临床生化检验技术本科第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价

②管回收率： 0.18(mmol/L)除 以0.19(mmol/L) 等于94.7% ③管回收率： 1.15(mmol/L)除 以1.19(mmol/L) 等于96.6 平均回收率
=95.7%
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
结果列表
测得浓度
①1.70 ②1.88 ③2.85 平均
加入浓度
― 0.19 1.19
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
第二节 临床生物化学检测方法的评价 和性能判断
一、检测系统的比对 二、方法学性能评价 三、质量目标设定与方法 学性能判断
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
方法学评价
• 建立或引进一个新方法，应对其技术性能如准确 度、精密度、线性等指标做出评价。
• 通过实验途径，对其性能评价指标（精密度、准 确度等）进行测定，决定候选方法是否可以被接 受（判断其能否满足临床使用要求）。
主要方法： 溴甲酚绿法、双缩脲法、J-G法等。
应用： 临床常规检验使用，常规方
法在作出评定以后，经有关学术 组织认可，可以作为推荐方法 （recommended method ） 。
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
• 决定性方法
一级标准品
• 参考方法
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2.精密度评价——重复性试验
试验的目的在于考察候选方法的偶然误差（也称 随机误差）。 （1）方法：在重复性条件下对同一样本，进行多 次分析测定，各测定值间随机误差的大小，即结 果的可重复程度就是精密度。一般测定次数为20 次。
反映精密度好坏的指标：标准差或变异系数。
应用：
由于技术要求太高，费用昂贵，这类方法不直接用于鉴定 常规方法的准确性，只用于评价参考方法与一级标准品。
储氢重量分析仪 (北京英格海德分析技术有限公司)
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（二）参考方法 （reference method）
定义： 是指准确度与精密度已经被充分证实，且经公认的权威
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
• 批内重复性试验 • 日内重复性试验 • 日间重复性试验 • 总的不精密度
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（2）注意事项
① 试验标本的选择 • 标准液简便易得，可制成不同浓度，干扰因素少，
可作为评价随机误差的最佳样品。 • 冻干质控血清稳定、使用方便，适用于进行日间
重复性试验。 • 患者标本或混合血清常用于短时间内完成的试验。
② 校准品、试剂使用同一批号，使用相同仪器。 ③ 离群值剔除
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（3）精密度图
CV
SD
SD
SD A 分析物浓度
CV A 分析物浓度
CV A 分析物浓度
图2-2 分析物浓度与标准差/变异系数关系图
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
规方法，评价其误差大小、干扰因素并决定是否可以被接 受；用于鉴定二级标准品和为质控血清定值、商品试剂盒 的质量评价。
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（三）常规方法（routine method）
定义： 应具有足够的精密度、准确度和特异度，有适当的分析
范围，经济实用，其性能指标符合临床或其它目的的需要。
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第二章 临床生物化学检测方法的 选择与评价
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
【教学目标】
熟悉： 1.临床生物化学检测方法的选择 2.临床生物化学检测方法的评价和性能判断 3.校准与溯源性
了解：测量不确定度
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
第二章 临床生物化学检测方法的 选择与评价
回收浓度
― 0.18 1.15
回收率
― 94.7 96.6 95.7
思考题
一个含钙真值为2.5mmol/L的标 本，若用该方法测定，浓度为？ 误差为？
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（三）检测限和分析灵敏度评价
1. 基本概念 检测限是指检测系统可检测出的最低分析物浓度，又称 为分析灵敏度。
（一）决定性方法 （definitive method） 是指准确度最高，系统误差最小，经过详细的 研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不 够明确的方法，其测定结果与真值最为接近。
主要方法： 重量分析法、中子活化法、同位素稀释-质谱分析法（ID-MS）
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
用回收率表示回收实验
加入浓度 V血清 V标准液 V总体积
C标准液
回收浓度＝样本最终测定浓度－基础样本浓度
回收率％＝回收浓度/加入浓度×100％
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
回收率计算举例：测定血清钙
样品 制备
加入 浓度
回收 浓度
回收率
①基础样品：
血清2ml 蒸馏水0.1ml ②分析样品：
血清2ml 4mmol/L钙 标准液0.1ml ③分析样品：
血清2ml 25mmol/L钙 标准液0.1ml
②管加入浓度： 4*0.1/(2+0.1) =0.19(mmol/L) ③管加入浓度： 25*0.1/(2+0.1) =1.19(mmol/L)
②管回收浓度： 1.88-1.7 =0.18(mmol/L) ③管回收浓度： 2.85-1.7 =1.15(mmol/L)
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2. 检测限评价 （1）方法及原理：
LoB和LoD分别通过空白样本或低值样本重复测 定获得。 LoQ的测定
• 试验样品：空白样品 检测限样品 • 测定次数：无具体规定，通常测定10～20次。 • 试验时间：一般做10天检测。 • 结果计算 （2）注意事项
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
（四）可报告范围和线性评价
1. 基本概念 （1）可报告范围又称分析测量范围（analytical
measurement range）指患者样本没有进行任何 预处理（稀释或浓缩等），检测方法能够直接测 定出的待测物的范围。由检测限和检测上限构成 的封闭区间。 （2）临床可报告范围是指样本经过稀释、浓缩或其 他预处理，以扩展直接分析测量下的分析物浓度 范围。
3. 准确度（accuracy）指单次测量结果与真值的接 近程度。
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
图2-3 精密度与准确度关系图
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
回收试验（Recovery Experiment） 回收实验
定义：
评估实验 方法正确测定 加入常规分析 样品中的纯分 析物的能力。
第一节 第二节 第三节 第四节
临床生物化学检测方法的选择 临床生物化学检测方法的评价和性能判断 校准与溯源性 测量不确定度
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
第一节 临床生物化学检测方法的选择
一、临床生物化学检测方 法的分级 二、临床生物化学检测方 法的选择
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
方法学的性能 实用性 使用的方便性、经济性、安全性等。 精密度 可靠性 准确度
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
一、临床生物化学检测方法的分级
分级依据：IFCC根据分析方法的准确性 与精密度的不同。
分为三级： • 决定性方法 • 参考方法 • 常规方法
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
（1）重复性 指在相同测量条件下，对同一被测 量物进行连续多次测量，所得结果之间的一致性。 对应批内不精密度。
（2）复现性 指改变测量条件后，同一被测量物 的测量结果之间的一致性。 中间精密度：实验室内不同操作条件下，采 用相同检测方法对同一被测量物进行多次重复测 量所得结果之间的一致程度。
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2. 线性评价
基本步骤 试验样本 （1）混合患者血清 （2）在混合患者血清中加入一定量的待测物 （3）经过特殊处理的混合人血清 （4）标准品、商品化质控物或能力验证材料
.
目的：
通过测定比 例系统误差，衡 量实验方法的准 确度，验证方法 可靠性以及校正 测得值。
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
实验方法
纯 品 标 准 液
病 人 样 品
分 析 样 品
无
分
病
析
人
物
样
溶
品
基 础 样 品
液
分析 测定结果
回收 率
分析 测定结果
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
3. 分析灵敏度和功能灵敏度 （1）分析灵敏度（analytical sensitivity）指以横坐
标为浓度，纵坐标为测量信号的校准曲线的斜率， 反映检测系统或方法辨别微量分析物浓度差异的 能力。 （2）功能灵敏度（ functional sensitivity ）指测定结 果变异系数符合特定要求时的分析物浓度，可用 LoQ取代。反映了方法能可靠测定的最低浓度。
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
（3）定量限（ Limit of Quantification,LoQ）指满 足精密度和正确度，在规定的实验条件下能够可 靠定量的分析物的最低浓度。
（3）线性（linearity）指在分析测量范围内，测量 值与预期的分析物浓度在数学上有明确的直线关 系。
（4）线性范围（ linear range）指测量值与预期的 分析物浓度呈直线的范围。
（1）空白限（Limit of Blank,LoB）指测量空白样本时能观 察到的最高测量结果。
（2）检出限（Limit of Detection,LoD）也称检测低限或最 小检测浓度，指可以定性地从样本中检出分析物的最低 浓度。
（3）定量限（ Limit of Quantification,LoQ）指满足精密度 和正确度，在规定的实验条件下能够可靠定量的分析物 的最低浓度。
（二）正确度和准确度评价
1. 基本概念 （1）正确度（trueness）指由大量测量结果得到的
平均值与真值之间的一致程度。反映系统误差的 大小。 （2）偏倚（bias）指大量测量结果的平均值与真值 之间的差异。
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
2. 正确度评价 （1）方法及原理 与参考方法进行方法学比对 检测定值的标准物 回收试验 （2）注意事项
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
一、检测系统的比对
（一）检测系统的概念 检测系统：完成一个项目检验所涉及的样本、仪 器、试剂、校准品、操作程序、质量控制、保养 计划和操作者等的组合。 1.配套检测系统 2.自建检测系统
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
（二）检测系统比对的实施步骤 1. 制订分析质量目标 2. 评价仪器性能 3. 确定对比检测系统 4. 评价检测系统的分析性能 5. 比对
确定检测需求 选择候选方法
设定质量目标 方法学评价
方法改进
方法实施
日常维护
临床常规检测验室引入新方法的流程图
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
（一）确定检测需求 1. 临床需求； 2. 方法的分析性能要求； 3. 自动分析仪的性能要求；
（二）候选方法的选择 1. 根据方法性能选择； 2. 根据所需条件设备选择 ；
（三）可接受性判断
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
二、方法学性能评价
（一）精密度和精密度评价 1. 基本概念
精密度（precision）是指在规定条件下获得的 相互独立的测量结果之间的一致性，是表示测定结 果中随机误差大小程度的指标。
精密度常用标准差或变异系数来描述不精密度， 从而度量精密度大小。
机构（国家主管部门、相关学术团体和国际性组织等）颁布 的方法。
干扰因素少，系统误差很小，有适当的灵敏度、特异度、 较宽的分析范围并且线性良好，重复测定中的随机误差可以 忽略不计。
主要方法：
原子吸收分光光度法、火焰光度法、免疫化学法，离子交换层析法等。
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价
应用： 能在条件优越的实验室作常规分析，主要用于鉴定常
二级标准品
• 常规方法
控制物
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二、临床生物化学检测方法的选择
方法选择的要求 （1）实用性 微量快速，操作简便，易于实现 自动化，便于急诊，费用低廉，应用安全。 （2）可靠性 精密度要求：变异系数（CV%）< 5%； 准确度要求：偏差系数（CB）< 5%。
第二章 临床生物化学检测方法的选择与评价