来的结果肯定不准。
我就有一次，太着急了，没有铺匀，培养出来的菌落在平板上分布得乱七八糟的，那得出的结果根本不能用。
不过这个方法如果做好了的话，还比较靠谱。
等菌落在平板上长出来以后，就可以慢慢地数数了。
要注意那些特别小或者生长得怪异的菌落也要算进去哦，可不能只挑那些长得好看又大的菌落数。
这个过程可得耐心，不过这样得出来的数就能大概知道原来样品里大肠杆菌的数量了。
我还听说有种比浊法，但我自己对这个不是特别有把握，因为它是通过菌液的混浊度来推断大肠杆菌的数量。
我觉得这里面误差肯定不小，不过好像操作比较简单，但是这个可能需要一些专业的仪器，而且不同的大肠杆菌菌株或者培养状态下，浊度和数量的关系可能会不一样，反正这个方法我就只是稍微了解，没怎么深入去做呢。
我现在觉得啊，要想准确对大肠杆菌计数，平板菌落计数法虽然麻烦点，但只要操作仔细啊，得到的结果还是比较可靠的。
要是急急忙忙或者东错一点西错一点的话，那结果就完全不能用了。
不过大家要是有更好的办法也跟我说一说呗。
大肠菌群计数实验报告
大肠菌群计数实验报告
大肠菌群计数实验报告是一种检测方法，用于分析和诊断含有大肠菌群的样本。
大肠菌群通常包括具有相似生物学特性的细菌，例如大肠杆菌（E. coli）、变形杆菌（P. aeruginosa）、溶血性大肠杆菌（S. dysenteriae）、肠球菌（C. perfringens）和致病性大肠杆菌（S. typhimurium）等。
大肠菌群计数实验报告包括使用大肠菌群计数法对样本中大肠菌群进行测定，以及相关报告内容：
1. 报告内容：样本来源，检测时间，报告人员，检测手段，结果判断等。
2. 细菌种类：具体种类及数量。
3. 风险评估：根据测得的细菌数量给出风险评估，具体包括有害细菌的数量、比例及其潜在危害。
4. 临床指导：根据测得的细菌数量和风险评估，给出临床指导，提供疾病预防及治疗的建议。
食品卫生微生物学检验 大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌计数
大肠菌群计数：第一法 6 操作步骤
6.2 初发酵实验 对每个样品，选择适宜的三个连续稀释度的样品匀液，液体 样品可以包括未经稀释的原液，每个稀释度接种三管月桂基硫酸 盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量需要超过1mL， 则用双料LST肉汤）。36℃±1℃培养24h±2h，检查倒管内是否有气 泡产生或轻摇试管时是否有密集连续的细小气泡从管底逸出，如 未产气则继续培养至48h±2h。记录在24h和48h内产气的LST肉汤管 数。未产气者为大肠菌群阴性；对产气者，则进行复发酵试验。
食品卫生微生物学检验 大肠杆菌计数
Microbiological examination of food hygiene -Enumeration of Escherichia coli
大肠菌群计数
大肠菌群
定义：一群在36℃条件下培养24~48小时能发酵乳糖、产酸 产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 卫生学概念，包括埃希氏菌属，克雷伯氏菌属、肠杆菌属 和柠檬酸杆菌属等的细菌 检验比较简单，所以被广泛用做水源的卫生指标和食品加 工卫生状况的通用指标
Microbiological examination of food hygiene -Enumeration of Coliforms
食品卫生微生物学检验 粪大肠菌群计数
Microbiological examination of food hygiene -Enumeration of faecal coliforms
℃± 1 ℃ 36 36℃
验
24h~ 48h
报告结果
大肠菌群计数
大肠菌群计数
大肠菌群计数
第一法
MPN法
第二法 平板计数法 第三法 Petrifilm测试片法
大肠杆菌及大肠菌群计数方法
大肠杆菌及大肠菌群计数方法大肠杆菌和大肠菌群计数方法Enumeration of Escherichia coli and the coliform章节内容：传统检测大肠菌群和大肠杆菌的方法LST-MUG法检测冷藏和冷冻食品中的大肠杆菌（除双壳类软体动物制品外）瓶装水检测方法贝类和贝类肉制品检测方法柑桔类水果汁中大肠杆菌检测方法大肠菌群和大肠杆菌计数的其他方法参考文件大肠埃希氏菌，以前常称大肠杆菌，于1885年由德国儿科医生Theodor Escherich 发现，广泛存在于人类和温血动物的肠道中，是人类和动物肠道中需氧性共生菌的优势菌群，维持宿主健康部分生理功能必需的肠道菌。
大肠埃希氏菌属肠杆菌科，肠杆菌科包括许多种细菌，致病菌有沙门氏菌、志贺氏菌、和耶尔森氏菌。
虽然大多数的大肠埃希氏菌为非致病菌，但是当宿主免疫力降低或细菌侵入肠道的外组织或器官时，可引起肠外感染。
某些血清型可产生毒素，为致病性大肠埃希氏菌，可引起人类腹泻。
1892年，Shardinger建议把大肠杆菌作为粪便污染的指标。
由于大肠杆菌广泛存在于人类和动物中，而在其他地方少见。
再者，大肠杆菌能发酵葡萄糖（以后改为为乳糖）产生气体。
与已知的非产气致病菌容易区别开来。
因此，大肠杆菌的检测已成为水和食品的近期粪便污染指标，表明可能含有致病菌。
肠道中柠檬酸盐菌，克雷伯氏菌和肠杆菌能发酵乳糖，与大肠杆菌的生物型非常相似，使得把大肠杆菌作为健康威胁的指标，在实际应用中很复杂。
于是，大肠菌群这个术语用来描述这类肠道菌，大肠菌群不是一个分类学上的定义，而是一个工作定义，指的是一群在35℃培养48h，产酸产气的，革兰氏阴性的芽孢杆菌。
1914年，每国公共健康协会把大肠菌群作为一个重要的卫生标准。
虽然大肠菌群很容易检测到，但不一定与粪便污染有关系，因为在自然环境样品中也常存在。
于是，粪大肠菌群就作为粪便污染的指标。
首先由Eijkman提出，指的是在高温下发酵乳糖，是总大肠菌群的亚群，同时也称为耐热大肠菌群。
大肠杆菌的检测(MPN计数法)
食品微生物检验技术课程综述大肠杆菌得检测(MPN计数法)院系: 食品科学与药学学院班级: 食科1１4姓名: 张花学号: 1140314３1组长: 张军玲成员: 张花赵晶郁朱娟娟大肠杆菌Petｒiｆilm测试片计数法摘要食品检测就是反映食品加工、贮藏、运输、等环节得卫生与安全状况得重要手段,而大肠菌群检测则就是食品检测得重要指标均之一。
根据定义大肠菌群就是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气得需氧与碱性厌氧得革兰氏阴性芽胞杆菌、其主要检测意义在于反映食品卫生状况并推测其在肠道致病菌得可能性、Ｐｅtrifilｍ大肠菌群测试片就是由美国３M生产得一种预先制备好得ＶRＢ平板培养基系统,并添加了TTＣ作为菌落指示剂便于菌落判读,而上层薄膜可以起到对大肠菌群发酵产生得气体截留得作用、该方法目前已被多数权威机构认可,并在国内很多实验室开展运用、关键词大肠杆菌Petｒifilｍ测试法1设备与材料１。
１恒温培养箱:3６±1℃。
1。
２冰箱２～５℃、１。
３恒温水浴箱 :4４。
5±0、2℃。
1。
4天平:感量０。
１g。
1、5均质器1。
６振荡器。
1.７无菌吸管:ｌｍＬ(具０。
0１ mL刻度)、1０mＬ(具0、１mL刻度)或微量移液器及吸头。
1.8无菌锥形瓶:容量500ｍＬ。
1。
９玻璃珠:直径约5mm、１.10pH计或pH比色管或精密ｐH试纸1.１１试管架。
２。
培养基与试剂２.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨( LST )肉汤。
2、２ＥC肉汤。
2、3蛋白胨水。
2.4缓冲葡萄糖蛋白胨水(MP-VP实验用)。
2。
5磷酸盐缓冲液。
2。
6无菌生理盐水:称取8。
５ｇ氯化钠溶于10０0ml蒸馏水中,121℃高压灭菌1５ｍｉn。
2、71ｍol／L氢氧化钠(NａOＨ ) :称取40g 氢氧化钠溶于1000ml蒸馏水中、2.81moｌ/L 盐酸(HCI ) :移取浓盐酸９0ml,用蒸馏水稀释至100０ｍl。
3检验程序4.样品稀释4、1固体与半固体样品:以无菌操作将检样25mL样品,置盛有２25mL磷酸盐缓冲液得无菌均质杯内或其她稀释液得灭菌锥形瓶内(瓶内予置适当数量得玻璃珠,经充分振摇或研磨做成１:１0得均匀稀释液。
大肠菌群计数含MPN表
大肠菌群计数是一种估计悬浮在水溶液中活菌数的方法。
一般分几组进行，每一组各有数重复，分别以渐次的方式加入不同量的待测水溶液于培养液中进行培养，随后观察每一组中的试管是否有菌生长，然后再利用统计表估计菌数。
例如水中coliform数的测定，将待测水溶液以10ml,1ml及0.1ml的量分别加入各组，每组三重复，经培养后观察coliform是否有生长，统计有菌生长的管数，以统计表统计菌数。
活菌的浓度可利用MPN的方式来估计，方式简单，可分为下列两步骤：在培养基中作数个重复稀释；记录有菌生长的试管。
若试管中无生长，则可能代表连一支菌都没有生长。
从统计观点，MPN这个方法是一种非常没效率的方式，因为每一试管与培养皿表面生长的菌数只有很小部分符合。
然而MPN的好处有以下：若菌无法长在固态培养基时，便可使用；若菌的生长的动力学具有很大变化，便可使用：假设某些菌会会立即且迅速的生长，且会在固态培养基产生很大的菌落，且与我们要的菌落接触到或盖过时；因为较少且具高度游动性或快速生长的菌，可能形成小菌落，因而其数量是很多而导致无法计数；假如非我们所要菌存在，或无筛选的方法存在时，便可使用。
虽然有污染的细菌可以大量生长，但仍可藉由我们所要看的菌产生特定的产物来估计；假如琼脂或其他固化材料有某些因素会干扰我们计数时，便可使用大肠菌群MPN表正反应试管数MPN/ml （g ）95% 信赖界线0.1ml0.01ml0.001ml下限上限000< 30013< 590103< 513020---1004< 5201017121110712311111336120113362009136201143372101534421120789220214472212810150230---30023412030139713030264153803104372103117514230312120303803209315380321153044032221035470330240361,300331460712,4003321,1001504,800333> 1,100> 150> 4,800说明：若稀释倍数为10，100，1000倍（即每ml LST中0.1，0.01，0.001ml（g）之检体），且LST均产气（正反应试管数3-3-3），经接种至EC，而其产气试管数为3-1-0，对照MPN为43，即为该检体大肠杆菌MPN数为43/ml（g）。
大肠菌群平板计数法方法学验证报告
大肠菌群平板计数法方法学验证报告实验步骤如下：1.准备培养基：将大肠杆菌选择培养基加入培养基瓶中，并用自来水洗净外面的杂质，随后用蒸馏水冲洗内表面。
将瓶口用无菌布覆盖，用锡箔纸包好，然后高温高压灭菌，储存在无菌环境中备用。
2.取少量待检样品：将待检食品样品（例如牛奶、蔬菜、饮用水等）取一适量，在无菌的条件下进行操作。
先将样品摇匀使其均匀分布，然后用无菌吸管取1毫升待检样品。
3.稀释样品：用无菌吸管将1毫升待检样品转移至无菌试管中，再向试管分别加入9毫升无菌生理盐水，摇匀使其均匀混合。
此时的样品为10倍稀释样品，将试管中的液体倒入下一个试管中，再加入9毫升无菌生理盐水，以此类推，制备出一系列浓度递减的稀释样品。
4.接种培养基：将每个稀释样品分别倒入标记好的平板培养基上，倒入后轻轻晃动，使其均匀分布在培养基上，然后在无菌工作台上用无菌铂丝铲取纱球大小的韧带状菌液涂抹在固体培养基表面，使细菌均匀生长。
5.培养和计数：将培养基板反面朝上，放入37°C恒温培养箱中进行培养，培养的时间一般为24小时。
待培养结束后，观察培养基表面是否出现典型的大肠菌群菌落。
使用菌落计数器对每个平板上的菌落进行计数。
根据以上实验步骤进行大肠菌群平板计数法的实验后，得出以下结论：1.适用性验证：通过本实验，我们可以验证大肠菌群平板计数法的适用性。
在我们的实验中，使用该方法对不同类型的食品样品进行了检测，并得出了相应的菌落计数。
这表明该方法适用于不同类型的样品，可以准确地测定大肠菌群数量。
2.优点：大肠菌群平板计数法具有以下优点：简单易行，操作方便；可定量测定大肠菌群数量，结果可靠；适用于不同类型的食品样品。
3.缺点：大肠菌群平板计数法也存在一些局限性：菌落计数需要较长时间，一般需要24小时才能观察到菌落；该方法只能测定培养基中能够生长的细菌，无法对其他微生物进行定量测定。
综上所述，大肠菌群平板计数法是一种能够准确测定大肠菌群数量的方法。
大肠杆菌群计数注意事项
大肠杆菌群计数注意事项嘿，咱今儿就来聊聊大肠杆菌群计数这档子事儿。
你可别小瞧了这大肠杆菌群，它们在咱生活中那可是无处不在啊！要想准确计数它们，那可得注意好多方面呢。
首先啊，采样就得特别讲究。
就好比你去摘果子，你得挑那长得好、没毛病的果子吧，采样也是一个道理。
要是采的样不对，那后面的计数能准吗？所以采样的地方得选对，不能随随便便就弄一点。
然后说说培养基，这可是大肠杆菌群生长的“家”呀。
这“家”要是不合适，它们能好好长吗？培养基的质量那得过关，不然怎么能让大肠杆菌群茁壮成长呢？还有啊，培养的条件也很重要。
温度啦、湿度啦，都得恰到好处。
你想想，要是温度太高或太低，那不就跟人待在极冷或极热的环境里一样难受嘛，它们还能好好繁殖吗？在操作过程中，一定要注意无菌操作。
这就好比做饭，你总不能让脏东西掉进锅里吧，那做出来的饭还能吃吗？无菌操作就是要保证咱的计数结果不受其他杂菌的干扰。
计数的时候也得瞪大了眼睛，可别数错了呀。
这就跟数星星似的，得一颗一颗认真数，要是马马虎虎，那结果能靠谱吗？咱再打个比方，这大肠杆菌群计数就像是一场比赛，每个环节都不能出错，采样是起跑，培养基是跑道，培养条件是天气，无菌操作是规则，计数就是冲刺。
哪一个环节出了问题，这场比赛可能就输啦。
而且啊，咱做这个可不是为了好玩，是为了保证咱的生活健康呢。
要是计数不准确，可能会影响到对食品、水等的质量判断，那后果可就严重啦。
总之呢，大肠杆菌群计数可不是一件简单的事儿，得认真对待，每一个细节都不能马虎。
只有这样，咱才能得到准确可靠的计数结果，才能更好地保障我们的生活。
所以啊，大家可别不当回事儿，一定要把这些注意事项牢记在心，严格按照要求去做。
这样，我们才能和大肠杆菌群“和谐相处”，同时又能保证我们的生活不受它们的不良影响呀！。
大肠杆菌mpn标准范围
大肠杆菌mpn标准范围大肠杆菌(MPN)是一种广泛存在于环境中的细菌，人们常用来作为水质检测的指标菌。
MPN检测是水质监测中的一种重要方法，其标准范围被广泛采用作为衡量水质好坏的依据。
MPN检测的基本原理是根据菌落计数的方法，将大肠杆菌的数量定量，进而对水质进行评估。
目前，国际上普遍认可的MPN标准分为三个级别：100ml、1000ml和10000ml。
其中，标准100ml是指在每100毫升水样中，检测到大肠杆菌的数量应少于1个，否则将会对人体健康造成潜在的危害。
对于不同类型的水源而言，其MPN标准范围也有所不同。
例如，对于饮用水而言，其标准范围应该在10 MPN/100 ml以内；对于游泳水而言，标准范围可适当放宽；而对于河流、湖泊等自然水源的标准范围则相对较高，一般为100 MPN/100 ml。
当水质超过MPN标准范围时，可能会对人造成潜在的健康影响。
例如，如果饮用水中MPN超过标准范围，可能会引起腹泻、恶心、呕吐、腹痛等症状，还会增加感染传染病的风险。
因此，对于水质的检测和评估非常重要。
值得注意的是，MPN检测并非完全可靠，可能会受到环境和其他因素的影响。
因此，在实际应用中，还需要结合其他水质检测指标来进行综合评估。
此外，MPN检测也有一定的局限性，不适用于所有类型的细菌，甚至可能忽略掉某些真菌和病毒。
总的来说，大肠杆菌MPN标准范围是衡量水质好坏的重要参数之一。
随着水资源的日益紧缺和环境污染的日益加重，对于水质检测和管理的需求也越来越迫切。
未来，有必要进一步完善MPN标准范围，并结合更加精准、全面的水质检测指标，为人们提供更加清洁、安全的水资源。
大肠菌群计数MPN法
一群在44.5 ℃发酵乳糖、产酸产气、IMViC生化试验为++--或-+--的革兰氏阴性无芽孢杆菌。分类学概念：肠杆菌科、埃希氏菌属是人和温血动物肠道内普遍存在的细菌，是粪便中的主要菌种。一般生活在人大肠中并不致病，但它侵入人体一些部位时，可引起感染 。O抗原（菌体抗原，150个） K抗原（荚膜抗原，90个） H抗原（鞭毛抗原，50个）
月桂基磺酸盐胰蛋白胨（LST）
归纳总结
培养基主要成分作用
①胆盐可抑制革兰氏阳性菌。②煌绿是抑菌抗腐剂，可增强对革兰氏阳性菌的抑制作用。③乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌群和肠道致病菌。④发酵试验判定原则：产气为阳性。由于配方里有胆盐，胆盐遇到大肠菌群分解乳糖所产生的酸形成胆酸沉淀，培养基可由原来的绿色变为黄色，同时可看到管底通常有沉淀。
煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）
归纳总结
注意事项
目前很多产品大肠菌群标准要求单位为MPN/100mL（g），同2010版检测结果单位MPN/100mL（g）不一致。中华人民共和国卫生部公告 2009第16号正式公告：现行食品标准中规定的大肠菌群指标以“MPN/100克或MPN/100毫升”为单位的，适用《食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》（GB/T 4789.3-2003）进行检测；以“MPN/克或MPN/毫升”、“CFU/克或CFU/毫升”为单位的，适用《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》（GB/T 4789.3-2008）进行检测。
大肠菌群 （Coliforms）
指在44.5℃培养24-48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。北美国家一般使用“粪大肠菌群”概念，如AOAC、FDA；而欧洲使用“耐热大肠菌群”概念，较少使用“粪大肠菌群”，如NMKL。与大肠菌群一样，并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。
大肠杆菌平板计数法计算公式
大肠杆菌平板计数法计算公式嘿，咱来聊聊大肠杆菌平板计数法的计算公式。
你知道吗，在咱们日常生活中，大肠杆菌其实无处不在。
就像有一次，我去菜市场买菜，看到一个卖菜的大妈，她的菜摊看起来倒是挺干净的，可我就多了个心眼儿，想到了大肠杆菌这玩意儿。
咱先来说说大肠杆菌平板计数法的原理哈。
简单说，就是通过培养大肠杆菌，然后数个数来估算样品中大肠杆菌的数量。
这就好比数数一群调皮的小孩子，得一个一个地数清楚。
那计算公式是啥呢？这就得提到几个关键的概念啦。
比如说，我们要先确定稀释倍数。
就像把一杯浓糖水不断加水稀释，直到甜度合适。
同样的，对样品中的大肠杆菌也得进行合适的稀释。
假设我们做了一系列稀释，然后在不同稀释度的平板上培养出了菌落。
这里面就有个关键的东西叫“平均菌落数”。
可别小看这个数，算起来也有讲究。
比如说，一个平板上的菌落密密麻麻的，数都数不清，那这可不行，得重新做。
要是菌落太少，也不准确。
那具体怎么算平均菌落数呢？咱得把同一稀释度的几个平板上的菌落数加起来，然后除以平板的个数。
比如说，同一稀释度有三个平板，菌落数分别是 50、60 和 70，那平均菌落数就是（50 + 60 + 70）÷ 3 =60 啦。
然后呢，根据稀释倍数，就能算出样品中大肠杆菌的数量。
比如说，稀释倍数是 100 倍，平均菌落数是 60 个，那每毫升样品中的大肠杆菌数就是 60×100 = 6000 个。
再给您举个例子哈。
有一回我在实验室做实验，就碰到了一个挺棘手的情况。
按照正常步骤做了稀释和培养，结果有一个稀释度的平板上菌落长得奇奇怪怪的，有的地方密，有的地方稀。
这可把我愁坏了，琢磨了半天，发现是在稀释的时候没摇匀。
后来重新认真操作，才得到了靠谱的结果。
总之啊，大肠杆菌平板计数法的计算公式虽然看起来有点复杂，但只要咱们搞清楚每个步骤的原理，认真操作，就不会出错。
这就跟咱们做数学题一样，一步一步来，总能算出正确答案。
您要是在实际操作中遇到啥问题，别着急，多琢磨琢磨，肯定能搞定！。
大肠菌群平板计数法计算公式
大肠菌群平板计数法计算公式
构建类肠杆菌群计数技术是衡量卫生水中大肠杆菌群的一个重要手段。
大肠杆菌群平板计数法是大肠杆菌群计数法中一种比较常见的技术，主要是利用培养基的抗血清特异性效能吸附技术，将水样中大肠杆菌群从环境介质中捕获、纯净、总数计算。
其计数法主要有以下几步：
（1）采样：从相应环境或样品中采集所需细菌样本；
（2）分离：用特定培养基培养，在合适的条件下，将沾染大肠杆菌群的样本分离出来；
（3）分析：采用抗血清特异性吸附技术，将纯化的大肠杆菌群模拟出来；
（4）计数：合理设置计数条件，将模拟出来的大肠杆菌群数目计算出来，得出大肠杆菌群数量。
大肠杆菌群平板计数法可以用于解决卫生水建筑中节水管道、游泳池和地下水渠等设备的安装的卫生检查问题，因为这类设备的渗漏可能会引起重要的公共卫生及环境污染问题。
由此可见，大肠杆菌群平板计数法也给建筑的正常使用 and 经营提供了较为准确的分析依据。
大肠杆菌群平板计数法是测定建筑环境中大肠杆菌群的一种有效手段，它为建筑安装和使用提供了较高精度的细菌数量测定结果，可以有效预防建筑环境传染疾病的发生。
这种技术可以广泛用于水处理厂、公共卫生毒理实验室、游泳池、室内健身中心、精湛的安装建筑市场以及大型建筑工程布置。
大肠杆菌的检测(MPN计数法)
食品微生物检验技术课程综述大肠杆菌的检测（MPN计数法）院系：食品科学与药学学院班级：食科114姓名: 张花学号: 114031431组长: 张军玲成员：张花赵晶郁朱娟娟大肠杆菌Petrifilm测试片计数法摘要食品检测是反映食品加工、贮藏、运输、等环节的卫生与安全状况的重要手段,而大肠菌群检测则是食品检测的重要指标均之一.根据定义大肠菌群是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和碱性厌氧的革兰氏阴性芽胞杆菌.其主要检测意义在于反映食品卫生状况并推测其在肠道致病菌的可能性。
Petrifilm大肠菌群测试片是由美国3M生产的一种预先制备好的VRB平板培养基系统，并添加了TTC作为菌落指示剂便于菌落判读，而上层薄膜可以起到对大肠菌群发酵产生的气体截留的作用。
该方法目前已被多数权威机构认可，并在国内很多实验室开展运用。
关键词大肠杆菌Petrifilm测试法1设备和材料1。
1恒温培养箱:36±1℃。
1.2冰箱2～5℃。
1.3恒温水浴箱 :44。
5±0。
2℃。
1.4天平:感量0。
1g.1.5均质器1.6振荡器。
1.7无菌吸管：lmL（具0.01 mL刻度）、10mL（具0。
1mL刻度）或微量移液器及吸头。
1.8无菌锥形瓶：容量500mL。
1。
9 玻璃珠:直径约5mm。
1.10pH计或pH比色管或精密pH试纸1。
11试管架.2. 培养基和试剂2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（ LST ）肉汤。
2.2EC肉汤.2。
3蛋白胨水.2。
4缓冲葡萄糖蛋白胨水（MP—VP实验用）。
2。
5磷酸盐缓冲液。
2。
6无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。
2。
71mol/L氢氧化钠（NaOH ）：称取40g 氢氧化钠溶于1000ml蒸馏水中。
2.81mol/L 盐酸（HCI ）：移取浓盐酸90ml,用蒸馏水稀释至1000ml。
3检验程序4.样品稀释4。
1固体和半固体样品：以无菌操作将检样25mL样品，置盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内或其他稀释液的灭菌锥形瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。
大肠杆菌计数实验报告
1. 掌握大肠杆菌的计数方法。
2. 了解大肠杆菌在不同环境下的生长状况。
3. 学习使用标准平板计数法进行微生物计数。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的革兰氏阴性菌，广泛存在于自然界和人类肠道中。
本实验采用标准平板计数法，通过在培养基上接种一定量的样品，观察形成的菌落数量，从而估算样品中大肠杆菌的浓度。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 大肠杆菌标准菌株- 琼脂培养基- 蒸馏水- 碘液- 灭菌器材- 移液器- 平板计数器2. 实验仪器：- 高压蒸汽灭菌锅- 灭菌操作台- 电子天平- 烧杯- 玻璃棒- 离心机1. 样品制备：- 称取适量大肠杆菌标准菌株，加入适量的蒸馏水，制成菌悬液。
- 将菌悬液用移液器稀释至适当浓度。
2. 琼脂培养基制备：- 称取适量的琼脂，加入适量的蒸馏水，溶解后加入琼脂培养基。
- 将溶解后的培养基加入高压蒸汽灭菌锅中，在121℃下灭菌20分钟。
3. 接种：- 取适量菌悬液，用移液器接种于琼脂培养基平板上。
- 将平板倒置，放入培养箱中，在适宜的温度下培养24小时。
4. 计数：- 观察平板上形成的菌落，用平板计数器进行计数。
- 根据计数结果，计算样品中大肠杆菌的浓度。
五、实验结果与分析1. 样品制备：- 制备的菌悬液呈均匀浑浊状，未见明显的絮状沉淀。
2. 琼脂培养基制备：- 制备的琼脂培养基呈透明状，未见明显的杂质。
3. 接种：- 接种后的平板在培养箱中培养24小时，平板上形成大量菌落。
4. 计数：- 平板上形成的菌落数为30个，根据计数结果，样品中大肠杆菌的浓度为10^6 CFU/mL。
六、实验讨论1. 本实验采用标准平板计数法进行大肠杆菌计数，操作简单，结果准确可靠。
2. 实验过程中，应注意操作规范，避免污染。
3. 本实验结果与理论值基本一致，说明实验方法可行。
七、实验结论通过本实验，我们掌握了大肠杆菌的计数方法，了解了大肠杆菌在不同环境下的生长状况。
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生化鉴定
取培养物进行革兰氏染色和生化试验。只要 有1个菌落鉴定为大肠杆菌，其所代表的LST 肉汤管即为大肠杆菌阳性。 查MPN表，报告每g（mL）样品中大肠杆菌 MPN值。
大肠杆菌与非大肠杆菌 的生化鉴别
靛基质 (I) ＋ － ＋ － 甲基红 VP试验 (M) (Vi) ＋ ＋ ＋ ＋ － － － － 枸橼酸盐 (C) － － ＋ ＋ 鉴定(型别) 典型大肠杆菌 非典型大肠杆菌 典型中间型 非典型中间型
第二法 VRBA-MUG平板计数法
制订依据
美国食品药品管理局（FDA）： Bacteriological Analytical Manual ，2002， Chapter 4： Enumeration of Escherichia coli and the Coliform Bacteria
基本原理
4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷，英文缩写 MUG。 是一种不产生荧光的底物。由于96%的大肠 杆菌都具有葡萄糖醛苷酸酶，能分解β-D葡萄 糖醛苷，而使4-甲基伞形酮游离出来，在 366nm紫外光下产生蓝色荧光。观察到蓝色 荧光即可认为是大肠杆菌阳性。MUG对大肠 杆菌的生长繁殖既没有抑制作用也没有促进 作用，对菌落形态也没有影响。
复发酵
如有产气者，则转接到已提前预温至45℃的 EC肉汤管中。将所有接种的EC肉汤管放于带 盖的44.5℃±0.2℃水浴箱内，水浴的水面应 高于肉汤培养基液面，培养24h±2h，如所有 EC肉汤管均未产气，即可报告大肠杆菌MPN 结果。
分离培养与纯化
如有产气者 ，则分别划线接种于伊红美蓝 （EMB）平板，36℃±1℃培养24h±2h后检 验平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的 典型菌落。 挑选典型菌落，如无典型菌落则挑取可疑菌 落。用接种针接触菌落中心部位，移种到营 养琼脂斜面或平板上，进行进一步的纯化分 离。
VRBA-MUG平板计数法检验程序
检样25g(ml)+225ml稀释液，均质
10倍系列稀释
选择2~3个适宜稀释度的样液， 接种VRBA-MUG平板 36℃±1℃ 18~24h
紫外光下，计数发荧光的菌落
报告结果
检验
选取2～3个适宜的连续稀释度的样品匀液， 每个稀释度分别取1mL注入两个无菌平皿。 另取1mL样品稀释液注入一无菌平皿中，作空 白对照。 将预热至45℃士0.5℃的结晶紫中性红胆盐琼 脂10 mL～15mL倾注于每个平皿中。小心旋 转平皿，将培养基与样品匀液充分混匀。 待琼脂凝固后，再加3 mL～4mL VRB-MUG 覆盖平板表层。 凝固后翻转平板，36℃±1℃ 培养18 h～24h。 注：空白对照不加VRB-MUG覆盖。
－ ＋
－ －
＋ ＋
＋ ＋
非典型产气肠杆菌 非典型产气肠杆菌
注：如果是出现了这个表以外的பைடு நூலகம்化反应类型，表明培养物可能不纯，应该重 新划线分离，必要时需要重复试验。
EMB琼脂
主要成分：乳糖、营养物质。指示剂系统： 伊红和美监。 原理：大肠菌群分解乳糖产酸，使伊红与美 蓝结合而形成黑色化合物，故菌落呈黑紫色， 并可产生金属光泽。黑色程度与光泽产生情 况与伊红、美蓝二者的比例有关。 不发酵乳糖产酸的细菌，在碱性环境中不能 使伊红、美蓝结合，因而形成无色的菌落。 部分大肠菌群的菌株在EMB上可形成红色或 粉红色的菌落。（应注意非典型的菌落）。
大肠杆菌平板计数与报告
选择菌落数为10～100的平板，暗室中 360nm～366nm波长紫外灯照射下，计数平板 上发浅蓝色荧光的菌落。 两个平板上发荧光菌落数的平均数乘以稀释 倍数，报告每克(或毫升)样品中大肠杆菌数， 以cfu/g(mL)表示。
注意事项
在实验时要用已知MUG阳性菌株（如大肠杆菌 ATCC25922）和产气肠杆菌（如ATCC13048） 做阳性和阴性对照。 在选择计数平板时，选择的菌落数不要太多太 密，50个左右效果比较好些。原因是游离的4甲基伞形酮有水溶性，能从菌落向培养基中扩 散，菌落太多的话，尤其是阳性菌落太多时， 很可能因荧光扩散，造成较大的误差。 紫外灯的功率不要太大。功率大了需要做好个 人防护。
接种时将纸片置于平坦在实验台，接种后将 上层膜缓慢盖下，避免气泡产生； 培养基未凝固时勿挪动； 对于肉、家禽和水产品，培养时间为24h2h, 对于其它产品，培养时间为48h2h。 培养时纸片堆叠不要超过20片。
结果判读
大肠杆菌为蓝点带气泡的菌落； 不论蓝色深浅，部分蓝色带气泡的菌落均为 大肠杆菌； 圆形边缘上及边缘外的菌落不计数； 注意样液菌量高的几种情况； 蓝点带气泡菌落和红点带气泡菌落之和为大 肠菌群数。
查MPN表，报告
I M Vi C生化试验，革兰染色
初发酵
选择适宜的三个连续稀释度的样品匀液 （液体样品可以选择原液）。每个稀释度 接种3管LST肉汤，每管接种1mL（如接种 量需要超过1 mL，则用双料LST肉汤）。 36℃±1℃培养48h±2h，如所有LST肉汤管 均未产气，即可报告大肠杆菌MPN结果。
大肠杆菌计数
第一法：MPN法 第二法： VRBA-MUG平板计数法 第三法：Petrifilm测试片法
第一法 大肠杆菌计数MPN法
大肠杆菌计数MPN法检验程序
检样25g(ml)+225ml稀释液，均质
10倍稀释 选择3个连续稀释度样品匀液接种LST
36℃±1℃
不产气
48±2h
产气 EC肉汤 45℃±0.2℃ 不产气 24±2h 产气 EMB琼脂平板 36℃±1℃ 24±2h 营养琼脂斜面培养
大肠杆菌计数
严纪文
大肠杆菌的定义
广泛存在于人和温血动物的肠道中，能 够在44.5℃发酵乳糖产酸产气、 IMViC 生化试验 (靛基质、甲基红、VP试验、 柠檬酸盐)为+ + - -或- + - -的革兰阴性杆 菌。
卫生学意义
大肠杆菌的某些菌株对人有致病性。 相对于大肠菌群和粪大肠菌群，大肠杆菌与粪便污 染的相关性最好，应用也最悠久。自1892年被提议 作为粪便污染的指示菌以来，已被应用了100多年 。 为什么后来又有了大肠菌群和粪大肠菌群的应用？ 主要的原因是因为大肠杆菌的检验过于复杂。 大肠杆菌是用于评价食品近期受到粪便污染的指标。 随着食品卫生标准的日益科学和细化，以及对大肠 杆菌检验方法的不断改进，对特定食品的大肠杆菌 的检验需求肯定会越来越多，因此在本次标准修订 时增加了大肠杆菌计数方法。
大肠杆菌测试片的计数与结果报告
选取菌落数在15~150之间的测试片作为计 数标准。 选择菌落数在15~150之间的稀释度，平均 菌落数乘以稀释倍数报告之。 如果所有稀释度测试片上的菌落数都小于 15，则计数稀释度最低的测试片上的平均 菌落数乘以稀释倍数报告之。 如果所有稀释度的测试片上均无菌落生长， 则以(<)1乘以最低稀释倍数报告之。
如果最高稀释度的菌落数大于150个时，计 数最高稀释度的测试片上的平均菌落数乘 以稀释倍数报告之。 计数菌落数大于150个的测试片时，可计数 一个或两个具有代表性的方格内的菌落数， 换算成单个方格内的菌落数后乘以20即为 测试片上估算的菌落数 (圆形生长面积为20 cm2)。 最终菌落浓度的单位以“cfu/g (mL)”表示。
EMB琼脂上大肠杆菌的典型菌与 可疑菌落
典型菌落：具黑色中心有光泽或无光泽的菌 落。 非典型的可疑菌落：粉红色，无黑心
生化鉴定的注意要点
靛基质试验：36℃±1℃，24h ±2h； 甲基红试验：36℃±1℃，4d；滴加甲基红 试剂，出现红色为阳性；出现黄色为阴性结 果。 V-P试验： 36℃±1℃，48h ±2h；滴加试剂 后若未出现伊红色，应再培养2h后再观察结 果。 柠檬酸盐试验： 36℃±1℃，96h ±2h；观 察有无细菌生长。有细菌生长培养基可变为 蓝色。
Thank you
第三法 PetrifilmTM测试片法
基本原理
PetrifilmTM大肠杆菌/大肠菌群测试片是一种 预先制备好的培养基系统，含有VRB培养基，冷 水可溶性凝胶和葡萄糖苷酶指示剂，可增强菌 落计数效果。E .coli能产生-葡萄糖苷酸酶与 培养基中的指示剂反应，产生蓝色沉淀环绕在 大肠杆菌菌落周围。表面覆盖的胶膜，可截留 发酵乳糖的大肠菌群产生的气体。培养结束后 计数蓝点带气泡的菌落即为大肠杆菌数，红点 带气泡和蓝点带气泡的菌落之和为大肠菌群数。
大肠杆菌PetrifilmTM测试片检验程序
检样25g(ml)+225ml稀释液，均质
10倍系列稀释 选择2~3个适宜稀释度的样液， 接种PetrifilmTM大肠杆菌测试纸片 36℃±1℃ 24±2h或48±2h 计数蓝色带气泡菌落 报告结果
操作要点
合理稀释度的选择，每稀释度接种2张测试 片；