各种葡聚糖凝胶的分离范围与用途
各种葡聚糖凝胶的分离范围及用途
各种葡聚糖凝胶的分离范围及⽤途SephadexG-10葡聚糖凝胶 G-10 分离范围<700 适⽤于脱盐、肽与其它⼩分⼦的分离Sephadex G-15 葡聚糖凝胶 G-15 分离范围<1500 适⽤于脱盐、肽与其它⼩分⼦的分离Sephadex G-15 葡聚糖凝胶 G-15 分离范围<1500 适⽤于脱盐、肽与其它⼩分⼦的分离Sepharose 6B 琼脂糖凝胶 6B 分离范围：1000-5000，适⽤于脱盐、肽与其它⼩分⼦的分离ConA-Sepharose ConA 琼脂糖凝胶分离范围：1000-5000，适⽤于脱盐、肽与其它⼩分⼦的分离Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶 G-25 中分离范围 1000-5000 适⽤于脱盐、肽与其它⼩分⼦的分离Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶 G-25 中分离范围 1000-5000 适⽤于脱盐、肽与其它⼩分⼦的分离Sephadex G-25 Fine 葡聚糖凝胶 G-25 细分离范围 1000-5000 适⽤于脱盐、肽与其它⼩分⼦的分离Sephadex G-25 Fine 葡聚糖凝胶 G-25 细分离范围 1000-5000 适⽤于脱盐、肽与其它⼩分⼦的分离SephadexG-50 Medium 葡聚糖凝胶 G-50 中分离范围 1500-30000 Sephadex G-50 Medium 葡聚糖凝胶 G-50 中分离范围1500-30000 Sephadex G-75 葡聚糖凝胶 G-75 分离范围 3000-80000 Sephadex G-75 葡聚糖凝胶 G-75 分离范围 3000-80000 DEAE Sepharose FF DEAE琼脂糖凝胶 FF 分离范围：3000-80000 Sephadex G-100 葡聚糖凝胶G-100 分离范围 4000-150000Sephadex G-100 葡聚糖凝胶 G-100 分离范围 4000-150000Sephadex G-150 葡聚糖凝胶 G-150 分离范围 5000-300000DEAE Sepharose CI-6B 琼脂糖凝胶CI-6B 分离范围：5000-300000 Sephadex G-150 葡聚糖凝胶 G-150 分离范围 5000-300000Sephadex G-200 葡聚糖凝胶 G-200 分离范围 5000-600000Sephadex G-200 葡聚糖凝胶 G-200 分离范围 5000-600000Sephadex G-200 葡聚糖凝胶 G-200 分离范围 5000-600000DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝胶 A-25 颗粒⼤⼩：40-120µm 分离⼤⼩：⼩蛋⽩及巨⼤分⼦DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝胶 A-25 颗粒⼤⼩：40-120µm 分离⼤⼩：⼩蛋⽩及巨⼤分⼦DEAE Sephades A-50 DEAE DEAE葡聚糖凝胶 A-50 颗粒⼤⼩：40-120µm，分离范围：⼩蛋⽩及巨⼤分⼦。
葡聚糖凝胶 Sephadex LH20 使用说明及使用心得
问：分得效果不是很好，上了有 8 毫升的样，我用甲醇洗脱，结果用 约一个保留体积就洗完了，东西不仅越分越少，而且仍然和没上柱之前差 不多，很让人困惑，郁闷。
了 1g 干态的,Sephadex LH20 对不同溶剂中的保留体积： water 2.1ml MeOH 1.9ml EtOH 1.8ml CHCl3 1.6ml n-BuOH 1.6ml 丙酮 0.8ml 乙酸乙酯 0.4ml 甲苯 0.2ml
2 "还有是不是样品的溶解是不是要与洗脱的起使浓度相同?如何确定样品 在最佳配比的容液中溶呢?"
不要着急,实验是一点一点做出来的,刚开始总是困难的.首先我要说 的是 Sephadex LH20 不是万能的,你的样品不一定适于用它分离,
1 "结果用约一个保留体积就洗完了",这很正常,这也是 Sephadex LH20 这种填料的特点:"洗脱体积一般为 2-3 个保留体积，对特殊保留强的化合 物，可洗脱 5 个保留体积",
3. 样品的处理和洗脱溶剂的选择。
如果样品极性大，选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积 的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（必须要进 行过滤！否则把 Sephadex LH-20 堵塞，就必须将 Sephadex LH-20 的柱头 部分弃去，造成不必要的浪费）。
如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少 体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。
当然有影响,Sephadex LH20 在不同的溶剂中的吸涨程度是不同的(任何 填料都是这样,只是 Sephadex LH20 很明显),一般在丙酮，乙酸乙酯 中收 缩很厉害,所以一般不用丙酮，乙酸乙酯 作溶剂,如果前后使用的两种洗脱 溶剂对 Sephadex LH20 的吸涨程度相差很大,还会产生大量气泡.以下列举
sephadex知识剖析
【操作步骤】
（1）A-50经酸碱处理，平衡至中性后，浸泡于0.1mol/L， pH7.4 PB中，置4℃冰箱储存备用。 （2）装柱：同DE52。 （3）平衡：松开出水口螺旋夹，以PB平衡，控制流速为 15滴/min，• 待洗脱液与流出液之pH值达到一致时，停止 平衡。 （4）加样、洗脱、收集与浓缩：基本上同DE52，以 0.1mol/L PB洗脱。 用过的DEAE-Sephadex A-50可用0.5mol/L Na2HPO4洗 脱回收。洗至流出液中无蛋白（OD280nm<0.04）后再用 蒸馏水洗至中性，加入0.02％叠氮钠于4℃保存备用。
Sephadex系统知识
葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶系列是当今生物大 分子分离、提取、纯化的重要分离材料， 按性能分包括 凝胶过滤、 离子交换、 疏水层析、 亲和层析，
主要用于蛋白质、核酸、多肽、多糖、酶的脱盐 与分离纯化中。 葡聚糖凝胶为葡聚糖和环氧氯丙烷交联而成的 珠状产品，化学性能稳定，在潮湿、中型ph、高 压120度，灭菌30min情况下，不影响色谱性能， 适用于柱色谱操作。用于蛋白质脱盐及不同分子 量蛋白在凝胶分离范围内的分离纯化，可在酶、 多糖、核酸和其它生物大分子的纯化中广泛应用。
葡聚糖凝胶LH
用途：分离水不溶物质。 葡聚糖凝胶LH-20/Sephadex LH-20 分离中 等大小生物分子，球蛋白分离范围100～ 4000 葡聚糖凝胶LH-60/Sephadex LH-60 分离 100～20000
葡聚糖凝胶C阳离子交换剂，吸附碱 性蛋白：
羧甲基葡聚糖凝胶C-25/CM葡聚糖凝胶C-25/CM Sephades C-25 应用：MW＞20000；载量4-5mmol/g 羧甲基葡聚凝胶C-50/CM葡聚糖凝胶C-50/CM Sephades C-50 应用：中等大小生物分子（30－200KD）；载量45mmol/g SP葡聚糖凝胶C-25/SP Sephades C-25 应用：MW>200 KD；载量：2.0-2.6mmol/g SP葡聚糖凝胶C-50/SP Sephades C-50 应用：中等大小 生物分子（30－200KD）；载量：2.0-2.6mmol/g
葡聚糖gpc级
葡聚糖gpc级
葡聚糖GPC级是一种用于分子量测定的标准品，常用于聚合物分子量的测定。
GPC是凝胶渗透色谱法的缩写，是一种常用的分离和分析方法，用于测定聚合物的分子量和分布。
葡聚糖GPC级是一种经过高度纯化的葡聚糖标准品，其分子量经过精确测定，可用于校正凝胶渗透色谱法测定分子量的准确性和精度。
在使用葡聚糖GPC级时，需要注意以下几点：
1.选用合适的葡聚糖GPC级标准品，根据需要测定的聚合物的分
子量和分布范围选择合适的标准品。
2.在使用前，应将葡聚糖GPC级标准品充分溶解并混合均匀，以
保证其浓度和纯度的一致性。
3.在使用过程中，应保持葡聚糖GPC级标准品的干燥和密封性，
避免其受潮和污染。
4.在使用后，应将葡聚糖GPC级标准品妥善保存，避免其受到物
理和化学因素的干扰，以保证其质量和稳定性。
总之，葡聚糖GPC级是一种重要的标准品，可用于凝胶渗透色谱法测定聚合物的分子量和分布。
在使用时，需要注意选择合适的标准品、保持其纯度和稳定性，以保证测定结果的准确性和可靠性。
葡聚糖凝胶75的操作方法
葡聚糖凝胶75的操作方法葡聚糖凝胶75是一种常用的凝胶材料，适用于生物学分离、电泳、柱层析等实验。
下面是葡聚糖凝胶75的详细操作方法。
1. 材料准备- 一定量的葡聚糖凝胶75。
根据实验需要，确定所需凝胶的重量。
- 缓冲溶液。
根据实验需要，选择合适的缓冲溶液，并按照实验方案调制好。
- 试管或实验室常规操作用品。
2. 准备葡聚糖凝胶- 将葡聚糖凝胶75取出，称取所需重量，放入一个干净的容器中。
3. 膨胀葡聚糖凝胶- 在称量容器中，加入足够的缓冲溶液，使葡聚糖凝胶逐渐膨胀，在液体中悬浮。
- 注意需加入的液体量，以保证膨胀后的葡聚糖凝胶具有所需的性质。
4. 筛选葡聚糖凝胶- 等待膨胀约30分钟，葡聚糖凝胶会逐渐膨胀并在液体中扩散。
- 使用数个试管架，每个试管架上插入一根取下的注射器针头，将其作为筛选葡聚糖凝胶的框架。
- 将膨胀的葡聚糖凝胶倒入筛选框架中，允许其自由流动并同时通过针头间的缝隙中流出。
- 这一步的目的是去除空气泡，并筛选出凝胶颗粒均匀、没有结块的葡聚糖凝胶。
5. 保存和激活- 将筛选后的葡聚糖凝胶用缓冲溶液保存，避免葡聚糖凝胶干燥。
- 如需激活葡聚糖凝胶，将其置于适当的缓冲溶液中，加入一定浓度的盐类或其他激活剂，并在较高温度（通常为60-80C）下固化一段时间，以激活葡聚糖凝胶。
6. 实验操作- 根据实验需求，将激活后的葡聚糖凝胶放入柱层析设备中。
- 将样品加入柱中，并使用缓冲溶液洗脱，或者使用适当的溶液进行柱层析。
- 注意柱层析过程中的操作，避免葡聚糖凝胶碎裂或溢出。
7. 结果分析- 根据实验的结果，可以通过检测样品组分的移动速率、表型等参数，进行结果的分析和解释。
葡聚糖凝胶75的操作方法主要包括材料准备、膨胀葡聚糖凝胶、筛选葡聚糖凝胶、保存和激活、实验操作以及结果分析等步骤。
每一步操作都需要仔细严谨，以确保实验的准确性和重复性。
葡聚糖凝胶操作方法
【实验目的】1.掌握葡聚糖凝胶的特性及凝胶层析的原理。
2．学习葡聚糖凝胶层析的基本操作技术。
【实验原理】凝胶层析又称分子排阻层析或凝胶过滤，是以被分离物质的分子量差异为基础的一种层析分离技术，这一技术为纯化蛋白质等生物大分子提供了一种非常温和的分离方法。
层析的固定相载体是凝胶颗粒，目前应用较广的是：具有各种孔径范围的葡聚糖凝胶（Sephadex）和琼脂糖凝胶（Sepharose）。
葡聚糖凝胶是由直链的葡聚糖分子和交联剂3—氯1，2—环氧丙烷交联而成的具有多孔网状结构的高分子化合物。
凝胶颗粒中网孔的大小可通过调节葡聚糖和交联剂的比例来控制，交联度越大，网孔结构越紧密；交联度越小，网孔结构就越疏松，网孔的大小决定了被分离物质能够自由出入凝胶内部的分子量范围。
可分离的分子量范围从几百到几十万不等。
葡聚糖凝胶层析，是使待分离物质通过葡聚糖凝胶层析柱，各个组分由于分子量不相同，在凝胶柱上受到的阻滞作用不同，而在层析柱中以不同的速度移动。
分子量大于允许进入凝胶网孔范围的物质完全被凝胶排阻，不能进入凝胶颗粒内部，阻滞作用小，随着溶剂在凝胶颗粒之间流动，因此流程短，而先流出层析柱；分子量小的物质可完全进入凝胶颗粒的网孔内，阻滞作用大，流程延长，而最后从层析柱中流出。
若被分离物的分子量介于完全排阻和完全进入网孔物质的分子量之间，则在两者之间从柱中流出，由此就可以达到分离目的。
本实验以葡聚糖凝胶G—25作为固定相载体，来分离蓝色葡聚糖—2000和溴酚蓝。
蓝色葡聚糖—2000分子量接近2×106，而溴酚蓝分子量为670，二者分子量相差较大，前者完全排阻，而后者则可完全进入凝胶颗粒网孔内，二者通过层析柱的时间不同而分开。
【实验材料】1.实验器材层析柱(1×20cm)附有一小段乳胶管及螺旋夹；洗脱液瓶(带下口的三角瓶，250m1)；试管及试管架；量筒10m1；721型分光光度计2.实验试剂(1) Tris—醋酸缓冲液(pH7.0):取0.0lmol/L Tris溶液(含0.1mol/L KCl)900ml，用浓醋酸调pH至7.0，加蒸馏水至1000m1。
葡聚糖凝胶G系列使用说明手册
葡聚糖凝胶使用说明Sephadex Gel Manuals1化学和物理性质葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶液中溶胀。
G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度，因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。
葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。
葡聚糖凝胶有不同的粒度。
超细级的葡聚糖凝胶是用于需要极高分辨率的柱色谱和薄层色谱。
粗级和中级的凝胶用于制备性色谱过程，可在较低的压力下获得较高的流速。
另外，粗级也可用于批量工艺。
1.1化学稳定性葡聚糖凝胶不溶于一切溶剂（除非它被化学降解）。
它在水、盐溶液、碱和弱酸性溶液中都是稳定的，在强酸中凝胶骨架的糖苷键被水解。
长期接触氧化剂将破坏凝胶，因而应避免使用。
1.2物理稳定性葡聚糖凝胶并不熔融，可以在湿态、中性PH进行灭菌。
干态的凝胶加热至120℃以上将开始焦糖化。
葡聚糖凝胶的机械强度取决于交联度。
2产品说明名称分离范围（球蛋白）应用葡聚糖凝胶G-10<700缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除小分子葡聚糖凝胶G-15<1500缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除小分子葡聚糖凝胶G-251000-5000工业上脱盐及交换缓冲液葡聚糖凝胶G-501000-30000多肽分离、脱盐、清洗生物提取液、分子量测定葡聚糖凝胶G-752000-70000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定葡聚糖凝胶G-1002000-120000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定葡聚糖凝胶G-1505000-300000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定葡聚糖凝胶G-2005000-600000蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定3使用方法3.1乙醇浸泡在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干。
3.2无盐水浸泡室温下，在无盐水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的完全溶胀。
葡聚糖分离范围
凝胶过滤填料的分离范围表SephadexG-10葡聚糖凝胶G-10 分离范围<700 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-15 葡聚糖凝胶G-15 分离范围<1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-15 葡聚糖凝胶G-15 分离范围<1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sepharose 6B 琼脂糖凝胶6B 分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离ConA-Sepharose ConA琼脂糖凝胶分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶G-25 中分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶G-25 中分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-25 Fine 葡聚糖凝胶G-25 细分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-25 Fine 葡聚糖凝胶G-25 细分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离SephadexG-50 Medium 葡聚糖凝胶G-50 中分离范围1500-30000Sephadex G-50 Medium 葡聚糖凝胶G-50 中分离范围1500-30000Sephadex G-75 葡聚糖凝胶G-75 分离范围3000-80000 Sephadex G-75 葡聚糖凝胶G-75 分离范围3000-80000 DEAE Sepharose FF DEAE琼脂糖凝胶FF 分离范围：3000-80,000Sephadex G-100 葡聚糖凝胶G-100 分离范围4000-150000Sephadex G-100 葡聚糖凝胶G-100 分离范围4000-150000Sephadex G-150 葡聚糖凝胶G-150 分离范围5000-300000DEAE Sepharose CI-6B 琼脂糖凝胶CI-6B 分离范围：5000-300,000Sephadex G-150 葡聚糖凝胶G-150 分离范围5000-300000Sephadex G-200 葡聚糖凝胶G-200 分离范围5000-600000Sephadex G-200 葡聚糖凝胶G-200 分离范围5000-600000Sephadex G-200 葡聚糖凝胶G-200 分离范围5000-600000DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝胶A-25 颗粒大小：40-120μm 分离大小：小蛋白及巨大分子DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝胶A-25 颗粒大小：40-120μm 分离大小：小蛋白及巨大分子DEAE Sephades A-50 DEAE DEAE葡聚糖凝胶A-50 颗粒大小：40-120μm，分离范围：小蛋白及巨大分子做纯化的人可能经常接触到sephadex，BIO-Gel，sephacryl s-,sepharos e BIo-Gel等几种填料，有时会混淆在一起，看到一个贴子较好的介绍了这些填料的区别，希望对大家有用。
葡聚糖凝胶 G-50 Medium 使用说明书
葡聚糖凝胶G-50 Medium使用说明书为确保产品的性能和无忧的操作，使用前请仔细阅读本手册，有任何疑问请咨询本公司售后技术支持或销售人员。
1. 产品介绍葡聚糖凝胶G-50 Medium是一种凝胶过滤层析介质（也叫体积排阻色谱），适用于生物分子的脱盐、缓冲液置换、组群分离、精细纯化。
特点如下：a. 经典的葡聚糖介质，选择性好。
b. 生物大分子（>30kDa）的快速脱盐和缓冲液置换（一步完成）。
c. G-50 Medium，可用于组群分离和杂质的去除（以排阻限30kDa为分界点）。
d. G-50 Fine，可用于小分子蛋白的分离纯化（1.5-30kDa）。
表1：性能参数2.选择2.1 介质级别的选择a. 快速脱盐、缓冲液置换、组群分离和杂质的去除：选择G-50 Medium，粒径大、流速快。
b. 小分子蛋白分离纯化：选择G-50 Fine，粒径小、分辨率高。
2.2 层析柱的选择a. 快速脱盐、缓冲液置换、组群分离和杂质的去除（上样量可达到30%CV）：选择粗短型层析柱（柱床高度低，例如XK 16/20），流速快、周期短。
b. 小分子蛋白分离纯化（上样量为0.5%-4%CV）：选择细长型层析柱（柱床高度高，例如XK 16/70），柱效高、分辨率好。
备注：CV指柱体积。
3. 使用3.1 溶胀取一定量的干粉，加入过量的纯化水（缓冲液：干粉≥20ml：1g），在室温（25℃）溶胀24小时或沸水浴溶胀3小时。
备注：溶胀过程中可进行柔和的搅拌，杜绝使用高速或剧烈的搅拌方式（例如磁力搅拌等）。
3.2 清洗待介质自然沉降后，小心的倒出上清液（包括极少量没有溶胀好的干粉和一些漂浮的小颗粒介质），再加入3-5倍体积的纯化水进行重悬。
重复此步骤5次。
备注：用于清洗产品中残留的微量有机试剂和碱性物质。
3.3 重悬在清洗好的介质中加入一定量的缓冲液（缓冲液:介质=1:3），用玻璃棒或其它搅拌装置柔和搅拌3-5分钟。
凝胶的种类及性质
凝胶的种类及性质（一）交联葡聚糖凝胶（Sephadex）⑴Sephadex G交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。
例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。
交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。
因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。
⑵Sephadex LH-20，是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物，能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。
（二）琼脂糖凝胶：商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。
琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。
一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。
琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。
（三）聚丙烯酰胺凝胶：是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。
交联剂越多，孔隙越小。
聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P （Bio-Gel P），由美国Bio-Rod厂生产，型号很多，从P-2至P-300共10种，P 后面的数字再乘1000就相当于该凝胶的排阻限度。
（四）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel ，具有大网孔结构，可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。
三、实验技术（一）层析柱层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管。
层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径，一般制备用凝胶柱，直径大于2厘米，但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。
葡聚糖凝胶柱层析
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外。
亲水性
葡聚糖凝胶是一种亲水性凝胶，在 水中能够膨胀并保持稳定的结构。
分子筛作用
由于凝胶的网孔大小不同，不同大 小的分子在通过凝胶柱时的路径和 速度也不同，从而实现分子的分离。
柱层析分离原理
吸附与解吸
样品中的各组分在葡聚糖凝胶上 的吸附能力不同，通过选择合适 的洗脱液，可以实现各组分的分
离。
分子筛效应
4. 上样
5. 洗脱与收集
将待分离样品溶解在少量洗脱液中，沿柱 内壁缓慢加入，避免冲击凝胶表面。
开启恒流泵，以恒定流速进行洗脱，同时 用收集器按一定时间或体积收集流出液。
6. 检测与记录
7. 结果分析
对收集到的流出液进行适当稀释后，利用 紫外可见分光光度计或酶标仪等检测目标 物质的含量，并记录数据。
优点
分辨率高，操作简便，重 复性好，对样品的适用范 围广。
缺点
对于某些非水溶性物质或 极端条件下的分离效果不 佳，且分离过程中可能存 在吸附损失。
02 实验材料与方法
主要试剂与仪器
主要试剂
葡聚糖凝胶（如Sephadex G-25 、G-50、G-100等）、洗脱液（ 一般为缓冲液或盐水）、待分离 样品。
基本原理 • 实验材料与方法 • 葡聚糖凝胶柱层析在生物大分子分离中应
用 • 葡聚糖凝胶柱层析在药物分析中应用 • 葡聚糖凝胶柱层析在环境科学中应用 • 实验结果分析与讨论
01 葡聚糖凝胶柱层析基本原 理
葡聚糖凝胶结构与性质
三维网状结构
葡聚糖凝胶具有三维的交联网状 结构，这种结构允许小分子进入 凝胶内部，而大分子则被排除在
环境污染物检测与去除
葡聚糖凝胶Sephadex LH-20在天然产物分离纯化中的应用
葡聚糖凝胶Sephadex LH-20在天然产物分离纯化中的应用陈亚军;高岩;杨春娟;苏晓琳;王蒙;王知斌【期刊名称】《化学工程师》【年(卷),期】2016(0)8【摘要】凝胶过滤色谱法是分离纯化天然产物的有效方法之一,Sephadex LH-20是最常用的一种葡聚糖凝胶填料,具有操作简便、分离纯度高,适用于多种有机溶剂等优点,可用于分离纯化苯丙素、黄酮、醌类、生物碱和萜类等天然产物.本文对Sephadex LH-20的分离原理和特性及在天然产物分离纯化中的应用方面进行系统综述,为相关的分离纯化研究和实际生产提供了重要的参考依据.【总页数】4页(P53-55,80)【作者】陈亚军;高岩;杨春娟;苏晓琳;王蒙;王知斌【作者单位】黑龙江中医药大学,教育部北药基础与应用研究重点实验室,黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,教育部北药基础与应用研究重点实验室,黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,教育部北药基础与应用研究重点实验室,黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,教育部北药基础与应用研究重点实验室,黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,教育部北药基础与应用研究重点实验室,黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室,黑龙江哈尔滨150040;黑龙江中医药大学,教育部北药基础与应用研究重点实验室,黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室,黑龙江哈尔滨150040【正文语种】中文【中图分类】R284.2【相关文献】1.葡聚糖凝胶Sephadex LH-20分离苷类的研究进展 [J], 梁耀光;吕巧莉2.大孔树脂联合Sephadex LH-20葡聚糖凝胶纯化蜂胶总黄酮工艺研究 [J], 李治;汤毛毛;李景;常相伟;刘劲松;彭代银;王国凯;桂双英3.大孔树脂联合Sephadex LH-20葡聚糖凝胶纯化蜂胶总黄酮工艺研究 [J], 李治;汤毛毛;李景;常相伟;刘劲松;彭代银;王国凯;桂双英4.PVP,C_(18)-柱和Sephadex LH-20在激素纯化中的应用 [J], 袁朝兴;沈镇德;商慧琛5.葡聚糖凝胶PT-25在两种生物制品分离纯化中的应用 [J], 王芝祥;张培华;李永清;李彬;叶世德因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Seplife G25 M 葡聚糖层析介质说明书
Seplife G25M说明书1.产品介绍Seplife G25M葡聚糖层析介质是一种具有三维网状结构的高分子化合物，它是由葡聚糖加入交联剂环氧氯丙烷通过醚键互相交联聚合而成，交联度越大，网孔结构就越紧密，吸水后的体积膨胀就越小，能允许进入层析介质内部的分子的分子量也就越小，反之亦然。
层析时，大于层析介质孔径的大分子，被阻于凝胶相外，沿着层析介质颗粒之间的间隙走，下移速度最快，故最先洗脱下来，中等大小的分子进入部分层析介质孔中，洗脱速度次之，而小分子因为能够进入全部层析介质孔中，受到阻力最大，故最后被洗脱下来，由此，物质得到分离和纯化。
SeplifeG25葡聚糖层析介质分离范围为1000~5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离。
2.性能介绍产品牌号Seplife G25M外观白色球状，无臭无味粒径（干，μm）50～150粒径（湿，μm）70～250溶胀度4~6ml/g干粉耐压（MPa）0.24最高流速（cm/h）480pH稳定性2~13在以下溶液中稳定：6M盐酸胍；8M尿素；70%乙醇；0.2M NaOH；化学稳定性0.2M HCl；1M乙酸；1%SDS；30%异丙醇；30%乙腈应用分离范围为1000~5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离3.交联葡聚糖凝胶微球G25的排阻极限测定Seplife G25排阻极限样品保留体积(ml)分子量LogMK av苄醇114.81108 2.03 1.00PEG400双苄基醚98.43580 2.760.80PEG600双苄基醚81.60780 2.890.60PEG1000双苄基醚65.721180 3.070.40PEG1540双苄基醚55.141620 3.210.28PEG4000双苄基醚33.814180 3.620.02PEG6000双苄基醚32.646180 3.790.00PEG7000双苄基醚32.637180 3.860.00PEG10000双苄基醚32.4210180 4.010.00PEG20000双苄基醚32.4120180 4.310.00 4.使用方法4.1预处理葡聚糖凝胶过滤层析介质一般是干粉状态，使用前必须在过剩的缓冲溶液中进行溶胀（室温溶胀过夜，或者在沸水中溶胀1h，避免使用磁力搅拌、药匙或者玻璃棒搅拌造成填料损坏）。
各种葡聚糖凝胶的分离范围与用途
各种葡聚糖凝胶的分离范围与用途：SephadexG-10葡聚糖凝胶G-10 分离范围<700 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-15葡聚糖凝胶G-15 分离范围<1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-15 葡聚糖凝胶G-15 分离范围<1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sepharose 6B 琼脂糖凝胶6B 分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离ConA-Sepharose ConA琼脂糖凝胶分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶G-25 中分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶G-25 中分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-25 Fine 葡聚糖凝胶G-25 细分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离Sephadex G-25 Fine 葡聚糖凝胶G-25 细分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离SephadexG-50 Medium 葡聚糖凝胶G-50 中分离范围1500-30000Sephadex G-50 Medium 葡聚糖凝胶G-50 中分离范围1500-30000Sephadex G-75 葡聚糖凝胶G-75 分离范围3000-80000Sephadex G-75 葡聚糖凝胶G-75 分离范围3000-80000DEAE Sepharose FF DEAE琼脂糖凝胶FF 分离范围：3000-80,000Sephadex G-100 葡聚糖凝胶G-100 分离范围4000-150000Sephadex G-100 葡聚糖凝胶G-100 分离范围4000-150000Sephadex G-150 葡聚糖凝胶G-150 分离范围5000-300000DEAE Sepharose CI-6B 琼脂糖凝胶CI-6B 分离范围：5000-300,000Sephadex G-150 葡聚糖凝胶G-150 分离范围5000-300000Sephadex G-200 葡聚糖凝胶G-200 分离范围5000-600000Sephadex G-200 葡聚糖凝胶G-200 分离范围5000-600000Sephadex G-200 葡聚糖凝胶G-200 分离范围5000-600000DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝胶A-25 颗粒大小：40-120μm分离大小：小蛋白及巨大分子DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝胶A-25 颗粒大小：40-120μm分离大小：小蛋白及巨大分子DEAE Sephades A-50 DEAE DEAE葡聚糖凝胶A-50 颗粒大小：40-120μm，分离范围：小蛋白及巨大分子。
葡聚糖凝胶使用说明书
上课下子棋保证书详细(第一篇)此文档协议是通用版本，可以直接使用，符号*表示空白。
敬重的班主任老师：在此，非常愧疚地向你递交我这份保证，由于一次保证意味着我犯了一次重大过错。
此次，我由于上课玩五子棋、不好好听课，给班级上课秩序造成了比较严峻的影响。
您观看到我的不良行为，准时加以制止，并且没收我的手机作为惩罚。
如今，经过面壁思过与深刻反剩我深深地觉悟到自己所犯错误的严峻性：第一，我身为一名在校同学，学习无疑是自己的本职工作，也是必需履行的义务。
其次，在高校期间的教育对于每个人来说都是非常宝贵的，而我却不思进取，甚至严峻到在上课期间玩手机、不用心听课。
这更是犯了非常严峻的错误，这是对于教育资源的铺张。
第三，身为一名同学，我犯这样的错误，无疑是大大辜负了我父母对我的殷切期望。
这对于我年迈的父母来说，是一个很大的打击。
我的父母辛苦赚钱，送我们进入高校深造，为的就是我们能够努力学习，找到一份好的工作，将来能够生活得更好。
而为的使我们能够在各方面活动好的条件，父母为我们购得手机。
而我却恰恰不用功读书，不能全身心的投入学习，反倒是上课玩五子棋。
如今我做了错事，辜负了我的父母，我觉得很惭愧，想起父母的辛苦，不由地流泪。
再看我的。
错误，我也是很抱歉辛勤教育我的老师的。
老师为我们辛勤工作，为我们努力备课，而我却辜负老师的辛苦，上课不好好听讲是对老师的不敬重。
此次保证过后，我也会跟老师做当面正式赔礼的。
最终我写一下对今后保证：我保证今后上课期间不做任何**行为了，上课期间不再玩五子棋。
今后仔细听每一节课，在校当一名好同学，在家做一个孝顺的儿子，将来为社会做出自己的一份贡献。
此致敬礼！保证人：******日期：*****上课下子棋保证书详细(第二篇)合同范本合同编号：[合同编号]标题：上课下子棋保证书日期：[签署日期]甲方：[甲方机构/个人名称]地址：[甲方地址]电话：[甲方电话]乙方：[乙方机构/个人名称]地址：[乙方地址]电话：[乙方电话]鉴于甲方作为[甲方机构/个人名称]（以下简称“甲方”）提供上课下子棋服务，乙方作为[乙方机构/个人名称]（以下简称“乙方”）接受上述服务，双方达成以下协议，以兹共同遵守：一、合作内容1.1 甲方将为乙方提供专业的上课下子棋服务，包括但不限于教授棋谱、指导棋局策略等。
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项葡聚糖凝胶柱是一种常用的色谱柱，其主要由多糖聚合物构成，具有多孔结构以及极高的比表面积。
葡聚糖凝胶柱在生物分离、蛋白质纯化以及分析等方面有重要的应用。
下面将介绍葡聚糖凝胶柱的使用方法以及注意事项，并列举了几种常见溶剂的溶胀系数作为参考。
使用方法：1.预处理：新柱使用前需进行预处理。
首先，在使用前用适当的缓冲液再生柱子，一般推荐使用PBS缓冲液进行再生。
其次，用去离子水进行洗脱，去除缓冲液中的离子。
2.样品准备：准备好带有样品的溶液，可以是蛋白质溶液、核酸溶液或者其他需要分离的溶液。
3.进样：将样品溶液注入到柱子中，可以使用曲线尖管或者注射器进行。
4.溶剂流动：使用适当的流动缓冲液进行柱子的着色，常用的缓冲液有PBS缓冲液、甲醇和乙醇。
5.收集分离的组分：通过收集分离的组分，可以进行后续的实验操作或者分析。
注意事项：1.柱子的平衡：在使用柱子前，将柱子放入合适的缓冲液中，进行平衡处理，通常需要约30分钟。
2.柱子的保管：使用完毕后，需将柱子用适当的缓冲液保存，避免干燥。
3.柱子的温度：柱子的运行温度一般在室温下进行，避免过高温度的使用，以免影响柱子的性能。
4.溶液选择：在选择适当的缓冲液时，应根据样品的性质以及需求进行选择，不同的缓冲液对分离的效果会有影响。
5.柱子的清洗：使用完毕后的柱子需要进行彻底的清洗工作，尤其是对于经常使用的柱子，清洗工作要做得彻底。
下面是几种常见溶剂的溶胀系数参考值：1.水：溶胀系数为1，对于葡聚糖凝胶柱来说，水是适用的溶剂。
2.硫酸：溶胀系数为0.57，硫酸能够完全渗透葡聚糖凝胶柱。
3.乙醇：溶胀系数为0.44，适量的乙醇可以使用，但过高浓度的乙醇可能会影响柱子的性能。
4.甲醇：溶胀系数为0.65，甲醇也可以使用，但同样需要注意控制浓度。
总结：葡聚糖凝胶柱是一种常见的色谱柱，具有广泛的应用。
在使用葡聚糖凝胶柱时，需进行适当的处理以及注意事项，以保证柱子的性能和寿命。
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项(包含各种溶剂的溶胀系数)
葡聚糖凝胶柱使用及注意事项1 Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，Sephadex G-25羟丙化后就是Sephadex LH-20。
其既有分子筛作用，在由极性与非极性溶剂组成的溶剂中还有反相层析效果。
虽然价位很高，但由于性能颇佳，可再生利用，所以倍受亲睐。
此外上柱样品损失很少，对处理小样品较好，这也是我们实验室常用的原因之一。
2 Sephadex LH20 的原理。
Sephadex LH20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。
因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。
如果使用反相溶剂洗脱，Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。
如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。
3 Sephadex LH20 洗脱溶剂。
看完第2点后，就应该清楚Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。
用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
4 Sephadex LH20 样品的处理和洗脱溶剂的选择。
如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀）。
如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。
5 Sephadex LH-20的步骤。
(1) 选择条件：梯度洗脱在Sephadex使用中并不象在正相柱层析中那么重要。
sephadex g-10葡聚糖凝胶 孔径
1. 概述Sephadex G-10 是一种常用的葡聚糖凝胶，具有广泛的应用范围。
在生物化学、分子生物学等领域中，它被广泛用于分离和纯化生物大分子，例如蛋白质、核酸等。
而Sepahdex G-10的孔径大小则是影响其分离和纯化效果的重要因素之一。
2. Sephadex G-10的基本介绍2.1 Sephadex G-10是一种由交联葡聚糖制成的凝胶，属于凝胶过滤层析介质的一种。
它以其较大的孔径而闻名，这使得它在许多生物大分子的分离过程中具有重要的应用价值。
2.2 Sephadex G-10的结构具有高度规则的孔隙结构，能够可靠地分离分子，并且不易受到外界因素的影响。
2.3 在分子生物学和生物化学的实验中，Sephadex G-10经常被作为一种理想的分离介质，用于分离蛋白质、核酸等大分子物质。
3. Sephadex G-10的孔径大小3.1 Sephadex G-10的孔径大小通常为10微米左右。
这种中等大小的孔径使得它能够有效地分离分子，但也相对于有一定的分辨能力，不会因为孔径过大而导致分离效果不理想。
3.2 对于一些较大的生物大分子，例如大分子蛋白质、核酸等，Sephadex G-10的孔径大小能够保证其能够顺利地通过凝胶中的孔隙，实现有效的分离和纯化。
4. Sephadex G-10的孔径大小对分离效果的影响4.1 由于Sephadex G-10的孔径大小适中，它能够较好地区分不同大小的分子。
对于较小的分子而言，它们能够更容易地穿过Sephadex G-10的孔隙，实现快速的分离。
4.2 对于较大的生物大分子，Sephadex G-10的孔径大小也能够保证其能够通过凝胶的孔隙，实现高效的分离。
这就体现了SephadexG-10的孔径大小对于分离效果的积极影响。
5. 结语Sephadex G-10作为一种常用的葡聚糖凝胶，在分离和纯化生物大分子的过程中具有重要的应用价值。
其孔径大小的适宜性，使得它能够有效地区分不同大小的分子，实现高效的分离和纯化。
实验五葡聚糖凝胶柱层析分离纯化蛋白质
得到较好的分离效果？
Thank You!
装柱时需保持柱体垂直于水平面，不可随意 晃动层析柱，以保持凝胶柱表面平整。
加样时移液器垂直伸入柱内，接近液面处集 中滴加，动作要轻柔，不要将床面冲起。 实验过程中需密切注意保持层析柱中的凝胶 始终处于蒸馏水中，防止蒸馏水排空。
吸附层析(absorption chromatography)
低分子量蛋白、多肽的分离
3,000~70,000 中低分子量蛋白、多肽的分离 4,000 ~150,000 中高分子量蛋白的分离 5,000 ~400,000 高分子量蛋白的分离 5,000 ~800,000
重点1
凝胶层析的原理 分子筛效应
比孔径大的分子不能扩散到孔穴内部， 完全被排阻在孔外，只能在凝胶颗粒外 的空间随流动相向下流动，它们经历的 流程短，流动速度快，首先流出。
亲和力 生物分子间存在很多特异性的相互作用， 如抗原－抗体、酶－底物、激素－受体等， 它们之间都能够专一而可逆的结合。 分离原理 在固定相载体表面偶联具有特殊亲和作用的 配基，这些配基可以与流动相中溶质分子发 生可逆的特异性结合而进行分离纯化。
1. Incubate crude sample with the immobilized ligand
混合物随流动相经固定相(网状孔径)的
层析柱时，混合物中各组份按其分子大
小不同而被分离的技术。
固定相（凝胶）
凝胶是一种不带电的具有三维空间的多孔 网状结构的高分子聚合物，每个颗粒的细 微结构及筛孔的直径均匀一致。
☻葡聚糖凝胶（Sephadex） ☻琼脂糖凝胶（Sepharose）
☻聚丙稀酰胺凝胶（Polyacrylamide）
葡聚糖凝胶柱层析法分离蛋白质
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各种葡聚糖凝胶的分离范围与用途：
SephadexG-10葡聚糖凝胶G-10 分离范围<700 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
Sephadex G-15 葡聚糖凝胶G-15 分离范围<1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
Sephadex G-15 葡聚糖凝胶G-15 分离范围<1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
Sepharose 6B 琼脂糖凝胶6B 分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
ConA-Sepharose ConA琼脂糖凝胶分离范围：1000-5000，适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶G-25 中分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
Sephadex G-25 Medium 葡聚糖凝胶G-25 中分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
Sephadex G-25 Fine 葡聚糖凝胶G-25 细分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
Sephadex G-25 Fine 葡聚糖凝胶G-25 细分离范围1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
SephadexG-50 Medium 葡聚糖凝胶G-50 中分离范围1500-30000 Sephadex G-50 Medium 葡聚糖凝胶G-50 中分离范围1500-30000 Sephadex G-75 葡聚糖凝胶G-75 分离范围3000-80000
Sephadex G-75 葡聚糖凝胶G-75 分离范围3000-80000
DEAE Sepharose FF DEAE琼脂糖凝胶FF 分离范围：3000-80,000 Sephadex G-100 葡聚糖凝胶G-100 分离范围4000-150000
Sephadex G-100 葡聚糖凝胶G-100 分离范围4000-150000
Sephadex G-150 葡聚糖凝胶G-150 分离范围5000-300000
DEAE Sepharose CI-6B 琼脂糖凝胶CI-6B 分离范围：5000-300,000 Sephadex G-150 葡聚糖凝胶G-150 分离范围5000-300000
Sephadex G-200 葡聚糖凝胶G-200 分离范围5000-600000
Sephadex G-200 葡聚糖凝胶G-200 分离范围5000-600000
Sephadex G-200 葡聚糖凝胶G-200 分离范围5000-600000
DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝胶A-25 颗粒大小：40-120μm 分离大小：小蛋白及巨大分子
DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝胶A-25 颗粒大小：40-120μm 分离大小：小蛋白及巨大分子
DEAE Sephades A-50 DEAE DEAE葡聚糖凝胶A-50 颗粒大小：40-120μm，分离范围：小蛋白及巨大分子。