植物组织培养实验及实习指导

植物组织培养实验及实习指导

杨玲编

西南林学院生物技术教研室

目录

实验一、母液的配制和保存 (2)

实验二、培养基的配制与灭菌 (5)

实验三、外植体消毒与初代培养的建立 (7)

实验四、继代与增殖培养 (9)

实验五、生根培养 (1)

1

实验六、植物茎尖脱毒培养 (1)

3

实习试管苗的炼苗与移栽 (1)

5

实验一、母液的配制和保存

一、实验目的

通过配制MS培养基母液，掌握贮备液的配制和保存方法。

二、原理

配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存。使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。

以MS培养基为例，所需配制的母液为：大量元素母液（母液Ⅰ，浓缩20倍）、微量元素母液（母液Ⅱ，浓缩200倍）、铁盐母液（母液Ⅲ，浓缩200倍）和有机化合物母液（母液Ⅳ，浓缩200倍）等。

三、实验材料、试剂和仪器设备

1．试剂

NH

4NO

3

, KNO

3

, CaCl

2

·2H

2

O, MgSO

4

·7H

2

O, KH

2

PO

4

, KI, H

2

BO

3

， MnSO

4

·4H

2

O, ZnSO

4·7H

2

O, Na

2

·MoO

4

·2H

2

O, CuSO

4

·5H

2

O, CoCl

2

·6H

2

O, Na

2

•EDTA•2

H 2O，FeSO

4

·7H

2

O，烟酸，甘氨酸, 盐酸硫胺素, 肌醇, 盐酸吡哆醇, 蒸馏水

2．仪器设备

冰箱，天平，酸度计或pH试纸，烧杯（50ml，100ml，500ml，1000ml），量筒(1 000ml，100ml，25ml)，容量瓶(1000ml，500ml，100ml)，磨口试剂瓶(500ml，1 000ml)，药勺、称量纸、酸度计或pH试纸，滴管、玻璃棒，电炉，微波炉

四、实验方法

1.大量元素母液的配制

配制时先用量筒量取蒸馏水大约800ml，放入1000ml的烧杯中，按照配方表中

用量依次分别称取：NH

4NO

3

,KNO

3

,KH

2

PO

4

,MgSO

4

.7H

2

O ,CaCl

2

.2H

2

O，待第一种化

合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入1 000ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至1000ml，然后，倒入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。

2.微量元素母液的配制

按照配方表中用量用电子天平分别依次称取MnSO

4•4H

2

O， ZnSO

4

•7H

2

O ，H

2

BO

3

，

KI ，NaMoO

4•2H

2

O， CuSO

4

•5H

2

O， CoCl

2

•6H

2

O，按制备母液Ⅰ的方法逐个溶解。

（钼酸钠难溶解，可在室温下用蒸馏水溶解后再加入到微量元素母液中。）定容至1000ml，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。

3.铁盐母液配制

把FeSO

4•7H

2

O和 Na

2

•EDTA•2H

2

O分别置于450ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之

溶解。保持加热，把FeSO

4溶液慢慢倒入Na

2

•EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾

时停止加热，待溶液冷却后把pH值调到5.5，加蒸馏水到最终容积1000ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于4℃冰箱中保存备用。

4.有机化合物母液的配制

按配方表中用量依次称取：维生素B

1，烟酸，甘氨酸，维生素B

6

，用蒸馏水依次

溶解并定容后，装入1000ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。

5.植物生长物质母液的配制

NAA母液：准确称量10mg，先用少量1mol/LNaOH溶液完全溶解后，加蒸馏水定容至100ml，即配制成浓度为0.1mg/ml的NAA母液，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、浓度、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。

6-BA母液的配制方法相似，母液浓度为2mg/ml。请注意细胞分裂素的溶解方法。

五、实验报告

按照实验报告格式要求及各组在实验中的配制溶液情况，完成报告撰写。

附：MS培养基母液配方