DNS法测定还原糖 ppt课件
实验二--总糖和还原糖的测定PPT课件
六、改进实验建议
-
11
▪ 附：仪器和试剂
▪ 主要仪器：分光光度计，水浴锅，容量瓶，刻度试管， 移液管等。
▪ 3,5-二硝基水杨酸试剂：
▪ 甲液：溶解6.9g结晶酚于15.2ml 10%氢氧化钠溶液中， 并用水稀释至69ml，在此溶液中加6.9g亚硫酸氢钠。
-
7
▪ （2）样品中总糖的水解提取：
▪ 准确称取10g新鲜材料（或1g材料干样粉末）， 放在锥形瓶中，加入10ml 6 mol•L-1 盐酸，15ml 水，在沸水浴中加热30min，取出一、二滴置于 白瓷板上，加1滴碘～碘化钾溶液检查水解是否完 全。如已水解完全，则不呈现蓝色。冷却后加入1 滴酚酞指示剂，以10%氢氧化钠溶液中和至溶液 呈微红色，过滤并定容到100ml。再精确吸取上述 溶液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀 备用。
（mg•g-1）
=
测定用提取液体积（ml）×样
品重量（g）
样品水解后还原糖毫克数×提取液总体积（ml）×稀释倍数
总糖（mg•g-1）=
测定用提取液体积（ml）×样品重量（g）
-
10
五、讨论分析
▪ 1、在被测样品中，还原糖可能是些什么糖？总糖 包括哪些？
▪ 2、用来测定总糖的样品，为什么要加盐酸水解？ 而在其测定前，又为何要用NaOH中和？
6
葡萄糖标准液（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
相当于葡萄糖量(mg) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
蒸馏水（ml）
2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8
11级DNS法测定还原糖含量最终版
黄色
桔红色
实验材料、主要仪器和试剂
? 1、试剂 （1）1mg/mL 葡萄糖标准液
准确称取干燥恒重的葡萄糖 100mg ，加少量 蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至 100mL （2）3,5-二硝基水杨酸（ DNS）试剂
将6.3g DNS 和262mL 2Mol/L NaOH 溶液， 加到500mL 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中， 再加5g结晶酚和 5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后 加蒸馏水定容至 1000mL ，贮于棕色瓶中备用。
→ 21.5ml 蒸馏水 测定吸光度并绘制标准曲线 （550nm 波长处）
? 二、样品中还原糖提取
准确称பைடு நூலகம்0.65g面粉，
放在100ml 烧杯中，先
以少量蒸馏水调成
糊状，然后加入15ml
蒸馏水，混匀，于50℃恒温保温20min ，时 搅拌，使还原糖浸出，过滤，将滤液全部收 集在25ml 容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度， 即为还原糖提取液。
（3）碘-碘化钾溶液 （4）6mol/l NaOH （5）0.1%酚酞指示剂 （6）6mol/l HCl溶液 2、材料 淀粉
3、器材 分光光度计，天平，水浴锅，电子 万用炉，试管若干
? 一、制作葡萄糖标曲线
? 取10支试管，按下表加入试剂
试剂
0 1 23 4
5
实验步骤
6
7
8
9
葡萄糖标 0 0.2 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 1.0 1.2 1.4 准液/ml
三.总糖提取
锥形瓶（0.5g面粉+10ml 盐酸+蒸馏水15ml）加热30min
检验水解是否完成（I-KI溶液） 冷却至室温后
中和并定容到 50ml 过滤取10ml 于 100ml 容量瓶
2019年实验六植物组织中总糖和还原糖含量的测定DNS法1017.ppt
冷却,用 I2-KI检测 沸水浴0.5h NaOH中和, 加水定容 到100mL
4.3、用3,5-二硝基水杨酸法测还原糖、 总糖含量
管号 样液/mL 水 DNS试剂/mL 空白对照 0 1.0 2.0 还原糖 样液管 1.0 0 2.0 总糖样液管 1.0 0 2.0
沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却至室温 蒸馏水/mL 9.0 9.0 9.0
A540
5、数据处理与问题
• 5.1、计算浓度
还原糖浓度100103 还原糖含量 100% 1 总糖浓度100103 0.9 总糖含量 100% 1
• 5.2、本实验的注意事项？
• 预习实验102.1酵母醇脱氢酶的提纯
3,5-二硝基水杨酸法标准曲线
1.8 1.6 1.4 y = 1.6159x - 0.0121 2 R = 0.9989
4.2、植物组织中总糖与还原糖溶液的获取
(1)还原糖：
1g土豆 取滤液作为还 原糖提取液 混匀,过滤
3mL水
研成匀浆 冷却定到 100mL
30mL水冲研 钵2-3次
三角瓶中 50℃水浴0.5h
(2)总糖：
1g土豆 取滤液作为 总糖提取液 混匀,过滤
3mL水
研成匀浆
12mL水冲研 钵2-3次
三角瓶中
物，3,5-二硝基水杨酸(黄色）则被还原为棕红色
的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖
的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用
分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对
标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖
的含量。
• 由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加
入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
DNS法测定总糖和还原糖之欧阳家百创编
实验九总糖和还原糖的测定（二）欧阳家百（2021.03.07）──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。
（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。
（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
（5）0.1% 酚酞指示剂。
（6）6 mol/L HCl溶液2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。
3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。
四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4水杨酸溶液(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5葡萄糖含量(mg)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。
DNS法测定还原糖的含量
absorbency
1 y = -0.14971 + 0.035786x R= 0.9954
0.8
0.6
0.4
0.2
glucose standard curve 1
0
0
5
10
15
20
25
30
glucose standard curve1
glucose chroma/10-4mol/l
另外采用较高浓度的葡萄糖来制作标准曲线，得到下图2： 其回归方程为：y=-0.10483+0.031804x,R=0.99817.
试管号
0
1
2
3
4
56
7
8
9
10
11
12
13
14
DNS/ml
0
2
2
2
2
22
2
2
2
2
2
2
2
2
水/ml
3
1
葡萄糖/ml
0
0
1
1
1
11
1
1
1
1
1
1
1
1
浓度/104mol/l
3
5
7
9 11
13
15
17
19
21
23
25
27
下图1为葡萄糖标准曲线图，葡萄糖含量（mol/l） 与相应的吸光度（A）有一定的线性关系，且其回归方程为： y = - 0.14971+0.035786x， R= 0.9954。
二.显色条件的选择
1. 波长选择 取5支试管按下表加相应溶液，沸水 浴15min, 均加入7ml水定容为10ml，流水冷却，在不 同波长处分别进行扫描。
《还原糖的测定》PPT课件
250------样品溶液的总体积,mL。
食品安全检验技术（理化部分） 食品中还原糖的测定
2、高锰酸钾滴定法
该法适用于各类食品中还原糖的测定，对于深色样液也 同样适用。这种方法的主要特点是准确度高，重现性好， 这两方面都优于直接滴定法。但操作复杂、费时。 （1）原理
将还原糖与过量的碱性酒石酸铜溶液反应，还原糖使 二价铜还原为氧化亚铜沉淀。经过滤取得氧化亚铜，用硫 酸铁溶液将其氧化溶解，而三价铁盐被定量地还原为亚铁 盐，再用高锰酸钾标准液滴定所产生的亚铁盐。根据高锰 酸钾标准溶液消耗量计算得氧化亚铜量，从检索表中查得 与氧化亚铜量相当的还原糖量，即可计算样品中的还原糖 含量。
ⅳ、汽水等含二氧化碳的饮料：吸取样品100.0mL于蒸 发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，转移入250mL容量 瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水 至刻度，混匀备用。
食品安全检验技术（理化部分） 食品中还原糖的测定
② 测定 吸取50.00mL处理后的样品溶液于400mL烧杯中，加碱
性酒石酸铜甲、乙液各25mL，盖上表面皿，置电炉上加热， 使其在4分钟内沸腾，再准确沸腾2分钟，趁热用铺好石棉的 古氏坩埚或G4垂融坩埚抽滤，并用60℃热水洗涤烧杯及沉 淀，至洗液不呈碱性为止。将坩埚放回原400mL烧杯中，加 25mL硫酸铁溶液及25mL水，用玻璃棒搅拌使氧化亚铜完全 溶解，以高锰酸钾标准溶液滴定至微红色为终点。记录高锰 酸钾标准溶液消耗量。
食品安全检验技术（理化部分） 食品中还原糖的测定
试剂
① 碱 性 酒 石 酸 铜 甲 液 ： 称 取 15g 硫 酸 铜 （ C uSO4·5H2O) 及 0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释到1000 mL ②碱性酒石酸铜乙液：取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶 于 水 中 ， 再 加 入 4g 亚 铁 氰 化 钾 ， 完 全 溶 解 后 ， 再 用 水 稀 到 1000 mL，储存于橡胶塞玻璃瓶内。 ③乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]，加3 mL冰醋酸 ，加水溶解并稀释1000 mL。 ④ 106g/L 亚 铁 氰 化 钾 溶 液 ： 称 取 106.g 亚 铁 氰 化 钾 [K4Fe(CN)6·3H2O]，溶于水中，稀释至100mL。 ⑤葡萄糖标准液：准确称取1.000 g干燥至恒量的 纯葡萄糖， 加水溶解后加入5 mL 盐酸，并以水稀释至1000 mL。 ⑥ 盐酸。
3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定还原糖
3,5-二硝基水杨酸比色法----标准曲线的制作1.实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖10257 RP麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
2.实验材料、主要仪器和试剂2.1实验材料主要用到这些实验材料：红曲黄色素发酵液、钠虑膜浓缩后红曲黄色素液、旋转蒸发后红曲黄色素液。
2.2主要仪器本实验用到的实验仪器有：1)具塞玻璃刻度比色管：25mL×19；2)烧杯：100mL×4；3)三角瓶：100mL×1；4)容量瓶：100mL×3，50mL×3；5)刻度吸管：1mL×4；2mL×3；10mL×1；6)沸水浴；7)冰浴；8)扭力天平；9)UV—2802SH型紫外可见分光光度计尤尼柯（上海）仪器有限公司；2.3实验试剂1)1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
2)3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g DNS和262mL 2M NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
3．实验步骤制作葡萄糖标准曲线取7支25mL具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
DNS法测还原糖
4. 结果计算
还原糖（%）=
A×V定 W样×V测
× 100
其中： A——从标准曲线上求得的葡萄糖质量，mg V定——样品溶液定容的体积，mL W样——样品的质量，mg V测——测定时的取样体积，mL
此化合物在过量的氢氧化钠碱性溶液中呈桔红色在540nm波长处有最大吸收在一定浓度范围内其吸光度与还原糖含量呈线性关系适用范围及特点此法适用于各类食品中还原糖含量的测定具有准确度高重现性好操作简便快速等优点尤其适用于大批样品的测定
DNS法测还原糖
2. 适用范围及特点 此法适用于各类食品中还原糖含量的测定， 具有准确度高、重现性好、操作简便、快速 等优点，尤其适用于大批样品的测定。
ห้องสมุดไป่ตู้
3. 实验试剂 3，5－二硝基水杨酸溶液：称取6.5g 3，5 －二硝基水杨酸溶于少量水中，移入 1000mL容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠 溶液325mL，再加入45g丙三醇，摇匀， 冷却后定容到1000mL。
4. 测定方法
准确吸取0、 2、 3、 4、 5、6、 7mg/mL的 葡萄糖标准溶液各1mL，样液2mL，分别置 于25mL比色管中，各加入3，5－二硝基水杨 酸溶液2mL，用蒸馏水补齐至10mL刻度线， 置沸水浴中煮5min显色，然后以流水迅速冷 却，用水定容到25mL，摇匀。以空白调零， 在540nm处测定吸光度，绘制标准曲线，计 算样品中还原糖的含量。
DNS比色法测定还原糖和总糖
还原糖和总糖的测定(3,5-二硝基水杨酸比色法)一、实验目的1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类。
单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用各种糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。
对非还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成还原性单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(常以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，而氧化剂3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。
三、实验材料和试剂1、实验材料面粉2、实验试剂①1mg/ml葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。
②3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS和262ml 2M NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。
③碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100ml蒸馏水中。
④酚酞指示剂：称取0.1g酚酞，溶于250ml 70%乙醇中。
⑤6M HCl和6M NaOH各100ml。
四、实验器材具塞璃玻刻度试管：20ml×11 大离心管：50ml×2烧杯：100ml×1 三角瓶：100ml×1容量瓶：100ml×3 刻度吸管：1ml×1；2ml×2；10ml×1恒温水浴锅沸水浴离心机扭力天平分光光度计五、操作步骤1、制作葡萄糖标准曲线取7支具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。
02-DNS法测定还原糖
5.反应液中加入4ml蒸馏水，测定OD540值。
6.整理数据，计算还原糖含量和总糖含量。
7.完成实验报告，下次实验课交给任课老师。
六、注意事项
1．用移液管准确吸取所需试剂。 2. 放入沸水浴时把试管捆好，保证整齐。 3. 沸水浴中反应时不要盖盖子，时刻关注水 浴锅中的水位，及时添加水。
4.沸水浴结束后，可放入冷水浴或冰水浴加速
实验二 3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖
一、实验目的 二、实验原理 三、实验器材
四、材料与试剂
五、操作方法
六、注意事项
一、实验目的
1．掌握还原糖定量测定的原理和方法 2．掌握分光光度计的使用方法 3. 掌握标准曲线的制作方法
二、实验原理
1．还原糖的定义
2. 哪些糖是还原糖？
3. 还原糖测定的基本原理
三、实验器材
1. 常规的玻璃器皿 2. 分光光度计 波长：540nm 模式：ABS 比色皿 3. 沸水浴 注意安全
四、材料与试剂
1．原始实验材料
小麦粉
2. 其它试剂
6 mol/L HCl；6 mol/L NaOH；碘-碘化钾溶 液；1 mg/L葡萄糖溶液；3.5-二硝基水杨酸
五、操作方法
1．取13个试管，写好标记。 2.1-9号做葡萄糖标准曲线用（一个空白样）， 10-11号测还原糖，12-13号测总糖用。 3.根据教材上的表格添加相应试剂。 4.沸水浴中反应5min。
日下午1：00开始上课。
今天的值日：第3-4组
二、实验原理
还原糖测定的基本原理
棕红色化合物 540nm波长下 有最大吸收
标准曲线
• 标准曲线（英文为 standard curve）是指通 过测定一系列已知组分的标准物质的某理化性 质，而建立标准物质的物理/化学属性跟仪器 响应之间的函数关系。建立标准曲线的目的是 推导待测物质的理化属性。 • 标准液浓度选择一般应能包括待测样品的可能 变异最低与最高值。 • 通常情况下的标准工作曲线是一条过原点的直 线（直线方程回归，相关系数ROD值时，混匀试管，使其颜色均匀。 7. 测定OD值时，从浓度低到浓度高的顺序测 定，未知浓度样品最后测定。 8. 洗涤比色皿时，先冲洗污物后，用酒精冲
《还原糖的鉴定》课件
03
CHAPTER
还原糖鉴定的实验操作
实验材料
试管、滴管、酒精灯、火柴、糖样品（如葡萄糖、果糖、蔗糖等）、氢氧化钠溶液、硫酸铜溶液、斐林试剂等。
结果记录
记录实验过程中的现象和结果，并进行分析。
加热
将试管放入热水中加热，观察是否有砖红色沉淀生成。
滴加硫酸铜溶液
继续逐滴加入硫酸铜溶液，并不断搅拌，观察溶液的颜色变化。
Байду номын сангаас
还原糖鉴定可用于检测食品中的还原糖含量，确保食品质量和安全。
食品质量检测
在食品加工过程中，还原糖鉴定可用于研究食品加工工艺对糖类物质的影响，优化食品加工技术和配方。
食品加工技术
THANKS
感谢您的观看。
详细描述
碘液法需要控制碘的浓度和反应时间，以免影响实验结果；同时要注意观察颜色的变化，以便准确判断结果。
注意事项
灵敏度高、操作复杂
总结词
银氨溶液法是一种灵敏度较高的还原糖鉴定方法。银氨溶液与还原糖在常温下反应，生成银镜。该方法适用于鉴定含有醛基的还原糖，尤其适用于痕量分析。
详细描述
银氨溶液具有腐蚀性，操作时要小心谨慎；同时要避免阳光直射，以免引起爆炸。
单糖
双糖
多糖
双糖是由两个单糖分子通过脱水缩合形成的，如麦芽糖和乳糖。
多糖是由多个单糖分子通过聚合形成的，不具有还原性。
03
02
01
还原糖具有还原性，能够还原斐林试剂或托伦斯试剂。
还原性
还原糖在加热或与酸共热时，容易发生分解和聚合反应，生成有色物质。
稳定性
还原糖易溶于水，难溶于乙醇等有机溶剂。
溶解性
在基因工程、细胞培养等领域，还原糖鉴定可用于检测和鉴定生物样本中的糖类物质，为生物技术的开发和应用提供支持。
3,5-二硝基水杨酸比色法(DNS法)测定还原糖
3,5－二硝基水杨酸比色法(DNS法)测定还原糖
一．原理
3,5－二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，再一定范围内，还原糖的量与反应液的颜色强度成比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。
次法是半微量定糖法，操作简便、快速，杂质干扰较少，是一种很好的糖定量测定方法。
二．试剂
1. 3,5－二硝基水杨酸试剂(DNS试剂)
甲液－溶解6.9克结晶酚（苯酚）于15.2毫升10％氢氧化钠中，并稀释至69毫升，再此溶液中加入6.9克亚硫酸氢钠。
乙液－称取255克酒石酸甲钠，加到300毫升10％氢氧化钠中，再加入880毫升1％3,5－二硝基水杨酸溶液。
将甲液和乙液相混合即得黄色试剂，保存于棕色试剂瓶中，在室温下放置7－10天后使用。
2.0.1％葡萄糖标准液
准确称取100毫克分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100毫升，保存于冰箱备用。
三.制作标准曲线
取9支大试管，分别按表一顺序加入各种试剂。
表一
将上述各管溶液混后，在紫外可见分光光度计上用绿色滤光片(520nm) 进行比色测定，用空白管溶液调零，记录光密度值。
以光密度值为横坐标，以葡萄糖浓度为纵坐标，绘制标准曲线。
四.定糖
根据所取样品的个数来确定所需的试管数，在这里以7支试管为例，分别按表二顺序来加入各种试剂。
将各管混匀后，按制作标准曲线时的同样方法的操作，测定各管的光密度，在标准曲线上查出相应的还原糖含量，按下述公式计算出还原糖含量。
还原糖%= (还原糖毫克数⨯样品稀释倍数)/培养基中总含糖量⨯100
表二。
DNS法测还原糖
DNS法测还原糖
1、分析试剂
DNS显色剂每1000mlDNS溶液含有酒石酸钾钠182g，无水亚硫酸钠3g，氢氧化钠20g，3，5－二硝基水杨酸6.3g，重蒸馏酚4g。
配后过滤放置半月后使用。
1%葡萄糖标准溶液：准确称取100mg葡萄糖，用少量蒸馏水溶解后定容至100ml，冰箱保存备用.
10%ZnSO4溶液.
2、器材
分光光度计，定糖管，移液管，容量瓶，烧杯，电炉等。
[方法步骤]
（一）葡萄糖标准曲线的绘制
取9只定糖管（有盖子，且用绳子系住），分别按照下表1的顺序加入各种试剂，沸水浴中加热5min，后立即流动水冷却。
管内溶液混匀，用空白管溶液调零点，520nm测定光密度值(O.D.)，以葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标绘制葡萄糖溶液标准曲线。
表1 制作葡萄糖标准曲线时各试剂用量
样品液适当稀释，使糖浓度为0.1-1.0mg/ml，取稀释后的糖液1.0ml于15ml刻度试管中，加DNS试剂2.0ml，沸水煮沸2min，冷却后用水补足到15ml刻度，在540nm波长下测定吸光度。
从标准曲线查出葡萄糖mg/ml数。
求出样品中糖含量。
《还原糖的鉴定》PPT课件
二、实验步骤与现象
1.可溶性还原糖
选材：含糖量较高的白色或近于白色，苹果、梨最好 。
制应
取液：（２mL）
现象：
1、为什么要选白色或近于白色的材料进行试验？ 答：减少试验材料对试验现象的干扰，使得试验
现象明显。
2、为什么加入组织样液与菲林试剂后溶液或显 蓝色？
生物组织中可溶性 还原糖的鉴定实验
白糖
盐
味精
还原糖的鉴定方法
1 物理学方法：观察颜色、状态、气味； 直接品尝
小苏打/NaHCO3 元明粉/Na2SO4
葡萄糖
还原糖的鉴定方法
1 物理学方法：观察颜色、状态、气味； 直接品尝
2 化学方法： 斐林试剂、班氏试剂、银氨溶液等.
化学方法鉴定原理
用其它热源加热不易控制温度，很容易 导致反应失败，而且斐林试剂里的蓝色 氢氧化铜沉淀热稳定性较差，受热 （80℃以上）很容易分解生成黑色的氧 化铜沉淀和水，不能生成砖红色氧化亚 铜沉淀。
反应过程
热水浴 还原糖（葡萄糖、果糖） +菲林试
变色
剂 2-3min
2.用斐林试剂鉴定可溶性还原糖 时,溶液颜色变化过程 为
A.浅蓝色 棕色 砖红色
B.无色 浅蓝色 棕色
C.砖红色 D.棕色
浅蓝色 绿色
棕色 无色
实验步骤
斐林试剂由质量浓度为0.1g／mL的氢氧化 钠溶液和质量浓度为0.05g／mL的硫酸铜 溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡 蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的葡 萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的 Cu2O沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖 酸。
答：菲林试剂中的Cu(OH)2在溶液中显蓝色。
反应式
DNS法测定总糖和还原糖之欧阳治创编
实验九总糖和还原糖的测定（二）──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。
（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。
（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
（5）0.1% 酚酞指示剂。
（6）6 mol/L HCl溶液2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。
3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。
四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 水杨酸溶液(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5葡萄糖含量(mg)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。
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笨，没有学问无颜见爹娘 ……” • “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
二、实验原理
1．还原糖的定义 2. 哪些糖是还原糖？ 3. 还原糖测定的基本原理
实验二 3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖
一、实验目的 二、实验原理 三、实验器材 四、材料与试剂 五、操作方法 六、注意事项
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一、实验目的
1．掌握还原糖定量测定的原理和方法 2．掌握分光光度计的使用方法 3. 掌握标准曲线的制作方法
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精品资料
• 你怎么称呼老师？ • 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你
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二、实验原理
还原糖பைடு நூலகம்定的基本原理
棕红色化合物 540nm波长下
有最大吸收
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标准曲线
标准曲线（英文为 standard curve）是指通 过测定一系列已知组分的标准物质的某理化性 质，而建立标准物质的物理/化学属性跟仪器 响应之间的函数关系。建立标准曲线的目的是 推导待测物质的理化属性。
下次实验：实验八 氨基酸的纸层析 4月4日的课由于清明放假顺延一周，即4月11
日下午1：00开始上课。 今天的值日：第3-4组
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六、注意事项
6. 测定OD值时，混匀试管，使其颜色均匀。
7. 测定OD值时，从浓度低到浓度高的顺序测
定，未知浓度样品最后测定。
8. 洗涤比色皿时，先冲洗污物后，用酒精冲 洗几遍，晾干。禁止用硬质毛刷洗涤。
9. 计算浓度时注意稀释倍数。
10.作图注意加标注和单位。
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六、注意事项
标准液浓度选择一般应能包括待测样品的可能 变异最低与最高值。
通常情况下的标准工作曲线是一条过原点的直 线（直线方程回归，相关系数R2）。
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三、实验器材
1. 常规的玻璃器皿 2. 分光光度计 波长：540nm 模式：ABS 比色皿 3. 沸水浴 注意安全
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四、材料与试剂
1．原始实验材料 小麦粉
4.沸水浴中反应5min。
•反应液中加入4ml蒸馏水，测定OD540值。
2.整理数据，计算还原糖含量和总糖含量。
3.完成实验报告，下次实验课交给任课老师。
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六、注意事项
1．用移液管准确吸取所需试剂。 2. 放入沸水浴时把试管捆好，保证整齐。 3. 沸水浴中反应时不要盖盖子，时刻关注水 浴锅中的水位，及时添加水。 4.沸水浴结束后，可放入冷水浴或冰水浴加速 冷却。
2. 其它试剂 6 mol/L HCl；6 mol/L NaOH；碘-碘化钾溶 液；1 mg/L葡萄糖溶液；3.5-二硝基水杨酸
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五、操作方法
1．取13个试管，写好标记。
2.1-9号做葡萄糖标准曲线用（一个空白样）， 10-11号测还原糖，12-13号测总糖用。
3.根据教材上的表格添加相应试剂。