分析实验

实验七高锰酸钾吸收曲线的绘制

【实验目的】

1.熟悉紫外可见分光光度计的原理、组成及使用方法；

2.掌握测定及绘制药物吸收曲线的方法。

【实验器材】

752N型紫外可见分光光度计、万分之一电子天平、计算机

1000ml棕色容量瓶、20ml大肚移液管、烧杯、50ml容量瓶、胶头滴管、擦镜纸、滤纸、坐标纸

KMnO4（分析纯）、蒸馏水、甲醇（分析纯）

【实验原理】

在紫外-可见光区，物质对光的吸收主要是分子中外层电子的能级跃迁所致，主要是指π→π*、n→π*两种跃迁类型，物质分子结构不同，产生的跃迁类型也不同，物质通过紫外吸收产生的吸收光谱也不相同。

在待测物质的浓度一定的条件下，用各种不同波长的光线作为入射光，测定物质的吸光度（A），然后以波长（λ）为横坐标，相应的吸光度（A）为纵坐标，绘制出的曲线就称为该物质的吸收光谱曲线。吸收光谱曲线是物质的特征曲线，体现了物质对不同波长的光的吸收能力。

在一定的温度、pH值等条件下，待测物质的性质确定，吸收光谱的曲线形状是一定的。在吸收光谱中，往往可找到一个或几个吸收最大值，该处的波长称为最大吸收波长（λmax）。物质的结构不同，它们的最大吸收波长也往往不同。

本实验是采用紫外可见分光光度计测定相应波长下的高锰酸钾溶液的吸光度，作图可得吸收曲线，分析高锰酸钾溶液的最大吸收波长。

紫外-可见分光光度计的介绍

一、构造：

二、操作步骤：

1接通电源，打开仪器开关，掀开样品室暗箱盖，预热20分钟。

2.缓缓转动波长选择钮至所需波长。

3.将空白溶液及待测溶液分别倒入比色杯4/5处，用擦镜纸擦净外壁，分别

放入吸收池内，使空白溶液的比色皿对准光路。

4. 轻按“A/T/C/F”键使光标处于“T”位臵，开启暗箱盖，轻按“▽/0%”键调零，应显示“0000.0”；盖上暗箱盖，轻按“Δ/100%”键，应显示“100.0”。

5. 轻按“A/T/C/F”键使光标处于“A”位臵，应显示“0.000”，拉动拉杆使待测溶液处于光路中，待数字稳定后读数，记录吸光度A值。

6.如要改变波长进行测定，将拉杆推回，使空白溶液处于光路中，重复步骤4中“轻按“Δ/100%”键，应显示“100.0””和步骤5。

7.测定完毕，关闭仪器开关、拔掉电源，取出比色皿洗净，浸泡在甲醇中，若长期不用，取出比色皿洗净后晾干放于比色皿盒中保存；吸收池中放臵干燥剂，防止比色架吸潮损坏。

8.填写《仪器使用记录表》。

【实验内容】

取分析纯的KMnO4 0.125g，精密称定，至1000ml棕色容量瓶中，加蒸馏水溶解完全并稀释至刻度，摇匀，作为储备液备用（0.125mg/ml）。

精密吸取上述储备液20m1，臵50ml容量瓶中，加蒸馏水稀释并定容至刻度，摇匀，作为待测溶液；另用蒸馏水作为空白溶液；

将空白溶液和待测溶液分别盛于厚度为1cm的比色皿中，放入紫外可见分光光度计中，按以下要求测定不同波长的吸光度；

从410nm至510nm，每隔20nm测定一次吸光度；510nm至540nm，每隔5nm；540nm至700nm，每隔20nm；并及时记录吸光度A值。

每变换一次波长，都需要用空白溶液进行校正，将透光率T调节至“100.0”再行测定。

在座标纸上或计算机上，以波长(nm)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，绘制吸收曲线，并指出最大吸收波长。

实验数据记录及结果计算

【注意事项】

1.严格按照仪器的操作步骤进行操作；

2.比色皿拿其磨砂面，液体装入约4/5高度，并用擦镜纸擦净外壁，每次用完后自来水冲洗干净，浸泡在甲醇中，使用时倒臵于滤纸上晾干；

3.倒取溶液时不能在仪器表面上方操作，仪器上请勿放任何物品；

4.每调换一次波长，都需要用空白溶液进行校正，使其吸光度为“0”。

5.两人相互合作，一人操作仪器，一人记录数据。

【思考题】

1.单色光不纯对测得吸收曲线有何影响？

2.不同仪器上测得的吸收曲线是否一样？为什么？

实验八标准曲线法测定高锰酸钾溶液的浓度

【实验目的】

1.进一步熟悉紫外可见分光光度计的使用方法；

2.掌握紫外可见分光光度法的定性和定量方法；

3.掌握标准曲线的绘制及计算方法。

【实验器材】

752N型紫外可见分光光度计、计算机

25ml棕色容量瓶、1、2、10ml大肚移液管、10ml刻度移液管、烧杯、胶头滴管、擦镜纸、滤纸、坐标纸

KMnO4（分析纯）、蒸馏水、甲醇（分析纯）

【实验原理】

根据物质对于入射光的特征吸收，可对待测物质进行定性分析，常采用的方法包括对比吸收光谱特征数据（λmax）、对比吸光度的比值、对比吸收光谱的一致性。

用于定量分析的依据是朗伯-比尔定律：A=ξ〃C 〃L。其物理意义是指当一束平行的单色光通过某一均匀溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和光程的乘积成正比。

采用最大吸收波长作为入射光，当待测物质确定，物质的吸光系数（百分吸光系数E或摩尔吸光系数ξ）是一常数，人为固定L=1cm，即吸光度A与浓度C之间成正比关系，就能够测定待测组分的浓度或含量。

常见的定量方法包括吸光系数法、标准曲线法、标准对照法。其中最常用、最准确的是标准曲线法。即先用标准物质配制一定浓度的储备液，再将该储备液配制成一系列浓度不同的标准溶液。在一定波长下，测试每个标准溶液的吸光度，以标准溶液的浓度为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，求得线性回归方程Y = a X + b和相关系数r。将未知浓度的待测溶液在同一条件下测得吸光度值，在标准曲线上查出待测溶液对应的浓度或含量。

【实验内容】

取分析纯的KMnO4 0.125g，精密称定，臵于1000ml棕色容量瓶中，加蒸馏水溶解完全并稀释至刻度，摇匀，作为储备液备用（0.125mg/ml）。

分别精密吸取上述储备液1、2、4、6、8、10m1，臵于6个25ml棕色容量瓶中，分别加蒸馏水稀释并定容至刻度，摇匀，作为标准溶液；另取蒸馏水作为空白溶液；

调节波长选择钮，以525nm作为测定波长；

将空白溶液盛于厚度为1cm的比色皿中，放入紫外可见分光光度计中进行校正，使吸光度为“0”；再按仪器操作规程依次测定6个标准溶液的吸光度，并记录数据。

取待测溶液（量取储备液5ml，稀释至25ml即得），同法进行测定吸光度，并记录数据。

在座标纸上或计算机上，以浓度(mg/ml)为横坐标，相应的吸光度(A)为纵坐