人感染HN禽流感病毒病原学特点及标本采集实验室检测
人感染H7N9禽流感采样以及实验室检测技术
用真空负压采血管采集血液标本5ml，室温静置30分钟， 1500～2000rpm离心10分钟，收集血清于2ml无菌螺口塑料管 中。
样本采集方法 (5)
鼻咽抽取物或呼吸道抽取物：
用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液或从气管抽取 呼吸道分泌物。先将收集器头部插入鼻腔或气管，接通负 压，旋转收集器头部并缓慢退出；收集抽取的粘液，并用 采样液3ml涮洗收集器1次（可用小孩导尿管接在50ml注射 器上来代替收集）。
注：应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本（尤其是下呼 吸道标本）和发病7天内急性期血清以及间隔2-4周的恢复 期血清。
要求 呼吸道标本：发病早期采样，每份不少于3ml 血清标本每份分为2管，每管不少于0.5ml
样本采集方法 (1)
咽拭子：左手用压舌板压住患者舌头，右手用2根聚丙烯纤
维头的塑料杆拭子同时檫拭双侧咽扁桃体及咽后壁，应避免 接触舌头，将拭子头浸入含3ml采样液的管中，弃去尾部，旋 紧管盖。
胞分类计数减少； 4. 不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所
致的肺炎。
• 包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱 液和鼻洗液）；
◆下呼吸道标本（如气管吸取物、肺洗液、肺组织标本）；
◆ 血清标本；
◆ 如病人死亡，应当尽可能说服家属同意尸检，及时进行尸 体解剖，采集组织（如肺组织、气管、支气管组织）标本；
样本采集方法 (4)
鼻洗液 患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5 ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患 者同时发K音以关闭咽腔。然后让患者低头使生理盐水流出，用平皿或烧 杯收集洗液。重复此过程洗两侧鼻孔
漱口液 用10 ml生理盐水漱喉。漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理
盐水在咽部转动。然后，用50ml的无菌螺口塑料管收集洗液。
人感染H7N9禽流感诊疗方案(2013年第1版)
二、流行病学
（一）传染源。目前尚丌明确，根据以往经验
及本次病例流行病学调查，推测可能为携带H7N9 禽流感病毒的禽类及其分泌物或排泄物。 （二）传播途徂。经呼吸道传播，也可通过密 切接触感染的禽类分泌物或排泄物等被感染，直 接接触病毒也可被感染。现尚无人不人之间传播 的确切证据。
二、流行病学Leabharlann （三）易感人群。目前尚无确切证据显示人类
一、病原学
禽流感病毒属正粘病毒科甲型流感病毒属。禽
甲型流感病毒颗粒呈多形性，其中球形直徂80～
120nm，有囊膜。基因组为分节段单股负链RNA。
依据其外膜血凝素（H）和神经氨酸酶（N）蛋白
抗原性丌同，目前可分为16个H亚型（H1～H16）
和9个N亚型（N1～N9）。
禽甲型流感病毒除感染禽外，还可感染人、
五、治疗
（三）抗病毒治疗。应尽早应用抗流感病毒药物。
2.离子通道M2阻滞剂：目前实验室资料提示金刚
烷胺（Amantadine）和金刚乙胺（Rimantadine）
耐药，丌建议单独使用。
五、治疗
（四）中医药治疗。 1.疫毒犯肺，肺失宣降 症状：収热，咳嗽，少痰，头痛，肌肉关节疼痛。 治法：清热宣肺 参考处方： 桑叶 金银花 连翘 炒杏仁 生石膏 知母 芦根 青蒿 黄芩 生甘草 水煎服，每日1—2剂，每4—6小时口服一次。 加减：咳嗽甚者加枇杷叶、浙贝母。 中成药：可选择疏风解毒胶囊、连花清瘟胶囊、清开灵注射 液。
少痰，可伴有头痛、肌肉酸痛和全身丌适。重症
患者病情収展迅速，表现为重症肺炎，体温大多
持续在39℃以上，出现呼吸困难，可伴有咯血痰；
可快速进展出现急性呼吸窘迫综合征、纵隔气肿、
脓毒症、休克、意识障碍及急性肾损伤等。
人感染HN禽流感诊疗方案及接诊流程
人感染HN禽流感诊疗方案及接诊流程诊断标准临床表现HN禽流感的临床表现与普通流感类似，但常见症状更加严重，包括高热、咳嗽、喉痛、鼻塞、鼻涕、乏力、肌肉疼痛、头痛和胸部不适等。
比较特殊的是，部分患者会出现呼吸急促、氧饱和度下降、发绀等表现，严重者可能发生呼吸衰竭和肺部感染。
诊断标准HN禽流感的诊断依据主要包括以下几个方面：1.有流感样症状的发热患者，并且满足以下几个条件中的一个或多个：•近期有华南湿地野鸟、家禽接触史或其环境接触史；•近期有密切接触HN禽流感确诊或疑似病例史；•近期有到禽类市场、活禽摊点、宰杀场等场所接触史；•近期有到禽养殖场或禽类散养区等地接触史。
2.特殊实验室检查（包括病原学和免疫学等）中有HN禽流感病毒阳性结果。
诊疗方案治疗准则HN禽流感患者应该在医疗机构进行住院治疗，一旦确诊应尽早给予抗病毒治疗。
应急用药HN禽流感的常用抗病毒药物主要包括奥司他韦、扎那米韦等。
应急用药的时限为发生症状的48小时内。
对症治疗HN禽流感的对症治疗主要是针对症状的处理，包括解热、止咳、清热、润肺等，同时应注意维持水、电解质平衡。
防治合并症在饮食调理、膳食营养支持、营养剂补充、抗生素预防等方面，应综合考虑患者的情况，以防治合并症。
接诊流程直接医疗机构若患者自感有流感症状或接触史时，应尽快前往直接医疗机构就诊，医护人员应有意识地寻找与流感疫情相关的接触史。
诊室检查在诊室检查时，应戴好口罩、手套、帽子等个人防护用品，建议以小隔间进行诊查。
信息记录医务人员应当详细记录患者的病情和接触史，并报告相关部门。
传染防控在患者就诊过程中，应采取相应的传染防控措施，避免交叉感染。
人感染HN禽流感的诊断标准主要包括临床表现和特殊实验室检查两大方面。
针对该疾病的治疗主要是抗病毒治疗及对症支持治疗。
在接诊流程中，医务人员应当严格按照相关规定和操作规程，采取相应的传染防控措施，避免交叉感染的发生。
人感染HN禽流感病毒病原学特点及标本采集实验室检测
人感染HN禽流感病毒病原学特点及标本采集实验室检测前言近年来，禽流感病毒给全球带来了极大的灾难。
由于不断变异和传播，禽流感病毒已经不再是仅仅威胁禽畜的疾病，它已经开始攻击人类。
在一些严重的病例中，患者出现肺炎等肺部感染，造成严重的影响和伤害。
因此，本篇文档将着重介绍人感染HN禽流感病毒病原学特点及标本采集实验室检测的相关细节，以帮助各位更好地了解和应对此疾病。
人感染HN禽流感病毒的病原学特点病毒来源禽流感病毒主要感染家禽及野生候鸟，人类是意外宿主，感染来源通常是人与禽类的接触。
传播途径人感染禽流感病毒的主要途径是直接或间接接触禽类呼吸道分泌物，如血液、唾液、粪便、呼吸道分泌物等。
此外，受污染的水、食物、环境等也是禽流感病毒传播的途径之一。
需要注意的是，人际传播也是一种常见的传播途径，特别是在人流集中的环境中，如公共交通工具、医院等。
病症表现人感染HN禽流感病毒的症状主要有发热、咳嗽、喉咙疼痛、肌肉酸痛、头痛、疲乏等症状。
严重的病例中还会出现胸部感染，引起肺炎等。
防护措施避免接触禽类及其分泌物是预防禽流感病毒的重要措施。
同时，个人卫生也非常必要，如勤洗手、使用口罩、避免人流集中环境等。
标本采集在疫情防控中，标本采集是必不可少的一项工作。
根据卫生部门的要求，下面介绍人感染HN禽流感病毒标本的采集方法：呼吸道标本呼吸道标本采集一般使用鼻咽拭子和气管吸引液两种方法。
鼻咽拭子采样应避免过度刺激，拭子插入鼻咽部最深处后轻轻拭擦，随后放到采样管中。
气管吸引液的采集需要呼吸科专业医生进行操作，采样时需要保证套管内部处于消毒状态，吸管插入气管后缓慢吸出分泌物放在采样管中。
血清标本血清标本采集需要降低污染风险，采用无菌操作，使用无菌或消毒药水消毒采样部位，采集后离心分离血清并装在采样管中。
粪便标本粪便标本采集前需要进行放松肛门，清洗肛门后，悬垂的直肠能将粪便顺利排出。
注意，在采集过程中避免与尿液混合，同时应避免放置时间过长。
人感染高致病性禽流感病毒H5N1的病理学和病原学特点
人感染高致病性禽流感病毒H5N1的病理学和病原学特点目的：研究人感染高致病性禽流感病毒H5N1的病理学和病原学特点。
方法：采用免疫组织化学、组织学、光镜、透射电镜方法对在2008年1月-2014年1月中国内地人禽流感患者25例进行研究。
均对其进行病原体分离培养鉴定，从而确定病原学特点。
结果：患者肺部病理改变主要为广泛性肺实变，肺水肿、肺出血及坏死。
肺泡腔内充满大量纤维素、红细胞、水肿液。
部分肺组织有明显的出血坏死，肺泡隔坏死崩解。
心肌间质水肿，少数淋巴细胞浸润。
电镜下，主要以高电子低密度核心居中的C型的病毒颗粒为主，低电子密度核心的A型病毒颗粒数量较少。
结论：高致病性A型禽流感病毒会导致患者出现严重急性病毒性肺炎，肺水肿、肺实变、明显的出血性坏死性炎症等病理改变为其主要特征。
电镜检查可见A型禽流感病毒样颗粒。
研究人禽流行性感冒的病原学和病理学特点，为将来的人禽流感临床诊断和治疗方案提供了理论基础和病理学基础。
禽流感病毒属于甲型流感病毒[1]。
人感染禽流感是由禽流感病毒引起的人类疾病，根据禽流感病毒对鸡和火鸡的致病性不同，可将其分为低/非致病性、中、高三级[2]。
由于禽流感病毒的血凝素结构等特点，一般感染禽类，在病毒复制过程中，出现基因重配，导致病毒结构出现改变，获得感染人的能力，最终导致人感染禽流感疾病的发生[3]。
近年来，禽流感不仅造成了人类的伤亡，同时还对家禽养殖业造成了重创[4]。
近年来先后在朝鲜、越南、泰国、韩国、日本、中国等10多个亚洲国家爆发H5N1高致病性禽流感病毒，引起全球的高度关注[5]。
此次研究对在2008年1月-2014年1月中国内地人禽流感患者25例进行研究，对其病理组织学、超微结构及病因学特点进行研究。
1 资料与方法1.1 一般资料选取2008年1月-2014年1月中国内地人禽流感患者25例作为研究对象，其中男16例，女9例，年龄22～86岁，25例患者均符合《人感染禽流感诊断方案》中的标准，根据患者流行病学接触史、临床表现及实验室检查结果，可作出人感染H5N1禽流感诊断。
人感染H7N9禽流感标本采集要求
人感染H7N9禽流感标本采集要求人感染H7N9禽流感病毒的病原学依据《人感染H7N9禽流感诊疗方案》（2013第一版）禽流感病毒属正粘病毒科甲型流感病毒属。
禽甲型流感病毒颗粒呈多形性，其中球形直径80〜120nm,有囊膜。
基因组为分节段单股负链RNA。
依据其外膜血凝素（H）和神经氨酸酶（N）蛋白抗原性不同，目前可分为16个H亚型（H1H16）和9个N亚型（N1〜N9）。
禽甲型流感病毒除感染禽外，还可感染人、猪、马、水貂和海洋哺乳动物。
可感染人的禽流感病毒亚型为H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3,此次报道的为全球首次发现人感染H7N9禽流感病毒。
该病毒为H7N9和H9N2重配的新型病毒，其内部基因来自于H9N2禽流感病毒，基因序列分析表明为禽源病毒。
人感染H7N9禽流感监测病例定义：同时具备以下4项条件依据《人感染H7N9禽流感疫情防控方案》（第版）1、发热（腋下体温》38C）;2、具有肺炎的影像学特征；3、发病早期白细胞总数降低或正常，或淋巴细胞分类计数减少；4、不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所致肺炎。
除第4条不同于不明原因肺炎病例定义，以上三条均相符。
不明原因肺炎第4条为：经规范抗菌药物治疗3-5天，病情无明显改善或呈进行性加Sr o标本采集种类：医疗机构应当及时采集病例相矢临床样本。
1、上呼吸道标本（包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液）；2、下呼吸道标本（如气管吸取物、肺洗液、肺组织标本）3、血清标本（发病7天内急性期血清以及间隔2・4周的恢复期血清）尸检标本（如病人死亡，应当尽可能说服家属同意尸检，及时进行尸体解剖，采集肺组织、气管、支气管等组织标本）5、应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本（尤其是下呼吸道标本）。
四、标本采集主要器材和试剂：1、拭子：WHO及美国CDC规定，鼻烟拭子采集只能用塑料杆的涤纶或人造棉拭子（如常用的聚酯纤维拭子），不能用藻酸钙拭子或木杆拭子，因可能使某些病毒失活或抑制PCR;脫脂棉含有荧光物质，影响实时应荧光定量PCR结果。
《人感染H7N9禽流感医院感染预防与控制技术指南(2021年版)》
《人感染H7N9禽流感医院感染预防与控制技术指南(2021年版)》人感染h7n9禽流感是由h7n9亚型禽流感病毒引起的急性呼吸道传染病。
自2021年2月以来,上海市、安徽省、江苏省先后发生不明原因重症肺炎病例,其中确诊人感染h7n9禽流感3例,2例死亡。
3例均为散发病例,目前尚未发现3例病例间有流行病学关联。
一、病原学禽流感病毒属于正黏病毒科甲型流感病毒属于。
禽甲型流感病毒颗粒呈圆形多形性,其中球形直径80~120nm,存有囊膜。
基因组为分节段单股负链rna。
依据其外膜血凝素(h)和神经氨酸酶(n)蛋白抗原性相同,目前可以分成16个h亚型(h1~h1⑴和9个n亚型(n1~n9)。
甲型流感病毒除病毒感染禽外,还可以病毒感染人、猪、马、水貂和海洋哺乳动物。
可以病毒感染人的禽流感病毒亚型为h5n1、h9n2、h7n7、h7n2、h7n3,此次报导的为人病毒感染h7n9禽流感病毒。
该病毒为新型重配病毒,其内部基因源自于h9n2禽流感病毒。
禽流感病毒广泛对热脆弱,对低温抵抗力较强,65℃冷却30分钟或煮熟(100℃)2分钟以上可以灭活。
病毒在较低温度粪便中可以存活1周,在4℃水中可以存活1个月,对酸性环境存有一定抵抗力,在ph4.0的条件下也具备一定的存活能力。
在存有甘油存有的情况下可以维持活力1年以上。
二、流行病学(一)传染源。
目前尚不明晰,根据以往经验及本次病例流行病学调查,推断可能将为随身携带h7n9禽流感病毒的禽类及其分泌物或排泄物。
(二)传播途径。
经呼吸道传播,也可通过密切接触感染的禽类分泌物或排泄物等被感染,直接接触病毒也可被感染。
现尚无人与人之间传播的确切证据。
(三)极易感人群。
目前未有清楚证据表明人类对h7n9禽流感病毒极易感。
现有诊断病例均为****。
(四)高危人群。
现阶段主要是从事禽类养殖、销售、宰杀、加工业者,以及在发病前1周内接触过禽类者。
三、临床表现根据流感的潜伏期及现有h7n9禽流感病毒感染病例的调查结果,潜伏期一般为7天以内。
人感染禽流感诊疗方案(2024版)
人感染禽流感临床表现
表现为上呼吸道感染症状， 如鼻塞、流涕、咽痛、咳 嗽 等，或仅表现为结膜炎。
进展迅速，多在发病 5～ 7 天出现肺炎，多有中至 重度 ARDS ，部分出现休 克、急性肾损伤、横纹肌 溶解、弥漫性血管内凝血、 Reye 综合征、急性坏死 性脑病、细菌或真菌感染 等并发症。
轻者
重症病例
人感染禽流感诊疗方案
（2024版）
xx 无锡市xxx医院
目录
01 疾病概述 02 病原学与流行病学 03 临床表现与实验室检查 04 诊断与鉴别诊断 05 治疗 06 医院感染控制与预防
01
疾病概述
人感染禽流感（Human infection with avian influenza）
病毒类型
禽流感病毒或潜在感染性材料的实验
包括共同生活、居住或陪护等；室职业人员；未采取有效的个人防护
的排泄物和分泌物污染的物品 （4）居住、生活、工作或到 措施，处置动物禽流感疫情的人员；
或环境； （2）曾经到过有活禽交易和 /或宰杀的场所；
访过的地区曾出现异常病/死禽；未采取有效的个人防护措施，诊 治、
护理、调查、处置人感染禽流感疑似 或实验室确诊病例的医疗卫生专业人 员。
禽流感病毒对乙醚、氯仿、丙酮等有机溶剂均敏感。常用消毒剂 （如氧化剂、含氯消毒剂和碘剂）、紫外线等均可迅速破坏其感染 性。65℃加热30分钟或100℃2分钟可灭活。
人感染禽流感流行病学
人感染禽流感全年均可发生，冬春季多发。
01
主要为病/死禽和携带禽流感病毒的健康禽类。
传染源
02
也可以为携带禽流感病毒的猪、牛等哺乳动物，感 染禽流感病毒的人或其他动物也是可能的传染源。
02
人感染H7N9禽流感病毒培训ppt课件
标本运输
经过行政审批 包装
临床样品：B类， UN3373包装 病毒分离物： A类， UN2814包装
专人专车运输并注意防护
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25
感染性物质包装分类
航空运输B类包装（ UN号3373
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26
A类、 B类包装的区别
定义 运输专用名称
UN编号
运输对象
UN专用标记 主容器 次级容器 外包装
发病早期白细胞总数降低或正常、淋巴细胞分类计数 减少；
经规范抗菌药物治疗3－5天
监测病例（同时具备以下4项）：
发热(腋下体温≥38℃)
具有肺炎的影像学特征
发病早期白细胞总数降低或正常,或淋巴细胞分类计数 减少
不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所致肺炎
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9
病例定义
疑似病例：
12
Eagel`s基础培养基
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13
咽拭子
用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为 木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧咽扁桃 体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集 液中，尾部弃去
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15
采咽拭子的器材和容器
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16
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17
标本采集要求
为防止采样液生长细菌和真菌，在采样液中需加 入抗菌素，加入庆大霉素（终浓度0.1mg/ml可高 至0.5mg/ml ）、抗真菌药物（终浓度2ug/ml）。 加入抗菌素以后重新调节pH值为7.4， 配制好的 采样液，分装每个采样管3-4ml，-20℃冻存。
庆大霉素:80mg（８万单位）／2ml
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10
人感染HN禽流感诊断标准及抗病毒治疗指症
人感染HN禽流感诊断标准及抗病毒治疗指症鸟流感（禽流感）是一种由甲型流感病毒引起的致命性疾病，可在家禽和野生鸟类之间传播。
虽然禽流感通常不会感染人类，但是一些甲型禽流感病毒子型（如H5N1和H7N9）能够感染人类并引起严重疾病，甚至导致死亡。
因此，及早诊断和治疗对患者的生命至关重要。
诊断标准当病人有以下症状之一或几个时，应考虑排除诊断或确诊甲型禽流感：•发热、咳嗽、喉痛、乏力和畏寒等流感类症状；•病人的旅行史或暴露史，特别是与禽类或野生鸟类的密切接触；•与患甲型禽流感的人密切接触；•目前流行季节和区域。
病情表现如果有急性呼吸道感染的典型症状，例如发热，流感症状和嗓子痛，并且病人曾经接触过禽类或野生鸟类、或在疫区旅行，就应该考虑甲型禽流感。
抗病毒治疗如果诊断为甲型禽流感，患者需要接受及时、准确的治疗来降低死亡率和减轻病情。
根据美国疾病控制和预防中心的建议，抗病毒治疗应该在确诊后的48小时内开始，而不是等到症状恶化才开始治疗。
主要的抗病毒药物是神经氨酸酶抑制剂，包括奥司他韦（oseltamivir）和扎那米韦（zanamivir）。
这些药物能够抑制甲型流感病毒从感染细胞中释放，从而减轻病情和减少并发症。
在决定是否使用抗病毒药物时，需要考虑以下几个因素：•个体情况：包括病人的年龄、妊娠或哺乳状况等；•临床表现：包括病情的严重程度、病情的持续时间，以及任何并发症的发生；•时间：抗病毒治疗的最佳时间是在发病的48小时之内开始。
在抗病毒治疗期间，必须对患者的身体情况进行监测，以确定治疗是否有效。
如果病情没有明显改善或恶化，患者应该重新评估治疗方案。
预防预防甲型禽流感的最佳方法是避免接触感染源。
这包括避免接触禽类和野生鸟类，特别是在禽流感的发生地区；遵循合适的卫生措施，如勤洗手和消毒，特别是在接触禽类或野生鸟类后；接种甲型禽流感疫苗等。
及早的诊断和治疗对预防和治疗甲型禽流感至关重要。
在确诊后48小时内开始抗病毒治疗可以减轻病情、降低死亡率和减少并发症的发生。
人感染HN禽流感诊断标准
人感染H7N9禽流感诊断标准
1、临床表现：
①流行病学史。
发病前1周内接触禽类及其分泌物、排泄物或者到过活禽市场，或者与人感染H7N9禽流感病例有流行病学联系。
②症状、体征和临床特点。
患者一般表现为流感样症状，如发热、咳嗽、少痰，可伴有头痛、肌肉酸痛、腹泻等全身症状。
重症患者病情发展迅速，多在发病3～7天出现重症肺炎，体温大多持续在39℃以上，出现呼吸困难，可伴有咯血痰。
③实验室主要检查1）.血常规。
白细胞总数一般不高或降低。
重症患者多有白细胞总数及淋巴细胞减少，可有血小板降低。
2）.血生化检查。
多有肌酸激酶、乳酸脱氢酶、天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶升高，C反应蛋白升高，肌红蛋白可升高。
3）.病原学及相关检测。
核酸检测阳性；甲型流感病毒抗原检测阳性；病毒分离阳性；动态检测急性期和恢复期双份血清H7N9禽流感病毒特异性抗体水平呈4倍或以上升高。
④胸部影像学检查。
发生肺炎的患者肺内出现片状阴影。
重症患者病变进展迅速，常呈双肺多发磨玻璃影及肺实变影像，可合并少量胸腔积液。
发生ARDS时，病变分布广泛。
2、诊断标准：
①疑似病例：符合上述临床表现，甲型流感病毒抗原阳性，或有流行病学史。
②确诊病例：符合上述临床表现，或有流行病学接触史，并且呼吸道分泌物标本中分离出H7N9禽流感病毒或H7N9禽流感病毒核酸检测阳性或动态检测双份血清H7N9禽流感病毒特异性抗体水平呈4倍或以上升高。
（耿占印供稿）。
感染HN9禽流感病毒毒病毒原特点及实验检测
CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION
人感染H7N9禽流感病毒 实验室检测
CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION
A/H7N3
禽
2004/加拿大
2/结膜炎、ILI; 1名LPAI；1名HPAI
A/H5N2
禽
2005/日本(Ibaraki) 13/无临床症状，血清学诊断
A/H7N2
禽
2007/英国(Wales) 1/结膜炎、ILI
A/H9N2
来源不清
2007/香港
1/ ILI
A/H10N7
鸭
2004/埃及( Ismaillia) 2/ ILI
共25株
均为LPAI 无感染人病例
亚洲：7株 均来自野禽 5株—韩国 2株—蒙古
CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION
H7N9的致病力和传播力
HPAI H7N3
HPAI H7N3
LPAI H7N9
LPAI H7N9
LPAI H7N9
A/H7N7
鸥
1980/美国
3/结膜炎
A/H7N7
鸭
1996/英国
1/结膜炎
A/H5N1
禽
1997/香港
18/ILI，肺炎
A/H9N2
鸡
1998/中国广东
5/ ILI，肺炎
A/H9N2
禽
1999/香港
2/ILI
A/H7N2 A/H9N2
人感染高致病性禽流感标本采集及实验室检测技术方案
人感染高致病性禽流感标本采集及实验室检测技术方案一、采集对象二、采集要求三、标本种类四、标本采集方法五、标本包装六、标本保存七、标本送检八、实验室生物安全九、标本的实验室检测十、检测结果的判断和报告十一、实验室检测流程十二、人禽流感实验室检测职责为及时、科学地采集和运送人禽流感病例或疑似污染环境等各种类型的标本，规范实验室检测程序和检测方法，提高检测质量，明确诊断或开展相关科学研究，特制定本方案。
一、采集对象1. 人禽流感医学观察病例、疑似病例、临床诊断病例及需要进一步研究的确诊病例。
2. 其他需要进行人禽流感诊断或排除者。
3. 需要采集的环境标本。
二、采集要求1. 从事人禽流感检测标本采集的技术人员必须经过生物安全培训和具备相应的实验技能。
在标本采集过程中，采样人员参照规定的防护措施进行安全防护。
2. 住院病例的标本由所在医院医护人员在当地疾病预防控制机构专业人员指导下采集。
3. 标本采集具体种类和数量由现场工作组确定。
4. 密切接触者标本由当地疾病预防控制机构负责采集。
5. 根据实验室检测工作的需要，结合病程再次采样。
三、标本种类每个病例应尽可能同时采集上、下呼吸道标本；需要排除人禽流感的死亡病例则依据《传染病病人或疑似传染病病人尸体解剖查验规定》（中华人民共和国卫生部令第43号）的规定采集尸体标本，没有条件进行尸体解剖的，可采集呼吸道灌洗液或经皮穿刺采集肺组织标本。
1. 上呼吸道标本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、深咳痰液。
最佳采集时间为发病后3天内。
2. 下呼吸道标本：包括呼吸道抽取物、支气管灌洗液、肺组织活检标本。
3. 尸检标本：病人死亡后应依法尽早进行解剖，在严格按照生物安全防护的条件下，进行尸检，主要采集肺、气管组织标本，条件允许下也可采集肝、肾、脾、心脏、脑、淋巴结等组织标本。
4. 血清标本：每一病例必须采集血清标本，须采集急性期、恢复期双份血清。
第一份血清应尽早（最好在发病后7天内）采集，第二份血清应在发病后第3～4周采集。
人感染H7N9禽流感病毒标本采集、运送及保存
100 A/chicken/Karachi/NARC-23/2003_H7N3_Pakistan A/quail/Aichi/1/2009_H7N6_Japan
87
99
A/duck/Hong_Kong/301/1978_H7N2_Hong_Kong
A/black_kite/Egypt/054/2004_H7N7_Egypt
时-70℃冻存。流感病毒在-20℃～-40℃时不稳 定，故长期保存应在-70℃温度以下，不要冻存 于-20℃，会降低流感病毒的检出率 ➢ 避免反复冻融，冰上一周也比冻融一次要好 ➢ 血清标本暂时存在可在4℃冰箱，长期保存于20℃冰箱。
标本包装和运输
➢ 根据《人感染H7N9禽流感疫情防控方案（第一 版）》规定，H7N9禽流感病毒实验室活动和样本 运输按照《人间传染的病原微生物名录》中高致 病性禽流感病毒进行管理
在无菌的带螺旋塑料管分装2-3ml采样液。最好储存在:– 20℃,4℃可放48–96h,室温1–2天。
➢ 采样拭子：使用头部为聚酯纤维的病毒采样拭子（鼻 及口咽型），铝或塑料做柄，不推荐棉拭子和木柄
采集对象
1.监测病例，同时具备以下4项条件的病例： （1）发热(腋下体温≥38℃)； （2）具有肺炎的影像学特征； （3）发病早期白细胞总数降低或正常,或淋巴细胞分类计 数减少； （4）不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所致肺炎。
核酸检测流程
• 若检测结果为甲型通用阳性，H7N9阴性，送剩余 的2份呼吸道相关原始标本送当地市级流感网络实 验室进行其他流感病毒型别鉴定；
• 市级流感网络实验室若不能分型或H5阳性标本应 立即送省级疾控中心流感参比实验室；
• 若检测结果全部阴性，将剩余的2份呼吸道相关原 始标本送省级疾控中心进行SARS、新冠状等病原 体检测；
人感染H7N9禽流感医疗救治专家共识
人感染H7N9禽流感医疗救治专家共识国家人感染H7N9禽流感临床专家组在总结前一阶段医疗救治工作经验，分析现有病例救治情况的基础上，就人感染H7N9禽流感医疗救治相关工作形成以下共识：一、病原学及相关检测抗病毒治疗之前必须采集呼吸道标本送检（如鼻咽分泌物、口腔含漱液、气管吸出物或呼吸道上皮细胞）。
有病原学检测条件的医疗机构应尽快检测，无病原学检测条件的医疗机构应留取标本送指定机构检测。
（一）甲型流感病毒抗原筛查。
优点是简便易行，部分检测试剂可用在诊室或病床旁完成检测，并可在15分钟内获得结果，适用于基层的流感筛查。
现有甲型流感病毒抗原筛查法的缺点一是敏感性低，试剂间存在较大差异。
既往研究表明，甲型流感病毒抗原筛查法对季节性流感筛查的敏感性为20-70%，目前缺乏此方法对人感染H7N9禽流感病毒筛查价值的临床评价。
二是本方法不能确定流感病毒的亚型，但不会影响抗病毒药物的早期使用。
（二）H7N9核酸检测。
采用realtimeRT-PCR方法，对患者呼吸道标本H7N9禽流感病毒核酸进行检测，诊断敏感性高、特异性强，推荐临床首选使用。
受条件和设各限制，本诊断方法尚无法在基层医疗机构普及。
对于高度怀疑的病例或甲型流感病毒抗原检测阳性的疑似病例应进行H7N9禽流感病毒核酸检测，以明确诊断。
由于病毒复制过程中，血凝素抗原及神经氨酸酶抗原mRNA含量不同，在标本检测中可能会出现H7检测阳性而N9检测阴性的情况。
因此，在我国目前尚无其它H7亚型流感病毒感染人的情况下，建议可仅检测敏感性较高的H7亚型来进行临床诊断，以便早期发现病例。
（三）病毒分离。
从患者呼吸道标本中分离H7N9禽流感病毒，为实验室诊断的金标准，应当在符合P3级生物安全要求的实验室开展。
（四）特异性抗体检测。
动态检测双份血清H7N9禽流感病毒特异性抗体水平呈4倍或以上升高。
二、胸部影像学检查人感染H7N9禽流感病毒的病例发生肺炎时肺部出现不同范围的片状影像。
人感染禽流感诊疗方案
人感染禽流感诊疗方案一、病原学禽流感病毒属正粘病毒科，甲型流感病毒属。
禽甲型流感病毒颗粒呈多形性，其中球形直径80～120nm，有囊膜。
基因组为分节段单股负链RNA。
依据其外膜血凝素(H)和神经氨酸酶(N)蛋白抗原性不同，目前可分为18个H亚型(H1～H18)和11个N亚型(N1～N11)。
禽甲型流感病毒除感染禽外，还可感染人、猪、马、水貂和海洋哺乳动物。
可感染人的禽流感病毒亚型为H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3，此次报道的为人感染H7N9禽流感病毒。
该病毒为新型重配病毒，其内部基因来自于H9N2禽流感病毒。
二、流行病学人感染H7N9禽流感病毒呈散发分布，散发病例之间没有流行病学关联。
感染源主要为接触感染禽类，尤其是活禽市场、家禽养殖场、屠宰场等。
此外，密切接触患者也是感染途径之一。
人群普遍易感，感染后产生的免疫力尚不明确。
三、临床表现人感染H7N9禽流感病毒感染的潜伏期一般为7天以内。
主要症状为发热、咳嗽、喉咙痛、流涕、肌肉痛、头痛、乏力等，部分病例可出现肺炎、呼吸衰竭、多器官功能障碍等严重并发症。
病例可有不同程度的呼吸困难，重症病例可出现急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、脓毒性休克、多器官功能障碍综合征(MODS)等，甚至导致死亡。
四、诊断1. 疑似病例：有发热、咳嗽、喉咙痛、流涕、肌肉痛、头痛、乏力等症状，伴有肺炎、呼吸衰竭、多器官功能障碍等严重并发症。
2. 确诊病例：疑似病例加上以下任一项实验室检测结果阳性：（1）呼吸道标本：甲型流感病毒通用型核酸检测阳性；（2）呼吸道标本：H7N9禽流感病毒特异性核酸检测阳性；（3）血标本：甲型流感病毒通用型核酸检测阳性；（4）血标本：H7N9禽流感病毒特异性核酸检测阳性。
五、治疗1. 一般治疗：保持呼吸道通畅，给氧，维持水、电解质平衡，营养支持。
2. 抗病毒治疗：使用神经氨酸酶抑制剂（如奥司他韦）进行抗病毒治疗。
3. 抗感染治疗：根据病原学检测结果，选用敏感抗生素。
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6个内部片段来源于H9N2
三株H7N9病毒为同一基因类型
序列特点
耐药性分析 对烷胺类药物是耐药的，即M2蛋白25-42位氨基酸发生S31N突变。
HA连接肽分析 HA蛋白339位连接肽由单个（PKGRGLFG）碱性氨基酸组成，根据既往研究，具有这种序列特点的病 毒对禽类呈低致病性。
受体结合位点及其它重要位点分析 Shanghai/1/2013的HA蛋白 226-228位氨基酸属于禽源受体结合位点（为QSG）。Shanghai/2/2013和 Anhui/1/2013的HA蛋白 226-228位氨基酸受体结合位点（为LSG）
• 2. 当地流感监测网络实验室收到标本后24 小时内，立即对呼吸道标本开展甲、乙型流感病毒通用引 物H5、H7亚型的检测。
• 若当地流感监测网络实验室检测结果为H5、H7核酸检测阳性时，应当于24小时内将其中2管呼吸道 相关原始标本分别送省级疾控中心流感网络实验室和国家流感中心。
• 具备相应生物安全条件的网络实验室可开展病毒分离，并将分离的毒株按要求及时送国家流感中心。
• 3. 若当地流感监测网络实验室检测结果为甲型流感和乙型流感通用引物均阴性时，应当立即 将1管原始呼吸道标本送省级疾控中心。省级疾控中心收到标本后，应当立即对其中1管进行 SARS 、新型冠状病毒等相关病原体的检测，另1管送国家流感中心。
• 4. 当地流感监测网络实验室将采集的血清标本分别送省级疾控中心和国家流感中心开展病原 体的抗体检测。
➢ 人A型流感病毒：H1N1、H2N2、H3N2
➢ 人禽流感病毒： H1N1、 H5N1、 H9N2、 H9N2 、 H10N7
H7N2、 H7N7 、 H7N3 、 H7N9、
➢ 禽流感病毒： H5N1 、 H5N2 、 H5N8、 H5N9、 H7N3 、 H7N4 、 H7N7 、 H7N9
➢ 猪流感病毒： H1N1、H1N2 、H3N2..
➢亚型：H7N1, H7N2, H7N3, H7N7, H7N8 ➢野禽居多 ➢LPAI
核酸检测
病毒分离
从3个病例中分离到3株病毒 • A/Shanghai/1/2013(H7N9) • A/Shanghai/2/2013(H7N9) • A/Anhui/1/2013(H7N9)
序列测定
PB2 PB1 PA HA NP NA MP NS
➢ 标本分装：为避免标本反复冻融，保证标本检测质量。 采集的呼吸道标本每份分为3 管，每管不少于1ml 血清标本每份分为2 管，每管不少于0.5ml。 并填写不明原因肺炎病例/聚集性病例标本送检表
（二）密切接触者标本采集
➢ 采集人：疾病预防控制机构负责标本采集和实验室检测工作。 ➢ 标本类型：应当采集病例的所有密切接触者的双份血清标本（开始实施医学观察时和间隔2-
二、实验室检测程序
➢ 人感染H7N9禽流感疑似病例先由各省（区、市）的国家流感监测网络实验室和具备PCR实验室检测 条件的医疗机构进行标本的检测。 不具备检测条件的地区，在确保生物安全的情况下，按照规定将标本送邻近具备相应条件和资格认证 的国家流感监测网络实验室和具备PCR实验室检测条件的医疗机构进行检测。
一、诊断程序
➢ 各省首例人感染H7N9禽流感病例由发生地省级卫生行政部门组织省级临床专家组结合病例 的流行病学史、临床表现、省级疾病预防控制中心检测结果及中国疾病预防控制中心实验室 复核检测结果等，按照诊疗方案进行诊断，由省级卫生行政部门报告国家卫生和计划生育委 员会。
➢ 各省后续病例的诊断仍按上述程序进行，但实验室诊断依据可不需要中国疾病预防控制中心 实验室的复核检测结果。
病例1 病例2 病例3
HPAI H7N3 LPAI H7N9
HPAI H7N3 LPAI H7N9
HPAI H7N7 、 H7N3、 H7N1
LPAI H7Nx、H7N2、 H7N3、H7N1、H7N9
LPAI H7N9
LPAI H7N8、 H7N9（Korea）
HPAI H7N3（ Pakistan）
人感染H7N9禽流感诊疗方案（2013年第2版） 病原学检测的解析
病原学及相关检测
抗病毒治疗之前必须采集呼吸道标本送检（如鼻咽分泌物、口腔含漱液、气管吸出物或呼吸道上 皮细胞）。
有病原学检测条件的医疗机构应尽快检测，无病原学检测条件的医疗机构应留取标本送指定机构 检测。
➢ （1）甲型流感病毒抗原筛查。呼吸道标本甲型流感病毒抗原快速检测阳性。但仅可作为初筛实验。 ➢ （2）核酸检测。对患者呼吸道标本采用real time PCR（或RT-PCR）检测H7N9禽流感病毒核酸。 ➢ （3）病毒分离。从患者呼吸道标本中分离H7N9禽流感病毒。 ➢ （4）动态检测双份血清H7N9禽流感病毒特异性抗体水平呈4倍或以上升高。
人感染H7N9禽流感病毒 病原学特点及标本采集、实验室检测
江西省疾病预防控制中心 疾病检测所
2013年4月12日
目录
人感染H7N9禽流感病毒病原学特点 人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实验室检测策略 人感染H7N9禽流感病例诊断程序 人感染H7N9禽流感诊疗方案（2013年第2版）
病原学检测的解析
1996 2002
2003
2004
2006 2007
1977 19791980
1/England H7N7
7/ Italy 1/ USA H7N3 H7N2
1/ Canada H7N3
4/ Wales H7N2
1/ USA H7N2
1/ Norfolk H7N3
H7感染人（>100人） 美国、英国、意大利、荷兰、加拿大
A/H5N1 A/H7N2(NY/107)
A/H7N3
A/H5N2
病原来源
时间/国家
病例数/临床表现
鸥
1980/美国
3/结膜炎
鸭
1996/英国
1/结膜炎
禽
1997/香港
18/ILI，肺炎
鸡
1998/中国广东
5/ ILI，肺炎
禽
1999/香港
2/ILI
禽
血20清02学/北证美据（：Virginia）1/ILI，血清学诊断
HPAI H7N7、 H7N3 、 H7N4
禽中暴发的H7 2006年前暴发的均为HPAI H7 欧洲：意大利、英国、德国、比利时、荷兰、丹麦、挪威、 捷克、西班牙、瑞典
近年来人感染禽流感病毒病例
病毒亚型 A/H7N7 A/H7N7 A/H5N1 A/H9N2 A/H9N2 A/H7N2
A/H9N2 A/H5N1 A/H7N7
The virus
M 2 protein
The Flu-Site
Neuram inidase
M 1 Protein Viral RNA Haem agglutinin
01/99
About the influenza illness 1
P harm aceutical
流感病毒表面蛋白 神经氨酸酶
血凝素 RNA M2 蛋白 (only on type A）)
甲型 H1N1
第四次世界大流行2010年2月28日 ，至少 16455人
流感病毒
EM Image: from Linda Stannard Dept of Medical Microbiology University of Cape Town
Sketch map: from Paul Digard Dept Pathology University of Cambridge
人感染H4, H5, H6, H7,H9,H10, H11 AIVs.
禽
2003/香港
1/ILI
禽
2003/香港
2/ ILI，肺炎
禽
2003/荷兰
89/结膜炎、ILI、肺炎; 1名死亡病
例
禽
2003至今, 15个国家 602/ ILI, 肺炎
来源不清
2003/北美(New
1/肺炎
York)，
禽
2004/加拿大
人感染H7N9禽流感病毒病原学特点
1918 1957 1968 2009
流感大流行和流感病毒的变异
流感病毒株 H1N1 39 Years
流感大流行造成的死亡人数
第一次世界大流行 2000－4000万 （第一次世界大战战亡人数<1000万）
H2N2 11 Years
H3N2
41 Years
第二次世界大流行 200万 第三次世界大流行 70-100万
➢ 各省（区、市）首例人感染H7N9禽流感疑似病例的原始标本应在确保生物安全的情况下，送中国 疾病预防控制中心进行复检确认。
➢ 后续发生的病例，各地应当将其原始标本和病毒分离物，在确保生物安全的情况下，按照规定及 时送中国疾病预防控制中心。
➢ 各省（区、市）卫生行政部门应当将具备PCR实验室检测条件的医疗机构纳入人感染H7N9禽流感 检测机构，开展标本检测工作，并作为诊断的实验室依据。
分类和命名 • 根据分类学分类流感病毒属正粘病毒科流感病毒属。 • 根据宿主分类为人流感病毒,禽流感病（AIV）,猪流感等 • 根据流感病毒核蛋白（NP）和基质蛋白（MS）抗原性的不同，将其分为A、B、C三个血清型
➢ 根据流感病毒血凝素HA和神经氨酸酶NA抗原性的差异，又可将其分为不同的亚型。目前，A型 流感病毒有16种特异的HA和9种特异的NA。
4周后）；当密切接触者出现急性呼吸道症状时还要采集咽拭子，送当地国家级流感网络实 验室进行检测。
（二）标本转送和检测
• 1.H7N9禽流感病毒实验室活动和样本运输按照《人间传染的病原微生物名录》中高致病性禽 流感病毒进行管理。 病例的临床标本采集后，县级疾病预防控制机构和病例收治的医疗机构要密切配合，按照 生物安全的相关规定进行包装，在24 小时内送到当地流感监测网络实验室进行检测。