病原微生物检测新技术及应用

手术室现场试验
手术室(r=0.766)
实时检测消毒前后空气中气溶胶 粒子数及荧光粒子数变化
荧光粒子数（pt/L)
气溶胶粒子数（pt/L)
室内空气中气溶胶粒子及荧光粒子数量的变化
70
消毒前
消毒中
消毒后
60
2400 2200
50
2000
40
1800
荧光粒子数（pt/L)
气溶胶粒子数（pt/L)
30
1600
◆ 同期住院人数为146人，感染率4.79% ，其中手术人数98人，手术部位感染（ SSI）率为7.14%，明显高于前一个月
调查感染源
分析感染特性，调查感染源
◆ 感染仅发生在神经外科手术的患者 ◆ 感染病人分布在不同的楼层，不同的
病区，在不同的手术室，且由不同的 医生进行手术 ◆ 取样 402份，最后仅在术前备皮用的 剃刀上发现了产碳青霉烯酶的肺炎克 雷伯菌。
总流泵
数据采集及控制软件的主界面
荧光粒子与细菌计数相关性
采用荧光粒子计数器法和Andersen采样 器法对医院不同环境空气进行同时采样， 比较两者检测结果的相关性。
25
微生物室现场采样
微生物实验室(r=0.865)
门诊抽血大厅采样
27
抽血大厅(r=0.889)
ICU现场采样
ICU(r=0.775)
气溶胶进样
流式原理进样 对单粒子测定
过滤器 壳流泵 过滤器
内喷嘴/样流 （1L/min）
确定粒子 大小
光束成形组件
外喷嘴/壳流 （4L/min）
总流 (5L/min)
二激光 激光器
判断粒子 生物活性
UV光 反射镜
小孔
喷嘴
绝对压力 传感器
椭球面镜
测量区
过滤器
壳流压力 传感器
总流压力 传感器
过滤器
UV 激光器
◆ 以测序为基础的分型方法：如多位点序列分型， spa分型等，有共有的数据库，可用于对不同 实验室的检测结果进行比较。
6
随机扩增DNA多态性分析
7
PFGE 脉冲场凝胶电泳
8
多位点0
确定医院感染爆发
◆ 九天中有7例神经外科手术后的患者切 口分泌物和导管引流液中分离出碳青 酶烯耐药肺炎克雷伯菌
Neg for: KPC, NDM, IMP, VIM, OXA-48,
SME
Whole Genome Sequencing
确定为产Kpc-2细菌
脉冲场凝胶电泳分析菌株同源性
Lane 1, 6, 11: Salmonella Braenderup H9812 used as molecular size markers; lane 2: case 1; lane 3: case 2; lane 4: case 3; lane 5: case 4; lane 7: case 5; lane 8: case 6; lane 9: case 7; lane 10: razor.
10
实时监测手术室空气质量
第三例病人手术过程的气溶胶粒子数量及荧光粒子数量
手术前
600 5
400
200 0
荧光粒子数量（pt/L)
11111111111111111111112222222222222222222233::::::::::::::::::::::00011122223334445555002581470369258147036925
手术后
荧光粒子数量（pt/L)
气溶胶粒子数量（pt/L) 2500
3000
2000
1500
1000
500
0
气溶胶粒子数量（pt/L)
实时监测手术室空气质量
荧光粒子数量（pt/L)
气溶胶粒子数量（pt/L)
第二例病人手术过程的气溶胶粒子数量及荧光粒子数量
50
手术前
手术中
手术后
2000
40
荧光粒子数量（pt/L) 气溶胶粒子数量（pt/L)
多位点序列分型
均为ST11型，中国流行株
患者资料一览表
治疗措施及患者预后
◆ 清创、引流 ◆ 阿米卡星鞘内注射 ◆ 患者痊愈出院，没有一例死亡 ◆ 此后改用剪毛+清洗头皮进行备皮，没有新
发感染病例
一把剃头刀的故事……
二、激光诱导荧光光谱技术 在医院空气细菌监测中的应用
细菌能量代谢
NADH，FADH在细菌细胞呼吸中起电子传递作用， 可作为22活细胞的标志，他们可产生荧光，可被检测
1500
30
1000 20
10
500
0
0
10:24 10:27 10:30 10:33 10:36 10:39 10:42 10:45 10:48 10:51 10:54 10:57 11:00 11:03 11:06 11:09 11:12 11:15 11:18 11:21 11:24
20
15
病原微生物检验新技术 及应用
交流内容
◆ 细菌同源性分析与医院感染暴发调查 ◆ 激光诱导荧光光谱技术在空气细菌监测
中的应用
2
一、细菌同源性分析 与医院感染暴发调查
3
医院感染与医院感染暴发
◆ 医院感染：是指住院病人在医院内获得的感 染，包括在住院期间发生的感染和医院内获 得出院后发生的感染。
◆ 医院感染暴发：是指在医疗机构或其科室的 患者中，短时间内发生3例以上同种同源感 染病例的现象。
如何发现医院感染？
◆ 细菌鉴定 ◆ 细菌药敏谱 ◆ 细菌血清型 ◆ 细菌分子同源性
5
细菌分子同源性检测方法
◆ 以电泳为基础的分型方法：如随机扩增DNA多 态性（RAPD），重复序列PCR（rep-PCR） 脉冲场凝胶电泳 （PFGE），限制性核酸内切 酶，质粒分型等，方法简单，成本较低，一般 仅适用于对同一批标本进行比较。
AST Carbapenem I or R
K. pneumoniae MIC (µg/ml):
Ertapenem Imipenem Meropenem
>2 R 4R
>8 R
Biological Test for Carbapenemase
耐药机制分析
PCR for Cbp’ase genes
Carba NP - MHT +
20
1400
10
1200
0
1000
16:10 16:20 16:30 16:40 16:50 17:00 17:10 17:20 17:30
实时监测手术室空气质量
30
25
20
15
10
5
0
第一例病人手术过程的气溶胶粒子及荧光粒子数量
手术前
手术中
荧光粒子数量（pt/L)
108889999999999999999999999::::::::::::::::::::::::::0333000222233333444445555502462462468024680246802468