基因工程试卷及答案 (1)

一、名词解释
1、基因治疗：是将目的基因放进特定载体中导入靶细胞或组织，通过替换或补偿引起疾病的基因，或者关闭或抑
制异常表达的基因来克服疾病的治疗方法。

2、反义核酸：是指能与特定mRNA精确互补、特异阻断其翻译的RNA或DNA分子。

3、反义DNA：也称反义寡核苷酸或反义脱氧寡核苷酸，是一种人工合成的、能与mRNA互补的、用于抑制翻译的
短小反义核酸分子。

4、同尾酶：指切割DNA可产生相同的黏性末端的限制酶
5、转导：指以噬菌体为载体，在细菌之间转移DNA的过程，有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得
细胞DNA的过程。

6、ａ-互补：指E.coli-半乳糖苷酶的两个无活性片段组合而成为功能完整的酶的过程。

7、转化：指将质粒或其他外源DNA导入处于感受态的宿主细胞，并使其获得新的表型的过程。

8、基因克隆：通过体外重组技术，将一段目的DNA经切割、连接插入适当载体，并导入受体细胞，扩增形成大量
子代分子的过程。

9、核酶：是一类具有催化活性的RNA分子，具有核苷酸水解活性，可特异性剪切RNA分子，相当于RNA酶。

10、位点偏爱：某些限制酶对同一底物中的有些位点表现出偏爱性切割，即对不同位置的同一识别序列表现出不同的切割效率，这种现象称作为位点偏爱。

二、选择
1.在( B )诱导下，目的蛋白与lacZ就会以融合蛋白的形式表达出来。

A. dNTP
B.IPTA
C. DMSO
D.SDS
2.（ A ）可使表达蛋白避免被细胞内蛋白降解，或使表达的蛋白正确折叠，从而达到维护目的蛋白的目的。

A.分泌表达载体
B.G S T融合表达载体
C.组氨酸标签表达载体
D.内含肽表达载体
3.DNA的琼脂糖凝胶电泳方向为（ B ）
A.正极向负极
B.负极向正极C浓度高向浓度低. D.浓度低向浓度高
4.影响脉冲场凝胶电泳电泳分辨率的最关键因素是（D ）
A.电场强度
B.缓冲液浓度
C.温度
D.脉冲时间
5.控制潜在RNA酶活性最重要的是（C）
A.使用R N A酶抑制剂
B.实验用具
C.细致谨慎的操作
D.温度控制
6.酵母基因表达系统的宿主不具有以下哪一条件(B )
A.安全无毒
B.载体D N A转化频率低
C.发酵周期短
D.蛋白质分泌能力好
7. 酿酒酵母的附加体形表达载体有（D）的缺点
A.蛋白分泌能力差
B.无终止子
C.不能独立复制
D.无选择压力时不稳定
8.（C）不能用大肠杆菌表达系统来生产。

A.胰岛素
B. 干扰素
C.EPO
D.赛若金
9.中国学者从人脐血白细胞中获得的（B）基因已用于我国第一个基因工程干扰素的生产。

A.胰岛素
B. 干扰素ａ-1b
C.EPO
D.CHO
10.下列哪项不属于反义核酸药物(D )
A.反义DNA
B. 核酶
C.肽核酸
D.siRNA
答案：BABDC BDCBD
11.I型限制与修饰系统的酶分子是（B）
A.内切酶与甲基化酶分子在一起
B.三亚基双功能酶
C .二亚基双功能酶 D.四亚基双功能酶
12.限制性内切酶的命名遵循的一定原则（D）
A．种名 B. 菌株号 C . 属名 D.种名，菌株号或生物型
13.大肠杆菌DNA聚合酶I 型5’→3’外切核酸酶活性的反应底物是（C）
A.单链DNA及引物
B.5’突出的双链DNA
C.双链DNA或DNA:RNA杂交体
D.带3’—OH的双链DNA或单链DNA
14．提高酶连接效率的方法（C）
A.加大酶量20倍
B.降低温度
C.加大平头末端的底物浓度
D.降低平头末端的底物浓度
15.碱性磷酸酶CIAP指（D）
A.细菌和虾的细菌碱性磷酸酶
B.虾碱性磷酸酶
C.细菌碱性磷酸酶
D.牛小肠碱性磷酸酶
16.为了突出3’末端可采用的方法（A）
A．T4—DNAPOL切平，然后平头连接 B.Klenow补平，然后平头连接
C．S1核酸酶切平，然后平头连接 D.Klenow补平，或S1核酸酶切平
17.能使X—gal变蓝的条件是（C）
A.有α—片段
B. α—受体片段
C.同时具有α—片段和α—受体片段
D.同时具有β—片段和β受体片段
18.当基因组DNA长度为野生型入噬菌体基因组多少时，不会明显影响存活能力（C）
A.78％~90％
B.60％~78％
C.78％~105％
D.105％以上
19质粒PSC101带有何种抗性基因（B）
A.卡那霉素抗性基因
B.四环素抗性基因
C.青霉素抗性基因
D.链霉素抗性基因
20.宿主为rec+，可在噬菌体溶源性细菌中鉴别重组合非重组入噬菌体的条件为（C）
A.red game 基因存在
B.red game 基因缺失，无chi位点
C.red game 基因缺失或替换，且有chi位点
D.red game基因存在且无chi位点
三、判断
1.酶切反应的反应温度大多数为37℃对
2.T4DNA连接酶只连接双链DNA分子，不需要ATP。

错
3.同一质粒尽管分子量不同，不同的构型电泳迁移率不同，其中ocDNA最快，scDNA最慢。

错
4．酵母DNA的原生质体转化法操作简便，容易掌握，但转化率不稳定，成本较高。

错
5.同尾酶的黏性末端互相结合后形成的新位点，一般不能再被原来的酶识别。

对
6.在蓝白斑筛选中，只有同时存在α—片段和α—受体片段才能使X—gal变蓝。

对
7.基因组大小分左臂，中段，右臂三部分。

对
8.cI基因的表达抑制λ噬菌体进入溶源状态。

错
9.chi位点是一段与重组事件相关联的10bpDNA序列，它激活以rec为媒介的交换反应。

错10.RNA的琼脂糖凝胶电泳实验中，RNA分析是在变性的条件下进行的，常用的变性剂为乙醛。

错
四、简答
一简述载体应具备的特征P39
1在宿主细胞内必须能够自主复制（具备复制原点）；
2必须具备合适的酶切位点，供外源DNA片段插入，同时不影响其复制；
3有一定的选择标记，用于筛选；
4最好有较高的拷贝数，便于载体的制备。

二简述构建质粒载体的基本策略和构建过程P43
（一）基本策略
1能在受体细胞内有效的复制；
2必须含有允许外源DNA片段克隆的位点，切尽可能的多；
3含有供选择克隆子的标记基因；
4载体DNA分子尽可能小。

（二）构建过程
1选择合适的出发质粒（亲本质粒）；
2正确获得构建质粒克隆载体的元件；
3选择合适的选择标记基因；
4在能达到预期目的的前提下，过程力求简单。

三大肠杆菌表达载体的表达形式和优缺点P87
1包涵体蛋白，没有生物学活性、易于分离纯化、不会被细胞内蛋白的降解作用、不会伤害宿主细胞；
2融合蛋白，稳定性大大增加、较高效率、易于分离纯化、一般受体蛋白位于N端外源蛋白位于表面；
3分泌型外源蛋白，更易于分离纯化、需在N端加入信号肽序列、减少外源蛋白在细胞内被蛋白酶降解的概率。

四简述能够发展成基因表达系统的宿主应具备的条件P279
1安全无毒，不致病；
2遗传背景清楚，容易进行遗传操作；
3构建的载体DNA容易进入，转化频率较高；
4发酵周期短，培养条件简单，容易进行高密度发酵；
5蛋白质分泌能力良好；
6有类似高等真核生物的蛋白质翻译后的修饰功能。

五酵母基因工程的优点（至少5点）P275
1酵母是真核生物，大多具有较高的安全性，如酿酒酵母可作为单细胞蛋白直接添加于饲料中;
2酵母繁殖速度快，能够向细菌一样在廉价的培养基上高密度培养，因此能大规模生产，具有降低基因工程产品成本的潜力；
3将原核生物中已知的分子和基因操作技术与真核生物中复杂的转译后修饰能力相结合，能方便的用于外源基因的操作；
4作为真核生物，提供了翻译后加工和分泌的环境，使得产物与天然蛋白一样或类似；
5不会形成不溶性的重组蛋白包涵体易于进行分离提纯。

五、论述
裂解提取法大肠杆菌质粒DNA的过程和几种纯化质粒的方法 P101
过程：
1用溶液Ⅰ将细胞悬浮50mmol/L的葡萄糖具有维持渗透压的作用，悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管底；
2加入2倍于溶液Ⅰ体积的溶液Ⅱ，该溶液含有NaOH /SDS，能够使细胞迅速破裂溶解，使悬浮液变成完全完全澄清的液体。

PH12.0到12.5染色体DNA和蛋白质变性，溶液中形成的大型复合物被SDS包被；
3加入1.5倍于溶液Ⅰ体积的溶液Ⅲ，溶液含有醋酸钾缓冲液，中和NaOH，防止长时间碱性条件会打断DNA，使复合物PDS从溶液中沉淀下来。

4取上清液离心制取粗产品(质粒DNA),再用2倍体积的乙醇沉淀，获得质粒DNA样品（可用RNase A去除RNA，用苯酚/氯仿抽离蛋白）。

方法：
1、PEG纯化质粒
2、氯化铯----溴化乙锭梯度平衡。