HPLC法测定盐酸法舒地尔含量
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科 技 论 坛
ＨＰ Ｌ Ｃ法测定盐酸法舒地 尔含量
李 扬
（ 哈 尔滨誉衡 药业股份 有限公 司， 黑龙 江 哈 尔滨 １ ５ ０ ０ ０ ０ ） 摘 要： 目的 ： 建立测定盐酸 法舒 地 尔含量的 方法。方 法 ： 采 用 ＨＰ Ｌ Ｃ法 ， 以１ ． ０ ％四 甲基 氢氧化铵 （ 磷 酸调节 ｐ Ｈ值 至 ７ ． ０ ） 一 甲醇 （ ７ ０： ３ ０ ） 为流动相 ； 流速 １ ． ０ ｍｌ ・ ｍ ｌ ； 检测波长 ２ ８ ０ ｎ ｍ； 进样量 ２ ０ ｌ 。结果 ： 盐酸 法舒地 尔在 １ ２ ． ０ ７ ｇ ／ ｍ ｌ ～１ ２ ０ ． ７ ０ ｇ ／ ｍ ｌ 范围内呈良好的 线性 关 系（ ｒ ＝ １ ） ； 本品 ８小时 内稳定性 良好 ； 平均回收率 ＝ ９ ９ ． ６ ４ ％， Ｒ ． Ｓ Ｄ＝ ０ ． １ ９ ％＜２ ． ０ ％； 中间精密度 良好 ， ＲＳ Ｄ＝ ０ ． ４ ７ ％＜２ ． ０ ％； 结论 ： 本 方法简 便、 准确、 灵敏 ， 适 用 于盐 酸 法舒 地 尔含 量 的 测 定 。 关键词 ： 法舒地 尔； 含量 ； 高效液相 色谱法 盐酸法舒地尔是 一种蛋 白激 酶抑 制剂 即细 表 １ 重 复 性 考 察结 果 胞 内钙离 子拮 抗剂 。血管平滑肌 的收缩是 由于 平 滑肌细胞内 ｃ ａ ２ ＋ 浓度显著增 高激活 了关键酶 的缘故 。当 ｃ ａ ２ ＋ 达到一定浓度时 ， 与ｃ ａ ２ ＋ 结合蛋 白钙调素结合 ，激活肌球蛋 白轻链磷酸化酶 ， 将 肌球蛋 白轻链磷酸化 ， 引起 肌肉收缩 。蛛网膜下 腔 出血时 ， 血管 中释放 出的各种血管收缩物质参 与血管痉挛 ， 最终通过肌球蛋 白轻链磷酸化造成 血管 收缩 。盐酸法舒地尔通过 阻断血管收缩过 精 密 量 取供 试 品储 备 溶 液 ｌ ｍ ｌ 及 对 照 品储 备 溶 液 １ ． ４ ｍ ｌ 至 程 的最终阶段 ， 肌球蛋 白轻链磷酸化 ， 来扩张血管 ， 抑制血管痉挛 。 １ ０ ｍｌ 容量瓶 中， 用流动相稀 释至刻度 ， 摇匀 ， 制 成每 ｌ ｍ ｌ 约含盐 酸 １ 仪器与试药 ２ ｕ ｇ （ １ ０ ０ ％） 的供试 品溶液 ， 同法制备 ３次。 分别取上述溶 Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ １ ２ ０ ０高效 液相色谱仪 ； Ｍｅ ｔ ｔ ｌ ｅ ｒ Ｘ Ｓ １ ０ ５ Ｄ Ｕ分析 天平 ； 盐 法舒地尔 ７ ０ ｕ ｌ 注入液相色谱仪 ，记 录色谱图。结果平均 回收率 ＝ ９ ９ ． ６ ４ ％， 酸法舒地 尔（ 批号 １ ０ ０ ３ ２ １ 、 １ ０ ０ ３ ２ ２ 、 １ ０ ０ ３ ２ ３ ） ； 对照品： 盐 酸法舒 地尔 液 ２ Ｒ Ｓ Ｄ ＝ ０ ． １ ９ ％＜２ ． ０ ％本方法准确度 良好。 （ 中国药品生物制 品检定所 ， 批号 １ ０ ０ ６ １ ４ — ２ ０ ０ ４ ０ １ ） 。 ４ ． ４中间精 密度试验 ２色谱条件与 系统适用性 取１ ０ ０ ３ ２ １ 批供试 品 ，由不 同分析人 员在不同 日期用不同设备 以１ ． Ｏ ％四甲基氢氧化 铵溶液 （ 磷酸调节 ｐ Ｈ值 至 ７ ． ０ ） 一甲醇 考察含量的变化情况 。 Ｒ Ｓ Ｄ ＝ ０ ． ４ ７ ％＜２ ． ０ ％。 试验 （ ７ ０： ３ ０ ）为 流动相 ；流 速 １ ． ０ ｍ ｌ ・ ｍ ｌ ；检测 波长 ２ ８ ０ ｎ ｍ；进样量 分别进行含量测定 ， 结果表明 ， 中间精密度 良好。 ２ ０ ｌ 。在上述色谱条件下 ， 盐 酸法 舒地尔峰理论板数 ｎ ＝ ８ ２ ７ ２ ． ９ ５ ２ ； ４ ． ５重复性试验 与相邻共存物之间的分离度 （ Ｒ）均 ＞１ ． ５ ；连续进样 ５次 Ｒ Ｓ Ｄ ＝ ０ ． 取 １ ０ ０ ３ ２ １ 批供试品 ， 依法测定其含量 ， 按外标法 以峰面积计算 ５ ７ ％； 拖 尾 因子 （ Ｔ ） ＝ １ ． ０ ２ ８ 。 含量 ， 平行测定 ６ 份 。结果见表 １ 。 ３测定 方法 试验结果表 明： 本方法的重复性 良好 。 精密称取供试品适量 ， 加流动相溶解并定量稀释制成每 ｌ ｍｌ 中
４ ． ６ 含 量 测 定 约含 ６ ０ Ｘｇ Ｉ 的溶 液。 精密量取 ２ ０ ｌ ， 注入液相色谱仪 ， 记录色谱 图； 取盐酸法舒地尔供试样 品， 依 法测定其含量。结果见表 ２ 。 另取盐酸法舒地尔对照品适量 ， 同法测定 。 按外标法以峰面积计算 ， 结果 ： 三批样品结果均在标示 量的 ９ ０ ． Ｏ ％～１ １ ０ ． Ｏ ％范 围内。 符合 即得 。 规定 。 ４方法学试验与结果 ５讨 论 ４ ． １ 线性 结果表明 ：盐酸法舒地尔在 １ ２ ． ０ ７ ｇ ／ ｍｌ ～１ ２ ０ ． ７ ０ ｇ ／ ｍ ｌ 范围内 精密称取盐酸法舒地尔对 照品 ３ ０ ． １ ９ ｍ ｇ ， 置５ ０ ｍ ｌ 量瓶 中 ， 加 流 ） ；本品 ８小时内稳 定性 良好 ；平均 回收率 动相使溶解并稀释至刻度 ， 作为贮备液。分别精 密量取贮备液 １ 、 ３ 、 呈 良好 的线性关系 １ ９ ． ６ ４ ％， Ｒ Ｓ Ｄ ＝ ０ ． １ ９ ％＜２ ． ０ ％； 中间精密度 良好 ， Ｒ Ｓ Ｄ ＝ ０ ． ４ ７ ％＜２ ． Ｏ ％， ５ 、 ７ 、 １ ０ ｍ ｌ ， 置于 ５ ０ ｍ ｌ 量瓶中 ， 用流动相稀释至刻度 ， 摇匀 ， 即得。精 ９ 三批 中试样品含量均大于 ９ ９ ． ０ ％。因此采用高效液相色谱法进行含 密量取 ２ ０ ｌ注入液相色谱仪 ， 记录色谱 图。 以其峰面积（ Ａ） 为纵坐 简单 、 便捷 、 准确 。 标 ，浓 度 （ ｃ）为 横 坐 标 ，进 行 线 性 回归 。盐 酸 法 舒 地 尔 在 量测定 ，
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科 技 论 坛
ＨＰ Ｌ Ｃ法测定盐酸法舒地 尔含量
李 扬
（ 哈 尔滨誉衡 药业股份 有限公 司， 黑龙 江 哈 尔滨 １ ５ ０ ０ ０ ０ ） 摘 要： 目的 ： 建立测定盐酸 法舒 地 尔含量的 方法。方 法 ： 采 用 ＨＰ Ｌ Ｃ法 ， 以１ ． ０ ％四 甲基 氢氧化铵 （ 磷 酸调节 ｐ Ｈ值 至 ７ ． ０ ） 一 甲醇 （ ７ ０： ３ ０ ） 为流动相 ； 流速 １ ． ０ ｍｌ ・ ｍ ｌ ； 检测波长 ２ ８ ０ ｎ ｍ； 进样量 ２ ０ ｌ 。结果 ： 盐酸 法舒地 尔在 １ ２ ． ０ ７ ｇ ／ ｍ ｌ ～１ ２ ０ ． ７ ０ ｇ ／ ｍ ｌ 范围内呈良好的 线性 关 系（ ｒ ＝ １ ） ； 本品 ８小时 内稳定性 良好 ； 平均回收率 ＝ ９ ９ ． ６ ４ ％， Ｒ ． Ｓ Ｄ＝ ０ ． １ ９ ％＜２ ． ０ ％； 中间精密度 良好 ， ＲＳ Ｄ＝ ０ ． ４ ７ ％＜２ ． ０ ％； 结论 ： 本 方法简 便、 准确、 灵敏 ， 适 用 于盐 酸 法舒 地 尔含 量 的 测 定 。 关键词 ： 法舒地 尔； 含量 ； 高效液相 色谱法 盐酸法舒地尔是 一种蛋 白激 酶抑 制剂 即细 表 １ 重 复 性 考 察结 果 胞 内钙离 子拮 抗剂 。血管平滑肌 的收缩是 由于 平 滑肌细胞内 ｃ ａ ２ ＋ 浓度显著增 高激活 了关键酶 的缘故 。当 ｃ ａ ２ ＋ 达到一定浓度时 ， 与ｃ ａ ２ ＋ 结合蛋 白钙调素结合 ，激活肌球蛋 白轻链磷酸化酶 ， 将 肌球蛋 白轻链磷酸化 ， 引起 肌肉收缩 。蛛网膜下 腔 出血时 ， 血管 中释放 出的各种血管收缩物质参 与血管痉挛 ， 最终通过肌球蛋 白轻链磷酸化造成 血管 收缩 。盐酸法舒地尔通过 阻断血管收缩过 精 密 量 取供 试 品储 备 溶 液 ｌ ｍ ｌ 及 对 照 品储 备 溶 液 １ ． ４ ｍ ｌ 至 程 的最终阶段 ， 肌球蛋 白轻链磷酸化 ， 来扩张血管 ， 抑制血管痉挛 。 １ ０ ｍｌ 容量瓶 中， 用流动相稀 释至刻度 ， 摇匀 ， 制 成每 ｌ ｍ ｌ 约含盐 酸 １ 仪器与试药 ２ ｕ ｇ （ １ ０ ０ ％） 的供试 品溶液 ， 同法制备 ３次。 分别取上述溶 Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ １ ２ ０ ０高效 液相色谱仪 ； Ｍｅ ｔ ｔ ｌ ｅ ｒ Ｘ Ｓ １ ０ ５ Ｄ Ｕ分析 天平 ； 盐 法舒地尔 ７ ０ ｕ ｌ 注入液相色谱仪 ，记 录色谱图。结果平均 回收率 ＝ ９ ９ ． ６ ４ ％， 酸法舒地 尔（ 批号 １ ０ ０ ３ ２ １ 、 １ ０ ０ ３ ２ ２ 、 １ ０ ０ ３ ２ ３ ） ； 对照品： 盐 酸法舒 地尔 液 ２ Ｒ Ｓ Ｄ ＝ ０ ． １ ９ ％＜２ ． ０ ％本方法准确度 良好。 （ 中国药品生物制 品检定所 ， 批号 １ ０ ０ ６ １ ４ — ２ ０ ０ ４ ０ １ ） 。 ４ ． ４中间精 密度试验 ２色谱条件与 系统适用性 取１ ０ ０ ３ ２ １ 批供试 品 ，由不 同分析人 员在不同 日期用不同设备 以１ ． Ｏ ％四甲基氢氧化 铵溶液 （ 磷酸调节 ｐ Ｈ值 至 ７ ． ０ ） 一甲醇 考察含量的变化情况 。 Ｒ Ｓ Ｄ ＝ ０ ． ４ ７ ％＜２ ． ０ ％。 试验 （ ７ ０： ３ ０ ）为 流动相 ；流 速 １ ． ０ ｍ ｌ ・ ｍ ｌ ；检测 波长 ２ ８ ０ ｎ ｍ；进样量 分别进行含量测定 ， 结果表明 ， 中间精密度 良好。 ２ ０ ｌ 。在上述色谱条件下 ， 盐 酸法 舒地尔峰理论板数 ｎ ＝ ８ ２ ７ ２ ． ９ ５ ２ ； ４ ． ５重复性试验 与相邻共存物之间的分离度 （ Ｒ）均 ＞１ ． ５ ；连续进样 ５次 Ｒ Ｓ Ｄ ＝ ０ ． 取 １ ０ ０ ３ ２ １ 批供试品 ， 依法测定其含量 ， 按外标法 以峰面积计算 ５ ７ ％； 拖 尾 因子 （ Ｔ ） ＝ １ ． ０ ２ ８ 。 含量 ， 平行测定 ６ 份 。结果见表 １ 。 ３测定 方法 试验结果表 明： 本方法的重复性 良好 。 精密称取供试品适量 ， 加流动相溶解并定量稀释制成每 ｌ ｍｌ 中
４ ． ６ 含 量 测 定 约含 ６ ０ Ｘｇ Ｉ 的溶 液。 精密量取 ２ ０ ｌ ， 注入液相色谱仪 ， 记录色谱 图； 取盐酸法舒地尔供试样 品， 依 法测定其含量。结果见表 ２ 。 另取盐酸法舒地尔对照品适量 ， 同法测定 。 按外标法以峰面积计算 ， 结果 ： 三批样品结果均在标示 量的 ９ ０ ． Ｏ ％～１ １ ０ ． Ｏ ％范 围内。 符合 即得 。 规定 。 ４方法学试验与结果 ５讨 论 ４ ． １ 线性 结果表明 ：盐酸法舒地尔在 １ ２ ． ０ ７ ｇ ／ ｍｌ ～１ ２ ０ ． ７ ０ ｇ ／ ｍ ｌ 范围内 精密称取盐酸法舒地尔对 照品 ３ ０ ． １ ９ ｍ ｇ ， 置５ ０ ｍ ｌ 量瓶 中 ， 加 流 ） ；本品 ８小时内稳 定性 良好 ；平均 回收率 动相使溶解并稀释至刻度 ， 作为贮备液。分别精 密量取贮备液 １ 、 ３ 、 呈 良好 的线性关系 １ ９ ． ６ ４ ％， Ｒ Ｓ Ｄ ＝ ０ ． １ ９ ％＜２ ． ０ ％； 中间精密度 良好 ， Ｒ Ｓ Ｄ ＝ ０ ． ４ ７ ％＜２ ． Ｏ ％， ５ 、 ７ 、 １ ０ ｍ ｌ ， 置于 ５ ０ ｍ ｌ 量瓶中 ， 用流动相稀释至刻度 ， 摇匀 ， 即得。精 ９ 三批 中试样品含量均大于 ９ ９ ． ０ ％。因此采用高效液相色谱法进行含 密量取 ２ ０ ｌ注入液相色谱仪 ， 记录色谱 图。 以其峰面积（ Ａ） 为纵坐 简单 、 便捷 、 准确 。 标 ，浓 度 （ ｃ）为 横 坐 标 ，进 行 线 性 回归 。盐 酸 法 舒 地 尔 在 量测定 ，