猪圆环病毒检测方法的研究进展
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发 现 淋 巴 组 织 中 单 核 巨 噬 细 胞 内 和 组 织 细 胞 内
方法 比ＩＡ更敏感 ，可用 于Ｐ Ｖ 抗体 的大规模检 Ｆ Ｃ２
测 。 ， １
２ １２ 间接 Ｅ Ｉ Ａ ．． ＬＳ
间接 Ｅ Ｉ ＬＳ Ａ主要用于测定抗体。用抗原致敏固 相 载体 ，然后 加入待 测抗体 的血清 ，培养后洗 去 未结 合成 分 ，再 加入 酶标 抗 体 ，洗涤 后加 入底 物 ，在酶 的催 化 下底 物发 生反 应 ，产 生有 色物
质 。Ｎ ｗ ｇｇｌ 报 道 了两 种 间接 Ｅ ＩＡ法 ，一种 ａ ａｉｕ等 ｔ ＬＳ
Ｐ Ｖ 的阳性信号很 强 ，说 明Ｐ Ｖ 主要存在这些 Ｃ２ Ｃ２ 细胞 的细胞浆 内。
２４ 免 疫过氧 化物 酶单 层试 验 ．
免疫过氧化 物酶单层试验 （ Ｍ ） Ｉ Ａ 是将生长有 Ｐ
Ｐ Ｖ病 毒 的Ｐ 一 ５ Ｃ Ｋ １ 细胞在 ９ 孔 板上长成单 层后 ， ６ 加入 １ 倍稀释 的待检猪 血清 ，作用一定时间后吸 ０
好 的手 段 。
２２ 间接 免 疫 荧光 ．
间接免疫荧光（ Ａ 主要利用已知抗原来检测 Ｉ ） Ｆ
酶联免疫吸附方法（ ＬＳ ） 以抗体抗原反应 Ｅ ＩＡ 是 为原理 的技术 ，是继免疫荧光和放射免疫技术之 后产生 的一种检测抗体或抗原 的免疫酶技术 ，该 技术简单 、灵敏 、快速 。血清学方法 中最主要 的
是 Ｅ ＩＡ法 ，主 要 包 括 竞 争 Ｅ ＩＡ、间 接 Ｅ ＩＡ、 ＬＳ ＬＳ ＬＳ 抗 原捕 获 Ｅ ＩＡ等 。 ＬＳ
２１１ 竞 争 Ｅ ＩＡ ．． ＬＳ
待检血清的抗体 ， 用于病毒分离效果的鉴定及病变
组织或猪源细胞 Ｐ Ｖ感染情况 的检测 。陈庆新等 Ｃ 将浙江省杭州地区２ 个猪场采集猪血清 １ ７ 份用 ８ ７ ６ ＩＡ Ｆ 试验进行 Ｐ Ｖ 的抗体检测 ，检测 出阳性血清 Ｃ２ ９ ０ ，阳性率为 ５． ％，调查结果显示 ，杭州地 ６份 ５８ ４ 区猪场为普遍感染＂。这种方法成本低 、简单 、快 速 、灵敏 ，但实际操作复杂 ，因此不适合临床上的
干 洗 涤 ，再 加 入 Ｈ Ｐ 记 的抗 猪 ＩＧ，３ Ｒ 标 ｇ ７ｏ 育 Ｃ孵 ３ ｉ，吸 干洗 涤后 加人 底 物 溶液 显色 ，然后 终止 ０ｒ ｎ ａ
以细胞培养 的 Ｐ Ｖ 全病毒作 为抗原 （Ｃ ２ Ｌ． Ｃ２ Ｐ Ｖ 一Ｅ Ｉ Ｓ ，另 一 种 以 Ｏ Ｆ 重 组 杆状 病 毒 表 达 产 物 作 为 Ａ） Ｒ２
包被抗原 （ Ｒ ２ Ｅ ＩＡ ，分别用 于检测针对全病 Ｏ Ｆ 一 ＬＳ ）
毒和病毒核衣壳蛋白的抗体。试验结果显示 ，Ｅ Ｉ Ｌ— Ｓ Ａ方 法 敏 感 性 高 、重 复 性 好 ，并 且 与 Ｐ Ｖ及 Ｐ
Ｐ Ｒ Ｖ的抗 体无 交叉 反应 。但 是 ， 由于 Ｐ Ｖ ＲＳ Ｃ２ Ｅ ＩＡ不 能 有效 区 分 Ｐ Ｖ 与 Ｐ Ｖ 抗 体 ，并 且 ＬＳ Ｃ１ Ｃ２
养 物 中 的病 毒核 酸 。
３１ 聚 合 酶链反 应 ．
Ｐ Ｖ 病毒培养物滴度低 ，纯化 困难 ，因此该方法 Ｃ２ 的应用受到很大限制。
２１ ．－ 抗原捕 获 Ｅ ＩＡ ３ ＬＳ
有研究人员利用单抗建立 了抗原捕获 Ｅ ＩＡ ＬＳ 方 法检测 Ｐ Ｖ 特异抗体 。Ｍ Ｎ ｉ 等以Ｐ Ｖ 特异性 Ｃ２ ｃ ｅｌ ｌ ｙ Ｃ２ 单抗 为 工具建 立 了抗 原捕 获 Ｅ ＩＡ用 于仔猪 多 系统 ＬＳ 衰竭综合征 （Ｍ ） Ｐ ＷＳ 的诊断 ，发现抗原捕获 Ｅ ＩＡ ＬＳ
反应 。刘长明等在优化此检测方法的基础上 ，研制
出一 种新 的 ＩＭＡ抗 体检 测 试 剂盒 ，该试 剂 盒用 于 Ｐ
猪血清 中 Ｐ Ｖ ２ Ｃ 一 抗体 检测 ，具有特 异 、敏感 、操 作简便 、实用性强等特点 。 ３ 分 子生物 学诊 断方 法 主要应用分子生物学方法来检测组织病料或培
快速 诊断 。
２３ 免 疫 组织化 学检 测 ．
竞争 Ｅ ＩＡ主要用 于测定 小分子抗 原及半抗 ＬＳ
原 。用特异性抗体致敏 固相载体 ，加入含待测抗 原 的样 品及一定量 的酶标抗原共 同培养 ，洗涤 除 去标记 和未标记 的抗 原 ，加底物显色 。Ｗａ ｅ等 ｌｒ ｋ
首次利用 Ｐ Ｖ 和 Ｐ Ｖ 特异性单克隆抗体建立 了 Ｃ１ Ｃ２ 竞争 Ｅ ＩＡ（— ＬＳ ） 法来检测 Ｐ Ｖ 抗 体 ，并 ＬＳ ｃ Ｅ Ｉ 方 Ａ Ｃ２ 将这种 方法和 ＩＡ方法相 比，检测结果表 明 ，该 Ｆ
聚合酶链反应 （Ｃ ） Ｐ Ｒ 是一种快速 、简便 、特异 的诊断方法 ，可直接检测病毒核酸 ，在兽 园 临 床检 测病原中广泛应用。经过多年研究 ，已建立 了多种
５Ｏ 饲料博览 ２ １年第 ２ ０１ 期
免疫组织化学检测 （ Ｃ 与 ＩＡ抗原抗体特异性反应的前提
下，利用酶细胞化学 的手段 ，检测抗原或抗体的一 门新 技 术 。Ｉ Ｃ是可 以对 携 带抗 原 的细 胞及 组织 的 Ｈ 形态进行大体 的评价 ，而且在普通显微镜下就可以 进行观察 ，且颜色稳定 ，样本易保存 。有学者应 用 Ｉ 法对 Ｐ ＨＣ ＭＷＳ 患病 猪 的 淋 巴组 织 进行 了检测 ，
积 的 ３０ｍ ｏ・～Ｄ 氨基 葡萄糖 。通常在病料 接 ０ ｍ ｌＬ 一 种后 ３ｄ ，通过 ＩＡ Ｃ Ｆ 、Ｐ Ｒ或 电子显微镜 观察 等方 法确认 病毒分离情 况 。病毒分离费时费力 ，不适 于疾病的快速诊断。
２ 血清 学方 法 ２１ 酶联 免疫吸 附方法 ．
与 病 毒 分 离 、Ｉ Ｃ一 样 能 很 好 地 鉴 别 Ｐ ＷＳ Ｈ Ｍ 与 Ｐ Ｖ 的亚临床感 染 ］ Ｃ２ 。抗原捕获 Ｅ ＩＡ的建立 为 ＬＳ Ｐ ＷＳ Ｐ Ｖ 的亚临床感染 的鉴别诊断提供 了很 Ｍ 与 Ｃ２
方法 比ＩＡ更敏感 ，可用 于Ｐ Ｖ 抗体 的大规模检 Ｆ Ｃ２
测 。 ， １
２ １２ 间接 Ｅ Ｉ Ａ ．． ＬＳ
间接 Ｅ Ｉ ＬＳ Ａ主要用于测定抗体。用抗原致敏固 相 载体 ，然后 加入待 测抗体 的血清 ，培养后洗 去 未结 合成 分 ，再 加入 酶标 抗 体 ，洗涤 后加 入底 物 ，在酶 的催 化 下底 物发 生反 应 ，产 生有 色物
质 。Ｎ ｗ ｇｇｌ 报 道 了两 种 间接 Ｅ ＩＡ法 ，一种 ａ ａｉｕ等 ｔ ＬＳ
Ｐ Ｖ 的阳性信号很 强 ，说 明Ｐ Ｖ 主要存在这些 Ｃ２ Ｃ２ 细胞 的细胞浆 内。
２４ 免 疫过氧 化物 酶单 层试 验 ．
免疫过氧化 物酶单层试验 （ Ｍ ） Ｉ Ａ 是将生长有 Ｐ
Ｐ Ｖ病 毒 的Ｐ 一 ５ Ｃ Ｋ １ 细胞在 ９ 孔 板上长成单 层后 ， ６ 加入 １ 倍稀释 的待检猪 血清 ，作用一定时间后吸 ０
好 的手 段 。
２２ 间接 免 疫 荧光 ．
间接免疫荧光（ Ａ 主要利用已知抗原来检测 Ｉ ） Ｆ
酶联免疫吸附方法（ ＬＳ ） 以抗体抗原反应 Ｅ ＩＡ 是 为原理 的技术 ，是继免疫荧光和放射免疫技术之 后产生 的一种检测抗体或抗原 的免疫酶技术 ，该 技术简单 、灵敏 、快速 。血清学方法 中最主要 的
是 Ｅ ＩＡ法 ，主 要 包 括 竞 争 Ｅ ＩＡ、间 接 Ｅ ＩＡ、 ＬＳ ＬＳ ＬＳ 抗 原捕 获 Ｅ ＩＡ等 。 ＬＳ
２１１ 竞 争 Ｅ ＩＡ ．． ＬＳ
待检血清的抗体 ， 用于病毒分离效果的鉴定及病变
组织或猪源细胞 Ｐ Ｖ感染情况 的检测 。陈庆新等 Ｃ 将浙江省杭州地区２ 个猪场采集猪血清 １ ７ 份用 ８ ７ ６ ＩＡ Ｆ 试验进行 Ｐ Ｖ 的抗体检测 ，检测 出阳性血清 Ｃ２ ９ ０ ，阳性率为 ５． ％，调查结果显示 ，杭州地 ６份 ５８ ４ 区猪场为普遍感染＂。这种方法成本低 、简单 、快 速 、灵敏 ，但实际操作复杂 ，因此不适合临床上的
干 洗 涤 ，再 加 入 Ｈ Ｐ 记 的抗 猪 ＩＧ，３ Ｒ 标 ｇ ７ｏ 育 Ｃ孵 ３ ｉ，吸 干洗 涤后 加人 底 物 溶液 显色 ，然后 终止 ０ｒ ｎ ａ
以细胞培养 的 Ｐ Ｖ 全病毒作 为抗原 （Ｃ ２ Ｌ． Ｃ２ Ｐ Ｖ 一Ｅ Ｉ Ｓ ，另 一 种 以 Ｏ Ｆ 重 组 杆状 病 毒 表 达 产 物 作 为 Ａ） Ｒ２
包被抗原 （ Ｒ ２ Ｅ ＩＡ ，分别用 于检测针对全病 Ｏ Ｆ 一 ＬＳ ）
毒和病毒核衣壳蛋白的抗体。试验结果显示 ，Ｅ Ｉ Ｌ— Ｓ Ａ方 法 敏 感 性 高 、重 复 性 好 ，并 且 与 Ｐ Ｖ及 Ｐ
Ｐ Ｒ Ｖ的抗 体无 交叉 反应 。但 是 ， 由于 Ｐ Ｖ ＲＳ Ｃ２ Ｅ ＩＡ不 能 有效 区 分 Ｐ Ｖ 与 Ｐ Ｖ 抗 体 ，并 且 ＬＳ Ｃ１ Ｃ２
养 物 中 的病 毒核 酸 。
３１ 聚 合 酶链反 应 ．
Ｐ Ｖ 病毒培养物滴度低 ，纯化 困难 ，因此该方法 Ｃ２ 的应用受到很大限制。
２１ ．－ 抗原捕 获 Ｅ ＩＡ ３ ＬＳ
有研究人员利用单抗建立 了抗原捕获 Ｅ ＩＡ ＬＳ 方 法检测 Ｐ Ｖ 特异抗体 。Ｍ Ｎ ｉ 等以Ｐ Ｖ 特异性 Ｃ２ ｃ ｅｌ ｌ ｙ Ｃ２ 单抗 为 工具建 立 了抗 原捕 获 Ｅ ＩＡ用 于仔猪 多 系统 ＬＳ 衰竭综合征 （Ｍ ） Ｐ ＷＳ 的诊断 ，发现抗原捕获 Ｅ ＩＡ ＬＳ
反应 。刘长明等在优化此检测方法的基础上 ，研制
出一 种新 的 ＩＭＡ抗 体检 测 试 剂盒 ，该试 剂 盒用 于 Ｐ
猪血清 中 Ｐ Ｖ ２ Ｃ 一 抗体 检测 ，具有特 异 、敏感 、操 作简便 、实用性强等特点 。 ３ 分 子生物 学诊 断方 法 主要应用分子生物学方法来检测组织病料或培
快速 诊断 。
２３ 免 疫 组织化 学检 测 ．
竞争 Ｅ ＩＡ主要用 于测定 小分子抗 原及半抗 ＬＳ
原 。用特异性抗体致敏 固相载体 ，加入含待测抗 原 的样 品及一定量 的酶标抗原共 同培养 ，洗涤 除 去标记 和未标记 的抗 原 ，加底物显色 。Ｗａ ｅ等 ｌｒ ｋ
首次利用 Ｐ Ｖ 和 Ｐ Ｖ 特异性单克隆抗体建立 了 Ｃ１ Ｃ２ 竞争 Ｅ ＩＡ（— ＬＳ ） 法来检测 Ｐ Ｖ 抗 体 ，并 ＬＳ ｃ Ｅ Ｉ 方 Ａ Ｃ２ 将这种 方法和 ＩＡ方法相 比，检测结果表 明 ，该 Ｆ
聚合酶链反应 （Ｃ ） Ｐ Ｒ 是一种快速 、简便 、特异 的诊断方法 ，可直接检测病毒核酸 ，在兽 园 临 床检 测病原中广泛应用。经过多年研究 ，已建立 了多种
５Ｏ 饲料博览 ２ １年第 ２ ０１ 期
免疫组织化学检测 （ Ｃ 与 ＩＡ抗原抗体特异性反应的前提
下，利用酶细胞化学 的手段 ，检测抗原或抗体的一 门新 技 术 。Ｉ Ｃ是可 以对 携 带抗 原 的细 胞及 组织 的 Ｈ 形态进行大体 的评价 ，而且在普通显微镜下就可以 进行观察 ，且颜色稳定 ，样本易保存 。有学者应 用 Ｉ 法对 Ｐ ＨＣ ＭＷＳ 患病 猪 的 淋 巴组 织 进行 了检测 ，
积 的 ３０ｍ ｏ・～Ｄ 氨基 葡萄糖 。通常在病料 接 ０ ｍ ｌＬ 一 种后 ３ｄ ，通过 ＩＡ Ｃ Ｆ 、Ｐ Ｒ或 电子显微镜 观察 等方 法确认 病毒分离情 况 。病毒分离费时费力 ，不适 于疾病的快速诊断。
２ 血清 学方 法 ２１ 酶联 免疫吸 附方法 ．
与 病 毒 分 离 、Ｉ Ｃ一 样 能 很 好 地 鉴 别 Ｐ ＷＳ Ｈ Ｍ 与 Ｐ Ｖ 的亚临床感 染 ］ Ｃ２ 。抗原捕获 Ｅ ＩＡ的建立 为 ＬＳ Ｐ ＷＳ Ｐ Ｖ 的亚临床感染 的鉴别诊断提供 了很 Ｍ 与 Ｃ２