人卵巢癌细胞系A2780肿瘤干细胞分离培养与鉴定

人卵巢癌干细胞的分离、鉴定及其特异性microRNA的筛选共3篇

人卵巢癌干细胞的分离、鉴定及其特异性microRNA的筛选共3篇人卵巢癌干细胞的分离、鉴定及其特异性microRNA的筛选1人卵巢癌干细胞的分离、鉴定及其特异性microRNA的筛选卵巢癌是妇女常见的恶性肿瘤之一，也是最具侵袭性和死亡率的妇科恶性肿瘤之一。

近年来，研究表明卵巢癌干细胞（OCSCs）在卵巢癌的发生、发展和复发中起着非常重要的作用。

OCSCs具有高度的增殖、分化和肿瘤形成能力，容易逃避传统治疗手段的检测和清除。

因此，深入研究OCSCs的分离、鉴定和治疗靶点，对于提高卵巢癌的治疗效果和预后具有非常重要的意义。

OCSCs的分离主要依赖于某些细胞表面分子的识别和分离技术。

研究表明，CD133，CD44和CD117等基因标记物是OCSCs表面的主要特征，可以作为OCSCs的识别和定位标志。

因此，这些表面分子的选择性抗体可以用于OCSCs的分离和富集。

通过流式细胞术（FACS）和磁珠分离技术等先进的细胞分离技术，可以从卵巢癌患者的肿瘤组织样本中纯化出高含量的OCSCs种群。

随着单细胞测序技术的发展，进一步可以研究OCSCs的基因、蛋白、代谢和功能特性等。

OCSCs的鉴定是指对其肿瘤形成、侵袭战略和治疗抵抗性的研究，具有非常重要的临床意义。

研究表明，OCSCs在细胞凋亡、DNA修复、肿瘤增殖和脱靶治疗等方面具有突出的特性。

因此，通过对OCSCs的微观和宏观观察，可以识别OCSCs的不同亚群，并进一步探究其分化程度、增殖模式、治疗耐受性等特征。

同时，通过体内和体外肿瘤模型的建立和治疗实验，可以验证OCSCs的肿瘤形成能力和抗药性。

最近的研究还表明，OCSCs还具有干细胞外泌体通路调控的特性，通过这种方式影响癌细胞的行为和治疗反应。

microRNA（miRNA）是非编码小RNA分子，在细胞代谢、增殖、分化、凋亡和信号转导等方面具有重要的调节作用。

研究表明，miRNA在OCSCs的增殖、分化、转移和耐受性等方面起着非常关键的作用。

肿瘤干细胞的分离培养及其在肿瘤治疗中的应用

肿瘤干细胞的分离培养及其在肿瘤治疗中的应用随着医学技术的不断前进，对肿瘤治疗的研究也越来越深入。

其中，肿瘤干细胞的研究备受关注。

肿瘤干细胞是指在肿瘤中所存在的一小部分细胞，能够不断分裂增殖，并给予肿瘤再生的可能性。

因此，肿瘤干细胞的分离与培养以及在肿瘤治疗中的应用，成为了当今医学研究的热点话题。

一、肿瘤干细胞的分离方法目前，分离肿瘤干细胞的方法主要包括紫杉醇浸润法、细胞表面标记法、限制稀释法等。

其中，限制稀释法是较为常用的一种。

限制稀释法是将单个肿瘤细胞样本通过连续的稀释、培养与观察，逐渐筛选出肿瘤干细胞。

它通过观察单个细胞的生长、分裂、增殖情况，来得出大量肿瘤细胞当中的干细胞。

虽然这种方法过程复杂、费时费力，但是它能够筛选出更加纯度高的肿瘤干细胞。

二、肿瘤干细胞的培养方法早期肿瘤干细胞的培养，主要采用血清补充的液体培养基进行细胞的培养。

但是在这种培养条件下，肿瘤干细胞很容易分化。

因此，近年来，越来越多的实验室采用无血清培养条件进行肿瘤干细胞的培养，以维持肿瘤干细胞的稳定状态。

无血清培养条件下，需要选择不同种类的培养基，添加多种生长因子与细胞基质，来模拟肿瘤干细胞自身的生长环境。

同时，还需注意对细胞的密度、温度、pH 值、CO2浓度等生理性因素的控制。

三、肿瘤干细胞在肿瘤治疗中的治疗应用肿瘤干细胞的研究在肿瘤治疗中，具有重要的应用价值。

首先，肿瘤干细胞作为肿瘤治疗的靶点，开启了新的临床治疗途径。

其次，肿瘤干细胞可以用于评估肿瘤药物的治疗效果，这一评价标准能够更为准确反映药物的实际效果。

此外，肿瘤干细胞还可以用于评估肿瘤的预后情况，帮助医生选择更加有效的治疗方式。

总之，肿瘤干细胞的研究在肿瘤治疗研究领域，具有非常重要的价值。

分离肿瘤干细胞、培养肿瘤干细胞以及开展针对肿瘤干细胞的治疗策略，将有助于提高肿瘤治疗的效果，为患者带来更好的治疗效果。

Ph.D.-7TM肽库体内淘选卵巢癌 A2780细胞特异性结合肽

World Journal of Cancer Research 世界肿瘤研究, 2015, 5, 43-51Published Online July 2015 in Hans. /journal/wjcr/10.12677/wjcr.2015.53007In Vivo Screening with Ph.D.-7TMand Identification of OvarianCancer A2780 Cell TargetedHeptapeptidesYucan Li, Guangfu Yin*, Ximing Pu, Fei YouCollege of Materials Science and Engineering, Sichuan University, Chengdu SichuanEmail: *nic0700@Received: Jun. 20th, 2015; accepted: Jul. 6th, 2015; published: Jul. 9th, 2015Copyright © 2015 by authors and Hans Publishers Inc.This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY)./licenses/by/4.0/AbstractIn order to select the specific ligands for ovarian cancer, the in vivo phage display technology has been applied to screen the peptide targeting to ovarian cancer A2780 cells. Firstly, ovarian cancer A2780 cells were inoculated into the armpit of nude mice to establish a tumor-bearing animal model. Then in vivo biopanning was conducted for 3 rounds with the Ph.D.-7TM phage-displayed peptide library, and individual phage clones were picked for DNA sequencing after the 3rd round.Among the picked phage clones, the clone PC-H displaying heptapeptide HGGVRLY (peptide HGG) accounted for as high as 27 percent. The identification results by ELISA tests, in vivo and in vitro phage binding assays, competitive binding assays, and immunofluorescence assays indicated that both the phage clone PC-H and the peptide HGG could be preferentially bounded to A2780 cells and then concentrated in tumor tissues. Furthermore, the results of MTT assay and scratch assay revealed that peptide HGG possessed low cytotoxicity. Altogether, the peptide HGG screened with the Ph.D.-7TM exhibited the high affinity to A2780 cells and the targeting to the ovarian cancer tis-sues, and would have great potentials in the targeting drug delivery system for ovarian cancer.KeywordsOvarian Cancer A2780 Cells, In Vivo Biopanning, Phage-Displayed Peptide Library, Targeting,Heptapeptide*通讯作者。

卵巢癌耐药细胞株a2780-cp的建立及cd44肿瘤干细胞功能验证

卵巢癌耐药细胞株A2780-CP的建立及CD44+肿瘤干细胞功能验证目录第一章前言 (1)第二章材料与方法 (3)2.1实验材料 (3)2.2培养基及主要试剂 (3)2.3实验所用设备 (4)2.4主要试剂的配制 (4)2.5实验方法 (5)第三章结果与分析 (11)3.1 A2780-CP耐药细胞株和A2780普通细胞株生物学特性差别 (11)3.2 A2780-CP与A2780肿瘤干细胞生物学特性验证 (13)第四章讨论 (19)第五章结论 (22)参考文献 (23)综述 (26)卵巢癌干细胞与多药耐药之间的关系 (26)参考文献 (35)中英文缩略词表 (41)致谢 (42)卵巢癌耐药细胞株A2780-CP的建立及CD44+肿瘤干细胞功能验证第一章前言第一章前言卵巢癌是妇科常见三大肿瘤之一，其发病率低于子宫内膜癌，然而死亡率却位居妇科肿瘤之首[1]，对妇女生命健康有的极大的威胁。

卵巢的胚胎发育，组织解剖及内分泌功能相对较复杂，从而导致卵巢癌在早期表现出不明显的症状，并缺乏行之有效的早期诊断方法。

而很多患者发现时已经处于中晚期，无法进行手术治疗，需要借助抗肿瘤药物进行治疗。

虽然近年来各种小分子药物、抗体药物、免疫疗法等层出不穷，但顺铂和紫杉醇依然是卵巢癌的一线用药方式，可是80%-85%的卵巢癌患者会产生药物耐性，导致治疗失败[2]。

现有多数研究认为细胞耐药的根源是肿瘤干细胞，一种肿瘤组织中存在的一小群自我更新并多向分化的细胞[3]。

这部分细胞高表达耐药相关基因，可以将药物泵出体外减少对自身的伤害；另一方面，化疗药物可明显杀伤快速分裂的细胞，而处于静止状态的肿瘤干细胞具有的这一独有特性使之有利于避免被肿瘤药物杀伤[4]。

关于肿瘤干细胞的起源有多种学说，国内外学说现普遍接受的是：肿瘤干细胞很有可能来自突变了的成体干细胞。

肿瘤的产生是由于突变长期累积的结果，因而这一过程相当漫长。

而已经失去继续分裂能力的分化的体细胞，其生命周期短，无法完成多个基因突变的累积。

体外三维培养卵巢癌A2780细胞及其多药耐药机制的实验研究

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维普资讯
河南职工医学院ｌｆＨｅａｄｃｌＣｌｇｏｔｆａｄＷｏｋｒｏｒａｎｎＭｅｉａｏｌｅｆｒＳａｎｒｅｓｏｅ
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基于气相色谱-质谱的代谢组学技术研究紫杉醇诱导的卵巢癌A2780耐药株的生物标志物

基于气相色谱-质谱的代谢组学技术研究紫杉醇诱导的卵巢癌A2780耐药株的生物标志物崔广波;刘晓昕【摘要】采用气相色谱-质谱(GC-MS)的代谢组学技术研究人卵巢癌紫杉醇耐药细胞A2780/Taxol与敏感细胞之间内源性代谢物的差异,初步探讨A2780/Taxol细胞生物学特性和耐药机制.使用浓度梯度法建立A2780/Taxol细胞,并通过细胞形态观察,生长曲线测定,药物敏感试验,细胞内多药耐药相关蛋白(MRP1)、P-糖蛋白(p-gp)和肺耐药蛋白(LRP)的水平测定,评价A2780/Taxol细胞的生物学特性.同时,采用GC-MS的代谢组学方法分别对卵巢癌敏感细胞株与紫杉醇耐药细胞株的代谢物指纹图谱进行分析,并通过偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)对代谢组学数据进行多元处理.结果表明:人卵巢癌细胞敏感细胞与耐药细胞相比,其中琥珀酸、天冬氨酸、果糖、肌醇等13种内源性代谢物存在显著性差异.糖降解、三羧酸(TCA)循环、肌苷代谢途径发生了异常改变,这些差异改变可能与卵巢癌细胞的耐药机制有关.【期刊名称】《南京工业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(038)001【总页数】6页(P111-116)【关键词】卵巢癌;紫杉醇;耐药蛋白;代谢组学【作者】崔广波;刘晓昕【作者单位】南京工业大学药学院,江苏南京210009;南京工业大学药学院,江苏南京210009【正文语种】中文【中图分类】R979.1卵巢癌是现今女性生殖器官常见恶性肿瘤之一,其发病率虽次于子宫颈癌和子宫体癌,死亡率却高居各类妇科肿瘤的首位,对妇女生命健康造成严重威胁[1]。

目前,卵巢癌的规范性治疗一般是肿瘤细胞减灭术并辅以术后化疗。

紫杉醇是20世纪90年代问世的抗微管类抗癌药,是目前临床治疗卵巢癌中最常用的化疗药之一[2]。

但不幸的是,超过80%的病人会因为肿瘤细胞对紫杉醇产生耐药性而使得化疗失败,肿瘤复发[3]。

因此,研究肿瘤细胞对紫杉醇产生耐药的发生机制,对临床探索预防和逆转卵巢癌耐药性,具有十分重要的意义。

肿瘤干细胞的分离和鉴定技术研究

肿瘤干细胞的分离和鉴定技术研究肿瘤干细胞是指一种具有自我更新能力的细胞，同时又可以分化成某些或所有肿瘤细胞的一种细胞。

它是肿瘤形成、生长、传播过程中至关重要的组成部分。

因为肿瘤干细胞具有高度的分化潜能和无限的增殖潜能，所以它们可以在充分的核苷酸切片的条件下自我更新、维持和增殖。

而且在化疗和放疗的过程中，肿瘤干细胞可以存活，这是导致肿瘤治疗失败以及肿瘤复发的原因之一。

因此，寻求分离和鉴定肿瘤干细胞的方法和技术至关重要。

目前分离和鉴定肿瘤干细胞的主要方法包括：1. 流式细胞仪流式细胞仪是一种可以对细胞进行分类、鉴定和计数的仪器。

通过标记分子，可以分离出具有肿瘤干细胞表型的细胞，如CD133、CD44、CD24和EpCAM。

但是，CD133和CD44等标记分子也可表达于非肿瘤干细胞，因此在使用流式细胞仪时需要结合其他的标记分子和鉴定方法，以提高分类和准确性。

2. 磁珠分选法磁珠分选法是一种通过对细胞表面标记抗原进行特异性结合和隔离的方法。

一般来说，将抗CD133的磁珠与肿瘤细胞混合，并在磁力场中分离，从而分离出肿瘤干细胞。

这种方法具有操作简单、高通量等优点，但仍然需要结合其他标记分子和方法以提高准确性。

3. 单细胞培养单细胞培养是一种将肿瘤组织显微切片后，将细胞分散到培养皿中，以培养单个肿瘤干细胞为主要目标的方法。

这种方法可以更加准确地分离出肿瘤干细胞，但是操作复杂、耗时长。

4. 体内鉴定体内鉴定是通过将标记细胞注射到小鼠等实验动物体内，观察肿瘤形成和生长的过程，进而鉴定出肿瘤干细胞。

这种方法可以检测到复杂的细胞肿瘤形成，但由于其时间和成本等原因，常常被用作其它方法的验证和分析。

需要注意的是，肿瘤干细胞的分离和鉴定不仅要依赖于单一的标记分子和方法，还需要结合多项标记分子和细胞生物学特征、分布情况等进行综合鉴定，以提高准确性和可靠性。

肿瘤干细胞的分离和鉴定技术对于肿瘤治疗、预防和管理具有重要意义。

通过分离和鉴定肿瘤干细胞，可以有效地评估肿瘤的潜在危险性、筛选出更加有效的治疗方法，更好地指导临床治疗、降低肿瘤复发率和死亡率。

《大蒜素对人卵巢癌细胞株A2780的作用及机制》

《大蒜素对人卵巢癌细胞株A2780的作用及机制》一、引言卵巢癌是一种常见的女性生殖系统恶性肿瘤，其发病率和死亡率均较高。

目前，对于卵巢癌的治疗主要依赖于手术和化疗，但治疗效果并不理想，且易产生耐药性。

因此，寻找新的治疗方法和药物成为研究的重要方向。

近年来，天然药物的研究逐渐受到关注，其中大蒜素因其具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性而备受瞩目。

本文旨在探讨大蒜素对人卵巢癌细胞株A2780的作用及机制，为卵巢癌的治疗提供新的思路和方向。

二、大蒜素简介大蒜素是从大蒜中提取的一种天然有机硫化物，具有广泛的生物活性。

其抗肿瘤作用已得到一定的研究证实，主要通过抑制肿瘤细胞的增殖、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭和转移等途径发挥抗肿瘤作用。

三、大蒜素对人卵巢癌细胞株A2780的作用1. 抑制细胞增殖：研究表明，大蒜素能够显著抑制人卵巢癌细胞株A2780的增殖，其作用呈剂量依赖性。

通过流式细胞术检测，发现大蒜素能够诱导细胞周期停滞，从而抑制细胞增殖。

2. 促进细胞凋亡：大蒜素能够诱导人卵巢癌细胞株A2780发生凋亡，表现为细胞核固缩、染色质边集等典型的凋亡形态学改变。

同时，大蒜素还能够增加细胞内活性氧水平，激活Caspase 家族等凋亡相关蛋白，进一步促进细胞凋亡。

3. 抗侵袭和转移：大蒜素能够抑制人卵巢癌细胞株A2780的侵袭和转移能力，降低细胞外基质的降解，从而减缓肿瘤的进展。

四、大蒜素的作用机制1. 调节相关基因和信号通路：大蒜素能够调节肿瘤细胞中相关基因和信号通路的表达，如NF-κB、MAPK等，从而发挥抗肿瘤作用。

2. 抗氧化作用：大蒜素具有抗氧化作用，能够清除细胞内的自由基，减轻氧化应激对细胞的损伤。

3. 免疫调节作用：大蒜素还能够调节机体免疫功能，增强机体的抗肿瘤能力。

五、结论综上所述，大蒜素对人卵巢癌细胞株A2780具有显著的抑制作用，能够抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、抗侵袭和转移。

其作用机制可能与调节相关基因和信号通路、抗氧化作用、免疫调节作用等有关。

肿瘤干细胞的鉴定与分离

ｃｉｅｎｔ，ＮＯＤ／ＳＣＩＤ）小鼠体内具有较强的致瘤能力，
＋－／ｌｏｗ认为ＣＤ４４ＣＤ２４为乳腺癌干细胞的免疫表型。＋－／ｌｏｗ但ＣＤ４４ＣＤ２４细胞群并非同质群体。Ｇｉｎｅｓｔｉｅｒ１］＋－／ｌｏｗ等［发现ＣＤ４４ＣＤ２４细胞群中可进一步分选出
sp细胞群可能富含肿瘤干细胞19连环蛋白通路wnt蛋白属分泌性糖蛋白作为配体同frizzled受体及低密度脂蛋白受体相关蛋白5结合促发下游一系列事件最后导致具有多样功能的连环蛋白在胞质内积聚并转位至核内同细胞因子和淋巴增强因子家族相互作用调节相关基因表达决定细胞的增殖和转移等属于经典wnt连环蛋白通路激活
·综述·
肿瘤干细胞的鉴定与分离
林之光陈波斌
【摘要】肿瘤干细胞被认为是肿瘤复发的根源。目前通过特定的免疫表型来分离鉴定肿瘤干细胞是最常用的方法。侧群（ＳＰ）细胞分离技术也已经相当成熟，利用Ｗｎｔ通路在肿瘤细胞的表达活性差异来分离肿瘤干细胞的方法正受到关注。构建干细胞龛来捕获肿瘤干细胞的方法有待进一步评价。【关键词】肿瘤干细胞；免疫表型分型ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆｃａｎｃｅｒｓｔｅｍｃｅｌｌｓＬＩＮＺｈｉｇｕａｎｇ，ＣＨＥＮＢｏｂｉｎ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｙ，ＨｕａｓｈａｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＦｕｄａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００４０，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＣＨＥＮＢｏｂｉｎ，Ｅｍａｉｌ：ｂｏｂｉｎ＿ｃｈｅｎ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｃａｎｃｅｒｓｔｅｍｃｅｌｌｓａｒｅｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄｔｏｂｅｔｈｅｏｒｉｇｉｎｏｆｔｕｍｏｒｒｅｌａｐｓｅ．Ｉｓｏｌａｔｉｎｇａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇｔｈｅｍｂｙｓｐｅｃｉａｌｉｍｍｕｎｅｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓｉｓｔｈｅｍｏｓｔｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄｍｅｔｈｏｄ．ＴｈｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅｏｆｉｓｏｌａｔｉｎｇＳＰｃｅｌｌｓｉｓｖｅｒｙｍａｔｕｒｅ．ＭｏｒｅａｔｔｅｎｔｉｏｎｓａｒｅｂｅｉｎｇｐａｉｄｔｏｔｈｅｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆｃａｎｃｅｒｓｔｅｍｃｅｌｌｓｕｓｉｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＷｎｔｐａｔｈｗａｙｏｎｓｕｒｆａｃｅｏｆｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇｓｔｅｍｃｅｌｌｓｎｉｃｈｅｓｔｏｃａｐｔｕｒｅｃａｎｃｅｒｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓｒｅｍａｉｎｓｔｏｂｅｆｕｒｔｈｅｒｅｖａｌｕａｔｅｄ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ；Ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ

细梗香草总皂苷逆转人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株A2780_Taxol分子机制的研究

中药逆转卵巢癌的相关文献国内屡有报道。黄芩素能使 A2780/ADM 细胞内 ADM 的累积增加 3 倍, 与异搏定的效果相当, 提示黄芩素能特异性阻断 P-Gp 的药物外排机制, 使 MDR 细胞内药物积累增加, 从而逆转 MDR[21]。姜黄素能增强 COC1/DDP 对顺铂的敏感性, 这一作用可能与姜黄素和顺铂协调诱导细胞凋亡有关, 其机制可能与降低 Bcl-2、Survivin 基因的表达 , 增加 Caspase-3 基因的表达有关[22]。川穹嗪（TMP）能逆转卵巢癌耐药细胞株 A2780/ADM 细胞对阿霉素的耐药性, 其逆转机制可能与增加细胞内 ADM 浓度和抑制该细胞 P-Gp 的表达有关。双氢青蒿素对人卵巢癌顺铂耐药细胞 SKOV3/CDDP 具有体外抑制作用, 对顺铂具有化疗增敏作用 , 并能逆转 SKOV3/CDDP 对顺铂的耐药 [23]。而细梗香草总皂苷逆转卵巢癌耐药的却未见报道。本课题组在前期研究中从 17 公斤细梗香草药材中提取 0.98 公斤的中间体，其细梗香草总皂苷含量为 60.48%，且前期研究人源肿瘤增殖，其 IC50 在 0.01429 μg/ml-2.762842 μg/ml ，抑制人卵巢癌紫杉醇耐药 A2780/Taxol 细胞增殖的 IC50 为 4.19 μg/ml 。本课题对细梗香草总皂苷逆转人卵巢癌紫杉醇耐药 A2780/Taxol 细胞的分子机制进行了较为系统的研究，运用 Western-blot 方法检测细梗香草总皂苷作用于人卵巢癌紫杉醇耐药 A2780/Taxol 细胞株后耐药相关基因 stathmin、mdrl、APE-1 及 HSP 蛋白的表达情况, 分析细梗香草总皂苷抑制人卵巢癌紫杉醇耐药 A2780/Taxol 细胞株增殖的机制是否是通过降低上述蛋白的表达, 从而逆转其耐药。另一方面，拟通过运用 RNAi 技术沉默 stathmin 基因的表达，探讨干扰 stathmin 基因后细梗香草总皂苷联合紫杉醇对卵巢癌细胞敏感性的影响和发生机制，从细胞增殖、凋亡、基因转录等角度，研究细梗香草总皂苷可能的逆转人卵巢癌紫杉醇耐药 A2780/Taxol 细胞的作用机制及与紫杉醇可能表现出的协同作用。该课题为细梗香草总皂苷最终应用于临床提供理论依据，为临床用药提供了基础，为肿瘤的多靶点治疗，逆转其耐药提供新的思路。参考文献 [1] Jemal A, Siegel R, Ward E, et al. Cancer statistics, 2007. CA Cancer J Clin, 2007 , 57 ( 1) : 43 - 66. [2] G adducci A, Cosio S, Zola P, et al. Surveillance procedures for patients

癌症干细胞的分离和鉴定

癌症干细胞的分离和鉴定癌症是一种极具威胁性的疾病，目前尚无完全有效治疗方法。

研究发现，癌症干细胞是癌症发生和发展的关键。

因此，分离和鉴定癌症干细胞成为了当前癌症研究的热点之一。

1. 背景癌症干细胞是一类可以自我更新并且具有不成熟状态的细胞。

它们能够长时间分裂，同时也能产生仍旧具有干细胞性的细胞和更多成熟的细胞。

因此，这些细胞是癌症发生和发展的关键。

2. 分离方法癌症干细胞的分离是癌症研究的基础。

科学家们采用了多种方法来分离癌症干细胞，例如：磁性分选法、流式细胞仪分选法和单细胞克隆扩增法等。

磁性分选法利用了磁性珠子和特定的抗体。

这些抗体会与癌症干细胞表面的蛋白质结合，从而将这些细胞与其他细胞分离开来。

流式细胞仪分选法是一种流式细胞术，它可以将细胞按照大小、形状、荧光等性质进行分离。

这种方法可以高效、准确地分离出癌症干细胞。

单细胞克隆扩增法是一种通过单个细胞进行扩增的方法。

这种方法能够避免干扰性因素的影响，同时也可以得到更纯的细胞群。

3. 鉴定方法鉴定癌症干细胞的方法主要包括：静态培养、肿瘤形成实验和移植实验等。

静态培养是一种将细胞在培养皿中培养并观察细胞的形态和特性的方法。

这种方法可以确定细胞的干细胞特性。

肿瘤形成实验是一种将细胞在小鼠体内培养，以观察是否会形成肿瘤。

这种方法可以确定细胞是否具有癌症干细胞的特性。

移植实验是一种将细胞移植到患者体内，观察其对癌症治疗的影响。

这种方法可以验证细胞的干细胞性质以及其对癌症治疗的响应。

4. 发展前景癌症干细胞的分离和鉴定对于癌症治疗具有重要意义。

科学家们通过对癌症干细胞的鉴定，可以确定其对癌症治疗的响应，为临床治疗提供有力的依据。

同时，这些研究也为癌症的早期筛查以及预防提供了新的思路。

值得一提的是，随着人工智能的发展和成熟，机器学习算法在癌症诊断和治疗上的应用也越来越广泛。

一些研究利用机器学习算法，成功地识别出了患有肺癌的患者中，患者起始时是否有高度可能发展出带有癌症干细胞的恶性肿瘤。

癌症干细胞的分离与鉴定

癌症干细胞的分离与鉴定癌症一直是人类的头号杀手，不少患者在抗癌过程中，一次次地经历治疗后病情复发的煎熬。

癌症普遍具有难治性、易转移性以及复发性，尽管现在各种治疗手段都有了很大的进步和提高，但依旧难以彻底消灭肿瘤细胞，而其中的原因之一就是癌症干细胞（cancer stem cell）的存在。

经过多年的研究，科学家们终于发现了癌症干细胞的存在。

癌症干细胞不仅具有传统癌症细胞的增殖和转移能力，还能自我更新和不断分化，成为肿瘤的重要来源。

因此，需要对癌症干细胞进行分离与鉴定，以进一步深入地了解其特性，为治疗和预防癌症提供更有效的手段。

一、癌症干细胞的特性癌症干细胞最初被发现于血液系统的肿瘤中，随后又在多种实体瘤中得到了确认。

癌症干细胞具有以下特性：1.能够自我更新和不断分化，保证了肿瘤的持续增长和复发。

2.多重耐药性，不受传统化疗的影响，极具生存优势。

3.易于进入休眠状态，隐藏在体内，困扰患者多年。

二、癌症干细胞的分离方法分离癌症干细胞是了解它们的特性和进行研究的前提，随着独特的分离方法的不断研究和发展，现在已经可以实现对癌症干细胞的高效分离。

1.表面标记法表面标记法是目前最常用的一种分离方法，采用标记癌症干细胞表面特异性的细胞膜标志物，然后通过细胞相对大小、细胞鉴定等方法分离癌症干细胞。

目前对于较多肿瘤，如胃癌、肝癌和肺癌等，都已经有了较为完整的表面标记方法。

2.特异性培养法癌症干细胞的分离也可以通过特异性培养法来实现。

此种方法需要特殊的培养基，能够满足癌症干细胞生存所需的特殊环境和生长因子。

通过培养基中的特定成分，能够进一步引导癌症干细胞分化，从而更好地了解它们的特性。

三、鉴定癌症干细胞的标准在进行癌症干细胞的鉴定过程中，我们需要考虑到多个因素。

而现在，已经有了多项科学标准供我们进行参考。

1.抗癌药物治疗的耐受性通过检测癌症细胞在治疗过程中的耐药性，来根据癌症干细胞的生物学行为和表型特征来鉴定癌症干细胞。

肿瘤干细胞的分离和鉴定

肿瘤干细胞的分离和鉴定随着现代医学的发展，对肿瘤的研究也日趋深入。

其中一个研究方向是肿瘤干细胞的分离和鉴定。

这个领域的重要性在于，肿瘤干细胞是一类能够自我更新并在肿瘤生长、转移和复发中起关键作用的细胞。

因此，对肿瘤干细胞的研究有望为肿瘤治疗提供新的思路和方法。

1. 肿瘤干细胞的定义和特点肿瘤干细胞是一类具有自我更新和多能分化特性的肿瘤细胞。

它们是肿瘤中能够产生各种不同类型细胞的祖细胞，并且有能力维持肿瘤的生长和发展。

与普通肿瘤细胞不同的是，肿瘤干细胞具有更强的代谢活性、更强的生存能力和更高的抗药性。

此外，肿瘤干细胞能够逃避免疫系统监控，从而在肿瘤发展进程中起到重要的作用。

2. 肿瘤干细胞的分离和鉴定方法肿瘤干细胞的分离和鉴定是肿瘤干细胞研究的基础。

目前主要的方法有以下几种：（1）细胞表面标记法通过将不同的细胞表面分子标记成不同的颜色，然后利用流式细胞术或细胞排序技术将不同的肿瘤细胞分离出来，从而分离和鉴定肿瘤干细胞。

常用的肿瘤干细胞表面标记分子包括CD133、CD44、CD24等。

（2）肿瘤球形体法肿瘤球形体法是通过将肿瘤细胞培养在特殊的培养基中，使细胞形成三维球状结构，从而富集肿瘤干细胞。

随着肿瘤球体的扩大，肿瘤干细胞比例会不断增加，从而方便肿瘤干细胞的研究。

（3）功能鉴定法通过对肿瘤细胞进行体外悬浮培养，利用细胞双层培养室将肿瘤细胞暴露在低氧环境中，从而富集肿瘤干细胞。

然后通过肿瘤球体形成、体内移植等一系列功能实验验证肿瘤干细胞的存在和功能。

3. 肿瘤干细胞在肿瘤治疗中的应用前景肿瘤干细胞的存在和作用是肿瘤治疗中的重要问题。

肿瘤干细胞具有较强的抗药性和低的分裂速度，这使得传统的化疗和放疗很难对其产生杀伤作用。

因此，发现并针对肿瘤干细胞的治疗方法成为了肿瘤治疗的重要方向。

（1）肿瘤干细胞抗靶向药物治疗由于肿瘤干细胞具有较强的自我更新、多能分化和抗药性等特点，它们成为了肿瘤治疗的一个难题。

近年来，研究人员发现肿瘤干细胞表面分子的存在为对其进行靶向治疗提供了可能。

丹参酮ⅡA诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡的作用及机制

丹参酮ⅡA诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡的作用及机制丹参酮ⅡA诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡的作用及机制【引言】卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率逐年上升，给女性健康带来了严重威胁。

因此，寻找有效的治疗手段成为亟待解决的问题之一。

近年来，传统中药在肿瘤治疗中的应用逐渐受到关注，其中丹参酮ⅡA作为一种有效成分，其抗癌效果备受关注。

【作用】研究表明，丹参酮ⅡA在人卵巢癌A2780细胞系中能够诱导细胞凋亡，起到抗癌的作用。

实验发现，在给予一定浓度的丹参酮ⅡA后，A2780细胞出现了明显的凋亡现象，包括细胞核凝聚、染色体断裂和细胞膜破裂等。

此外，丹参酮ⅡA还通过调节细胞周期和促进细胞凋亡相关蛋白的表达，从而抑制了A2780细胞的生长和增殖。

【机制】1. 丹参酮ⅡA通过调节细胞周期促进细胞凋亡。

丹参酮ⅡA能够抑制A2780细胞的G0/G1期进程，并诱导细胞进入S期和G2/M期，从而加速细胞凋亡进程。

研究发现，丹参酮ⅡA通过抑制细胞周期相关蛋白的表达，如cyclin D1、CDK4等，调控了细胞周期的进程，从而促使细胞凋亡的发生。

2. 丹参酮ⅡA调节细胞凋亡相关蛋白的表达。

丹参酮ⅡA 能够抑制细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2、Bcl-xl和Bcl-w的表达，同时促进细胞凋亡促进蛋白Bax和caspase-3的表达。

Bcl-2蛋白家族在调控细胞凋亡中起到关键作用，抑制Bcl-2蛋白家族的表达能够促进细胞凋亡的发生。

丹参酮ⅡA还可以通过激活caspase-3，促进凋亡的进行。

3. 丹参酮ⅡA抑制细胞血管生成。

研究发现，丹参酮ⅡA 能够抑制A2780细胞的血管生成，从而阻断营养物质的供应，抑制肿瘤生长。

丹参酮ⅡA通过下调血管生成相关因子VEGF 和bFGF的表达，减少肿瘤血管的生成，从而达到抑制肿瘤生长的作用。

【结论】综上所述，丹参酮ⅡA能够通过调节细胞周期、调节细胞凋亡相关蛋白的表达和抑制细胞血管生成等方式，诱导人卵巢癌A2780细胞的凋亡。

PDGF-C促进体外培养人卵巢癌细胞系A2780和SKOV3的增殖和迁移

PDGF-C促进体外培养人卵巢癌细胞系A2780和SKOV3的增殖和迁移李晓莹;钱智勇;潘凌亚【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2016(036)006【摘要】目的观察血小板衍生生长因子-C(PDGF-C)对体外培养的卵巢上皮癌细胞系A2780和人浆液性卵巢癌细胞系SKOV3的影响.方法采用培养的人类上皮性卵巢癌细胞系A2780和SKOV3,应用CCK8检测法评价细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期;利用Transwell细胞迁移实验、细胞划痕实验测定细胞迁移能力.结果 PDGF-C能明显刺激A2780和SKOV3增殖,增加两种细胞S期细胞的比例,对SKOV3的促增殖作用在20 μg/L达高峰,A2780的促增殖作用在30 μg/L达高峰.同时,PDGF-C促进A2780和SKOV3的迁移能力.结论 PDGF-C可促进培养的A2780和SKOV3的增殖与迁移能力.【总页数】5页(P789-793)【作者】李晓莹;钱智勇;潘凌亚【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院妇产科,北京100730;军事医学科学院基础医学研究所细胞生物实验室,北京100850;中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院妇产科,北京100730【正文语种】中文【中图分类】R711.75【相关文献】1.NVP-BEZ235对卵巢癌细胞系SKOV3增殖及体内、体外迁移的影响 [J], 秦宇;赖慧玲;赵雪娇;王常玉2.miR-216b-5p在卵巢癌细胞系A2780中的表达及对增殖、迁移和侵袭的影响[J], 黄明; 赵宗霞; 葛俊丽; 双婷; 陈必良3.原薯蓣皂调控JNK/P38 MAPK信号通路对卵巢癌SKOV3细胞系增殖、凋亡及迁移侵袭的影响 [J], 朱利红; 段树鹏; 秦海霞; 张秀玲; 赵淑珍; 李少儒; 王世进4.结缔组织生长因子促进人卵巢癌细胞系SKOV3增殖与迁移 [J], 董玲玲;高云;牛国宇5.miR-493-5p抑制人卵巢癌细胞系SKOV3增殖和迁移 [J], 李少儒;秦海霞;刘珊珊;侯瑞杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

肿瘤干细胞的分离与鉴定

17
02 肿瘤干细胞分离
（6）联合多种方法分离
在目前的研究中，肿瘤干细胞的分离并不是采用单一的方法，而是选用两种或者两种以上的分离方法，以获得数量更多、纯度更高的肿瘤干细胞。
18
目录
01 肿瘤干细胞特性 02 肿瘤干细胞的分离 03 肿瘤干细胞的鉴定 04 几种常见肿瘤干细胞的分离与鉴定
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根据生物学特性分离
无血清培养基分选法(SFM)
1
2
3
4
5
流式细胞分选（FACS）
旁群细胞分选法(SP)
12
02肿瘤干细胞分离
（1）免疫磁珠分选（MACS）
MACS是基于肿瘤干细胞表面特异性抗原能与连接有磁珠的特异性单克隆抗体相结合，之后在外部磁场的作用下，连接有单克隆抗体磁珠的肿瘤干细胞停留在磁场中，而无特异性表面抗原的肿瘤细胞则不能与免疫磁珠结合，因而不能在磁场中停留，从而得以分离出肿瘤干细胞。[PMID：30009677]。
（2）流式细胞分选（FACS）
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02肿瘤干细胞分离
（3）根据生物学特性分离
根据肿瘤干细胞具有的某些生物学特性将肿瘤干细胞分离筛选出的方法。如可以通过细胞核对核染料的拒染性质、肿瘤干细胞体外培养所需的特殊条件等特性，分离出肿瘤干细胞 [PMID:14711994 ] 。
15
02肿瘤干细胞分离
CD90+,CD133+ ABCB5+ CD1Байду номын сангаас5+
CD44+/CD117+,CD133+,CD44+/MYD88+
CD133+
PMID [PMID:7509044] [PMID: 20630801] [PMID:12629218] [PMID: 17283135] [PMID:18049477] [PMID: 14522905] [PMID: 21448722] [PMID: 17122772 ]

基于SP细胞分选法初步鉴定卵巢癌干细胞表面标志

基于SP细胞分选法初步鉴定卵巢癌干细胞表面标志作者：张弦蒋翠莲王宝偲刘蔷左鹏飞赵枫姝窦骏【摘要】目的：基于侧群（SP）细胞分选方法，初步鉴定卵巢癌干细胞（CSC) 表面标志，为临床靶向治疗卵巢癌提供靶分子。

方法：检测、分离卵巢癌细胞株A2780中的SP细胞，并对SP与Non SP细胞作细胞生物学鉴定，包括克隆形成能力、致瘤能力、耐药性、定量ATP结合框蛋白家族G2蛋白 (ABCG2)检测等；进一步用免疫磁选方法筛出ABCG2+及ABCG2-细胞，同样作上述细胞生物学鉴定，探讨ABCG2分子能否作为卵巢CSC的表面标志。

结果：卵巢癌A2780细胞株中的SP细胞在体外强克隆形成能力、裸鼠体内的高致瘤性、对化疗药物长春新碱较强耐受性及高表达ABCG2分子等生物学特性基本符合CSC的特征。

ABCG2＋细胞的克隆增殖能力略强于ABCG2-细胞；ABCG2+细胞的耐药性与SP细胞的耐药性一致。

结论： A2780细胞株中的SP细胞基本符合CSC的生物学特征，其高表达的ABCG2分子参与维持SP细胞表型，特别是多药耐药性。

ABCG2分子可作为靶向治疗CSC的靶分子，逆转肿瘤的多药耐药性。

【关键词】侧群细胞卵巢癌癌干细胞ABCG2分子靶向治疗Abstract： Objective To explore a target molecule for the clinical targeted therapy of ovarian cancer. Methods The SP cells and non SP cells were isolated respectively from the human ovarian cell 2780 strain by fluorescence activated cell sorting (FACS) and their biological characteristics were identified by analysis of their ability to form colonies in common media, tumorigenicity in Balb/c nude mice, and of their resistance to chemotherapeutic agents vinblastin. The expression of ABCG2 was detected with real time quantitative RT PCR (qRT PCR). The specific ABCG2 phenotype cells were further isolated from the ovarian cell A2780 strain for the same identification as above by the monoantibody labeled with immune magnetic beads by magnetic activated cell sorting system. Results The SP cells proliferative potency, clone formation ability in the common media, the tumorigenicity in Balb/c nude mice, and resistance to vinblastin in vitro were basically coincident with characteristics of cancer stem cells（CSC）. The ABCG2＋cells proliferative potency and resistance to vinblastin in vitro were higher than those of the ABCG2-cells. Conclusion The SP cells in the ovarian cell 2780 strain possess the traits of ovarial CSC and expressed ABCG2 molecule maintains the SP cells phenotype, especially in multidrugresistance. The ABCG2 molecule may be responsible for target molecule of the targeted therapy of ovarian cancer and for inversion of multidrug resistance in ovarian cancer.Key words：side population cells; ovarian cancer; cancer stem cells; ABCG2 molecule; target therapy卵巢癌是女性生殖器官常见肿瘤，发病率在妇科恶性肿瘤中列居第三，但其致死率却为各类妇科肿瘤之首［1］，因此，探索治疗卵巢癌的新途径，已成为进一步提高卵巢癌患者生存率的关键。

卵巢癌肿瘤干细胞分离鉴定方法的进展

卵巢癌肿瘤干细胞分离鉴定方法的进展
杨柳;乔杰;郭红燕
【期刊名称】《现代妇产科进展》
【年(卷),期】2013(22)9
【摘要】卵巢癌肿瘤干细胞是卵巢癌发生、复发及耐药的根源。

成功分离、鉴定肿瘤干细胞,有助于研究其特性,并针对性地开发靶向治疗手段。

目前已有一些较公认的可分离、富集肿瘤干细胞的方法,但由于肿瘤干细胞来源尚不清楚、卵巢癌存在高度异质性、体内体外环境差异大,这些方法均存在一定的局限性。

分析现有的分离鉴定方法,寻找特异的干细胞标记物,谨慎对待实验结果,有助于正确认识肿瘤干细胞。

【总页数】3页(P759-761)
【关键词】卵巢癌;肿瘤干细胞;分离鉴定
【作者】杨柳;乔杰;郭红燕
【作者单位】北京大学第三医院妇科
【正文语种】中文
【中图分类】R737.31
【相关文献】
1.人卵巢癌组织肿瘤干细胞的分离和鉴定 [J], 林盛;龙海霞;向橦;朱波;谢荣凯
2.肿瘤干细胞分离鉴定方法的研究进展 [J], 程俊美;谢峰;王慧
3.肿瘤干细胞理论及肿瘤干细胞分离和鉴定研究进展 [J], 宋东颖;王毅;孙岚;张英
鸽
4.卵巢癌细胞系ID8中肿瘤干细胞的分离及生物学特性鉴定 [J], 俞晓毓;吴迪;王净;李菲;白绪乐;赵枫姝;窦骏
5.卵巢癌细胞系ID8中肿瘤干细胞的分离及生物学特性鉴定 [J], 俞晓毓;吴迪;王净;李菲;白绪乐;赵枫姝;窦骏;;;;;;;;;
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