离体血脑屏障模型的建立
药代动终版
08级药代动期末考参考资料名词解释1. 清除率CL ：单位时间，从体内消除的药物表观分布容积数，总清除率CL 等于总消除速率dx/dt 对全血或血浆药物浓度c 的比值，也就是说消除速率dx/dt=cl*c 。
2. 稳态坪浓度：为达到稳态后给药间期τ内AUC 与τ的比值。
c=AUC/τ，该公式的实质：对稳态各个时间点的浓度的时间长度权重平均。
3. 代谢分数：fm ，代谢物给药后代谢物的AUC 和等mol 的原型药物给药后代谢物的AUC的比值。
4. 负荷剂量（Loading Dose ）：凡首次给药剂量即可使血药浓度达到稳态的剂量。
5. 非线性药物动力学：药物动力学参数随剂量（或体内药物浓度）而变化，如半衰期与剂量有关，这类消除过程叫非线性动力学过程，也叫剂量依赖性动力学过程。
6. 非线性消除：药物在体内的转运和消除速率常数呈现为剂量或浓度依赖性，此时药物的消除呈现非一级过程，一些药动学参数如T1/2,CL,不再为常数，AUC 、Cmax 等也不再与剂量成正比变化。
7. 清洗期（必考）：交叉实验设计中两个周期的间隔称为清洗期，至少间隔药物的7~9个清除半衰期。
如果清洗期不够长，第一轮服药在血液中的残留对第二轮产生干扰。
存在不等性残留效应，第二轮数据就无效了。
8. 后遗效应（必考）：在生物等效性试验交叉设计中，由于清洗期不够长，第一轮服药在血液中的残留对第二轮产生的干扰称为后遗效应。
9. 物料平衡：指药物进入体内后的总量与从尿液、粪便中收集到的原型药及代谢物等的总量是相等的。
10. 药物转运体：存在与细胞膜上的能将药物向细胞外排的一类功能性蛋白质或者多肽。
11. 介质效应：由于样品中存在干扰物质，对响应造成的直接或间接的影响。
12. MAT ：mean absorption time 即平均吸收时间。
公式为MAT=MRT oral – MRT iv13. 波动系数：FD ，研究缓控释剂得到稳态时的波动情况，av /c -c ssmin ss max C FD ）（ 14. 平衡透析法：测定药物蛋白结合率的一种方法，该方法是以半透膜将血浆与缓冲液隔开，将药物加入缓冲液中，待药物扩散达到平衡后测定半透膜两侧的药物浓度，并计算出药物的蛋白结合率。
先导化合物结构优化策略_四_改善化合物的血脑屏障通透性
试、脑摄取指数、原位脑灌注、静脉注射法、定量自 动射线照相法、脑微透析法、脑脊液测定法、正电子 成像法和核磁共振成像法等[10](表 5)。 4 通过结构优化改善血脑屏障透过性质
HONG Yu1, 2, ZHOU Yu2, WANG Jiang2, LIU Hong1, 2*
(1. School of Pharmacy, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China; 2. Key Laboratory of Receptor Research, Shanghai Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 201203, China)
只能测量血脑屏障的速率不能预测体体内血脑屏障通透性测定模型名称优点缺点体内药动学测试bpkplogbb数据可靠筛选效率低费用高消耗资源多脑摄取指数法快速适合于易代谢的药物药物在脑部暴露时间短射的药物不能全部进入脑部原位脑灌注实验更加准确避免快速代谢需同位素标记及对照化合筛选效率较低静脉注射技术灵敏度高实验难度增加实验难度定量自动射线照相法操作简单花费较少不能较好地区分药物代谢物及与蛋白结合的药物脑微透析法数据可靠筛选高效费用低该法要求分析方法的灵敏度较高缺乏转运体受非特异性结合影响脑脊液测定法11取样难度低脑脊液周转迅速易受外排等因素的影响正电子成像非侵入型快速重现性高灵敏度高药物代谢物及结合蛋白的药物不易区分备较为复杂昂贵核磁共振成像非侵入型灵敏度高昂贵不宜作日常筛选方法部分用于预测化合物理化性质参数及血脑屏障通透性的商业软件软件名称软件开发公司网址admetus中国科学院上海药物研究所药物发现与设计中心http
血脑屏障由脑毛细血管内皮及其细胞间的紧密 连接、基底膜、周细胞以及星形胶质细胞等围成的神 经胶质膜构成, 其中内皮细胞是血脑屏障的主要结 构, 中枢药物必须透过内皮细胞才能进入脑细胞。除 内皮细胞与星形胶质细胞等形成的物理屏障外, 血 脑屏障还包括各种酶与转运体形成的生化屏障[5]。
血脑屏障2013.11
4.神经血管单元 (Neurovascular Unit)
神经血管单元 (Neurovascular Unit， NVU): 组成血脑屏障的各成分与邻近 的神经细胞共同组成的功能单位，主 要以旁分泌的方式在生理和病理条件 下相互影响、相互作用。包括神经元、 星形胶质细胞、小胶质细胞、血管内 皮细胞、血管周细胞、基底膜以及细 胞外基质。
周细胞(Pericyte)
• 属于血管平滑肌细胞系 • 与内皮细胞共用基膜 • 与内皮细胞之间存在特化连接
周细胞
包裹脑微小/毛细血管30%-70%
周细胞的功能
周细胞的缩血管作用
星形胶质细胞终足(Astrocyte end-foot)
调节水分子进出脑组织 调节电解质代谢 调节小血管通透性
NVU in Alzheimer's Disease
5.其它血脑屏障相关疾病
狂犬病 帕金森病 精神分裂症 慢性病理性疼痛 中枢神经系统创伤 肌萎缩脊髓侧索硬化症
……
Nearly all large-molecule pharmaceutics & 98% of small molecules
阿尔兹海默氏病 (Alzheimer’s disease)
进行性认知障碍，以神经毒性Аβ在血管和脑实质中的聚集、神经 元损害以及神经缠结为病理特征。
Amyloid peptide β (Аβ) 发挥中心作用
Аβ内向流
BBB 对Аβ的清除
3.其它血脑屏障开放的情况
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体外血脑屏障穿透实验原理
体外血脑屏障穿透实验原理为了模拟体外血脑屏障穿透实验，我们首先需要准备一些实验材料和设备。
这些设备包括血脑屏障模型、细胞培养设备、药物或标记物质等。
血脑屏障模型可以是体外培养的细胞层，也可以是动物或人体组织的切片。
细胞培养设备包括培养皿、培养液和培养箱等。
在实验开始之前，我们需要将血脑屏障模型放置在细胞培养设备中，并添加适当的培养液。
然后，我们将待测物质（比如药物或标记物质）加入到培养液中。
待测物质可以是已知的药物，也可以是新开发的候选药物。
在实验过程中，我们可以使用不同的浓度和时间来观察待测物质在血脑屏障模型中的穿透情况。
血脑屏障穿透实验的原理基于被动扩散和主动转运两种方式。
被动扩散是指物质在浓度梯度的驱动下自由穿过血脑屏障。
这种方式适用于一些小分子药物，它们可以通过血脑屏障细胞间间隙或通过脂溶性渗透到脑组织中。
然而，对于大分子药物或亲水性物质来说，被动扩散的穿透性非常有限。
主动转运是指通过特定的转运蛋白将物质从血液一侧转运到脑组织一侧。
这些转运蛋白可以是ABC转运体、载体蛋白或离子通道等。
这种方式通常需要能量消耗，并且对于药物的选择性非常高。
因此，研究血脑屏障穿透性需要考虑到这些转运蛋白的特性和功能。
在实验过程中，我们可以使用不同的方法来评估待测物质的穿透性。
常用的方法包括透过率测定、分子量切割和转运蛋白活性测定等。
透过率测定可以通过测量物质在血脑屏障模型中的浓度变化来评估其穿透性。
分子量切割是指根据待测物质的分子量来判断其是否能够穿透血脑屏障。
转运蛋白活性测定可以通过测量转运蛋白在血脑屏障模型中的表达和功能来评估其对待测物质的转运能力。
通过体外血脑屏障穿透实验的研究，我们可以获得许多有关药物或其他物质在血脑屏障中的穿透性和转运机制的信息。
这些信息对于药物研发和脑组织疾病的治疗非常重要。
然而，需要注意的是，体外血脑屏障穿透实验只是模拟了血脑屏障的一部分特性，实际情况可能会更加复杂。
因此，在进行实验研究时，我们需要结合其他方法和技术来更全面地了解血脑屏障的穿透性。
体外血脑屏障模型建立
体外血脑屏障模型建立
体外血脑屏障模型建立是一项重要的实验技术，该技术可以用来模拟人体的血脑屏障功能，以研究药物透过血脑屏障的能力，从而为药物研发提供更加准确的实验数据。
建立体外血脑屏障模型的过程主要分为以下几个步骤：首先，需要从动物（例如小鼠）的脑部获取毛细血管，然后将这些毛细血管培养在细胞培养皿中。
其次，需要向这些毛细血管中加入人类脑部内皮细胞（BMEC），这些细胞可以在培养皿中生长并形成一层膜状结构。
最后，将实验所需的药物或其他物质加入培养皿中，以观察其是否能够通过膜状结构进入毛细血管内。
通过建立体外血脑屏障模型，可以更加准确地评估药物的透过血脑屏障的能力，从而为药物研发提供科学依据。
同时，这项技术也可以用来研究血脑屏障的结构和功能，为神经系统疾病的治疗提供更深入的理解和探索。
- 1 -。
跨血脑屏障的主要途径和机制
跨血脑屏障的主要途径和机制一、血脑屏障的结构与功能血脑屏障是由大脑微血管内皮细胞组成的一种特殊的生理屏障,主要功能是保护大脑免受外源性物质的侵害,维持大脑内稳态环境。
血脑屏障由内皮细胞、基底膜、周细胞和星形胶质细胞构成,其中内皮细胞通过紧密连接形成一个高度选择性的物理屏障,阻止大多数分子跨膜扩散。
血脑屏障的形成和维持依赖于内皮细胞与周围细胞之间的相互作用。
星形胶质细胞分泌多种生长因子,如转化生长因子β(TGF-β)和血管内皮生长因子(VEGF),促进内皮细胞分化并形成紧密连接,从而增强血脑屏障的屏障功能。
同时,周细胞也参与到血脑屏障的建立和维持过程中,通过分泌一些信号因子调节内皮细胞的通透性和极性。
然而,血脑屏障对于许多药物和神经递质的通过具有高度的选择性,这也成为中枢神经系统(CNS)疾病治疗的一大障碍。
因此,如何有效跨越血脑屏障成为神经药物递送领域的关键问题之一。
二、跨血脑屏障的主要途径为了克服血脑屏障的阻隔作用,研究者已经发现了几种主要的跨血脑屏障的途径,包括被动扩散、载体介导转运、受体介导转运以及通过破坏屏障完整性的途径等。
被动扩散被动扩散是最为简单直接的跨血脑屏障的方式,主要取决于药物分子的理化性质,如分子量、脂溶性、电荷等。
一般来说,分子量小于400 Da、高度脂溶性且电中性的小分子更容易通过被动扩散进入大脑。
在这种情况下,药物分子可以穿透内皮细胞膜,进入大脑组织。
然而,大多数神经递质和药物分子并不满足这些性质要求,因此被动扩散并不能有效作用于CNS疾病的治疗。
因此,研究者开发了其他一些跨屏障的策略。
载体介导转运内皮细胞膜上存在各种营养物质转运蛋白,如葡萄糖转运蛋白(GLUT)、L-亮氨酸转运蛋白(LAT)等,可以介导一些内源性分子如葡萄糖、氨基酸等跨膜转运进入大脑。
利用这些天然的转运蛋白,研究者设计了一些载体介导的跨屏障递送策略。
例如,将待递送的神经药物偶联到葡萄糖或氨基酸等小分子上,利用GLUT或LAT转运蛋白实现跨膜转运。
血脑屏障研究方法
血脑屏障研究方法The study of the blood-brain barrier (BBB) is crucial for understanding the complex interactions between the brain and the circulatory system. 血脑屏障（BBB）的研究对于理解大脑和循环系统之间复杂的相互作用至关重要。
One common method used to study the BBB is the use of in vitro models. These models involve growing primary cells from the brain, such as endothelial cells, astrocytes, and pericytes, in a controlled environment to mimic the structure and function of the BBB. 一种常用的研究BBB的方法是使用体外模型。
这些模型涉及在受控环境中培养来自大脑的原代细胞，如内皮细胞、星形胶质细胞和周细胞，以模拟BBB的结构和功能。
Another method involves the use of in vivo animal models, such as rodents, to investigate the BBB. Researchers can administer specific molecules or drugs and observe their transport across the BBB inreal-time, providing valuable insights into the permeability and integrity of the barrier. 另一种方法涉及使用体内动物模型，如啮齿类动物，来研究BBB。
异钩藤碱对阿尔茨海默病及其他中枢神经系统疾病的药理作用研究进展
异钩藤碱对阿尔茨海默病及其他中枢神经系统疾病的药理作用研究进展罗小金【摘要】Isorhynchophylline ( IRN) is an alkaloid isolated from Uncaria rhynchophylla .IRN mainly acts on cardiovascular and central nervous systems diseases including hypertension , brachycardia and sedation .In recent years , it has been found that IRN has widespread pharmacological effects in central nervous disease .This review aim at reviewing neuroprotective activities of Isorhynchophyl-line on Alzheimer′s disease and other central nervous systems diseases via improving learning and memory impairments , inhibiting Tau protein hyperphosphorylation , antagonizing β-Amyloid-iInduced neurotoxicity , and reducing glia-secretory inflammatory factors .%异钩藤碱( Isorhynchophylline , IRN)是从茜草科中药钩藤抽取提的具有较强药理活性的羟吲哚生物碱. 除已被临床应用于治疗心血管疾病外,近年来研究发现,其对中枢神经系统具有广泛的药理学作用. 文中就IRN通过改善认知和记忆功能损伤、拮抗β淀粉样蛋白(β-amyloid ,Aβ)诱导的神经毒性、抑制Tau蛋白过度磷酸化和减少胶质细胞释放炎性因子等途径,对阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)及其他中枢神经系统提供神经功能保护的药理作用机制作一综述.【期刊名称】《医学研究生学报》【年(卷),期】2015(028)010【总页数】4页(P1112-1115)【关键词】异钩藤碱;阿尔茨海默病;中枢神经系统;药理作用【作者】罗小金【作者单位】519041 珠海,遵义医学院生理教研室【正文语种】中文【中图分类】R285.50 引言阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是老年痴呆中最为常见的类型，以学习、记忆功能大量缺失和认知功能缺陷为临床特征的神经退行性疾病，病理学特征为细胞外β淀粉样蛋白(β-amyloid，Aβ)大量蓄积导致的老年斑形成和细胞内Tau蛋白过度磷酸化导致的神经原纤维大量缠结(neurofibrilary tangles tangles，NFTs)。
体外血脑屏障的建立
体外血脑屏障的建立李联平;蒋莹【摘要】目的：利用大鼠脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞于体外建立血脑屏障。
方法分别取10只出生7～10 d、2只出生1～3 d的SD大鼠，断头处死后取脑组织，分别分离培养脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞，采用免疫细胞染色方法鉴定脑微血管内皮细胞，以脑微血管內皮细胞因子Ⅷ作为标记抗原，以神经胶质原纤维酸性蛋白（ GFAP）作为标记抗原鉴定星型胶质细胞。
以非接触方式共培养脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞的方法建立体外血脑屏障。
接种12 d将电极插入待测Transwell小室（培养模型）、细胞培养液、空白Transwell小室（细胞培养液为媒介）。
测定跨膜电阻、测算荧光素钠渗透系数（ Pe），衡量模型完整性。
结果接种12 d时，模型、细胞培养液、空白Transwell小室的电阻值分别为180、64、112Ω／cm2。
接种12 d时模型Pe为（4．67±0．4）×10－6 cm／s。
结论成功建立体外血脑屏障，屏障效应较好、完整性较高。
【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2016(056)027【总页数】3页(P28-29,30)【关键词】血脑屏障;细胞屏障;动物实验;大脑;脑微血管内皮细胞;星型胶质细胞【作者】李联平;蒋莹【作者单位】海军总医院，北京100048;北京市肛肠医院【正文语种】中文【中图分类】R741血脑屏障是血液与脑组织间的一种特殊屏障，由微血管内皮、基膜和星型胶质细胞等构成，其中内皮细胞是血脑屏障的主要结构。
血脑屏障具有保证脑的内环境高度稳定、保护中枢神经系统的活动机能、阻止微生物和毒素等异物侵入脑组织的功能。
以往在体血脑屏障动物实验存在动物脑组织内药物浓度较低无法准确测量、动物体内影响因素较多等缺点。
血脑屏障模型的研究主要经历了脑血管碎段模型、脑微血管内皮细胞模型的构建、星型胶质细胞和血管内皮细胞共同模型的培养等3个阶段[1]。
但目前尚无统一模型鉴定标准[2，3]。
中药药理研究思路与方法
proximal section of the LDLR mRNA 3’UTR.
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Figure-3 Blocking ERK activation abolished the regulatory effect of BBR on LDLR.
Figure-3(a) The activity of BBR on LDLR expression was most sensitive to U0126.
Treatment of hyperlipidemic hamsters with BBR reduced serum cholesterol by 40% and LDL-cholesterol by 42%,with a 3.5-fold increase in hepatic LDLR mRNA and a 2.6-fold increase in hepatic LDLR protein.
Using human hepatoma cells,BBR upregulates LDLR expression independent of sterol regulatory element binding proteins, but dependent on ERK activation.
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四、中药药理学研究模式
1.中药单体的研究
中药
化学单体
构建化学组分库
高通量筛选
整体动物实验 组织器官
细胞亚细胞 分子生物学
阐明机理
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例-1
Berberine is a novel cholesterol-lowering drug working through a unique mechanism distinct from statins
口服吸收研究方法与口服制剂吸收促进剂蒋学华-国际药用辅料网
口服吸收研究方法与口服制剂吸收促进剂蒋学华,金朝辉四川大学华西药学院，成都，610041摘要：口服给药制剂欲发挥全身作用，吸收是关键。
为了提高口服药物制剂的生物利用度，常常使用吸收促进剂。
本文就目前常用的吸收研究方法、吸收促进剂及其促吸收机理作一综述。
药物的吸收是指药物从给药部位向血液循环系统转运的过程，主要是通过胃肠道以及肺泡、皮肤、鼻粘膜和角膜等部位的上皮细胞（epithelial cells）进行的。
除血管内给药，药物应用后都要经过此过程，药物疗效如何，吸收是关键。
但药物的吸收受到诸多因素的影响，如药物的溶解性、解离度、溶出度、粘膜透过性、首过效应，以及胃肠道的生理因素等。
对于一些极性大、脂溶性差、分子量大的药物，由于其不易通过生物膜，口服生物利用度通常较低【1】。
提高药物口服生物利用度的途径主要有两个，一是改变药物物理化学性质，提高其透膜能力或改善其溶解特性，如微粉化技术、固体分散体技术、包合技术、前体药物制备技术等；另一途径是改善膜的特性以提高药物的膜透过性，或外排泵的抑制，以阻止机体对吸收药物的外排。
本文将改善膜的特性与外排泵抑制所用辅料统称为吸收促进剂【2】，拟就吸收促进剂研究的手段、吸收促进剂的种类及作用机理进行综述介绍。
1 口服吸收常用的研究方法与模型【3】口服吸收促进剂的研究，需考察其对药物口服吸收过程的影响。
目前，药物口服吸收的试验动物常用鼠、犬、猪等，研究方法主要有离体肠段模型、Caco-2细胞模型、BBMEC模型、肠段结扎法、外翻内脏液囊改良技术、在体灌流试验法和体内试验方法等。
1.1离体肠段模型该方法系将动物离体肠段固定在扩散池中间，测定药物通透性。
扩散池常用Ussing Chamber 体系，为了维持离体组织的活性，一般通入95％O2～5％CO2。
该模型常用于考察促进剂作用的部位差异及促进剂的筛选。
1.2 Caco-2细胞模型目前，用于评价辅料对药物渗透性影响的方法还很局限，Caco-2细胞模型是目前常用的方法。
血脑屏障的结构与功能研究进展
血脑屏障的结构与功能研究进展王顺蓉,张 英综述,李著华审校(泸州医学院病理生理教研室,泸州 646000) 哺乳动物中枢神经系统为了有效地执行其功能,需要一个超稳定的内环境,这一内环境稳定性的维持,依赖于血脑屏障(Blood Brain barrier,BBB)。
BBB是由无窗孔的毛细血管内皮细胞及细胞间紧密连接、基膜、周细胞、星形胶质细胞足突和极狭小的细胞外隙共同组成的一个细胞复合体,是存在于脑和脊髓内的毛细血管与神经组织之间的一个动态的调节界面。
研究认为这个界面不单纯是被动保护性屏障,还能选择性地将脑内有害或过剩物质泵出脑外,保持脑的内环境稳定。
BBB中的脑毛细血管内皮细胞(Brain Microvascular Endothilial Cells, BMECs)具有与机体其它部位的毛细血管内皮细胞不同的特殊结构与功能。
目前已证实:BBB的屏障作用的主要由覆盖在脑毛细血管腔面的BMECs及其细胞间紧密连接完成。
星形胶质细胞仅参与诱导和维持BBB的特性。
1 血脑屏障的屏障功能 血脑屏障功能由机械性作用、载体、受体介导的运送系统及酶等共同参与构成。
1.1 机械的屏障功能 BMECs之间几乎没有间隙,近管腔面为紧密连接(环绕成带),胞内吞饮小泡数目极少、细胞内收缩蛋白少,细胞不易皱缩及高阻抗(限制离子通过)的存在,形成BBB的机械屏障;内皮细胞之间有紧密连接使内皮层形成一个完整的屏障界面,胶质细胞产生的可溶性分子促进紧密连接的形成,从而限制BBB的通透性;内皮细胞外存在带负电的基底膜,主要对内皮细胞起支撑作用,防止由于静脉压改变导致的毛细血管变形。
特殊的结构使脑微血管内皮细胞更具上皮细胞的特点,使血液中的溶质只能由内皮细胞的特异性转运系统进入脑,而不能像机体其它部位那样,可以经由内皮细胞裂隙,细胞内孔道或吞饮作用通过血管,但脑的毛细血管并非全部为“紧密结合”的内皮细胞层,少数区域结合疏松,呈网络状。
离体血脑屏障模型的建立的开题报告
离体血脑屏障模型的建立的开题报告一、研究背景血脑屏障是由脑血管内皮细胞、基底膜和周围神经胶质细胞（如星形胶质细胞）组成的一种物理屏障，它能够限制大部分物质（如多数药物）的自由通过，从而维护脑组织的稳定和功能。
但是，一些药物（如化疗药物和抗病毒药物）需要穿过血脑屏障才能发挥治疗作用。
因此，研究离体血脑屏障模型是非常必要的。
目前，许多研究都使用小鼠或大鼠的离体脑切片来构建离体血脑屏障模型。
但是，这种方法具有一些局限性，如脑损伤和细胞死亡等，导致结果可能不太一致。
因此，研究离体血脑屏障模型的建立和优化，具有非常重要的意义。
二、研究内容和目的本文旨在建立一种优化的离体血脑屏障模型，使用人类血脑屏障内皮细胞和星形胶质细胞，在维持其功能性和结构完整性的同时，能够方便地用于高通量筛选试验或毒理学研究。
研究内容包括：1. 优化培养条件：选择合适的培养基、培养时间和温度，以确保血脑屏障的功能性和结构完整性。
2. 特异性检测：使用荧光探针、RT-PCR或Western blot等方法，检测血脑屏障相应蛋白的表达，确认模型的特异性。
3. 通过透过性的变化来评估模型的可靠性。
三、研究方法1. 准备细胞：使用新鲜的人类脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞，分别培养和展开至足够的数量和质量，存放在液氮中备用。
2. 建立模型：在体外培养解冻后的人类脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞，加入适宜的培养基和培养条件（如温度、压力等），孵育一定的时间。
3. 测定透过性：使用修饰过的荧光探针、FITC-蛋白和荧光染料（如草酸二乙酯）等，将其加入到上清液中，测量透过性。
4. 模型特异性检测：使用RT-PCR或Western blot等方法，检测血脑屏障相应蛋白的表达，确认模型的特异性。
四、预期结果完成本文研究后，可以预期得到以下结果：1. 建立一种功能性好、结构完整的离体血脑屏障模型。
2. 模型能够用于高通量筛选试验或毒理学研究，可靠性较高。
3. 可以发现一些新型物质或药物，通过或发挥其作用的能力。
体外血脑屏障模型构建
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四川大学硕士学位论文
摘要
两种含铜宫内节育器（IUD）铜离子初期体外释放规 律及细胞毒性的研究
药剂学专业
研究生：张川川 指导教师：蒋学华，奚廷斐
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Abstract
四川大学硕士学位论文
Study on cytotoxicity and the in vitro copper release of TCu220c and TCu380A
Major: Pharmaceutics Science Student: Chuanchuan Zhang, Professor: Xue-hua Jiang, Ting-fei Xi
因此，在临床应用中，建议进一步结合实践，全面考察两种含铜宫内节育 器的不良事件，由暴释现象引起的置器后的不适和异常出血等副作用的发生率， 带器妊娠的发生率等，以明确不同含铜面积的宫内节育器的毒性问题。词：宫内节育器，TCu220c ，TCu380A，细胞毒性，细胞周期，细胞凋亡
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四川大学硕士学位论文
first day, which is 10 times higher than that of TCu220c (~38μg/d) at pH 5.8 on the third day. Copper release depends on the pH value of the SUS, the copper surface area of the Cu-IUD and the behavior of the copper surface finish. In genera l, the most important change of decreases in the corrosion rate took place during the first 15 days of the exper iment; and then the corrosion rate drops dramatica lly, and a steady state of corrosion was observed. This behavior has been attributed to a protective effect of the deposition la yers formed on copper. SEM showed the deposition la yers formed on the TCu-IUD and P, Cl, Ca, Na, K and Cu signa ls were defined by EDX in the corrosion product la yers. And as the pH value decreased，the ratio of Cu decreased which was opposite to the ratio of C、Ca、O.
血脑屏障的研究现状
血脑屏障的研究现状血脑屏障（blood-brain barrier，BBB）是由脑内血管内皮细胞、基底膜和星形胶质细胞等组成的一种天然屏障，它可以有效地隔离脑组织与循环血液之间的物质交换，维护了神经系统的正常结构和功能。
BBB是神经科学研究中的重要问题之一，其研究对于探究神经药理、治疗神经系统疾病及病理性损伤都具有很重要的意义。
BBB的形成和结构BBB隔离了脑组织与外界环境的交换，因此其形成和结构具有显著的特殊性和复杂性。
BBB主要由内皮细胞、基底膜和星形胶质细胞构成，其中内皮细胞紧密连结，形成了血-脑屏障的主体。
此外，基底膜和星形胶质细胞也对血-脑屏障的形成和功能具有重要影响。
BBB的专一性选择BBB具有对大多数药物、染料和蛋白质的选择性通过性能，只有少数特定物质可以通过。
BBB的通过性严格受到内皮细胞的调控，它可以让必需的营养物质和化合物通过，同时阻止有害物质进入脑组织中。
BBB的破坏和修复BBB的破坏可能导致各种神经系统疾病，例如多发性硬化症（multiple sclerosis）、肿瘤和脑积水等。
近年来，许多研究揭示了BBB的修复机制。
BBB的修复可以通过多种途径实现，包括内皮细胞的再生和血管内皮生长因子（VEGF）等的作用。
BBB的研究方法BBB的研究方法涉及到分子生物学、生物化学、生理学和分析化学等多个领域。
研究BBB的方法包括离体和体内的技术手段。
离体技术包括分离BBB微血管、保持细胞活力并测定其通透性或转运能力，以及体外培养脑组织细胞等方法。
体内技术包括放射性同位素示踪、生物荧光标记和电子显微镜等。
BBB的药物递送BBB作为神经系统的屏障，防止多数分子和药物抵达神经系统。
因此，BBB的药物递送是神经科学领域中研究的一个前沿课题。
与常规治疗方法相比，药物递送的方法更有效，需要较小的剂量，并且非侵入性。
结语BBB是神经科学研究中的重要问题之一，其研究对于探究神经药理、治疗神经系统疾病及病理性损伤都具有很重要的意义。
体外血脑屏障穿透实验原理
体外血脑屏障穿透实验原理引言:体外血脑屏障穿透实验是一种常用的实验方法，用于研究血脑屏障的通透性以及药物在血脑屏障上的转运机制。
本文将围绕体外血脑屏障穿透实验的原理展开介绍。
一、血脑屏障的作用和特点血脑屏障是指由血脑屏障系统组成的生物屏障，它位于脑血管和神经元之间，起到保护和维护大脑内部环境稳定的作用。
血脑屏障由血脑屏障系统的两个主要组成部分构成，即血脑屏障内皮细胞和脑脊液分泌系统。
血脑屏障的主要特点有：1. 高选择性通透性：血脑屏障对一些物质具有高选择性通透性，如葡萄糖等营养物质能够自由通过，而大多数药物和有毒物质则难以穿过血脑屏障。
2. 限制性通透性：血脑屏障限制了血浆中大分子物质和细胞成分的通过，防止它们进入脑组织。
3. 主动转运机制：血脑屏障内皮细胞具有主动转运机制，能够通过特定的转运蛋白将一些物质从血浆侧转运至脑组织侧。
二、体外血脑屏障穿透实验原理体外血脑屏障穿透实验通过模拟体外环境，可以研究药物在血脑屏障上的穿透性和转运机制。
实验通常包括以下几个步骤：1. 血脑屏障模型的建立：体外血脑屏障模型可以使用血脑屏障内皮细胞株、小鼠脑微血管内皮细胞等进行构建。
这些细胞在培养基中生长和分化，形成紧密连接的细胞层，模拟真实的血脑屏障。
2. 药物的添加和培养：在血脑屏障模型中添加待研究的药物，并进行培养，通常是在体外细胞培养箱中，模拟体内环境，如恒温、恒湿、含有适当气体的培养箱中进行。
3. 采样和检测：在一定时间内，通过取样的方式获取培养液，然后使用适当的分析方法，如高效液相色谱法、质谱法等，对药物的浓度进行检测和分析。
4. 数据处理和分析：根据实验结果，可以计算药物通过血脑屏障的透过率、转运速率等参数，评估药物在血脑屏障上的穿透性和转运机制。
三、体外血脑屏障穿透实验的应用体外血脑屏障穿透实验广泛应用于药物研究和开发领域，具有以下几个方面的应用价值：1. 药物筛选和评价：通过体外血脑屏障穿透实验，可以对大量药物进行筛选和评价，评估药物在血脑屏障上的通透性，从而为新药开发提供指导。
血脑屏障渗透模型PAMPA的构建及其条件优化
血脑屏障渗透模型PAMPA的构建及其条件优化FU Ying;LYU Jinpeng;LI Wenjian;DING Shumin;LIU Li;SONG Guoqiang【摘要】平行人工膜渗透模型(parallel artificial membrane permeation assay,PAMPA)主要以人工磷脂作为生物膜来模拟药物跨膜的屏障,能测定通过被动扩散途径跨过血脑屏障的药物,该模型操作简单,成本低.以实验室合成的化合物为研究对象,在MultiScreen?96-well板上铺一层牛脑磷脂的十二烷溶液作为PAMPA 模型,并通过高效液相色谱(HPLC)测定化合物的血脑屏障渗透率.实验中发现亲脂性化合物水溶性较差,需要添加助溶剂以帮助溶解,因此考察了4种助溶剂(DMSO、乙腈、乙醇、正丙醇)对化合物溶解度的影响及助溶剂含量对磷脂膜完整性的影响,最终选择了浓度为10％的正丙醇做为助溶剂来进行渗透实验,测得了各个化合物的渗透率,并筛选出了渗透率最好的化合物,为将来的药物开发提供指导.【期刊名称】《常州大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2019(031)004【总页数】7页(P86-92)【关键词】平行人工膜渗透模型;血脑屏障;助溶剂;磷脂膜;渗透率【作者】FU Ying;LYU Jinpeng;LI Wenjian;DING Shumin;LIU Li;SONG Guoqiang【作者单位】;;;;;【正文语种】中文【中图分类】TK8血脑屏障(Blood Brain Barrier，BBB)是一种保护大脑免受血液循环中有害物质的影响，并调节特定分子从血液进入中枢神经系统(central nervous system，CNS)的膜 [1-2]。
血脑屏障包括脑毛细血管内皮细胞形成的血浆与脑细胞间的屏障和脉络丛形成的血浆与脑脊液间的屏障，这些屏障能够限制物质(多半为有害物质)在血液和脑组织之间的自由交换，并对不同的物质有不同的通透性[3-4]。
血脑屏障[严选材料]
![血脑屏障[严选材料]](https://img.taocdn.com/s3/m/8b71f6499ec3d5bbfc0a7406.png)
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4.决定血脑屏障通透性的因素
• 物质的脂溶性 • 物质的亲水性 • 与血浆蛋白的结合程度 • 载体转运系统 • 发育的影响 ……
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5.血脑屏障各组分详解
血管腔面
a
内皮细胞
b
紧密连接
c
基膜
d
周细胞
e4
星星形形胶胶质质细细胞胞终终足足
Basement membrane Pericytes
End -feet of astrocytes
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中枢和外周毛细血管的差别
外周
CNS
内皮细胞
有窗孔、多小泡
无窗孔、缺乏小泡
内皮细胞连接
有间隙
紧密连接
周细胞
很少
有
基膜
无
胶质细胞
无
有 星形胶质细胞终足
内皮细胞含有的酶 无
类
内皮细胞是否能收 含收缩蛋白，对组织
物质交换非常丰富
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Following questions
毒素 H2O
药物
ATP
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How to protect?
BRAIN
BLOOD
BCB
CSF
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一、什么是血脑屏障
血脑屏障(blood-brain barrier, BBB)：在血液和脑之间，选择性 地阻止某些物质由血进入脑的屏 障。
—— Semin Immunopathol (2010)
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多发性硬化 (Multiple sclerosis)
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口服药物吸收模型的研究进展
口服药物吸收模型的研究进展莫李立;王素军【摘要】Based on investigation of the domestic and foreign relevant literatures published in recent years , the progresses on oral drug absorption models were reviewed. The experimental methods, the characteristics and application progress of oral drug absorption models were introduced to provide a reference for the scientific evaluation of drug absorption.%对口服药物吸收模型进行综述,介绍各模型的研究方法、特点和应用进展,为药物吸收的科学评价提供参考.【期刊名称】《广东药学院学报》【年(卷),期】2011(027)001【总页数】4页(P104-107)【关键词】口服药物;肠道吸收;人工生物膜;细胞模型;灌流模型【作者】莫李立;王素军【作者单位】广东药学院药科学院,广东,广州,510006;广东药学院药科学院,广东,广州,510006【正文语种】中文【中图分类】R945口服给药是最常见也是最方便的给药方式。
对于口服药物来说,小肠是吸收的主要场所,因此药物的跨肠道表皮细胞渗透是产生药效的决定性环节。
了解药物在体内吸收的机制、速度和程度,有助于进行药物结构的改善、处方设计和工艺过程,指导合理的临床用药。
目前研究药物吸收的模型有人工生物膜模型、细胞模型和动物实验模型等。
上皮细胞膜就是一种生物膜,药物的吸收过程实际上就是一个跨膜转运的过程。
因此通过在体外模拟生物膜,可以对药物的吸收进行科学的预测和评价。
人工生物膜模型主要有平行人造膜法和固定化人工膜色谱柱法。
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20070501
浙江Ｔ业人学硕ｌ：学位论文
离体血脑屏障模型的建立
摘要
血脑屏障（ＢＢＢ）是隔离中枢神经系统与外周组织的生理性屏障，大多数的 小分子物质和几乎所有的大分子物质都无法穿越ＢＢＢ入脑。因此ＢＢＢ是中枢神 经系统药物开发的主要限制因素。由于在体状态下对ＢＢＢ的研究存在技术困难， 建立ＢＢＢ体外模型（ＢＢＢＭ），对中枢神经系统药物的研发有重要意义。．
ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ ｄｉｓｐｌａｙｅｄ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｒａｃｅｌｌｕｌａｒ仃ａｎｓｐｏｒｔ ａｎｄ ｈｉｇｈ
ｔｒａｎｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（ＴＥＥＲ）． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：Ａ ｈｉｇｈ ｑｕａｌｉｔｙ ａｎｄ ｍ够ｓ－ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＢＢＢ ｍｏｄｅｌ ｗａｓ
浙江工业大学顾Ｉ：学位论文
Ｋ＋因而不能通过。
Ａ：ＴＪ的分子基础及信号调节
利用冰冻断裂复型技术发现，玎象围绕在细胞四周的“焊接线”，相邻细胞
细胞膜被焊接线“焊接”在一起，形成了绳索样的连接物。一般认为该连接物是由 成串排列的特殊跨膜蛋白组成，相邻细胞的“嵴线”相互交联封闭了细胞之间的空
隙。
Ｂ：ＴＪ的分子构成 ＴＪ主要由跨膜蛋白和胞质附着蛋白两种成分组成，细胞骨架（主要是微丝）
式提出了血脑屏障（ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ．ｂａｒｒｉｅｒ ＢＢＢ）的概斜”。但直到２０世纪６０年代，
电子显微镜的研究才揭示了斑脑屏障的解剖学基础。
１．１．Ｉ．１血脑屏障的解剖学特征
脑毛细血管是由内皮细胞（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ）和周皮细胞（ｔｘ，ｉｅｙｔｅｓ，具有类似 平滑肌性质的细胞）构成，星形胶质细胞（ａｓｔｒｏｇｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ）足突包绕毛细血管外周， 覆盖其９５％－９９％的表面。人们原以为星形细胞足突构成了血脑屏障，但是电子 显微镜研究证实（１９６０年），脑毛细血管内皮细胞是构成血脑屏障的关键解剖位 点。血脑屏障的功能是由于脑毛细血管内皮细胞的特殊性质所决定的，脑和周围 器官的毛细血管超微结构的特点有所不同。
（ＢＢＢ）ｗｈｉｃｈ ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ ａ ｃｏ－ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｂｒａｉｎ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ
ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ．
Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｉｎ ａ ｆｉｒｓｔ ｓｔｅｐ，ｂｒａｉｎ ｒｎｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｎｅＷ
血管允许物质无选择地弥散透过血管壁。位于四个脑室内的脉络丛的脑毛细血管 通透性较高，这是因为，此处的脑血管内皮细胞具有窗孔样结构。高度血管化的
（１）内皮细胞之阈存在非常复杂的紧密连接ｍｇｈｔ ｊｕｎｃｔｉｏｎ，ＴＪ）【２】，它可阻断血 液承载物质弥散透过屏障。当将电子致密示踪剂辣根过氧化酶注入脑的供血动脉 时，很快在脑内血管充盈，但全部被内皮细胞间的紧密结合所阻挡，不能进入脑 实质。当将辣根过氧化酶注入蛛网膜下腔时，可很快弥散到血管周围的胶质细胞 的足突之间并通过管腔外的基底膜，但不能穿过细胞间的紧密连接。内皮细胞的 紧密连接是血脑屏障的最基本的解剖基础。所有内皮细胞之间都有复杂的连接， 但通常电阻很低（５．１０ Ｄ．／ｃｍ２），而血脑屏障紧密连接处的电阻却很高（２００ ｆ／／ｃｍ２），
（２）屏障毛细血管内皮细胞相对缺乏饮液囊泡（ｐｉｎｏｅｙｔｏｔｉｅ）及窗孔 （ｆｅｎｅｓｔｒａｔｉｏｎ）。在周围器官及脑内缺乏血脑屏障的部位（如脑室系统），血液承载的 极性物质是被动地扩散穿过细胞间隙，以及通过特殊的胞浆窗，液相或受体调控
的入胞作用（ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ）而透过毛细血管壁。
。
（３）为支持耗能转运，线粒体数目增加。这些解剖学特点与特殊的转运系统 造成了屏障对水溶性化合物选择性的通透。周围器官的毛细血管内皮细胞则含有 窗孔和较多的饮液囊泡，且细胞之间缺乏紧密结合，这就决定了周围器官的毛细
也是组成ＴＪ的重要组成部分。在１了的下方存在粘着连接，通过粘着斑连接蛋 白与为钙粘素的延伸形成跨膜网架。ＴＪ与粘着连接在维持ＢＢＢ稳定方面共同发
挥作用。
Ｃ：ＴＪ的信号调节
许多胞质信号分子聚集在ＴＪ复合物上并参与信号级联反应以调控ＴＪ的形
成和分解。其中Ｃａ２＋调节ＴＪ活性【３】，磷酸化调节ＴＪ结构的完整性１４１，另外胶 质细胞，ＰＫＣ，异源三聚体Ｇ蛋白和小ＧＴＰ结合蛋白也参与对ＴＪ的调节净７】。
浙江Ｔ业大学硕ｔ学位论文 ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｌｏｏｋｅｄ ｌｉｋｅ ｔｙｐｉｃａｌ‘＇ｃｏｂｂｌｅｓｔｏｎｅｓ”ａｆｔｅｒ ａｂｏｕｔ ７～９ ｄａｙ ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒ ｏｆ
Ⅶ
浙江ｆ：业人学学位论文原剖性声明
本人郑重卢明：所提交的学何论文是本人在导师的指导Ｆ，独立进行研究Ｉ：作所取得的研究 成果。除文中已经加以标注引＿ＬＩｊ的内弈外，本论文不包含其他个人或集体己经发表成撰弓过 的研究成果，，也不含为获得浙江ｌ：业人学或其它教育机构的学位证ＩＳ而使＿ＬＩｊ过的材料。对 本文的研究作出重要贡献的个人雨Ｉ集体，均己在文中以明确方式标明。本人承担本卢明的法 律责任。
ｇｒｏｗｔｈ．（２）Ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ ｄｉｓｐｌａｙｅｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ａｓｔｒｏｃｙｔｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｇｌｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ ａｃｉｄｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＧＦＡＰ）．０）Ｔｈｅ ｃｏ－ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｂｒａｉｎ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ
Ｖ
塑垩三兰兰奎兰堡主兰垡丝苎
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Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ａｎ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｂｌｏｏｄ．Ｂｒａｉｎ Ｂａｒｒｉｂａｒｒｉｅｒ（ＢＢＢ）ｉｓ ａ ｂａｒｒｉｅｒ ｓｏｐａｒａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ（ＣＮＳ）ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒｙ，Ｓｉｎｃｅ ｉｔ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｕｐｔａｋｅ ｏｆ＞９８％ｏｆｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｎｄ～１００％ｏｆ ｌａｒｇｅ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ ｂａｒｒｉｅｒ（ＢＢＢ）ｉｓ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｌｉｍｉｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ （ＣＮＳ）．Ｂｅｃａｕｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎ ｖｉｖｏ ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｓｔｓ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｓｅａｒｃｈｉｎｇ ｆｏｒ ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ ｂａｒｒｉｅｒ ｍｏｄｅｌ（ＢＢＢＭ）ｔｈａｔ ｐｒｅｓｏｒｖｅｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ＣＮＳ ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．
ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ，ｉｔｓ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｗｅｒｅ ｅｓｔｉｍａｔｅｄ ｂｙ ｓｏｍｅ ｔｅｓｔｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｍｅａｓｕｒｅ ｏｆ
ｔｍｎｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（ＴＥＥＲ）ａｎｄ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ． Ｒｅｍｉｔｓ：（１）Ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｆｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅ—ｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｄｉｓｐｌａｙｅｄ ｍｏｎｏｌａｙｅｒ
本文的目的在参阅文献的基础上，建立一种由脑微血管内皮细胞与星形胶 质细胞共培养，具有良好的形态和结构功能，便于大量培养和复制的体外血脑屏 障模型。实验方法：首先，通过匀浆，过滤，密度梯度离心，胶原酶消化等步骤 分离ＳＤ新生大鼠的脑微血管内皮细胞进行培养，第二步，分离大鼠大脑皮质中 的星形胶质细胞进行培养，最后，将两种细胞分别接种于多孔滤膜的两面进行共 培养。模型建立后，通过跨细胞膜电阻（ＴＥＥＲ）的测量以及通透性测试等对模 型的功能特点进行评估。实验结果：（１）对分离的脑微血管内皮进行了形态观察， 并对生长曲线进行了测定，细胞在培养７—９天后显示了典型的“铺路石”样形 态并形成细胞单层。（２）星形胶质细胞显示了良好的生长形态和胶质纤维酸性蛋 白ＧＦＡＰ）表达。（３）两种细胞共同培养建立的血脑屏障模型显示了较低的通透 性和较高的跨细胞膜电阻（ＴＥＥＲ）。结论：通过脑微血管内皮细胞和星形胶质 细胞的共培养，可建立符合生理，药理学研究要求的高质量体外血脑屏障模型。 养，可建立符合生理，药理学研究要求的高质量体外血脑屏障模型。 关键词：血脑屏障，血脑屏障模型，脑微血管内皮细胞，星形胶质细胞。
ｂｏｒｎ ＳＤ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ａｎｄ ｓｕｂ－ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｂｙ ｈｏｍｏｇｅｎａｔｃ，ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ， ｄｅｎｓｉｔｙ ｅｅｎｔｒｉｆｉｇｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ．Ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｌｏｒａ
ｎｅｗ ｒｏｏｍ ＳＤ ｒａｔｓ ｆｏｒ ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ．Ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙ，ａ ｃｏ－ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ｂｒａｉｎ
ａｓｔｒｏｃ螂Ｏｌｌ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ（ＢＭＥＣ）ｏｎ ｔｒａｎｓｗｅｔｌｓ，ｗｉｔｈ
ｔｈｅ ｂｏｔｔｏｍ
ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｏｆ ｌｒａｎｓｗｅｌｌ Ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｂｅｓｉｄｅｓ，ｗｈｅｎ ｔｈｅ ＢＢＢ ｍｏｄｅｌ ｗａｓ
本学传论文属丁．
１、保密口，在——年解密后适川本授权Ｊ５。
２、不保密口。