基因工程试题1

名词解释问题： Primer参考答案：引物。

是 DNA 复制的先锋，就象结晶过程中的晶核，引导 DNA 的合成。

名词解释问题： Northern blot参考答案： Northern 杂交。

用于检测细胞或组织样品中是否存在与探针同源的 mRNA 分子的检测方法。

过程与 Southern 杂交相似，只不过在 Blotting 过程中转移的是 RNA 而不是 DNA 。

名词解释问题：α-complementation参考答案：α-互补。

指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的α-半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现的互补。

这两个无酶学活性的产物混合在一起时，可恢复α-半乳糖苷酶的活性。

名词解释问题： Real time PCR参考答案：实时 PCR 。

通过特定设计的 PCR 仪器来实时检测 PCR 扩增过程每一轮循环产物的累积数量，推算模板的起始浓度，这种工作方式就称为实时 PCR 。

名词解释问题： Southern blot参考答案： Southern 杂交。

一种检测 DNA 分子的方法。

将 DNA 片段从琼脂糖凝胶转移到滤膜，结合了 DNA 分子的滤膜先与特定的预杂交液进行预杂交，然后与标记的核酸探针和滤膜混合。

如果滤膜上的 DNA 分子存在与探针同源的序列，那么探针将与该分子形成杂合双链，从而吸附在滤膜上。

在经过一定的洗涤程序将游离的探针分子除去后，通过放射自显影或生化检测，就可判断滤膜上是否存在与探针同源的 DNA 分子及其分子量。

名词解释问题： lytic growth参考答案：裂解生长状态。

噬菌体侵染宿主细胞后，大量复制并组装成子代噬菌体颗粒，导致宿主细胞裂解的现象称裂解生长状态。

名词解释问题： Genomic DNA library参考答案：指将某生物体的全部基因组 DNA 用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的 DNA 片段、与合适的载体体外重组并转化相应的宿主细胞获得的所有阳性菌落。

名词解释问题： Shuttle vector参考答案：穿梭载体。

能够在两类不同的宿主中复制、增殖和选择的载体称为穿梭载体。

名词解释问题： P1 artificial chromosomes参考答案： P1 人工染色体载体。

结合了 P1 载体和 BAC 载体的特性，是 P1 噬菌体载体的改进载体。

重组分子不能通过体外包装来感染宿主细胞，而只能通过电转化来将重组分子导入宿主细胞。

名词解释问题： Single strand binding protein参考答案：单链结合蛋白。

此蛋白能协同地与 ssDNA 结合而不与 dsDNA 结合，可以削弱链内二级结构的稳定性，从而加速互补多核苷酸的重新退火，并通过消除阻碍 DNA 聚合酶前进的链内二级结构，而提高这些聚合酶的持续作用能力。

填空题问题：在 DNA 测序中， Primer walking 的定义是（）。

参考答案：从目的片段的一端开始，利用载体上的序列为依据，设计第一次反应的引物进行测序，然后，依次根据前一次测序结果，设计下一次反应引物，递进测序，直至完成。

填空题问题：（）即为质粒的拷贝数，按照质粒拷贝数的多少，质粒可以分为（）和（），（）质粒多数是一些具有转移能力的大质粒；（）质粒多数是一些不具有转移能力的小质粒。

参考答案：单个细胞中所含有的质粒 DNA 分子数目；严谨型；松弛型；严谨型；松弛型填空题问题：热起始是一种在 PCR 反应中优化目标扩增产物的方法，它可抑制（）扩增。

参考答案：非特异性填空题问题：基因操作（Gene manipulation）的核心部分是基因克隆（gene cloning）， gene cloning 的基本要点有（），（）和（）。

参考答案：克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择填空题问题：绿豆核酸酶来源于绿豆芽，与 S1 酶相似，但比 S1 酶更温和，在（）上才切割，可使 DNA 突出端变成平端。

参考答案：大切口填空题问题：有关感受态出现的机制，目前主要有两种假说：（）和（）。

参考答案：局部原生质化；酶受体假说填空题问题： E.coli DNA 连接酶与 T4 DNA 连接酶相似，但需（）的参与，且其平端连接效率低常用于置换合成法。

参考答案：烟酰胺－腺嘌呤二核苷酸（NAD＋）填空题问题： Ecok 的一般分子组成为 R2M2S ，在这些亚基中， R 亚基具有（）的作用， M 亚基具有（）的作用， S 亚基具有（）的作用，当该该酶发生作用时，需用到的辅因子有：（）、（）、（）。

参考答案：限制酶；甲基化；识别 DNA 序列；ATP；SAM；Mg2+填空题问题：在 RNA 的分离、纯化和检测过程中，需控制 RNA 酶的活性，常用的 RNA 酶抑制剂有（）、（）、（）。

参考答案：人胎盘 Rnase 抑制剂；氧铜核糖核苷复合物；硅藻土填空题问题：核糖核酸酶 A 来源于牛胰，为内切核酸酶，可特异攻击（）。

可除去 DNA:RNA中未杂交的 RNA 区，可用来确定 DNA 或 RNA 中单碱基突变的位置。

参考答案： RNA 上嘧啶残基的 3' 端填空题问题：大肠杆菌中至少有三种依赖于甲基化的限制系统（）、（）、（）。

它们识别的序列各不相同，但只识别经过甲基化的序列，都限制 CpG 甲基化酶作用的 DNA 。

参考答案： mcrA；mcrBC；mrr填空题问题： YAC 载体基本组成元件有（），（），（），（）和（）。

参考答案：复制起点；着丝粒；端粒；MCS；筛选标记填空题问题：染色体步查指（）。

参考答案：采用一段分离自某一重组体一端的非重复 DNA 片段作为探针以鉴定含有相邻序列的重组克隆。

填空题问题：转化（Transformation）是在 1928 年由格里菲思在对（）菌进行研究时发现的。

转导（Transduction）是 1952 年由莱德伯格在研究（）菌的遗传重组时发现的。

参考答案：肺炎双球菌（Diplococcus pneumoniae）；鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）填空题问题： Gene cloning 是指（），基因文库（Gene library）是指（）。

答案：利用重组DNA技术分离目的基因；由大量的含有基因DNA（即某一生物的全部DNA顺序）的不同DNA片段的克隆所构成的群体填空题问题：常用的双脱氧终止法测定 DNA 序列，其长度一般不会超过 1Kb ，因此进行大分子 DNA 测序时，需（），常用的方法有（）、（）和（）。

参考答案：打断大段目标 DNA ，生成大小适合测序的小片断 DNA ；限制酶消化；超声处理；在 Mn2＋存在下用胰 DNA 酶Ⅰ消化填空题问题：重组 DNA 导入宿主的一般方法有（），（），（），（）和（）等。

参考答案：转化；转导；转染；感染；接合填空题问题：利用 PCR 技术介导的定点诱变（Site-directed mutagenesis）。

较常用的方法一般有三种即（），（）和（）。

参考答案：同源重组法；DpnⅠ法；重叠延伸填空题问题：重叠基因（Overlapping gene）是指（），间隔基因（Interrupted gene）是指（）参考答案：一个基因的序列中，单个 DNA 序列可编码一个以上的蛋白质；在编码序列中间插入的一段无编码作用的碱基序列填空题问题： 1 单位NaeⅠ或NarⅠ的定义：（）参考答案：切割 1μg 腺病毒 2 DNA 在 50ul 体系中 1 小时所需的酶量填空题问题：质粒载体的附加功能要素主要有（），（），（）等。

参考答案：α－互补；ssDNA phage origin，promotor填空题问题：基因突变（Gene mutation）的类型有（），（），（）等。

参考答案：简单的插入或缺失；单个碱基的置换；系统的缺失、插入或成串碱基的置换填空题问题：构建 Gene library 时，应根据所要分离的外源基因的大小选择合适的载体，这些载体通常包含有λ噬菌体、YAC 以及（）、（）和（）等。

参考答案：粘粒（cosmid）；BAC（细菌人工染色体）；质粒（plasmid）填空题问题：启动子（Promotor）是指（）。

通常一个 Gene 是否表达，（）是关键的一步，是起决定作用的。

在转录过程中，Promoter 还是（）的结合位点。

参考答案：基因转录过程中控制起始的部位；转录起始；RNA 聚合酶填空题问题：DnaseⅠ为内切核酸酶，在不同的辅因子条件下，产生不同的酶切效果，当 Mg2+ 存在时（）；当 Mn2+ 存在时（）。

参考答案：独立作用于每条 DNA 链，且切割位点随机；可在两条链的大致同一位置切割 dsDNA ，产生平端或 1 到 2 个核甘酸突出的 DNA 片断选择题问题： SDS 是分离 DNA 时常用的一种阴离子去污剂，下列对其作用描述不正确的是（）参考答案： D 消除反应中的泡沫点评：消除反应中的泡沫的是异戊醇。

选择题问题：下列 DNA 聚合酶中，哪一种酶只切割双链 DNA 中的一条链，产生单链切口，即切口酶（）参考答案： A DnaseⅠ点评：在 Mg2+ 存在下，独立作用于每条 DNA 链，且切割位点随机。

在 Mn2+ 存在下，它可在两条链的大致同一位置切割 dsDNA ，产生平端或 1～2 个核苷酸突出的 DNA 片段； Klenow DNA 聚合酶是 E.coli DNA polymerase 经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去 5'--3' 外切活性的多肽大片段，而聚合活性和 3'--5' 外切活性不受影响； T4 噬菌体 DNA 聚合酶与 Klenow DNA 聚合酶相似，但 3'--5' 外切活性强 200 倍，且不从单链 DNA 模板上替换引物； T7 噬菌体 DNA 聚合酶的活性功能与 T4 噬菌体 DNA 聚合酶和 Klenow DNA 聚合酶类似，但 3'--5' 外切活性为 Klenow 的 1000 倍。

选择题问题：粘粒（cosmid）是一种人工建造的载体，下列对它的描述中哪一项是不正确的（）参考答案： D 进入受体细胞后，可引起溶源化反应点评：粘粒指带有将 DNA 包装到噬菌体颗粒中所需的 cos 序列的质粒。

包括质粒复制起点，可以像质粒一样转化并增殖；包括 cos 位点，可以像噬菌体颗粒一样包装、侵染。

选择题问题：以下各项中不是 PCR 反应所必须的是（）参考答案： D 甘油点评：甘油可以增加引物与 DNA 链的结合，但不是必需的。

选择题问题：限制性内切核酸酶可以特异性地识别（）参考答案： C 双链 DNA 的特定碱基序列点评：了解限制性内切酶的识别序列。